Name: in vivo imaging of fully active brain tissue in awake zebrafish larvae and juveniles by skull and skin removal
Uploaded: 2021-02-10T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging of Fully Active Brain Tissue in Awake Zebrafish Larvae and Juveniles by Skull and Skin Removal at JoVE.com

Agradecemos especialmente a Timo Fritsch pelo excelente cuidado animal e Hermann Döring, Mohamed Elsaey, Sol Pose-Méndez, Jakob von Trotha, Komali Valishetti e Barbara Winter pelo apoio útil. Também somos gratos a todos os outros membros do laboratório Köster por seu feedback. O projeto foi financiado em parte pelo projeto da Fundação Alemã de Pesquisa (DFG, KO1949/7-2) 241961032 (para a RWK) e pelo Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF; Era-Net NEURON II CIPRESS projeto 01EW1520 para JCM) é reconhecido.

Todo o trabalho animal descrito aqui está de acordo com as regulamentações legais (Diretiva UE 2010/63). A manutenção e manuseio de peixes foram aprovadas pelas autoridades locais e pelo representante do bem-estar animal da Technische Universität Braunschweig.
1. Preparação de fluido espinhal cerebro artificial (ACSF), agarose de baixo derretimento e agulhas de vidro afiadas
<ol><li>Prepare o ACSF dissolvendo os produtos químicos listados nas seguintes concentrações em água desti...

<ol>
	<li>Embryology. Zebrafish Development Available from: <a target="_blank" href="https://embryology.med.unsw.edu.au/embryology/index.php/Zebrafish_Development">https://embryology.med.unsw.edu.au/embryology/index.php/Zebrafish_Development</a> (2020)</li><li>Sassen, W. A., K&#246;ster, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+toolbox+for+genetic+manipulation+of+zebrafish.+Advances+in+Genomics+and+Genetics.">A molecular toolbox for genetic manipulation of zebrafish. Advances in Genomics and Genetics.</a> Dove Medical Press. 2015 (5), 151-163 (2015).</li><li>Singh, A. P., N&#252;sslein-Volhard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+stripes+as+a+model+for+vertebrate+colour+pattern+formation.">Zebrafish stripes as a model for vertebrate colour pattern formation.</a> Current Biology. 25 (2), 81-92 (2015).</li><li>Kalueff, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+to+recognize+zebrafish+'affective'+behavior.">Time to recognize zebrafish 'affective' behavior.</a> Brill: Behaviour. 149 (10-12), 1019-1036 (2012).</li><li>Karlsson, J., von Hofsten, J., Olsson, P. -. 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A., Leung, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Curare+(d-Tubocurarine).">Curare (d-Tubocurarine).</a> Encyclopedia of Toxicology (3rd Edition). , 1088-1089 (2014).</li><li>Gesler, H. M., Hoppe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3,6-bis(3-diethylaminopropoxy)+pyridazine+bismethiodide,+a+long-acting+neuromuscular+blocking+agent.">3,6-bis(3-diethylaminopropoxy) pyridazine bismethiodide, a long-acting neuromuscular blocking agent.</a> The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 118 (4), 395-406 (1956).</li><li>Furman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Alpha Bungarotxin. Reference Module in Biomedical Sciences. , (2018).</li><li>Attili, S., Hughes, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaesthetic+tricaine+acts+preferentially+on+neural+voltage-gated+sodium+channels+and+fails+to+block+directly+evoked+muscle+contraction.">Anaesthetic tricaine acts preferentially on neural voltage-gated sodium channels and fails to block directly evoked muscle contraction.</a> PLoS One. 9 (8), 103751 (2014).