Name: immunostaining of whole-mount retinas with the clarity tissue clearing method
Uploaded: 2021-03-06T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunostaining of Whole-Mount Retinas with the CLARITY Tissue Clearing Method at JoVE.com

Vi vil gerne takke Bing Ye, Nathan Spix og Hao Liu for teknisk support. Dette arbejde blev støttet af National Institute of Health Grants EY022640 (D.-Q.Z.) og Oakland University Provost Undergraduate Student Research Award (E.J.A.).

Musepleje og alle forsøgsprocedurer blev udført i henhold til National Institutes of Health retningslinjer for forsøgsdyr og blev godkendt af Institutional Animal Care and Use Committees på Oakland University (protokol nr. 18071).
BEMÆRK: Navnene på opløsningerne og deres sammensætninger er anført i tabel 1.
1. Vævspræparat
<ol><li>Aflive musen med en overdosis af CO2, efterfulgt af livmoderhalskræft dislokation.</li>
	<li>F...

<ol>
	<li>Witkovsky, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+and+retinal+function.">Dopamine and retinal function.</a> Documenta Ophthalmologica. 108 (1), 17-40 (2004).</li><li>McMahon, D. G., Iuvone, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+organization+of+the+mammalian+retina:+from+gene+regulation+to+physiology+and+diseases.">Circadian organization of the mammalian retina: from gene regulation to physiology and diseases.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 39, 58-76 (2014).</li><li>Prigge, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M1+ipRGCs+Influence+Visual+Function+through+Retrograde+Signaling+in+the+Retina.">M1 ipRGCs Influence Visual Function through Retrograde Signaling in the Retina.</a> Journal of Neuroscience. 36 (27), 7184-7197 (2016).</li><li>Zhang, D. Q., Belenky, M. A., Sollars, P. J., Pickard, G. E., McMahon, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanopsin+mediates+retrograde+visual+signaling+in+the+retina.">Melanopsin mediates retrograde visual signaling in the retina.</a> PLoS One. 7 (8), 42647 (2012).</li><li>Liu, L. L., Alessio, E. J., Spix, N. J., Zhang, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+GluA2-containing+calcium-impermeable+AMPA+receptors+on+dopaminergic+amacrine+cells+in+the+mouse+retina.">Expression of GluA2-containing calcium-impermeable AMPA receptors on dopaminergic amacrine cells in the mouse retina.</a> Molecular Vision. 25, 780-790 (2019).</li><li>Liu, L. L., Spix, N. J., Zhang, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+Receptors+Contribute+to+Retrograde+Synaptic+Transmission+from+Ganglion+Cell+Photoreceptors+to+Dopaminergic+Amacrine+Cells.">NMDA Receptors Contribute to Retrograde Synaptic Transmission from Ganglion Cell Photoreceptors to Dopaminergic Amacrine Cells.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 279 (2017).</li><li>Chung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+molecular+interrogation+of+intact+biological+systems.">Structural and molecular interrogation of intact biological systems.</a> Nature. 497 (7449), 332 (2013).</li><li>Poguzhelskaya, E., Artamonov, D., Bolshakova, A., Vlasova, O., Bezprozvanny, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+method+to+perform+CLARITY+imaging.">Simplified method to perform CLARITY imaging.</a> Molecular Neurodegeneration. 9, 19 (2014).</li><li>Epp, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+CLARITY+for+Clearing+Whole-Brain+and+Other+Intact+Organs.">Optimization of CLARITY for Clearing Whole-Brain and Other Intact Organs.</a> eNeuro. 2 (3), (2015).</li><li>Magliaro, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clarifying+CLARITY:+Quantitative+Optimization+of+the+Diffusion+Based+Delipidation+Protocol+for+Genetically+Labeled+Tissue.">Clarifying CLARITY: Quantitative Optimization of the Diffusion Based Delipidation Protocol for Genetically Labeled Tissue.</a> Frontiers in Neuroscience. 10, 179 (2016).</li><li>Yang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+phenotyping+within+transparent+intact+tissue+through+whole-body+clearing.">Single-cell phenotyping within transparent intact tissue through whole-body clearing.</a> Cell. 158 (4), 945-958 (2014).</li><li>Zheng, H., Rinaman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+CLARITY+for+visualizing+immunofluorescence+labeling+in+the+developing+rat+brain.">Simplified CLARITY for visualizing immunofluorescence labeling in the developing rat brain.</a> Brain Structure and Function. 221 (4), 2375-2383 (2016).</li><li>Witkovsky, P., Arango-Gonzalez, B., Haycock, J. W., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+retinal+dopaminergic+neurons:+differential+maturation+of+somatodendritic+and+axonal+compartments.">Rat retinal dopaminergic neurons: differential maturation of somatodendritic and axonal compartments.</a> Journal of Comparative Neurology. 481 (4), 352-362 (2005).</li></ol>

