Name: immunostaining of whole-mount retinas with the clarity tissue clearing method
Uploaded: 2021-03-06T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunostaining of Whole-Mount Retinas with the CLARITY Tissue Clearing Method at JoVE.com

Vi vil takke Bing Ye, Nathan Spix og Hao Liu for teknisk støtte. Dette arbeidet ble støttet av National Institute of Health Grants EY022640 (D.-Q.Z.) og Oakland University Provost Undergraduate Student Research Award (E.J.A.).

Musepleie og alle eksperimentelle prosedyrer ble utført i henhold til National Institutes of Health retningslinjer for laboratoriedyr og ble godkjent av Institutional Animal Care and Use Committees ved Oakland University (protokoll nr. 18071).
MERK: Navn på løsningene og deres komposisjoner er oppført i tabell 1.
1. Vev forberedelse
<ol><li>Euthanize musen med en overdose av CO2, etterfulgt av Cervical dislocation.</li>
	<li>Enuclea...

<ol>
	<li>Witkovsky, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+and+retinal+function.">Dopamine and retinal function.</a> Documenta Ophthalmologica. 108 (1), 17-40 (2004).</li><li>McMahon, D. G., Iuvone, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+organization+of+the+mammalian+retina:+from+gene+regulation+to+physiology+and+diseases.">Circadian organization of the mammalian retina: from gene regulation to physiology and diseases.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 39, 58-76 (2014).</li><li>Prigge, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M1+ipRGCs+Influence+Visual+Function+through+Retrograde+Signaling+in+the+Retina.">M1 ipRGCs Influence Visual Function through Retrograde Signaling in the Retina.</a> Journal of Neuroscience. 36 (27), 7184-7197 (2016).</li><li>Zhang, D. Q., Belenky, M. A., Sollars, P. J., Pickard, G. E., McMahon, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanopsin+mediates+retrograde+visual+signaling+in+the+retina.">Melanopsin mediates retrograde visual signaling in the retina.</a> PLoS One. 7 (8), 42647 (2012).</li><li>Liu, L. L., Alessio, E. J., Spix, N. J., Zhang, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+GluA2-containing+calcium-impermeable+AMPA+receptors+on+dopaminergic+amacrine+cells+in+the+mouse+retina.">Expression of GluA2-containing calcium-impermeable AMPA receptors on dopaminergic amacrine cells in the mouse retina.</a> Molecular Vision. 25, 780-790 (2019).</li><li>Liu, L. L., Spix, N. J., Zhang, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+Receptors+Contribute+to+Retrograde+Synaptic+Transmission+from+Ganglion+Cell+Photoreceptors+to+Dopaminergic+Amacrine+Cells.">NMDA Receptors Contribute to Retrograde Synaptic Transmission from Ganglion Cell Photoreceptors to Dopaminergic Amacrine Cells.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 279 (2017).</li><li>Chung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+molecular+interrogation+of+intact+biological+systems.">Structural and molecular interrogation of intact biological systems.</a> Nature. 497 (7449), 332 (2013).</li><li>Poguzhelskaya, E., Artamonov, D., Bolshakova, A., Vlasova, O., Bezprozvanny, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+method+to+perform+CLARITY+imaging.">Simplified method to perform CLARITY imaging.</a> Molecular Neurodegeneration. 9, 19 (2014).</li><li>Epp, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+CLARITY+for+Clearing+Whole-Brain+and+Other+Intact+Organs.">Optimization of CLARITY for Clearing Whole-Brain and Other Intact Organs.</a> eNeuro. 2 (3), (2015).</li><li>Magliaro, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clarifying+CLARITY:+Quantitative+Optimization+of+the+Diffusion+Based+Delipidation+Protocol+for+Genetically+Labeled+Tissue.">Clarifying CLARITY: Quantitative Optimization of the Diffusion Based Delipidation Protocol for Genetically Labeled Tissue.</a> Frontiers in Neuroscience. 10, 179 (2016).</li><li>Yang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+phenotyping+within+transparent+intact+tissue+through+whole-body+clearing.">Single-cell phenotyping within transparent intact tissue through whole-body clearing.</a> Cell. 158 (4), 945-958 (2014).</li><li>Zheng, H., Rinaman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+CLARITY+for+visualizing+immunofluorescence+labeling+in+the+developing+rat+brain.">Simplified CLARITY for visualizing immunofluorescence labeling in the developing rat brain.</a> Brain Structure and Function. 221 (4), 2375-2383 (2016).</li><li>Witkovsky, P., Arango-Gonzalez, B., Haycock, J. W., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+retinal+dopaminergic+neurons:+differential+maturation+of+somatodendritic+and+axonal+compartments.">Rat retinal dopaminergic neurons: differential maturation of somatodendritic and axonal compartments.</a> Journal of Comparative Neurology. 481 (4), 352-362 (2005).</li></ol>

