Name: a syngeneic orthotopic osteosarcoma sprague dawley rat model with amputation to control metastasis rate
Uploaded: 2021-05-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate at JoVE.com

Financiamento do NIH através do Instituto Nacional do Câncer, conceder # CA228582. Shun Ishiyama está recebendo uma bolsa da Toray Medical Co., Ltd.

Todos os procedimentos e experimentos envolvendo ratos foram realizados de acordo com protocolos aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso de Animais da Johns Hopkins.
1. O protocolo de cultura celular DA linha celular OS de rato SD UMR-106
<ol><li>Células de cultivo em DMEM, suplementadas com 10% (v/v) FBS, penicilina (10 U/mL)-estreptomicina (10 U/mL) a 37 °C na atmosfera umidificada de 5% de CO2. Realizar experimentos usando células com passagens de 2-812</s...

<ol>
	<li>Link, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+adjuvant+chemotherapy+on+relapse-free+survival+in+patients+with+osteosarcoma+of+the+extremity.">The effect of adjuvant chemotherapy on relapse-free survival in patients with osteosarcoma of the extremity.</a> New England Journal of Medicine. 314 (25), 1600-1606 (1986).</li><li>Bielack, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+in+high-grade+osteosarcoma+of+the+extremities+or+trunk:+an+analysis+of+1,702+patients+treated+on+neoadjuvant+cooperative+osteosarcoma+study+group+protocols.">Prognostic factors in high-grade osteosarcoma of the extremities or trunk: an analysis of 1,702 patients treated on neoadjuvant cooperative osteosarcoma study group protocols.</a> Journal of Clinical Oncology. 20 (3), 776-790 (2002).</li><li>Botter, S. M., Neri, D., Fuchs, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+osteosarcoma.">Recent advances in osteosarcoma.</a> Current Opinion in Pharmacology. 16, 15-23 (2014).</li><li>Ek, E. T. H., Dass, C. R., Choong, P. F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commonly+used+mouse+models+of+osteosarcoma.">Commonly used mouse models of osteosarcoma.</a> Critical Reviews in Oncology Hematology. 60 (1), 1-8 (2006).</li><li>Guijarro, M. V., Ghivizzani, S. C., Gibbs, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+osteosarcoma.">Animal models in osteosarcoma.</a> Frontiers Oncology. 4, 189 (2014).</li><li>Janeway, K. A., Walkley, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+osteosarcoma+in+the+mouse:+From+bedside+to+bench.">Modeling human osteosarcoma in the mouse: From bedside to bench.</a> Bone. 47 (5), 859-865 (2010).</li><li>Mohseny, A. B., Hogendoorn, P. C., Cleton-Jansen, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteosarcoma+models:+from+cell+lines+to+zebrafish.">Osteosarcoma models: from cell lines to zebrafish.</a> Sarcoma. 2012, 417271 (2012).</li><li>Khanna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+murine+osteosarcoma+with+clonally+related+variants+differing+in+pulmonary+metastatic+potential.">An orthotopic model of murine osteosarcoma with clonally related variants differing in pulmonary metastatic potential.</a> Clinical &amp; Experimental Metastasis. 18 (3), 261-271 (2000).</li><li>Martin, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parathyroid+hormone-responsive+adenylate+cyclase+in+induced+transplantable+osteogenic+rat+sarcoma.">Parathyroid hormone-responsive adenylate cyclase in induced transplantable osteogenic rat sarcoma.