Name: a syngeneic orthotopic osteosarcoma sprague dawley rat model with amputation to control metastasis rate
Uploaded: 2021-05-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate at JoVE.com

NIH-finansiering genom National Cancer Institute, anslag # CA228582. Shun Ishiyama får för närvarande ett bidrag från Toray Medical Co., Ltd.

Alla procedurer och experiment med råttor utfördes enligt protokoll som godkänts av Johns Hopkins Animal Care and Use Committee.
1. SD rat OS-cellinjen UMR-106 cellkulturprotokoll
<ol><li>Odla celler i DMEM, kompletterade med 10% (v/v) FBS, penicillin (10 U/mL)-streptomycin (10 U/ml) vid 37 °C i fuktad 5% CO2 atmosfär. Utför experiment med celler med passager på 2-812.</li>
</ol>2. Intratibial injektion av OS-cellsprotokoll
...

<ol>
	<li>Link, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+adjuvant+chemotherapy+on+relapse-free+survival+in+patients+with+osteosarcoma+of+the+extremity.">The effect of adjuvant chemotherapy on relapse-free survival in patients with osteosarcoma of the extremity.</a> New England Journal of Medicine. 314 (25), 1600-1606 (1986).</li><li>Bielack, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+in+high-grade+osteosarcoma+of+the+extremities+or+trunk:+an+analysis+of+1,702+patients+treated+on+neoadjuvant+cooperative+osteosarcoma+study+group+protocols.">Prognostic factors in high-grade osteosarcoma of the extremities or trunk: an analysis of 1,702 patients treated on neoadjuvant cooperative osteosarcoma study group protocols.</a> Journal of Clinical Oncology. 20 (3), 776-790 (2002).</li><li>Botter, S. M., Neri, D., Fuchs, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+osteosarcoma.">Recent advances in osteosarcoma.</a> Current Opinion in Pharmacology. 16, 15-23 (2014).</li><li>Ek, E. T. H., Dass, C. R., Choong, P. F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commonly+used+mouse+models+of+osteosarcoma.">Commonly used mouse models of osteosarcoma.</a> Critical Reviews in Oncology Hematology. 60 (1), 1-8 (2006).</li><li>Guijarro, M. V., Ghivizzani, S. C., Gibbs, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+osteosarcoma.">Animal models in osteosarcoma.</a> Frontiers Oncology. 4, 189 (2014).</li><li>Janeway, K. A., Walkley, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+osteosarcoma+in+the+mouse:+From+bedside+to+bench.">Modeling human osteosarcoma in the mouse: From bedside to bench.</a> Bone. 47 (5), 859-865 (2010).</li><li>Mohseny, A. B., Hogendoorn, P. C., Cleton-Jansen, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteosarcoma+models:+from+cell+lines+to+zebrafish.">Osteosarcoma models: from cell lines to zebrafish.</a> Sarcoma. 2012, 417271 (2012).</li><li>Khanna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+murine+osteosarcoma+with+clonally+related+variants+differing+in+pulmonary+metastatic+potential.">An orthotopic model of murine osteosarcoma with clonally related variants differing in pulmonary metastatic potential.</a> Clinical &amp; Experimental Metastasis. 18 (3), 261-271 (2000).</li><li>Martin, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parathyroid+hormone-responsive+adenylate+cyclase+in+induced+transplantable+osteogenic+rat+sarcoma.">Parathyroid hormone-responsive adenylate cyclase in induced transplantable osteogenic rat sarcoma.