Modifikasjon av CLARITY-protokollen for helmonterte netthinner. Vi har forenklet CLARITY-protokollen for å oppnå tilstrekkelig polymerisering uten behov for vakuumevakuering eller uttørkingskammer, som det brukes i de fleste tidligere studier7,9,11. Polymerisasjonsprosessen hemmes av oksygen, og krever at prøven isoleres fra luft under polymerisasjonstrinnet i protokollen. Men i stedet for å avgasse med ...

Vertebrat netthinnen er kanskje den mest tilgjengelige delen av sentralnervesystemet (CNS), og det fungerer som en utmerket modell for å studere hjernens utvikling, struktur og funksjon. Fem klasser av nevroner i netthinnen fordeles i tre kjernefysiske lag atskilt med to plexiformlag. Det ytre kjernefysiske laget (ONL) består av klassiske fotoreseptorer (stenger og kjegler) som omdanner lys til elektriske signaler. Elektriske signaler behandles av nevroner i det indre kjernefysiske laget (INL), inkludert bipolare, horisontale og amacrine celler, og overføres deretter til retinal ganglion celler (RGCs) i ganglion cellelaget (GCL). RGCer er utgangsnevronene i netthinnen, med axonene som projiserer til hjernen for å bidra til bildedannende og ikke-bildedannende visuell funksjon. I tillegg gir tre typer glialceller (Muller-celler, astroglia og mikroglia) næringsstoffer til nevroner og beskytter nevroner mot skadelige endringer i deres ekstracellulære miljø.
En spesialisert subpopulation av amacrine celler produserer og frigjør dopamin, en viktig nevromodulator i CNS, rekonfigurere retinal nevrale kretser under lys tilpasning1,2. Dopaminerge amacrine celler (DACs) har et unikt trekk ved morfologiske profiler. Deres somata ligger i den proksimale INL med dendritter som ramifying i den mest distale delen av det indre plexiformlaget (IPL). Axon-lignende prosesser av DACs er unmyelinated, tynn og lang, sparsomt forgrenet, og bærer varicosities (stedene for dopaminutgivelse). De danner en tett plexus med dendritter i IPL, inkludert ringlignende strukturer rundt somataen til alle amacrine celler. Axonene går også gjennom INL mot OPL, og danner en sentrifugalbane over netthinnen3. Vi har vist at DAC-prosesser uttrykker reseptorer som svar på glutamatfrigivelse fra presynaptiske nevroner, inkludert bipolare celler og iboende lysfølsomme retinal ganglionceller (ipRGCer)4,5,6. Det er imidlertid uklart om glutamatreseptorer uttrykker på axoner, dendritter eller begge deler siden de er avskåret i vertikale retinal seksjoner og ikke kan skilles fra hverandre5,6. Immunostaining må utføres i helmonterte netthinner for å avdekke tredimensjonal forgrening av DACs og tilstedeværelsen av glutamatreseptorer på subcellulære rom. Selv om netthinnen er relativt gjennomsiktig, er tykkelsen på en mus helmontert netthinne ca. 200 μm, noe som begrenser penetrasjonen av antistoffer i det dype vevet, samt reduserer lysinntrengning for høyoppløselig avbildning på grunn av vevslysspredning. For å overvinne disse begrensningene tilpasset vi den immunstagende kompatible vevshydrgeldelipidasjonsmetoden (CLARITY) utviklet nylig for tykke hjerneseksjoner til helmonterte muse netthinner7.
CLARITY-metoden ble opprinnelig utviklet av Deisseroth-laboratoriet for immunstaining og avbildning av tykke hjerneprøver7. Den bruker et sterkt vaskemiddel, natrium dodecylsulfat (SDS) og elektroforese for å fjerne lipidkomponentene (som forårsaker lysspredning av vev), slik at proteiner og nukleinsyrer er på plass. De fjernede lipidene erstattes med et gjennomsiktig stillas som består av hydrogelmonomerer som akrylamid for å støtte den gjenværende proteinstrukturen. Det rensede vevet kan merkes via immunhiistokjemi og avbildet med betydelig økt lysinntrengningsdybde gjennom vevet (opptil flere millimeter under vevsoverflaten). Siden da har CLARITY-metoden blitt optimalisert og forenklet av flere forskningsgrupper8,9,10. En modifisert CLARITY-protokoll bruker en passiv clearing-teknikk for å unngå mulig vevsskade forårsaket av elektroforese for å rydde hele hjernen og andre intakte organer11. Denne metoden er imidlertid ennå ikke brukt på helmonterte netthinner. Her tilpasset vi den passive CLARITY-teknikken for helmonterte netthinner for å gjøre dem mer gjennomsiktige for immunhiistokjemi og avbildning. Vi fant at et flertall av de retinale proteinene som ble testet ble bevart under denne prosessen for immunhiistokjemi. Ved hjelp av refraktiv indeksmatchingsløsning kunne vi avbilde retinal neuroner over omtrent 200 μm tykkelse fra ONL til GCL i helmonterte netthinner.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>16% Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td>Fixative</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrylamide</td>
			<td>Fisher Biotech</td>
			<td>BP170</td>
			<td>Hydrogel monomer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axio Imager.Z2</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Fluorscence microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600</td>
			<td>Blocking agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse Ti</td>
			<td>Nikon Instruments</td>
			<td></td>
			<td>Scanning confocal microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH0258</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5655</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9763</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S0751</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaN3</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td>Bacteriostatic preservative</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NDS</td>
			<td>Aurion</td>
			<td>900.122</td>
			<td>Blocking agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS Elements AR</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1610301</td>
			<td>Delipidation agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorbitol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>51876</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td>Surfactant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP337</td>
			<td>Surfactant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VA-044</td>
			<td>Wako Chemicals</td>
			<td>011-19365</td>
			<td>Thermal initiator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunostaining of whole-mount retinas with the clarity tissue clearing method