</a> Nature. 260 (5550), 436-438 (1976).</li><li>Fisher, J. L., Mackie, P. S., Howard, M. L., Zhou, H., Choong, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expression+of+the+urokinase+plasminogen+activator+system+in+metastatic+murine+osteosarcoma:+an+in+vivo+mouse+model.">The expression of the urokinase plasminogen activator system in metastatic murine osteosarcoma: an in vivo mouse model.</a> Clinical Cancer Research. 7 (6), 1654-1660 (2001).</li><li>Yu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+reproducible+osteosarcoma+rat+model+using+orthotopic+implantation+technique.">Establishment of reproducible osteosarcoma rat model using orthotopic implantation technique.</a> Oncology Reports. 21 (5), 1175-1180 (2009).</li><li>Zhang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homologous+mesenchymal+stem+cells+promote+the+emergence+and+growth+of+pulmonary+metastases+of+the+rat+osteosarcoma+cell+line+UMR-106.">Homologous mesenchymal stem cells promote the emergence and growth of pulmonary metastases of the rat osteosarcoma cell line UMR-106.</a> Oncology Letters. 8 (1), 127-132 (2014).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+protein+90+and+ErbB2+in+the+cardiac+response+to+doxorubicin+injury.">Heat shock protein 90 and ErbB2 in the cardiac response to doxorubicin injury.</a> Cancer Research. 67 (4), 1436-1441 (2007).</li><li>Sysa-Shah, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+cross-regulation+between+ErbB2+and+&#946;-adrenergic+signalling+pathways.">Bidirectional cross-regulation between ErbB2 and &#946;-adrenergic signalling pathways.</a> Cardiovascular Research. 109 (3), 358-373 (2016).</li><li>Wachtman, L. M., Browning, M. D., Bedja, D., Pin, S., Gabrielson, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+the+use+of+long-term+indwelling+jugular+catheters+in+a+rat+model+of+cardiotoxicity.">Validation of the use of long-term indwelling jugular catheters in a rat model of cardiotoxicity.</a> Journal of American Association Laboratory Animal Science. 45, 55-64 (2006).</li><li>Abdou, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Prognostic+role+of+Ezrin+and+HER2/neu+expression+in+osteosarcoma.">The Prognostic role of Ezrin and HER2/neu expression in osteosarcoma.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 24 (5), 355-363 (2016).</li><li>Hughes, D. P., Thomas, D. G., Giordano, T. J., McDonagh, K. T., Baker, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+erbB+family+phosphorylation+in+osteosarcoma+as+a+target+for+CI-1033+inhibition.">Essential erbB family phosphorylation in osteosarcoma as a target for CI-1033 inhibition.</a> Pediatric Blood &amp; Cancer. 46 (5), 614-623 (2006).</li><li>Wen, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+in+osteosarcoma:+expression+and+mutational+analysis.">Epidermal growth factor receptor in osteosarcoma: expression and mutational analysis.</a> Human Pathology. 38 (8), 1184-1191 (2007).</li><li>Khanna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+drug+development+path+that+targets+metastatic+progression+in+osteosarcoma.">Toward a drug development path that targets metastatic progression in osteosarcoma.</a> Clinical Cancer Research. 20 (16), 4200-4209 (2014).</li></ol>