</a> Nature. 260 (5550), 436-438 (1976).</li><li>Fisher, J. L., Mackie, P. S., Howard, M. L., Zhou, H., Choong, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expression+of+the+urokinase+plasminogen+activator+system+in+metastatic+murine+osteosarcoma:+an+in+vivo+mouse+model.">The expression of the urokinase plasminogen activator system in metastatic murine osteosarcoma: an in vivo mouse model.</a> Clinical Cancer Research. 7 (6), 1654-1660 (2001).</li><li>Yu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+reproducible+osteosarcoma+rat+model+using+orthotopic+implantation+technique.">Establishment of reproducible osteosarcoma rat model using orthotopic implantation technique.</a> Oncology Reports. 21 (5), 1175-1180 (2009).</li><li>Zhang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homologous+mesenchymal+stem+cells+promote+the+emergence+and+growth+of+pulmonary+metastases+of+the+rat+osteosarcoma+cell+line+UMR-106.">Homologous mesenchymal stem cells promote the emergence and growth of pulmonary metastases of the rat osteosarcoma cell line UMR-106.</a> Oncology Letters. 8 (1), 127-132 (2014).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+protein+90+and+ErbB2+in+the+cardiac+response+to+doxorubicin+injury.">Heat shock protein 90 and ErbB2 in the cardiac response to doxorubicin injury.</a> Cancer Research. 67 (4), 1436-1441 (2007).</li><li>Sysa-Shah, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+cross-regulation+between+ErbB2+and+&#946;-adrenergic+signalling+pathways.">Bidirectional cross-regulation between ErbB2 and &#946;-adrenergic signalling pathways.</a> Cardiovascular Research. 109 (3), 358-373 (2016).</li><li>Wachtman, L. M., Browning, M. D., Bedja, D., Pin, S., Gabrielson, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+the+use+of+long-term+indwelling+jugular+catheters+in+a+rat+model+of+cardiotoxicity.">Validation of the use of long-term indwelling jugular catheters in a rat model of cardiotoxicity.</a> Journal of American Association Laboratory Animal Science. 45, 55-64 (2006).</li><li>Abdou, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Prognostic+role+of+Ezrin+and+HER2/neu+expression+in+osteosarcoma.">The Prognostic role of Ezrin and HER2/neu expression in osteosarcoma.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 24 (5), 355-363 (2016).</li><li>Hughes, D. P., Thomas, D. G., Giordano, T. J., McDonagh, K. T., Baker, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+erbB+family+phosphorylation+in+osteosarcoma+as+a+target+for+CI-1033+inhibition.">Essential erbB family phosphorylation in osteosarcoma as a target for CI-1033 inhibition.</a> Pediatric Blood &amp; Cancer. 46 (5), 614-623 (2006).</li><li>Wen, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+in+osteosarcoma:+expression+and+mutational+analysis.">Epidermal growth factor receptor in osteosarcoma: expression and mutational analysis.</a> Human Pathology. 38 (8), 1184-1191 (2007).</li><li>Khanna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+drug+development+path+that+targets+metastatic+progression+in+osteosarcoma.">Toward a drug development path that targets metastatic progression in osteosarcoma.</a> Clinical Cancer Research. 20 (16), 4200-4209 (2014).</li></ol>