Ændring af CLARITY-protokollen for helmonterings-nethinder. Vi har forenklet KLARHED-protokollen for at opnå tilstrækkelig polymerisering uden behov for et vakuumevakuerings- eller udtørringskammer, som det bruges i de fleste tidligere undersøgelser7,9,11. Polymeriseringsprocessen hæmmes af ilt, hvilket kræver, at prøven isoleres fra luften under protokollens polymeriseringstrin. I stedet for at afgas...

Hvirveldyr nethinden er måske den mest tilgængelige del af centralnervesystemet (CNS), og det tjener som en fremragende model for at studere udviklingen, strukturen og funktionen af hjernen. Fem klasser af neuroner i nethinden er fordelt i tre nukleare lag adskilt af to plexiform lag. Det ydre atomlag (ONL) består af klassiske fotoreceptorer (stænger og kegler), der omdanner lys til elektriske signaler. Elektriske signaler behandles af neuroner i det indre nukleare lag (INL), herunder bipolar, vandret og amacrinceller, og overføres derefter til nethindeganglionceller (RGCs) i ganglioncellelaget (GCL). RGCs er output neuroner af nethinden, med axoner projicere til hjernen for at bidrage til billeddannende og ikke-billeddannende visuel funktion. Derudover giver tre typer af gliaceller (Muller-celler, astroglia og microglia) næringsstoffer til neuroner og beskytter neuroner mod skadelige ændringer i deres ekstracellulære miljø.
En specialiseret delpopulation af amacrinceller producerer og frigiver dopamin, en vigtig neuromodulator i CNS, omkonfigurerer nethinde neurale kredsløb under lystilpasning1,2. Dopaminergiske amacrine celler (DACs) har et unikt træk ved morfologiske profiler. Deres somata er placeret i den proksimale INL med dendritter, der forgrener sig i den mest distale del af det indre plexiformlag (IPL). Axon-lignende processer af DAC'er er unmyelinated, tynde og lange, sparsomt forgrenet, og bærer varicosities (de steder, dopamin frigivelse). De danner en tæt plexus med dendritter i IPL, herunder ring-lignende strukturer omkring somata af AII amacrine celler. Axonerne løber også gennem INL mod OPL og danner en centrifugalvej over nethinden3. Vi har vist, at DAC processer udtrykke receptorer som reaktion på glutamat frigivelse fra presynaptic neuroner, herunder bipolar celler og iboende lysfølsomme retinal ganglion celler (ipRGCs)4,5,6. Det er dog uklart, om glutamatreceptorer udtrykker på axoner, dendritter eller begge dele, da de er afskåret i lodrette nethindesektioner og ikke kan skelnes fra hinanden5,6. Immunostaining skal udføres i helmonterings nethinder for at afsløre tredimensionel forgrening af DAC'er og tilstedeværelsen af glutamatreceptorer på subcellulære rum. Selv om nethinden er relativt gennemsigtig, tykkelsen af en mus hele mount nethinden er ca 200 μm, hvilket begrænser indtrængen af antistoffer i det dybe væv samt reducerer lys penetration for høj opløsning billeddannelse på grund af væv lys-spredning. For at overvinde disse begrænsninger tilpassede vi immunostaining kompatibel væv hydrogel delipidation metode (KLARHED) udviklet for nylig for tykke hjerne sektioner til hele montere musen nethinder7.
CLARITY-metoden blev oprindeligt udviklet af Deisseroth-laboratoriet til immunostaining og billeddannelse af tykke hjerneprøver7. Det bruger et stærkt vaskemiddel, natrium dodecyl sulfat (SDS) og elektroforese til at fjerne lipidkomponenterne (der forårsager vævslysspredning), hvilket efterlader proteiner og nukleinsyrer på plads. De fjernede lipider erstattes med et gennemsigtigt stillads bestående af hydrogelmonomerer som acrylamid for at understøtte den resterende proteinstruktur. Det ryddede væv kan mærkes via immunohistochemistry og afbildes med væsentligt øget lysindtrængningsdybde gennem vævet (op til flere millimeter under vævsoverfladen). Siden da er CLARITY-metoden blevet optimeret og forenklet af flere forskningsgrupper8,9,10. En modificeret CLARITY-protokol anvender en passiv clearingteknik for at undgå de mulige vævsskader, der frembringes ved elektroforese til rydning af hele hjernen og andre intakte organer11. Denne metode er dog endnu ikke anvendt på helmonterede nethinder. Her har vi tilpasset den passive KLARHED teknik til hele montere nethinder for at gøre dem mere gennemsigtige for immunohistochemistry og billeddannelse. Vi fandt, at et flertal af de testede nethindeproteiner blev bevaret under denne proces for immunhistokemi. Ved hjælp af brydningsindeks matching løsning, vi var i stand til at billedet nethinde neuroner på tværs af ca 200 μm tykkelse fra ONL til GCL i hele mount nethinder.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>16% Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td>Fixative</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrylamide</td>
			<td>Fisher Biotech</td>
			<td>BP170</td>
			<td>Hydrogel monomer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axio Imager.Z2</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Fluorscence microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600</td>
			<td>Blocking agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse Ti</td>
			<td>Nikon Instruments</td>
			<td></td>
			<td>Scanning confocal microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH0258</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5655</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9763</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S0751</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaN3</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td>Bacteriostatic preservative</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NDS</td>
			<td>Aurion</td>
			<td>900.122</td>
			<td>Blocking agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS Elements AR</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1610301</td>
			<td>Delipidation agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorbitol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>51876</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td>Surfactant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP337</td>
			<td>Surfactant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VA-044</td>
			<td>Wako Chemicals</td>
			<td>011-19365</td>
			<td>Thermal initiator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunostaining of whole-mount retinas with the clarity tissue clearing method

