Name: in vivo imaging of fully active brain tissue in awake zebrafish larvae and juveniles by skull and skin removal
Uploaded: 2021-02-10T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging of Fully Active Brain Tissue in Awake Zebrafish Larvae and Juveniles by Skull and Skin Removal at JoVE.com

우리는 특히 훌륭한 동물 보호와 헤르만 도링, 모하메드 엘세이, 솔 포즈- 멘데스, 야콥 폰 트로타, 코말리 발리셰티, 바바라 윈터에게 도움을 준 티모 프리치에게 감사드립니다. 우리는 또한 그들의 의견에 대한 Köster 연구소의 다른 모든 구성원에게 감사드립니다. 이 프로젝트는 독일 연구 재단 (DFG, KO1949/7-2) 프로젝트 241961032 (RWK) 및 분데스 장관 퓌르 빌둥 und Forsung (BMBF)에 의해 부분적으로 투자되었다; 에라넷 뉴런 II CIPRESS 프로젝트 01EW1520 ~ JCM)이 인정된다.

여기에 설명된 모든 동물 작업은 법적 규정에 따라 다됩니다(EU-지침 2010/63). 생선의 유지 보수 및 취급은 지방 당국과 테크니슈 유니버시타트 브라운슈바이크의 동물 복지 대표에 의해 승인되었습니다.
1. 인공 세레브로 척수액 (ACSF), 낮은 녹는 아가로즈 및 날카로운 유리 바늘의 준비
<ol><li>증류수의 농도에 따라 나열된 화학 물질을 용해하여 ACSF를 준비합니다. 134 mM NaCl (58.4...