Råttor med OS tibial implantat utvecklar mätbara tumörer med 3 veckor efter implantation. Om lemmar med tumörer amputeras 3 veckor efter implantation, minskar förekomsten av lungmetastasering avsevärt. OSs är både osteolytiska och osteoblastiska. Råttor utan amputation utvecklar lungmetastaser som är flera och varierande stora, observerade genom radiografi eller vid obduktionen 7 veckor efter implantationen. EGFR, ErbB2 och ErbB4 uttrycks i råtta UMR106 OS, liknande mänskliga OS16,<sup...

Osteosarcoma (OS) är den vanligaste primära ben tumör hos barn, ungdomar och unga vuxna. Det senaste framsteget i behandlingen av OS inträffade på 1980-talet när multi-agent kemoterapi visade sig förbättra den totala överlevnaden jämfört med kirurgi ensam1. OS utvecklas under snabb bentillväxt, vanligtvis förekommer i långa rörformiga ben såsom lårben, skenben och överarmsbenet. De kännetecknas av en osteolytisk, osteoblastisk eller blandad utseende med anmärkningsvärd periosteal reaktion2. Kemoterapi och kirurgisk samband kan förbättra resultatet för patienter med en 5-årig överlevnad för 65% av patienterna2,3. Tyvärr har höggradiga OS-patienter med metastaserad sjukdom 20% överlevnad. OS invaderar regionalt och metastaserar främst till lungorna eller andra ben och är vanligare hos män. Det mest övertygande behovet för dessa unga patienter är en ny terapi som förhindrar och eliminerar livskraften hos avlägsna metastaser.
OS prekliniska modeller har granskats4,5,6,7 och få tillgängliga immunkompetenta modeller med amputation av orthotopic OS har utvecklats. År 2000 utvecklades en viktig modell med BALB/c möss med ortopiskt syngeneskt OS och amputation8. Jämfört med denna musmodell är råttmodellen baserad på genetiskt utbredd och 10 gånger större djur som leder till vissa fördelar. Råttan UMR106-modellen utvecklades från ett 32P inducerat OPERATIVSYSTEM i en Sprague Dawley (SD) råtta, som härleddes till en cellinje9. År 2001 beskrevs orthotopic implantation av UMR106-01 först i implanterade skenben av athymic möss med snabb, konsekvent primära tumör utveckling och radiologiska, histologic funktioner gemensamt med OS hos människor. Lungmetastaser utvecklades och var beroende av ortopisk placering av UMR106 i benmikromiljön10. År 2009 etablerade Yu et al.11 en reproducerbar ortopisk lårbens-OS-råttmodell med UMR106-celler hos större hanråttor. Framgångsrika tumör implantationer och lung metastasering hastighet hos råttor utan amputation liknade de data som presenteras här. I denna studie utfördes en extra amputation till modellen med unga råttor, vilket föreslog att tidpunkten för primär tumör borttagning är avgörande vid modellering AV OS, särskilt relaterade till ögonbevarande progression. Med denna förfining förbättrar amputation och in vivo imaging denna modell för prekliniska studier för ny läkemedelsbedömning för OS.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AKT</td>
			<td>Cell Signaling TECHNOLOGY</td>
			<td>4685S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>absorbable suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J214H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-actin</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-47778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;2-AR antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-569</td>
			<td>replaced by &#946;2-AR (E-3): sc-271322</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bis&#8211;Tris gels</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>NP0321PK2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine SR Lab</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td>IZ-70000-201908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>#A0452</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD68 antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>#14-0688-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemiluminescent substrate</td>
			<td>cytiva</td>
			<td>RPN2232</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CL-Xposure film</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>34089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Anesthesia System</td>
			<td>EVETEQUIP</td>
			<td>922120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>diaminobenzidine</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>SK-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxorubicin</td>
			<td>Actavis</td>
			<td>NDC 45963-733-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGFR antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-03</td>
			<td>replaced by EGFR (A-10): sc-373746</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERBB2 antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-284</td>
			<td>replaced by Neu (3B5): sc-33684</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERBB4 antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-283</td>
			<td>replaced by ErbB4 (C-7): sc-8050</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERK antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-514302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye lubricant</td>
			<td>PHARMADERM</td>
			<td>NDC 0462-0211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe (100 &#181;L)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>Model 1710 SN SYR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>horseradish peroxidase-linked secondary antibody</td>
			<td>cytiva</td>
			<td>NA934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP polymer detection kit</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>MP-7401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP polymer detection kit</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>MP-7402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>BUTLER SCHEIN</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane vaporizer</td>
			<td>EVETEQUIP</td>
			<td>911103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UMR-106 cell</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray</td>
			<td>Faxitron</td>
			<td>UltraFocus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray processor</td>
			<td>Hope X-Ray Peoducts Inc</td>
			<td>MicroMax X-ray Processor</td>
			<td>Hope Processors are not available in USA anymore</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>wound clips</td>
			<td>BECTON DICKINSON</td>
			<td>427631</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic orthotopic osteosarcoma sprague dawley rat model with amputation to control metastasis rate

Det senaste framsteget i behandlingen av osteosarkom (OS) inträffade på 1980-talet när multi-agent kemoterapi visade sig förbättra den totala överlevnaden jämfört med kirurgi ensam. För att ta itu med detta problem är syftet med studien att förfina en mindre känd modell av OS hos råttor med ett omfattande histologiskt, avbildning, biologiskt, implantation och amputation kirurgiskt tillvägagångssätt som förlänger överlevnaden. Vi använde en immunocompetent, outbred Sprague-Dawley (SD), syngeneic råtta modell med implanterade UMR106 OS cellinje (härrör från en SD råtta) med orthotopic tibial tumör implantat i 3 veckor gamla hane och kvinnliga råttor att modellera pediatriskt OS. Vi fann att råttor utveckla reproducerbara primära och ögonbevarande pulmonell tumörer, och att lem amputationer vid 3 veckor efter implantation avsevärt minska förekomsten av pulmonell metastasering och förhindra oväntade dödsfall. Histologiskt var de primära och metastaserade OSs hos råttor mycket lik mänskliga OPERATIVSYSTEM. Med hjälp av immunohistokemiska metoder visar studien att råtta OS infiltreras med makrofager och T-celler. En protein uttryck undersökning av OS celler visar att dessa tumörer uttrycker ErbB familjen kinaser. Eftersom dessa kinaser också uttrycks mycket i de flesta mänskliga OSs, kan denna råtta modell användas för att testa ErbB utbildningshämmare för terapi.