Vævshydrogeldelipidationsmetoden (CLARITY), der oprindeligt blev udviklet af Deisseroth-laboratoriet, er blevet ændret og i vid udstrækning anvendt til immunostaining og billeddannelse af tykke hjerneprøver. Denne avancerede teknologi er dog endnu ikke blevet brugt til helmonterede nethinder. Selv om nethinden er delvist gennemsigtig, begrænser dens tykkelse på ca. 200 μm (hos mus) stadig indtrængen af antistoffer i det dybe væv samt reducerer lysindtrængning for billeddannelse med høj opløsning. Her har vi tilpasset KLARHED metode til hele montere musen nethinder ved polymerisere dem med en acrylamid monomer til at danne en nanoporous hydrogel og derefter rydde dem i natrium dodecyl sulfat for at minimere proteintab og undgå vævsskader. KLARHED-forarbejdede nethinder blev immunostained med antistoffer for nethinde neuroner, gliaceller, og synaptiske proteiner, monteret i et brydningsindeks matchende løsning, og afbildet. Vores data viser, at KLARHED kan forbedre kvaliteten af standard immunohistokemisk farvning og billeddannelse for nethinde neuroner og gliaceller i hele montering forberedelse. For eksempel blev 3D-opløsningen af fine axonlignende og dendritiske strukturer af dopaminergiske amacrinceller meget forbedret af KLARHED. Sammenlignet med ikke-forarbejdede helmonterede nethinder kan KLARHED afsløre immunostaining for synaptiske proteiner såsom postsynaptisk tæthedsprotein 95. Vores resultater viser, at KLARHED gør nethinden mere optisk gennemsigtig efter fjernelse af lipider og bevarer fine strukturer af nethindeneuroner og deres proteiner, som rutinemæssigt kan bruges til at opnå højopløsningsbilleddannelse af nethindeneuroner og deres subcellulære strukturer i hele monteringsforberedelsen.

Modificerede KLARHED-behandlede nethinder er optisk gennemsigtigt væv. For at formulere en vævsrydningsmetode, der er kompatibel med immunohistokemiske applikationer i nethinden, samtidig med at vi sørgede for tilstrækkelig afdæmitning og bevarede cellulære proteiners strukturelle integritet, tilpassede vi CLARITY-vævsclearingmetoden til helmonterede musehindeinaer. Vi var i stand til at forenkle protokollen og ændre den for hele monterings-nethinder (se protokol). Efter at have afsluttet væv...

Watch this Scientific Journal Video about Immunostaining of Whole-Mount Retinas with the CLARITY Tissue Clearing Method at JoVE.com

Immunostaining of Whole-Mount Retinas with the CLARITY Tissue Clearing Method

Her præsenterer vi en protokol til at tilpasse klarhedsmetoden i hjernevævene til helmonterings nethinder for at forbedre kvaliteten af standard immunohistokemisk farvning og højopløsningsbilleddannelse af nethindeneuroner og deres subcellulære strukturer.