Vev hydrogel delipidation metoden (CLARITY), opprinnelig utviklet av Deisseroth laboratoriet, har blitt modifisert og mye brukt for immunstaining og avbildning av tykke hjerneprøver. Denne avanserte teknologien har imidlertid ennå ikke blitt brukt til helmonterte netthinner. Selv om netthinnen er delvis gjennomsiktig, begrenser tykkelsen på ca. 200 μm (hos mus) fortsatt penetrasjonen av antistoffer i det dype vevet, samt reduserer lysgjennomtrengning for høyoppløselig avbildning. Her tilpasset vi CLARITY-metoden for helmonterte muse netthinner ved å polymerisere dem med en akrylamidmonomer for å danne en nanoporøs hydrogel og deretter fjerne dem i natriumdidesulfat for å minimere proteintap og unngå vevsskader. CLARITY-bearbeidede netthinner ble immunostert med antistoffer mot retinal nevroner, glialceller og synaptiske proteiner, montert i en brytningsindeksmatchingsløsning og avbildet. Våre data viser at CLARITY kan forbedre kvaliteten på standard immunhiistokjemisk farging og avbildning for retinal nevroner og glialceller i helmontert forberedelse. For eksempel ble 3D-oppløsning av fine axon-lignende og dendritiske strukturer av dopaminerge amacrine celler mye forbedret av CLARITY. Sammenlignet med ikke-bearbeidede helmonterte netthinner, kan CLARITY avsløre immunostaining for synaptiske proteiner som postsynaptisk tetthetsprotein 95. Våre resultater viser at CLARITY gjør netthinnen mer optisk gjennomsiktig etter fjerning av lipider og bevarer fine strukturer av retinal nevroner og deres proteiner, som rutinemessig kan brukes til å oppnå høyoppløselig avbildning av retinal nevroner og deres subcellulære strukturer i helmontert forberedelse.

Modifiserte CLARITY-bearbeidede netthinner er optisk gjennomsiktig vev. For å formulere en vevsryddingsmetode som er kompatibel med immunhiistokjemiske applikasjoner i netthinnen samtidig som vi gir tilstrekkelig delipidasjon og beholder den strukturelle integriteten til de cellulære proteinene, tilpasset vi CLARITY-vevsryddingsmetoden til helmonterte muse netthinner. Vi var i stand til å forenkle protokollen og modifisere den for helmonterte netthinner (se Protokoll). Etter å ha fullført vevshyb...

Watch this Scientific Journal Video about Immunostaining of Whole-Mount Retinas with the CLARITY Tissue Clearing Method at JoVE.com

Immunostaining of Whole-Mount Retinas with the CLARITY Tissue Clearing Method

Her presenterer vi en protokoll for å tilpasse CLARITY-metoden til hjernevevet for helmonterte netthinner for å forbedre kvaliteten på standard immunhiistokjemisk farging og høyoppløselig avbildning av retinal nevroner og deres subcellulære strukturer.