<ol>
	<li>Embryology. Zebrafish Development Available from: <a target="_blank" href="https://embryology.med.unsw.edu.au/embryology/index.php/Zebrafish_Development">https://embryology.med.unsw.edu.au/embryology/index.php/Zebrafish_Development</a> (2020)</li><li>Sassen, W. A., K&#246;ster, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+toolbox+for+genetic+manipulation+of+zebrafish.+Advances+in+Genomics+and+Genetics.">A molecular toolbox for genetic manipulation of zebrafish. Advances in Genomics and Genetics.</a> Dove Medical Press. 2015 (5), 151-163 (2015).</li><li>Singh, A. 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B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenylthiourea+disrupts+thyroid+function+in+developing+zebrafish.">Phenylthiourea disrupts thyroid function in developing zebrafish.</a> Development Genes and Evolution. 212, 593-598 (2003).</li><li>Baumann, L., Ros, A., Rehberger, K., Neuhauss, S. C. 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Reference Module in Biomedical Sciences. , (2018).</li><li>Attili, S., Hughes, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaesthetic+tricaine+acts+preferentially+on+neural+voltage-gated+sodium+channels+and+fails+to+block+directly+evoked+muscle+contraction.">Anaesthetic tricaine acts preferentially on neural voltage-gated sodium channels and fails to block directly evoked muscle contraction.</a> PLoS One. 9 (8), 103751 (2014).</li><li>Namikawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+neurodegenerative+spinocerebellar+ataxia+type+13+in+zebrafish+using+a+Purkinje+neuron+specific+tunable+coexpression+system.">Modeling neurodegenerative spinocerebellar ataxia type 13 in zebrafish using a Purkinje neuron specific tunable coexpression system.</a> Journal of Neuroscience. 39 (20), 3948-3969 (2019).</li><li>Hennig, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+models+of+synaptic+short+term+plasticity.">Theoretical models of synaptic short term plasticity.</a> Frontiers in Computational Neuroscience. 7 (45), (2013).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moesin1+and+Ve-cadherin+are+required+in+endothelial+cells+during+in+vivo+tubulogenesis.">Moesin1 and Ve-cadherin are required in endothelial cells during in vivo tubulogenesis.</a> Development. 137, 3119-3128 (2010).</li><li>Hobro, A., Smith, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evaluation+of+fixation+methods:+Spatial+and+compositional+cellular+changes+observed+by+Raman+imaging.">An evaluation of fixation methods: Spatial and compositional cellular changes observed by Raman imaging.</a> Vibrational Spectroscopy. 91, 31-45 (2017).</li><li>Knogler, L. D., Kist, A. M., Portugues, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+context+dominates+output+from+purkinje+cell+functional+regions+during+reflexive+visuomotor+behaviours.">Motor context dominates output from purkinje cell functional regions during reflexive visuomotor behaviours.</a> eLife. 8, 42138 (2019).</li><li>Hsieh, J., Ulrich, B., Issa, F. A., Wan, J., Papazian, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+development+of+Purkinje+cell+excitability,+functional+cerebellar+circuit,+and+afferent+sensory+input+to+cerebellum+in+zebrafish.">Rapid development of Purkinje cell excitability, functional cerebellar circuit, and afferent sensory input to cerebellum in zebrafish.</a> Frontier in Neural Circuits. 8 (147), (2014).</li><li>Scalise, K., Shimizu, T., Hibi, M., Sawtell, N. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+cerebellar+Purkinje+cells+during+fictive+optomotor+behavior+in+larval+zebrafish.">Responses of cerebellar Purkinje cells during fictive optomotor behavior in larval zebrafish.</a> Journal of Neurophysiology. 116 (5), 2067-2080 (2016).</li><li>Harmon, T. C., Magaram, U., McLean, D. L., Raman, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+responses+of+Purkinje+neurons+and+roles+of+simple+spikes+during+associative+motor+learning+in+larval+zebrafish.">Distinct responses of Purkinje neurons and roles of simple spikes during associative motor learning in larval zebrafish.</a> eLife. 6, 22537 (2017).</li><li>Zehendner, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moderate+hypoxia+followed+by+reoxygenation+results+in+blood-brain+barrier+breakdown+via+oxidative+stress-dependent+tight-junction+protein+disruption.">Moderate hypoxia followed by reoxygenation results in blood-brain barrier breakdown via oxidative stress-dependent tight-junction protein disruption.</a> PLoS One. 8 (12), 82823 (2013).</li><li>Dhabhar, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+short-term+stress+response+-+mother+nature's+mechanism+for+enhancing+protection+and+performance+under+conditions+of+threat,+challenge,+and+opportunity.">The short-term stress response - mother nature's mechanism for enhancing protection and performance under conditions of threat, challenge, and opportunity.</a> Frontiers of Neuroendocrinology. 49, 175-192 (2018).</li></ol>

제시된 방법은 생체 내 환경에서 뉴런의 고해상도 이미지를 기록하기 위한 색소 침착을 억제하는 약제와 함께 뇌 격리 또는 제브라피시 애벌레의 치료에 대한 대체 접근법을 제공한다. 이 방법으로 기록 된 이미지의 품질은 이식 된 뇌의 이미지와 유사하지만 자연 조건에서도 마찬가지입니다.
더욱이, 형광의 강도의 손실은 고정제(18)로치료에 대한 ?...