Immunostaining af helmonteringskinner med KLARHED Vævsclearingmetoden

The tissue hydrogel delipidation method (CLARITY), originally developed by the Deisseroth laboratory, has been modified and widely used for immunostaining ...

Denne protokol giver mulighed for undersøgelse af den fine morfologi af nethinde neuroner og kan give indsigt i de cellulære og subcellulære morfologiske ændringer, der opstår i sygdomstilstande. Denne metode forbedrer den optiske gennemsigtighed i nethinden betydeligt og giver mulighed for høj opløsning, tredimensionel billeddannelse, kredsløbsledninger og fine subcellulære strukturer af nethindeneuroner i hormon nethinden forberedelse. Enucleate musens øjne med buede pincet og overføre dem til en lille petriskål med 0,1 M PBS.Stik et lille hul langs hornhinden sclera krydset med nålen under dissektion mikroskop, derefter overføre øjet i 4% magt formaldehyd i en time. Overfør øjet tilbage til en skål med PBS. Under et dissektionsmikroskop skal du bruge dissektionssaks til at skære hele vejen rundt om Corneoscleral-krydset.Fjern hornhinden og linsen. Skær det derefter i bunden af synsnerven og skræl forsigtigt scleraen af med pincet for at isolere nethinden. Lav fire små nedskæringer jævnt omkring nethinden og bruge en fin spids børste dyppet i PBS at lægge det flade GCL side ned i kløver-lignende form på en lille firkant skåret fra nitrocellulose filterpapir.Pick up hjørnet af nitrocellulose papir med pincet og læg det i en 48 godt plade med 4% magt formaldehyd i en time, derefter overføre filterpapir og nethinden til en brønd med PBS og vask tre gange i fem minutter hver. Tø A4P0 opløsning på is. Overfør derefter nethinden til A4P0-opløsningen og inkuber natten over ved fire grader Celsius med blid omrøring.Tilsæt vegetabilsk olie i brønden for helt at dække A4P0-opløsningen. Inkuber i et vandbad ved 40 grader Celsius i tre timer uden rysten. Vask derefter tre gange i PBS i fem minutter pr. vask.Inkuber nethinden i 10%Natrium dodecyl sulfat ved 40 grader Celsius i to dage med blid rysten derefter overføre filterpapir og nethinden til PBS med Triton X-100 og vask fem gange i 90 minutter pr vask. Efter den endelige vask, opbevare nethinden ved fire grader Celsius i PBS-T med 0,01% natrium azide eller flytte direkte til immuno farvning. Fjern nethinden fra filterpapiret ved forsigtigt at skrælle det af med en fin spidsbørste i PBS-T.Inkuberes i primært antistof fortyndet i blokeringsopløsning i to dage ved 40 grader Celsius med blid rysten. Efter inkubationen vaskes fem gange i 90 minutter i PBS-T. Inkuber nethinden med passende sekundære antistoffer fortyndet i blokeringsopløsning i to dage ved 40 grader Celsius med blid rysten.Beskyt prøverne mod lys under hele proceduren. Nethinden vaskes fem gange i 90 minutter i 0,02 M fosfatbuffer. Til sidst inkuberes nethinden i sorbitolbaseret brydningsindeksmatchende opløsning ved 40 grader Celsius natten over med blid rysten.Kontur et glas dække slip med en fin spids permanent markør for at markere en firkantet grænse på bagsiden af et glas mikroskop dias. Vend rutsjebanen om, og brug en sprøjte til at spore grænsen med en tynd linje silikonefedt på forsiden af rutsjebanen. Efterlad et lille hul i det ene hjørne for overskydende monteringsopløsning for at undslippe.Overfør nethinden til midten af det afgrænsede område, og placer den med en fin spidsbørste, så den ligger fladt med fotoreceptorsiden mod glasrutsjebanen. Pipette ca 60 mikroliter af sRIMS, så det dækker den flade nethinden og strækker sig til det ene hjørne af kabinettet. Sørg for, at nethinden forbliver flad og på plads.Påfør dækslet slip, startende fra hjørnet med sRIMS og langsomt sænke det, indtil det rører fedt på alle sider. Placer en stak med tre dæksedler på hver side af den monterede nethinde som en afstandsstykke. Brug den lange kant af et andet dias til at trykke dækslet ned, så holderen er flad og jævn.Opbevar rutsjebanerne ved fire grader Celsius indtil billeddannelse. Begynd med at placere diaset på mikroskopstadiet og finde prøven. For at få Z-stablede billeder af prøver skal du først fokusere på signalet i hver kanal individuelt og indstille eksponeringstiden eller scanningshastigheden for henholdsvis fluorescens eller konfokale mikroskoper.Angiv området for Z-stakken enten ved manuelt at indstille brændplanet øverst og nederst i det ønskede område eller ved at indstille midtpunktet og derefter angive et område omkring midtpunktet. Juster trinstørrelsen eller antallet af udsnit efter behov. Hent billedet, og gem den oprindelige fil.Eksporteres derefter som en TIF-fil eller et andet ønsket format. Brug billedanalyse, foretrukne software til at justere lysstyrken og kontrasten i hver kanal, indtil der opnås optimal klarhed i både de enkelte billeder og den tredimensionelle gengivelse af Z-stakken. Når de behandles med den modificerede KLARHED protokol fuldstændig optisk gennemsigtighed i hele tykkelsen af nethinden blev observeret i forhold til ikke-forarbejdede kontrol nethinder.Z stablede billeder til Arrestin-mærkede kegler i ONL, TH-mærkede DAC'er i INL og RBPMS-markerede RPC'er i GCL vises her. Den relative placering af neuroner i hele tykkelsen af nethinden blev observeret i overlejringsbilledet. TH farvning og klarhed behandlet hele Mount nethinder blev sammenlignet med billeder fra standard forberedelse.Dendritter og axon-lignende processer af DACs blev mere tydeligt afsløret i en klarhed behandlet nethinden end i en standard nethinden. Axon-lignende processer af DACs udstillet komplet ring-lignende strukturer i en klarhed nethinden i forhold til en standard nethinden. Ring-lignende strukturer klarhed nethinden taget ved hjælp af fluorescens mikroskopi var næsten identiske med dem, der observeres ved hjælp af konfokal mikroskopi.Axon-lignende processer også løb mod den ydre nethinden. Immuno farvning mod GluA2 og PSD-95 viste forskellige punktncta, afslører individuelle GluA2 indeholder AMPA receptorer og formodede post synaptiske steder, hhv. Et overlejringsbillede viste en vis punktlighed på DAC-processer.De punkter i formodede co-lokalisering blev præsenteret i XZ, YZ, og XY fly og TH co-lokaliseret klart med både GluA2 og PSD-95. Det er vigtigt, at nethinden forbliver flad under hydrogel polymeriseringsprocessen, så den ryddede nethinden kan ligge fladt til monterings- og billeddannelsesprocessen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