Immunstaining av hel-mount netthinner med CLARITY vev clearing metode

The tissue hydrogel delipidation method (CLARITY), originally developed by the Deisseroth laboratory, has been modified and widely used for immunostaining ...

Denne protokollen tillater undersøkelse av den fine morfologien til retinal nevroner og kan gi innsikt i de cellulære og subcellulære morfologiske endringene som oppstår i sykdomstilstander. Denne metoden forbedrer den optiske gjennomsiktigheten til netthinnen betydelig og gir mulighet for høyoppløselig, tredimensjonal avbildning, kretsledninger og fine sub cellulære strukturer av netthinne nevroner i hormon netthinnepreparat. Forfør museøyne med buede tang og overfør dem til en liten Petri-tallerken med 0,1 M PBS.Stikk et lite hull langs hornhinnen sclera krysset med nålen under disseksjon mikroskopet, deretter overføre øyet til 4% makt formaldehyd i en time. Overfør øyet tilbake til en tallerken med PBS. Under et disseksjonsmikroskop, bruk disseksjonssaks for å kutte hele veien rundt Corneoscleral-krysset.Fjern hornhinnen og linsen. Klipp den deretter ved foten av synsnerven og skrell forsiktig scleraen av med tang for å isolere netthinnen. Lag fire små kutt jevnt rundt netthinnen og bruk en fin spissbørste dyppet i PBS for å legge den flate GCL-siden ned i den kløverlignende formen på en liten firkantet kutt fra nitrocellulose filterpapir.Plukk opp hjørnet av nitrocellulosepapiret med tang og legg det i en 48 brønnplate med 4% kraft formaldehyd i en time, overfør deretter filterpapiret og netthinnen til en brønn med PBS og vask tre ganger i fem minutter hver. Tin A4P0-løsningen på is. Overfør deretter netthinnen til A4P0-løsningen og inkuber over natten ved fire grader Celsius med mild agitasjon.Tilsett vegetabilsk olje i brønnen for å dekke A4P0-løsningen helt. Inkuber i et vannbad ved 40 grader Celsius i tre timer uten risting. Vask deretter tre ganger i PBS i fem minutter per vask.Inkuber netthinnen i 10% natrium dodecylsulfat ved 40 grader Celsius i to dager med mild risting, overfør deretter filterpapiret og netthinnen til PBS med Triton X-100 og vask fem ganger i 90 minutter per vask. Etter den endelige vasken, lagre netthinnen ved fire grader Celsius i PBS-T med 0,01% natriumazid eller flytt direkte til immunfarging. Fjern netthinnen fra filterpapiret ved å skrelle den forsiktig av med en fin spissbørste i PBS-T.Inkubert i primært antistoff fortynnet i blokkeringsløsning i to dager ved 40 grader Celsius med mild risting. Etter inkubasjonen, vask fem ganger i 90 minutter i PBS-T. Inkuber netthinnen med passende sekundære antistoffer fortynnet i blokkeringsløsning i to dager ved 40 grader Celsius med mild risting.Beskytt prøvene mot lys gjennom resten av prosedyren. Vask netthinnen fem ganger i 90 minutter i 0,02 M fosfatbuffer. Til slutt inkuber netthinnen i sorbitol-basert brytningsindeks matchende løsning ved 40 grader Celsius over natten med mild risting.Omrisset et glassdeksel med en permanent fin spissmarkør for å markere en firkantet grense på baksiden av et glassmikroskopsklie. Snu gliden og bruk en sprøyte til å spore grensen med en tynn linje med silikonfett på forsiden av lysbildet. Legg et lite gap i ett hjørne for overflødig monteringsløsning å unnslippe.Overfør netthinnen til midten av det avgrensede området og plasser den med en fin spissbørste slik at den ligger flatt med fotoreseptorsiden mot glasssklie. Pipette ca. 60 mikroliter sRIMS slik at den dekker den flate netthinnen og strekker seg til ett hjørne av kabinettet. Sørg for at netthinnen holder seg flat og på plass.Påfør dekselslippet, start fra hjørnet med sRIMS og senk det sakte til det berører fettet på alle sider. Plasser en stabel med tre dekselslipper på hver side av den monterte netthinnen som avstandsstykke. Bruk den lange kanten på et annet lysbilde til å trykke ned dekselslippet slik at braketten er flat og jevn.Oppbevar lysbildene ved fire grader Celsius til avbildning. Begynn med å plassere lysbildet på mikroskopstadiet og finne prøven. For å få Z-stablede bilder av prøver, fokuser først på signalet i hver kanal individuelt og still inn eksponeringstiden eller skannehastigheten for henholdsvis fluorescens eller konfektmikroskop.Angi området for Z-stakken enten ved å stille inn fokusplanet manuelt øverst og nederst i ønsket område, eller ved å angi midtpunktet og deretter angi et område rundt midtpunktet. Juster trinnstørrelsen eller antall stykker etter ønske. Ta bilde og lagre den opprinnelige filen.Deretter eksporteres som en TIF-fil eller et annet ønsket format. Bruk bildeanalyse, valgprogramvare for å justere lysstyrken og kontrasten i hver kanal til optimal klarhet oppnås i både enkeltbildene og den tredimensjonale gjengivelsen av Z-stakken. Når den behandles med den modifiserte CLARITY-protokollen, ble fullstendig optisk gjennomsiktighet gjennom tykkelsen på netthinnen observert sammenlignet med ikke-bearbeidede kontroll netthinner.Z stablede bilder for Arrestin-merkede kjegler i ONL, TH-merkede DAC-er i INL og RBPMS-merkede RGCer i GCL vises her. Den relative plasseringen av nevroner gjennom hele tykkelsen av netthinnen ble observert i overleggsbildet. TH-farging og CLARITY behandlet hele Mount netthinner ble sammenlignet med bilder hentet fra standard forberedelse.Dendritter og axon-lignende prosesser av DACs ble tydeligere avslørt i en klar behandlet netthinne enn i en standard netthinne. Axon-lignende prosesser av IS viste komplette ringlignende strukturer i en klarhets netthinne sammenlignet med en standard netthinne. Ringlignende strukturer av CLARITY netthinne tatt ved hjelp av fluorescensmikroskopi var nesten identiske med de som ble observert ved hjelp av konfektmikroskopi.De axonlignende prosessene løp også mot den ytre netthinnen. Immunofarging mot GluA2 og PSD-95 viste distinkt puncta, og avslørte individuelle GluA2 som inneholder AMPA-reseptorer og putative postsynaptiske steder. Et overleggsbilde viste litt puncta på DAC-prosesser.Punktene for putativ samlokalisering ble presentert i XZ-, YZ- og XY-fly og TH samlokulert tydelig med både GluA2 og PSD-95. Det er viktig at netthinnen forblir flat under hydrogelpolymeriseringsprosessen, slik at den ryddede netthinnen kan ligge flatt for monterings- og bildeprosessen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