</li><li>Namikawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+neurodegenerative+spinocerebellar+ataxia+type+13+in+zebrafish+using+a+Purkinje+neuron+specific+tunable+coexpression+system.">Modeling neurodegenerative spinocerebellar ataxia type 13 in zebrafish using a Purkinje neuron specific tunable coexpression system.</a> Journal of Neuroscience. 39 (20), 3948-3969 (2019).</li><li>Hennig, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+models+of+synaptic+short+term+plasticity.">Theoretical models of synaptic short term plasticity.</a> Frontiers in Computational Neuroscience. 7 (45), (2013).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moesin1+and+Ve-cadherin+are+required+in+endothelial+cells+during+in+vivo+tubulogenesis.">Moesin1 and Ve-cadherin are required in endothelial cells during in vivo tubulogenesis.</a> Development. 137, 3119-3128 (2010).</li><li>Hobro, A., Smith, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evaluation+of+fixation+methods:+Spatial+and+compositional+cellular+changes+observed+by+Raman+imaging.">An evaluation of fixation methods: Spatial and compositional cellular changes observed by Raman imaging.</a> Vibrational Spectroscopy. 91, 31-45 (2017).</li><li>Knogler, L. D., Kist, A. M., Portugues, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+context+dominates+output+from+purkinje+cell+functional+regions+during+reflexive+visuomotor+behaviours.">Motor context dominates output from purkinje cell functional regions during reflexive visuomotor behaviours.</a> eLife. 8, 42138 (2019).</li><li>Hsieh, J., Ulrich, B., Issa, F. A., Wan, J., Papazian, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+development+of+Purkinje+cell+excitability,+functional+cerebellar+circuit,+and+afferent+sensory+input+to+cerebellum+in+zebrafish.">Rapid development of Purkinje cell excitability, functional cerebellar circuit, and afferent sensory input to cerebellum in zebrafish.</a> Frontier in Neural Circuits. 8 (147), (2014).</li><li>Scalise, K., Shimizu, T., Hibi, M., Sawtell, N. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+cerebellar+Purkinje+cells+during+fictive+optomotor+behavior+in+larval+zebrafish.">Responses of cerebellar Purkinje cells during fictive optomotor behavior in larval zebrafish.</a> Journal of Neurophysiology. 116 (5), 2067-2080 (2016).</li><li>Harmon, T. C., Magaram, U., McLean, D. L., Raman, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+responses+of+Purkinje+neurons+and+roles+of+simple+spikes+during+associative+motor+learning+in+larval+zebrafish.">Distinct responses of Purkinje neurons and roles of simple spikes during associative motor learning in larval zebrafish.</a> eLife. 6, 22537 (2017).</li><li>Zehendner, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moderate+hypoxia+followed+by+reoxygenation+results+in+blood-brain+barrier+breakdown+via+oxidative+stress-dependent+tight-junction+protein+disruption.">Moderate hypoxia followed by reoxygenation results in blood-brain barrier breakdown via oxidative stress-dependent tight-junction protein disruption.</a> PLoS One. 8 (12), 82823 (2013).</li><li>Dhabhar, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+short-term+stress+response+-+mother+nature's+mechanism+for+enhancing+protection+and+performance+under+conditions+of+threat,+challenge,+and+opportunity.">The short-term stress response - mother nature's mechanism for enhancing protection and performance under conditions of threat, challenge, and opportunity.</a> Frontiers of Neuroendocrinology. 49, 175-192 (2018).</li></ol>