The retinal pigment epithelium (RPE) lies at the back of the mammalian eye, just under the neural retina, which contains the photoreceptors (rods and ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Sensory Nerve Fibers Innervating Skin and Limb Bones

Tissue Forberedelse og immunfarvning af Mouse sensoriske nervefibre innerverer hud og lemmer Bones

Detection and primary processing of physical, chemical and thermal sensory stimuli by peripheral sensory nerve fibers is key to sensory perception in ...

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissektion af Transversus Abdominis Muscle for Hele mount Neuromuskulære Junction Analyse

Analysis of neuromuscular junction morphology can give important insight into the physiological status of a given motor neuron. Analysis of thin flat ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Hele Mount immunolabeling af olfaktoriske receptor neuroner i<em&gt; Drosophila</em&gt; Antenne

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Whole-mount Imaging of Mouse Embryo Sensory Axon Projections

Hele-mount Imaging af museembryo Sensory Axon Fremskrivninger

The visualization of full-length neuronal projections in embryos is essential to gain an understanding of how mammalian neuronal networks develop. Here we ...

Whole Mount Labeling of Cilia in the Main Olfactory System of Mice

Hele Mount Mærkning af Cilia i Main Olfaktoriske System af mus

The mouse olfactory system comprises 6-10 million olfactory sensory neurons in the epithelium lining the nasal cavity. Olfactory neurons extend a single ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

Hele Mount Dissektion og Immunofluorescens af Voksen Mouse Cochlea

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

Optical Clearing of the Mouse Central Nervous System Using Passive CLARITY

Optisk Clearing af Mouse centralnervesystemet Brug Passiv CLARITY

Traditionally, tissue visualization has required that the tissue of interest be serially sectioned and imaged, subjecting each tissue section to unique ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

En simpel en-trin Dissektion Protokol for Whole-mount Forberedelse af Voksen<em&gt; Drosophila</em&gt; Brains

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...