최근 수십 년 동안,제브라피쉬(Danio rerio)는배아 및 애벌레 발달 연구를 위한 가장 인기 있는 척추동물 모델 유기체 중 하나로 발전해 왔습니다. 제브라피쉬 암컷의 큰 대변은 배아의 급속한 자궁 발달과 초기 배아 발달 단계 동안의 투명성과 결합된 몇 가지 주요 요인에 불과하며, 제브라피쉬는 발달 문제1을유발하는 강력한 모델 유기체로 만드는 몇 가지 주요 요인일 뿐이다. 생체 내 고해상도와 결합된 분자 유전 기술의 어드밴스는 발달 과정의 기본 세포 생물학적 메커니즘을 해결하는 데허용하였다 2. 특히, 신경 분화, 생리학, 연결 성 및 기능 분야에서, 제브라피쉬는 전례없는 세부 사항에서 분자 역학, 뇌 기능 및 유기체 행동의 상호 작용에 빛을 비추고있다.
그러나, 이 연구 결과의 대부분은 신경계 조직의 투명성이 점진적으로 분실되기 때문에 발달의 첫번째 주 도중 배아 및 초기 애벌레 단계에 제한됩니다. 이러한 단계에서 뇌 조직은 두개골 분화 및 색소 침착3에의해 차폐되는 고해상도 현미경 검사법에 의해 접근이 방지됩니다.
따라서, 신경 분화의 주요 질문, 성숙, 및 뉴런 연결또는 시냅스 스케일링의 정제와 같은 가소성은 공부하기 어렵다. 이러한 세포 과정은 예를 들어 사회적 행동, 의사 결정 또는 동기 부여 기반 행동을 구동하는 세포 메커니즘을 정의하기 위해 중요하며, 몇 주 간의 오래된 애벌레에 대한 제브라피시 연구가 최근 행동 연구4에기초한 주요 연구 결과를 기여했습니다.
몇 주 동안 제브라피시 애벌레에서 색소 침착을 억제하는 약리학적 접근법은 거의 실현 가능하지 않거나5,6,7,8에해로운 효과를 일으킬 수도 있다. 캐스퍼9 또는 크리스탈10과같은 특정 색소 침착 결함을 가진 이중 또는 삼중 돌연변이 균주는 엄청난 귀중한 도구가되었지만 번식에서 힘들고 몇 자손을 제공하며 과도한 근친 교배로 인한 유전 적 기형을 축적 할 위험이 있습니다.
여기서, 대안으로 최소 침습 절차는 어떤 제브라피시 균주에 적용 할 수 있습니다. 이 절차는 생활과 깨어 얼룩말 물고기 애벌레에 있는 신경 활동을 기록하기 위하여 전기 생리학 연구 결과에서 적응되었습니다. 텔레오스트에서, 피부와 부드러운 두개골 연골은 두뇌 혈관과 단단히 섞이지 않기 때문에, 이 층을 마이크로 박리해서 주의 깊게 제거할 수 있습니다. 이것은 손상 없이 신경과 축 관을 포함 하는 뇌 조직을 노출 하 고 신경 형태를 기록에 대 한 허용, 시 냅 스 구조 와 그들의 분자 내용을 포함 하 여, 차례로 Ca 와 같은 생리적 변화의 관찰을 포함2+ 과도 또는 세포 내 전송 이벤트 최대 몇 시간 동안. 더욱이, 설명적 특성을 넘어, 뇌 조직에 직접 접근은 신경 약리학 물질 관리 및 광유전학 적 접근을 통해 성숙한 신경 기능의 심문을 가능하게 합니다. 따라서, 진정한 구조 기능 관계는 이 두뇌 노출 전략을 사용하여 청소년 제브라피시 뇌에서 드러나게 될 수 있다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Calcium chloride</td>
			<td>Roth</td>
			<td>A119.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Laser scanning microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>TCS SP8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>d-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>d-Tubocurare</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T2379-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Capillary type 1</td>
			<td>WPI</td>
			<td>1B150F-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Capillary type 2</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>GC100F-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Coverslip</td>
			<td>deltalab</td>
			<td>D102424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Roth</td>
			<td>9105.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td>Invitrogen (Thermo Fischer)</td>
			<td>H3570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging chamber</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>81156</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Normapur</td>
			<td>26764298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LM-Agarose</td>
			<td>Condalab</td>
			<td>8050.55</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride (Hexahydrate)</td>
			<td>Roth</td>
			<td>A537.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Camera</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DFC9000 GTC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle-Puller type 1</td>
			<td>NARISHIGE</td>
			<td>Model PC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle-Puller type 2</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>Model P-2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur-Pipettes 3ml</td>
			<td>A.Hartenstein</td>
			<td>20170718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Roth</td>
			<td>P029.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Normapur</td>
			<td>28244262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricain</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E10521-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waterbath</td>
			<td>Phoenix Instrument</td>
			<td>WB-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm petri dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>833900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90 mm petri dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>821473001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo imaging of fully active brain tissue in awake zebrafish larvae and juveniles by skull and skin removal