O método apresentado fornece uma abordagem alternativa ao isolamento cerebral ou ao tratamento de larvas de zebrafish com fármacos inibindo pigmentação para registro de imagens de alta resolução de neurônios em seu ambiente in vivo. A qualidade das imagens registradas com este método é comparável às imagens de cérebros explantados, mas em condições naturais.
Além disso, evita-se uma perda de intensidade de fluorescência, pois não há necessidade de tratamento com fixa...

Nas últimas décadas, o zebrafish (Danio rerio) evoluiu como um dos organismos modelo vertebrados mais populares para estudos de desenvolvimento embrionário e larval. A grande fecundidade das fêmeas de zebrafish aliada ao rápido desenvolvimento ex utero do embrião e sua transparência durante os estágios iniciais do desenvolvimento embrionário são apenas alguns dos fatores-chave que fazem do zebrafish um poderoso organismo modelo para resolver questões de desenvolvimento1. Avanços nas tecnologias genéticas moleculares combinados com estudos de alta resolução in vivo de imagem permitiram abordar mecanismos biológicos celulares subjacentes aos processos de desenvolvimento2. Em particular, no campo da diferenciação neuronal, fisiologia, conectividade e função, o zebrafish lançou luz sobre a interação da dinâmica molecular, funções cerebrais e comportamento organismo em detalhes sem precedentes.
No entanto, a maioria desses estudos são restritos a estágios embrionários e larvais iniciais durante a primeira semana de desenvolvimento, uma vez que a transparência do tecido do sistema nervoso é progressivamente perdida. Nestas fases, o tecido cerebral é impedido de acessar por abordagens de microscopia de alta resolução que se tornam protegidas pela diferenciação do crânio e pigmentação3.
Portanto, questões-chave de diferenciação neuronal, maturação e plasticidade, como o refinamento da conectividade neuronal ou o dimensionamento sináptico são difíceis de estudar. Esses processos celulares são importantes para definir mecanismos celulares que conduzem, por exemplo, comportamento social, tomada de decisão ou comportamento baseado em motivação, áreas para as quais a pesquisa de zebrafish sobre larvas de várias semanas de idade contribuiu recentemente com os principais achados baseados em estudos comportamentais4.
Abordagens farmacológicas para inibir a pigmentação em larvas de zebrafish por várias semanas são pouco viáveis ou podem até causar efeitos prejudiciais5,6,7,8. Cepas mutantes duplas ou triplas com defeitos de pigmentação específicos, como o casper9 ou o cristal10,tornaram-se ferramentas tremendamente valiosas, mas são trabalhosas na reprodução, fornecem poucos descendentes e representam o perigo de acumular malformações genéticas devido ao excesso de endogamia.
Aqui, é fornecido um procedimento invasivo mínimo como alternativa que seja aplicável a qualquer cepa de zebrafish. Este procedimento foi adaptado de estudos eletrofisiológicos para registrar atividade neuronal em larvas vivas e acordadas de zebrafish. Em teleosts, a cartilagem da pele e do crânio macio pode ser cuidadosamente removida através da micro-descascamento dessas camadas, porque elas não estão firmemente entrelaçadas com a vasculatura cerebral. Isso permite expor o tecido cerebral contendo neurônios e tratos axonais sem danos e para o registro de morfologia neuronal, incluindo estruturas sinápticas e seus conteúdos moleculares, que por sua vez incluem a observação de alterações fisiológicas como transitórios ca2+ ou eventos de transporte intracelular por até várias horas. Além disso, além das caracterizações descritivas, o acesso direto ao tecido cerebral permite o interrogatório de funções neuronais maduras por meio da administração de substâncias neurofarmacológicas e abordagens optogenéticas. Portanto, as relações de função da verdadeira estrutura podem ser reveladas no cérebro juvenil de zebrafish usando essa estratégia de exposição cerebral.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Calcium chloride</td>
			<td>Roth</td>
			<td>A119.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Laser scanning microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>TCS SP8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>d-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>d-Tubocurare</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T2379-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Capillary type 1</td>
			<td>WPI</td>
			<td>1B150F-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Capillary type 2</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>GC100F-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Coverslip</td>
			<td>deltalab</td>
			<td>D102424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Roth</td>
			<td>9105.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td>Invitrogen (Thermo Fischer)</td>
			<td>H3570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging chamber</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>81156</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Normapur</td>
			<td>26764298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LM-Agarose</td>
			<td>Condalab</td>
			<td>8050.55</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride (Hexahydrate)</td>
			<td>Roth</td>
			<td>A537.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Camera</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DFC9000 GTC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle-Puller type 1</td>
			<td>NARISHIGE</td>
			<td>Model PC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle-Puller type 2</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>Model P-2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur-Pipettes 3ml</td>
			<td>A.Hartenstein</td>
			<td>20170718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Roth</td>
			<td>P029.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Normapur</td>
			<td>28244262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricain</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E10521-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waterbath</td>
			<td>Phoenix Instrument</td>
			<td>WB-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm petri dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>833900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90 mm petri dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>821473001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo imaging of fully active brain tissue in awake zebrafish larvae and juveniles by skull and skin removal