Ratos com implantes tibiais da OS desenvolvem tumores mensuráveis por 3 semanas após a implantação. Se os membros com tumores forem amputados 3 semanas após a implantação, a incidência de metástase pulmonar é reduzida significativamente. Os OSs são osteolíticos e osteoblásticos. Ratos sem amputação desenvolvem metástases pulmonares de tamanho múltiplo e variado, observadas por radiografia ou necropsia por 7 semanas após a implantação. EGFR, ErbB2 e ErbB4 são expressos em umr106 OS de rato, semelhante...

O osteossarcoma (OS) é o tumor ósseo primário mais comum em crianças, adolescentes e adultos jovens. O avanço mais recente no tratamento da OS ocorreu na década de 1980, quando a quimioterapia multi-agente mostrou-se para melhorar a sobrevida geral em comparação apenas com a cirurgia1. O SISTEMA OPERACIONAL desenvolve-se durante o rápido crescimento ósseo, tipicamente ocorrendo em ossos tubulares longos como fêmur, tíbia e úmero. Caracterizam-se por uma aparência osteolítica, osteoblástica ou mista com notável reação peristeal2. A quimioterapia e a ressecção cirúrgica podem melhorar o resultado para pacientes com sobrevida de 5 anos para 65% dos pacientes2,3. Infelizmente, pacientes com doença metastática de alto grau têm 20% de sobrevida. O OS invade regionalmente e metástase principalmente para os pulmões ou outros ossos e é mais prevalente em machos. A necessidade mais convincente para esses pacientes jovens é uma nova terapia que previne e elimina a viabilidade de metástases distantes.
Foram revisados modelos pré-clínicos de OS4,5,6,7 e poucos modelos imunocompetntes disponíveis utilizando amputação de os os ortotópicos. Em 2000, um modelo importante foi desenvolvido utilizando camundongos BALB/c com OS ortotópicos e amputação8. Comparado a este modelo de camundongo, o modelo de rato é baseado em animais geneticamente superados e 10 vezes maiores levando a algumas vantagens. O modelo UMR106 de rato foi desenvolvido a partir de um SO induzido de 32P em um rato Sprague Dawley (SD), que foi derivado em uma linhacelular 9. Em 2001, a implantação ortotópica de UMR106-01 foi descrita pela primeira vez em tíbias implantadas de camundongos atrímicos com desenvolvimento rápido e consistente do tumor primário e características radiológicas, histológicas em comum com o OS em humanos. As metástases pulmonares desenvolveram-se e dependiam da colocação ortotópica de UMR106 no microambiente ósseo10. Em 2009, Yu et al.11 estabeleceram um modelo de rato de fêmur ortotópico reprodutopico usando células UMR106 em ratos maiores do sexo masculino. As implantações tumorais bem sucedidas e a taxa de metástase pulmonar em ratos sem amputação foram semelhantes aos dados aqui apresentados. Neste estudo, foi realizada uma amputação adicional ao modelo de uso de ratos jovens, o que sugere que o tempo de remoção do tumor primário é crucial na modelagem da OS, especialmente relacionada à progressão metastática. Com este refinamento, amputação e imagem in vivo melhoram este modelo para estudos pré-clínicos para avaliação de novos medicamentos para OS.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AKT</td>
			<td>Cell Signaling TECHNOLOGY</td>
			<td>4685S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>absorbable suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J214H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-actin</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-47778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;2-AR antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-569</td>
			<td>replaced by &#946;2-AR (E-3): sc-271322</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bis&#8211;Tris gels</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>NP0321PK2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine SR Lab</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td>IZ-70000-201908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>#A0452</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD68 antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>#14-0688-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemiluminescent substrate</td>
			<td>cytiva</td>
			<td>RPN2232</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CL-Xposure film</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>34089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Anesthesia System</td>
			<td>EVETEQUIP</td>
			<td>922120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>diaminobenzidine</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>SK-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxorubicin</td>
			<td>Actavis</td>
			<td>NDC 45963-733-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGFR antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-03</td>
			<td>replaced by EGFR (A-10): sc-373746</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERBB2 antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-284</td>
			<td>replaced by Neu (3B5): sc-33684</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERBB4 antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-283</td>
			<td>replaced by ErbB4 (C-7): sc-8050</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERK antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-514302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye lubricant</td>
			<td>PHARMADERM</td>
			<td>NDC 0462-0211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe (100 &#181;L)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>Model 1710 SN SYR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>horseradish peroxidase-linked secondary antibody</td>
			<td>cytiva</td>
			<td>NA934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP polymer detection kit</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>MP-7401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP polymer detection kit</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>MP-7402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>BUTLER SCHEIN</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane vaporizer</td>
			<td>EVETEQUIP</td>
			<td>911103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UMR-106 cell</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray</td>
			<td>Faxitron</td>
			<td>UltraFocus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray processor</td>
			<td>Hope X-Ray Peoducts Inc</td>
			<td>MicroMax X-ray Processor</td>
			<td>Hope Processors are not available in USA anymore</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>wound clips</td>
			<td>BECTON DICKINSON</td>
			<td>427631</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic orthotopic osteosarcoma sprague dawley rat model with amputation to control metastasis rate