뇌 발달 과 성숙 중에 발생하는 일시적인 변화를 이해하려면 세포 및 세포 외 해상도의 공간과 시간에 대한 상세한 고해상도 이미징이 필요합니다. 분자 및 이미징 기술의 발전으로 투명한 제브라피시 배아에서 뇌 발달의 세포 및 분자 메커니즘에 대한 수많은 상세한 통찰력을 얻을 수 있었습니다. 최근, 사회 행동의 제어, 의사 결정 또는 동기 부여 중심 행동의 예를 들어 제어되는 수정 후 몇 주 후 후 애벌레 단계에서 발생하는 신경 연결의 정제 과정은 연구의 초점으로 이동했다. 이러한 단계에서, 제브라피쉬 피부의 색소 침착은 뇌 조직에 대한 가벼운 침투를 방해하고, 배아 단계에 대한 해결책, 예를 들어, 색소 침착의 약리학적 억제는 더 이상 가능하지 않다.
따라서, 깨어 있는 제브라피시의 뇌에 대한 현미경 접근을 위한 최소침습수술용용액은 전기생리학적 접근법에서 유래되는 것을 제공한다. 텔레오스트에서 피부와 부드러운 두개골 연골은 이러한 층을 미세 하게 벗겨내어 손상없이 기본 뉴런과 축산 관을 노출시킴으로써 조심스럽게 제거 할 수 있습니다. 이를 통해 시냅스 구조와 분자 내용을 포함한 신경 형태학을 기록하고 Ca2+ 과도 또는 세포내 운송 이벤트와 같은 생리적 변화의 관찰을 할 수 있습니다. 또한 약리학적 억제 또는 광유전학 적 조작을 통해 이러한 프로세스의 심문이 가능합니다. 이 두뇌 노출 접근은 분 또는 시간의 범위에 있는 살아있는 두뇌 조직에 있는 이 사건의 상호 관계 그리고 상호 의존뿐만 아니라 뉴런에 있는 구조적이고 생리적인 변경에 관하여 정보를 제공합니다. 이 기술은 지금까지 테스트 된 최신 발달 단계인 수정 후 30 일까지 제브라피시 애벌레의 생체 내 뇌 이미징에 적합합니다. 따라서 시냅스 미세 조정 및 스케일링, 축산 및 수지상 운송, 시토스켈레탈 화물의 시냅스 타겟팅 또는 현지 활동에 의존하는 표현과 같은 중요한 질문에 대한 액세스를 제공합니다. 따라서 이러한 마운팅 및 이미징 접근 방식에 대한 광범위한 사용이 예상될 수 있습니다.

그림 3A,C 형질 전환선 Tg의 14dpf 애벌레 표시[-7.5Ca8:GFP]bz12[15] 두개골은 여전히 그대로. 과부하 피부의 안료 세포는 머리 전체에 분포되어 관심 영역에서 형광 신호를 방해하고 있습니다 (여기, 소뇌). 이 조건에서 애벌레와 함께, 뇌의 고해상도 이미지를 얻을 수 없습니다. 그림 3B 열...

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In vivo Imaging of Fully Active Brain Tissue in Awake Zebrafish Larvae and Juveniles by Skull and Skin Removal

여기서 우리는 생체 내 최대 애벌레와 청소년 단계에서 제브라피시 배아 뇌를 이미지화하는 방법을 제시합니다. 전기 생리학적 접근법에서 채택된 이 미세침습 절차는 성숙한 뉴런의 세포 및 세포 세포 이하 세부 사항에 대한 액세스를 제공하며 뇌 기능 및 약물 개입을 특성화하기 위한 광유전학 및 신경 약리학과 결합될 수 있습니다.