Immunkompetenta SD-utbrytna råttor används för dessa OS-studier, som erbjuder en djurmodell med ett intakt immunsystem. Vi har använt UMR106 cellinjen från ATCC, utvecklad från celler som ursprungligen isolerades från ett operativsystem från en SD råtta. Vi implanterade cellerna i SD råttor, vilket ger en syngenesk modell för OS. UMR106 celler implanteras i skenbenet hos 3 veckor gamla manliga och kvinnliga SD råttor, simulerar en pediatrisk OS-modell. Dessutom ger ortopisk implantation av UMR106 celler direk...

Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate at JoVE.com

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate

Här beskrivs en syngeneic orthotopic implantation följt av en amputation förfarande av osteosarkom med spontana pulmonell metastasering som kan användas för preklinisk undersökning av metastasering biologi och utveckling av nya terapier beskrivs.

En syngenesk ortopisk osteosarkom Sprague Dawley Rat Modell med amputation för att kontrollera metastaseringshastighet

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...

Implantering osteosarkom celler inuti skenbenet mikromiljön främjar lung metastasering. Denna modell kan också vara användbar för att studera mekanismerna för lungmetastasering eller nya cancerbehandlingar som kräver ett intakt immunsystem. När tumören har fastställts är amputation nödvändig för att kontrollera metastaseringshastigheten i långsiktiga överlevnadsstudier.Vi använder halsinjektionerna för att möjliggöra visualisering av intravenös läkemedelsleverans. Halsveninjektion är användbar för många andra sjukdomsmodeller för vilka en exakt läkemedelsleverans krävs. Vi har använt denna metod för att leverera nanopartiklar och radiomärkta ligans för in vivo-avbildning.Vi råder nya användare att öva på att ta bort en lem från fem till tio avlivade råttor innan de försöker ett experiment för att behärska mekaniken för lemamputation utan blodförlust. Efter att ha bekräftat en brist på svar på penisreflex, säkra den sövda råttan i en noskon på en låg värme inställning värmeplatta i supin position. Ta bort håret på höger ben, upp till ventrala och dorsala nedre buken.Använd gasväv eller spray för att desinficera operationsområdet med 70% etanol och ett lämpligt utspädd antiseptiskt medel och applicera salva på djurets ögon. Använd en borrliknande rörelse för att göra en öppning, sätt in en 22-gauge nål märkt 10 millimeter från spetsen 10 millimeter i skenbenets diaphysis i mitten av skenbensplatån och förläng nålen genom metafysen till diafysen. Efter att ha tagit bort nålen, blanda försiktigt tumörcellens suspension av intresse för att få en homogen cellfjädring och ladda 7,5 x 10 till den fjärde av cellerna i 20 mikroliter PBS i en Hamilton-spruta.Markera Hamilton-sprutan med celler 10 millimeter från nålspetsen och sätt in nålen till 10 millimeters märket i hålet som görs av 22-gauge nålen. Ladda sedan försiktigt ut hela volymen av celler i märghålan och placera råttan i en bur på en värmeplatta med övervakning tills full recumbency. För intravenös doxorubicin administration, efter anestesi bekräftelse, använd noggrann dissekering för att visualisera höger eller vänster halsven och för in nålen i den övergående muskelvävnaden.Rikta nålen mot huvudet in i halsvenenlumen, eftersom den visualiseras i halsvenen som är främre mot bröstmuskeln och dra en liten volym blod i nålspetsen för att bekräfta en korrekt insättning. När nålen är på plats, injicera långsamt 100 till 150 mikroliter av två milligram per kilo doxorubicin under en minut. Lösningen ska vara synlig i venen under leveransen.När all lösning har levererats, använd steril gasväv för att applicera försiktigt tryck på venen och använd tre till fyra sårklämmor för att stänga snittet. Efter att ha bekräftat sedering, ta bort håret på höger ben, upp till ventralen och rygglivet, och placera råttan i supinläge på en värmeplatta. Skrubba huden från mitten av kalven till strax ovanför höftleden i höger underliv som visat och applicera salva på djurets ögon.Använd sterila handskar och instrument, dra benet genom ventilen på det sterila kirurgiska draperi och gör ett omkretst kutan snitt bara proximalt till kvävningen. Deglove bakbenet för att exponera lårartären och venen på bakbenets