O avanço mais recente no tratamento do osteossarcoma (OS) ocorreu na década de 1980, quando a quimioterapia multi-agente mostrou melhorar a sobrevida geral em comparação apenas com a cirurgia. Para resolver esse problema, o objetivo do estudo é refinar um modelo menos conhecido de OS em ratos com uma abordagem cirúrgica histológica, de imagem, biológica, implantação e amputação abrangente que prolonga a sobrevivência. Utilizamos um imunocompetente, sprague-Dawley (SD), modelo de rato síngênico com linha celular UMR106 OS implantada (originária de um rato SD) com implantes de tumor tibial ortotópico em ratos machos e fêmeas de 3 semanas de idade para modelar o OS pediátrico. Descobrimos que os ratos desenvolvem tumores pulmonares primários e metastáticos reprodutíveis, e que as amputações de membros em 3 semanas após a implantação reduzem significativamente a incidência de metástase pulmonar e previnem mortes inesperadas. Histologicamente, as OSs primárias e metastáticas em ratos eram muito semelhantes aos humanos. Usando métodos imunohistoquímicos, o estudo mostra que os os ratos estão infiltrados com macrófagos e células T. Um levantamento de expressão proteica das células de OS revela que esses tumores expressam cineases familiares ErbB. Uma vez que essas quinases também são altamente expressas na maioria das OSs humanas, este modelo de rato poderia ser usado para testar inibidores da via ErbB para terapia.

Ratos de sosseio de ORIGEM imunocompetente são usados para esses estudos de SO, que oferece um modelo animal com um sistema imunológico intacto. Usamos a linha celular UMR106 da ATCC, desenvolvida a partir de células que foram inicialmente isoladas de um SO de um rato SD. Implantamos as células em ratos SD, fornecendo assim um modelo sinténico para as células UMR106 são implantadas na tíbia de ratos SD masculinos e fêmeas de 3 semanas de idade, simulando um modelo de SO pediátrico. Além disso, a implantação ...

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A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate

Aqui, uma implantação ortotópica sinténica seguida de um procedimento de amputação do osteossarcoma com metástase pulmonar espontânea que pode ser usada para investigação pré-inlinética da biologia da metástase e desenvolvimento de novas terapêuticas é descrita.

Um modelo de rato de osteossarcoma ortotópico sintérico sprague dawley com amputação para controlar a taxa de metástase

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...