두개골과 피부 제거에 의해 깨어 얼룩말 물고기 애벌레와 청소년에서 완전히 활성 뇌 조직의 생체 내 이미징

Understanding the ephemeral changes that occur during brain development and maturation requires detailed high-resolution imaging in space and time at ...

이 방법은 나중에 애벌레 단계에서 Zebrafish 뇌의 시각화를 허용하여 이전에는 불가능했던 생체 내에서 매우 상세한 방식으로 신경 아키텍처를 관찰할 수 있습니다. 나중에 애벌레 발달 도중 나타나고 명확한 화상 진찰에서 두뇌를 방지하는 안료 세포는, 단순히 제거되기 때문에 이 방법에 아무 문제가 없습니다. 이 방법으로, 뇌의 애벌레 발달 중에 나중에 발생하는 프로세스, 시냅스 가소성, 뉴런의 변성 또는 재생에 영향을 미치는 과정을 연구할 수 있어야 합니다.실험을 시작하기 전에 마이크로 피펫 풀러를 사용하여 유리 모세 혈관에서 날카로운, 얇은 유리 바늘을 준비합니다. 다음으로 플라스틱 파스퇴르 파이펫을 사용하여 적절한 용액을 포함하는 90mm 직경의 페트리 접시에 애벌레를 수집합니다. 선택한 유충을 ACSF가 들어있는 35밀리미터 직경의 페트리 접시에 옮기고 24 by 24밀리미터, 사각형, 유리 커버를 페트리 접시 뚜껑에 놓습니다.그런 다음 실험에 필요한 ACSF의 부피를 카보겐으로 산소화에 적합한 phial로 알리쿼트합니다. 유충을 포함하려면 파스퇴르 파이펫을 사용하여 마취된 유충을 스테레오 현미경으로 마운팅 챔버로 옮겨 넣습니다. 어떤 애벌레가 여전히 움직일 수 있다면, 물고기가 완전히 움직일 수 없을 때까지 실험을 위해 물고기를 사용하지 마십시오.유충이 움직이지 않는 경우, 조심스럽게 초과 매체를 제거하고 즉시 애벌레에 낮은 녹는 아가로즈의 적어도 1 밀리리터를 추가합니다. 가로즈 표면에 최대한 가깝게 향하는 등지와 얼룩말 피시를 오리엔테이션합니다. 애벌레가 거꾸로 된 현미경을 사용하여 이미지화될 경우, 굳건한 후 애벌레를 포함하는 아가로즈를 작은 큐비드 블록으로 다듬는다.이미징을 위해 뇌를 노출하려면 필요에 따라 뇌 영역에 과도한 아가로즈를 잘라내고 유리 바늘을 사용하여 근처의 피부를 통해 작은 절개를 하지만 끝나지 않고 조직에 너무 깊이 침투하지 않고 관심 영역을 사용하십시오. 간신히 피부 표면 바로 아래에 바늘을 이동, 주의 깊게 관심 의 영역을 통해 피부를 제거하거나 옆으로 밀어 수 있을 때까지 관심의 영역 주위에 아주 작은 상처를 계속. 조직이 모든 배아에서 제거되었을 때, 거꾸로 된 현미경의 이전에 준비 된 이미징 챔버에 낮은 녹는 아가로즈의 작은 방울을 추가하고 작은 주걱을 사용하여 이미징 챔버의 아가로즈 드롭에 180도 의 가가로즈 블록을 뒤집습니다.아가로즈가 고화되면 이미징 챔버를 신선한 ACSF로 채우고 애벌레를 이미징하기 시작합니다. 여기서, 두개골이 그대로 있는 14일 후 비옥한 형질전환유충을 그대로 관찰할 수 있다. 도시된 바와 같이, 과부하 피부 내의 안료 세포는 머리 전체에 분포되어 관심 영역에서 형광 신호를 방해합니다.두개골 수술을 받은 후, 관심 분야는 상세한 고해상도 이미징을 위해 자유롭게 접근할 수 있게 됩니다. 피부, 두개골 및 혈액 뇌 장벽은 또한 두개골 수술 후에만 이 뇌 세포에서 관찰된 강력한 핵 염료 염색에 의해 설명된 바와 같이 뇌내 물질의 침투를 방해합니다. 이러한 장점은 또한 30 일 후에 수정 후에 관찰됩니다.적색 형광 단백질의 발현으로 인한 형광뇌 혈관을 함유하는 형질형 물고기에서, mCherry는 내피 세포에서, 이미지 스택의 깊이 값에서 색 코딩조차도 거의 250 미크론에 뇌 내에 깊이 묻혀 있는 혈관조차도 여전히 명확하게 보이고 추적할 수 있음을 보여줍니다. 이 절차를 수행 할 때 항상이 살아있는 동물의 수술임을 명심하십시오. 따라서 존중과 집중된 마음이 필요합니다.이 절차 후, 시냅스 구조, 생리학적 및 세포 내 수송 이벤트를 포함한 뉴런 형태의 기록은 7일 이상의 유충에서 수행될 수 있다. 이 기술을 사용하여, 우리는 나중에 애벌레 단계에서 생기는 두뇌에 있는 세포 프로세스를 또한 연구할 수 있는 접근을 제공하기를 희망합니다, 예를 들면, 사회적인 행동 또는 의사 결정과 같은 복잡한 행동을 설치에 관련시키는 관련시키는.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