Compreender as alterações efêmeras que ocorrem durante o desenvolvimento e amadurecimento cerebral requer imagens detalhadas de alta resolução no espaço e no tempo na resolução celular e subcelular. Os avanços nas tecnologias moleculares e de imagem nos permitiram obter numerosas informações detalhadas sobre os mecanismos celulares e moleculares do desenvolvimento cerebral no embrião transparente de zebrafish. Recentemente, os processos de refinamento da conectividade neuronal que ocorrem em estágios larvais posteriores várias semanas após a fertilização, que são, por exemplo, o controle do comportamento social, tomada de decisão ou comportamento motivado por motivação, passaram a se concentrar na pesquisa. Nestas fases, a pigmentação da pele do zebrafish interfere com a penetração da luz no tecido cerebral, e soluções para estágios embrionários, por exemplo, inibição farmacológica da pigmentação, não são mais viáveis.
Portanto, é fornecida uma solução cirúrgica minimamente invasiva para o acesso de microscopia ao cérebro de zebrafish acordado que é derivada de abordagens eletrofisiológicas. Em teleosts, a cartilagem da pele e do crânio macio pode ser cuidadosamente removida micro-descascando essas camadas, expondo neurônios subjacentes e tratos axonais sem danos. Isso permite o registro da morfologia neuronal, incluindo estruturas sinápticas e seus conteúdos moleculares, e a observação de alterações fisiológicas como transitórios Ca2+ ou eventos de transporte intracelular. Além disso, o interrogatório desses processos por meio de inibição farmacológica ou manipulação optogenética é viável. Esta abordagem de exposição cerebral fornece informações sobre mudanças estruturais e fisiológicas nos neurônios, bem como a correlação e interdependência desses eventos no tecido cerebral vivo na faixa de minutos ou horas. A técnica é adequada para imagens cerebrais in vivo de larvas de zebrafish até 30 dias após a fertilização, o último estágio de desenvolvimento testado até agora. Assim, fornece acesso a questões tão importantes como refinamento sináptico e dimensionamento, transporte axonal e dendrático, direcionamento sináptico de carga citoesquelética ou expressão local dependente de atividades. Portanto, um uso amplo para esta abordagem de montagem e imagem pode ser antecipado.

Figura 3AC mostrar uma larva dpf de 14 dpf da linha transgênica Tg [-7.5Ca8:GFP]bz12[15] com o crânio ainda intacto. As células pigmentadas na pele sobreposta estão distribuídas por toda a cabeça e estão interferindo com o sinal de fluorescência na região de interesse (aqui, cerebelo). Com a larva nesta condição, não é possível obter imagens de alta resolução do cérebro. <strong c...

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In vivo Imaging of Fully Active Brain Tissue in Awake Zebrafish Larvae and Juveniles by Skull and Skin Removal

Aqui apresentamos um método para a imagem do cérebro embrionário de zebrafish in vivo upto larval e juvenil estágios. Este procedimento microinvasivo, adaptado a partir de abordagens eletrofisiológicas, fornece acesso a detalhes celulares e subcelulares de neurônio maduro e pode ser combinado com estudos optogenéticos e neurofarmaológicos para caracterização da função cerebral e intervenção medicamentosa.

In vivo Imagem de Tecido Cerebral Totalmente Ativo em Larvas de Zebrafish Acordados e Juvenis por Remoção de Crânio e Pele

Understanding the ephemeral changes that occur during brain development and maturation requires detailed high-resolution imaging in space and time at ...