The retinal pigment epithelium (RPE) lies at the back of the mammalian eye, just under the neural retina, which contains the photoreceptors (rods and ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Sensory Nerve Fibers Innervating Skin and Limb Bones

Tissue Preparering og farging av Mouse Sensoriske nervefibre Innervating Hud og Limb Bones

Detection and primary processing of physical, chemical and thermal sensory stimuli by peripheral sensory nerve fibers is key to sensory perception in ...

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Disseksjon av Transversus Abdominis Muscle for hel-mount Neuromuscular Junction Analyse

Analysis of neuromuscular junction morphology can give important insight into the physiological status of a given motor neuron. Analysis of thin flat ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Hele Mount immunolabeling av olfactory Receptor nevroner i<em&gt; Drosophila</em&gt; Antenne

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Whole-mount Imaging of Mouse Embryo Sensory Axon Projections

Hel-mount Imaging av Mouse Embryo Sensory Axon Anslag

The visualization of full-length neuronal projections in embryos is essential to gain an understanding of how mammalian neuronal networks develop. Here we ...

Whole Mount Labeling of Cilia in the Main Olfactory System of Mice

Hele Mount Merking av Cilia i hovedluktsystemet av Mus

The mouse olfactory system comprises 6-10 million olfactory sensory neurons in the epithelium lining the nasal cavity. Olfactory neurons extend a single ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

Hele Mount Dissection og Immunfluorescens av Adult Mouse Cochlea

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

Optical Clearing of the Mouse Central Nervous System Using Passive CLARITY

Optisk Clearing av musen sentralnervesystemet Bruke Passiv CLARITY

Traditionally, tissue visualization has required that the tissue of interest be serially sectioned and imaged, subjecting each tissue section to unique ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

En enkel ett-trinns Dissection Protokoll for Whole-mount Utarbeidelse av Adult<em&gt; Drosophila</em&gt; Brains

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...