개발 Zebrafish Forebrain에 Clonally 관련 신경 전구 세포의 시간 경과 라이브 영상

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

연구

신경과학

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

의 Proprioceptors의 시각화<em&gt; Drosophila</em&gt; 애벌레와 Pupae

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

초음파 혈액 - 뇌 장벽 파괴 및 망간 향상된 MRI를 사용하여 기능성 Neuroimaging

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae

Zebrafish의 유충에 자동으로 높은 처리량 행동 분석

We have created a novel high-throughput imaging system for the analysis of behavior in 7-day-old zebrafish larvae in multi-lane plates. This system ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

동시<em&gt; 생체</em두 망막의&gt; 기능 테스트로<em&gt; 생체</em&gt; 전위도 시스템

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Exposure of the Pig CNS for Histological Analysis: A Manual for Decapitation, Skull Opening, and Brain Removal

조직 학적 분석을위한 돼지 CNS의 노출 : 목 베기, 두개골 열기위한 매뉴얼 및 뇌 제거

Pigs have become increasingly popular in large-animal translational neuroscience research as an economically and ethically feasible substitute to ...

Labeling and Imaging of Amyloid Plaques in Brain Tissue Using the Natural Polyphenol Curcumin

천연 폴리페놀 커큐민을 사용하여 뇌 조직에서 아밀로이드 플라크의 라벨링 및 이미징

Deposition of amyloid beta protein (A&#946;) in extra- and intracellular spaces is one of the hallmark pathologies of Alzheimer&#39;s disease (AD). ...

A Hydrophobic Tissue Clearing Method for Rat Brain Tissue

쥐 뇌 조직을 위한 소수성 조직 청산 방법

Hydrophobic tissue clearing methods are easily adjustable, fast, and low-cost procedures that allows for the study of a molecule of interest in unaltered ...

Implantation of a Cranial Window for Repeated In Vivo Imaging in Awake Mice

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깨어있는 마우스 에서 반복되는 생체 내 이미징을위한 두개골 창 이식

To fully understand the cellular physiology of neurons and glia in behaving animals, it is necessary to visualize their morphology and record their ...

Brain Pericyte Calcium and Hemodynamic Imaging in Transgenic Mice In Vivo

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생체 내 트랜스제닉 마우스의 뇌 성 구체 칼슘 및 혈역학 이미징

Recent advances in protein biology and mouse genetics have made it possible to measure intracellular calcium fluctuations of brain cells in vivo and to ...