Implantar células osteossarcoma dentro do microambiente da tíbia promove metástase pulmonar. Este modelo também pode ser útil para estudar os mecanismos de metástase pulmonar ou novas terapias contra o câncer que requerem um sistema imunológico intacto. Uma vez estabelecido o tumor, a amputação é necessária para controlar a taxa de metástase em estudos de sobrevivência de longo prazo.Usamos as injeções jugulares para permitir a visualização da entrega de drogas intravenosas. A injeção de veia jugular é útil para muitos outros modelos de doenças para os quais é necessário um parto preciso de medicamentos. Usamos este método para fornecer nanopartículas e liganos radiolabeled para imagens in-vivo.Aconselhamos novos usuários a praticar a remoção de um membro de cinco a 10 ratos eutanizados antes de tentar um experimento para dominar a mecânica da amputação de membros sem perda de sangue. Depois de confirmar a falta de resposta ao reflexo peniano, fixe o rato anestesiado em um nariz em uma almofada de calor de baixo calor na posição supina. Remova o cabelo da perna direita, até o abdômen inferior ventral e dorsal.Use gaze ou spray para desinfetar a área cirúrgica com 70% de etanol e um antisséptico diluído apropriado e aplicar pomada nos olhos do animal. Usando um movimento semelhante a uma broca para fazer uma abertura, insira uma agulha de calibre 22 marcada 10 milímetros da ponta 10 milímetros na diáfise da tíbia no meio do planalto tibial, estendendo a agulha através da metafise para a difásise. Depois de remover a agulha, misture suavemente a suspensão da célula tumoral de interesse para obter uma suspensão celular homogênea, e carregue 7,5 x 10 para o quarto das células em 20 microliters de PBS em uma seringa Hamilton.Marque a seringa Hamilton com células a 10 milímetros da ponta da agulha e insira a agulha à marca de 10 milímetros no orifício feito pela agulha de calibre 22. Em seguida, descarregue suavemente todo o volume de células na cavidade da medula, e coloque o rato em uma gaiola em uma almofada de aquecimento com monitoramento até a recumbência total. Para a administração da doxorubicina intravenosa, após a confirmação da anestesia, use dissecção cuidadosa para visualizar a veia jugular direita ou esquerda e insira a agulha no tecido muscular sobredisto.Direcione a agulha em direção à cabeça para o lúmen da veia jugular, como é visualizado na veia jugular anterior ao músculo peitoral, e desenhe um pequeno volume de sangue na ponta da agulha para confirmar uma inserção precisa. Quando a agulha estiver no lugar, injete lentamente de 100 a 150 microlitres de dois miligramas por quilograma de doxorubicina ao longo de um minuto. A solução deve ser visível dentro da veia durante o parto.Quando toda a solução tiver sido entregue, use gaze estéril para aplicar pressão suave na veia e use de três a quatro clipes de ferida para fechar a incisão. Após confirmar a sedação, retire o cabelo da perna direita, até o ventral e o abdômen inferior dorsal, e coloque o rato na posição supina em uma almofada de aquecimento. Esfregue a pele do meio do bezerro até um pouco acima da articulação do quadril do abdômen inferior direito como demonstrado e aplique pomada nos olhos do animal.Usando luvas e instrumentos estéreis, puxe a perna através da ventilação da cortina cirúrgica estéril e faça uma incisão cutânea circunferencial apenas proximal ao sufocamento. Deglove o membro traseiro para expor a artéria femoral e a veia na superfície ventral-medial do membro traseiro, e use suturas absorvíveis 4-0 para litigar os vasos ao nível do fêmur médio e transecte distally. Fixar a veia distally para reduzir o vazamento durante a dissecção muscular e usar dissecção contundente para sequestrar a articulação do quadril com rotação lateral para fora.Localize e desarticula a cabeça do fêmur do acetábulo, e remova qualquer tecido restante, mantendo a perna presa ao corpo. Administre um bloco de respingos no acetábulo e no nervo ciático com aproximadamente seis miligramas por quilograma de ropivacaína, e use uma simples sutura absorvível interrompida 4-0 para fechar a musculatura sobre o acetábulo. Em seguida, use clipes de ferida colocados de cinco a 10 milímetros para fechar as bordas da pele.A imagem de raio-X para vigilância tumoral permite a confirmação da invasão de tumores ósseos e pode ser realizada em membros recentemente amputados ou fixos de formalina. A imagem de raios-X também permite a avaliação da morfologia radiográfica dos pulmões com e sem metástases, fornecendo um método rápido e fácil para determinar a necessidade de eutanásia para evitar mortes espontâneas desnecessárias. No osteossarcoma do rato, a morfologia tumoral osteolítica e osteoblástica pode ser confirmada pela histopatologia do membro amputado.Observe que o osso cortical está ausente neste exemplo e que o osso adjacente foi substituído ou fortificado por um novo osso tecido que é orientado perpendicular ao eixo existente do córtex. Ilhas de osteoides imaturos também podem ser identificadas dentro do tumor. Nessas imagens, pode-se observar a morfologia microscópica de metástases pulmonares representativas, algumas com embolia óssea mineralizada e tumoral.A imunossuagem de tumores osteossarcoma primários pode revelar infiltração dos tumores por populações de células imunes, como macrófagos CD68 positivos ou células T CD3 positivos. A mancha ocidental de proteínas tumorais pode ser usada para determinar a expressão de quinases proteicas, receptores de proteína quinase e outras proteínas que interagem com essas vias. Para a implantação da tibial, uma vez que o primeiro orifício tibial tenha sido feito, continue a segurar a perna em sua mão não dominante no mesmo ângulo para manter a pele e os orifícios ósseos alinhados para facilitar a inserção da agulha Hamilton.Para injeção jugular, insira a agulha no músculo, mas não angulou muito a agulha para evitar a falta da veia. Para a amputação, pratique a desarticulação em ratos eutanizados primeiro.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

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Pesquisa do câncer

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Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

Modelo de pulmão acelular e celular para estudar o Tumor metástase

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Modelos de xenoenxertos Ortotópicos derivados do paciente para Carcinoma de células urotelial humana e crescimento do tumor do câncer colorretal e metástase espontânea

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...