ventrala-mediala yta och använd 4-0 absorberbara suturer för att litigate kärlen i nivå med mitten av lårbenet och transect distally. Kläm fast venen distally för att minska läckage under muskeldissekering och använd trubbig dissekering för att bortföra höftleden med lateral utåtgående rotation.Lokalisera och disartikulera lårbenets huvud från acetabulum och ta bort eventuell återstående vävnad och håll benet fastsatt på kroppen. Administrera ett stänkblock till acetabulum och ischiasnerven med cirka sex milligram per kilo ropivakain och använd en enkel avbruten 4-0 absorberbar sutur för att stänga muskulaturen över acetabulum. Använd sedan sårklämmor placerade fem till 10 millimeter för att stänga hudens kanter.Röntgenbilder för tumör övervakning möjliggör bekräftelse av ben tumör invasion och kan utföras på nyligen amputerade eller formalin-fasta lemmar. Röntgenbilder möjliggör också utvärdering av lungornas radiografimorfologi med och utan metastaser, vilket ger en snabb och enkel metod för att fastställa behovet av dödshjälp för att förhindra onödiga spontana dödsfall. I råtta osteosarcoma kan både osteolytisk och osteoblastic tumör morfologi bekräftas av histopatologi i den amputerade delen.Observera att det närbenet saknas i detta exempel och att det intilliggande benet har ersatts med eller förstärkts av nytt vävt ben som är orienterad vinkelrätt mot cortex befintliga skaft. Öar av omogna osteoider kan också identifieras inom tumören. I dessa bilder kan mikroskopiska morfologin av representativa lung metastaser, vissa med mineraliserade ben och tumör vaskulär emboli observeras.Immunostaining av primära osteosarcoma tumörer kan avslöja infiltration av tumörer av immun cell populationer, såsom CD68-positiva makrofager eller CD3-positiva T-celler. Western blotting av tumörcellprotein lysates kan användas för att bestämma uttrycket av proteinkinaser, proteinkinasreceptorer och andra proteiner som interagerar med dessa vägar. För tibial implantation, när det första tibialhålet har gjorts, fortsätt att hålla benet i din icke-dominerande hand i samma vinkel för att hålla huden och benhålen uppradade för att göra Hamilton-nålinsättningen enklare.För halsinjektion, sätt in nålen i muskeln, men vinkla inte nålen för mycket för att undvika att venen missas. För amputationen, öva disarticulationen på avlivade råttor först.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescerande Orthotopic musmodell för cancer i bukspottskörteln

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murina Experimentellt av ursprungliga tumören utveckling och peritonealdialys metastasering<em&gt; via</em&gt; Orthotopic Ympning med ovarialcancer celler

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

En portådern Injection modell för att studera levermetastaser av bröstcancer

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Practical Considerations in Studying Metastatic Lung Colonization in Osteosarcoma Using the Pulmonary Metastasis Assay

Praktiska överväganden studera metastaserande lungcancer kolonisationen i osteosarkom med pulmonell metastas-analys

The pulmonary metastasis assay (PuMA) is an ex vivo lung explant and closed cell culture system that permits researchers to study the biology of lung ...

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

En syngena pankreascancer musmodell att studera effekterna av irreversibel elektroporation

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

En självlysande och fluorescerande ortotop syngena murina modell av Androgen-beroende och kastrationsresistent prostatacancer

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping av ortotop Homograft (syngena) av murina primära KPC pankreas duktal adenokarcinom av flödescytometri

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

Ortotop Transplantation av syngena lunga adenokarcinom celler att studera PD-L1-uttryck

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

Acellulärt och cellulära Lung modell att studera tumör metastasering

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Patient-härledda ortotopiska xenograft-modeller för Human Urotelial cellkarcinom och kolorektal cancer tumörtillväxt och spontan metastaser

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...