Este método permite a visualização do cérebro de Zebrafish em estágios larvais posteriores para permitir a observação da arquitetura neuronal de forma altamente detalhada in vivo que antes não era possível. As células pigmentas, que surgiram durante o desenvolvimento larval posterior e impedem o cérebro de imagens claras, não são problema com este método porque são simplesmente removidas. Com o método, deve ser possível estudar processos que ocorrem em estágios posteriores durante o desenvolvimento larval do cérebro, processos que impactam na plasticidade sináptica, degeneração dos neurônios ou sua regeneração.Antes de começar o experimento use um puxador de micropipette para preparar agulhas de vidro afiadas, finas e de vidro de capilares de vidro. Em seguida, use uma pipeta pasteur de plástico para coletar larva em uma placa Petri de 90 milímetros de diâmetro contendo a solução apropriada. Transfira a larva selecionada para uma placa de Petri de 35 milímetros de diâmetro contendo ACSF e coloque uma tampa de vidro de 24 por 24 milímetros na tampa da placa de Petri.Em seguida, aliquotar o volume de ACSF necessário para o experimento em um phial apropriado para oxigenação com carbogen. Para incorporar a larva, use uma pipeta Pasteur para transferir a larva anestesiada para uma câmara de montagem sob um estereoscópio. Se alguma larva ainda for capaz de se mover, não use o peixe para o experimento até que os peixes sejam completamente incapazes de se mover.Quando a larva estiver imóvel, remova cuidadosamente o excesso médio e adicione imediatamente pelo menos um mililitro de baixa fusão à larva. Oriente o zebrafish com a região dorsal o mais próximo possível da superfície da ágarose. Se a larva for imagem usando um microscópio invertido, após uma solidificação, corte a agarose contendo a larva em um pequeno bloco cuboide.Para expor o cérebro para a imagem, corte o excesso de agarose sobre a região do cérebro de interesse conforme necessário e use uma agulha de vidro para fazer uma pequena incisão através da pele perto, mas não mais, a região de interesse sem penetrar muito profundamente no tecido. Mal movendo a agulha logo abaixo da superfície da pele, continue fazendo cortes muito pequenos ao redor da região de interesse até que a pele sobre a região de interesse possa ser removida ou deixada de lado. Quando o tecido tiver sido removido de todos os embriões, adicione uma pequena gota de baixa derretimento agarose à câmara de imagem previamente preparada de um microscópio invertido e use uma pequena espátula para virar o bloco de ágarose cuboide 180 graus sobre a gota de agarose na câmara de imagem.Quando a agarose se solidificar, encha a câmara de imagem com ACSF fresco e comece a fotografar a larva. Aqui, uma larva transgênica pós-fertilização intacta de 14 dias com o crânio ainda intacto pode ser observada. Como mostrado, as células pigmentadas dentro da pele sobreposta são distribuídas por toda a cabeça, interferindo com o sinal fluorescente na região de interesse.Após cirurgia aberta no crânio, a área de interesse torna-se livremente acessível para imagens detalhadas de alta resolução. A barreira cerebral de pele, crânio e ou sangue também dificultam a penetração de substâncias no cérebro, como ilustrado pela robusta coloração de corante nuclear observada nessas células cerebrais somente após a cirurgia aberta do crânio. Essas vantagens também são observadas em 30 dias após a fertilização.Em peixes transgênicos contendo uma vasculatura cerebral fluorescente devido à expressão da proteína fluorescente vermelha, mCherry, em células endoteliais, a codificação de cores nos valores de profundidade da pilha de imagens demonstra que mesmo os vasos sanguíneos profundamente enterrados dentro do cérebro para quase 250 mícrons ainda são claramente visíveis e rastreáveis. Ao realizar este procedimento sempre tenha em mente que esta é uma cirurgia em um animal vivo. Portanto, requer respeito e uma mente focada.Após esse procedimento, o registro da morfologia neuronal, incluindo estruturas sinápticas, eventos fisiológicos e de transporte intracelular podem ser realizados em larvas com mais de sete dias após a fertilização. Com essa técnica, esperamos fornecer uma abordagem que permita estudar também processos celulares no cérebro que ocorrem em estágios larvais posteriores, e que estejam envolvidos no estabelecimento, por exemplo, de comportamentos complexos como comportamento social ou tomada de decisão.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

Lapso de tempo de imagens ao vivo de relação clonal células progenitoras neurais no desenvolvimento Zebrafish Encéfalo anterior

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Neurociência

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

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Visualização de Propriocepção em<em&gt; Drosophila</em&gt; As larvas e pupas

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Neuroimagem Funcional Usando rompimento da barreira hemato-encefálica ultra-sônico e Manganês-RM

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae

Automatizados análises comportamentais de alto rendimento em larvas do peixe

We have created a novel high-throughput imaging system for the analysis of behavior in 7-day-old zebrafish larvae in multi-lane plates. This system ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultâneo<em&gt; Ex vivo</em&gt; Teste Funcional de Dois retinas por<em&gt; In vivo</em&gt; Sistema Eletrorretinograma

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Exposure of the Pig CNS for Histological Analysis: A Manual for Decapitation, Skull Opening, and Brain Removal

Exposição do SNC porco para análise histológica: A manual por decapitação, crânio de abertura, e Cérebro Remoção

Pigs have become increasingly popular in large-animal translational neuroscience research as an economically and ethically feasible substitute to ...

Labeling and Imaging of Amyloid Plaques in Brain Tissue Using the Natural Polyphenol Curcumin

Rotulagem e imagem de placas amilóides no tecido cerebral usando a curcumina polifenóis naturais

Deposition of amyloid beta protein (A&#946;) in extra- and intracellular spaces is one of the hallmark pathologies of Alzheimer&#39;s disease (AD). ...

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