Name: immunostaining of whole-mount retinas with the clarity tissue clearing method
Uploaded: 2021-03-06T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunostaining of Whole-Mount Retinas with the CLARITY Tissue Clearing Method at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить Бин Е, Натана Спикса и Хао Лю за техническую поддержку. Эта работа была поддержана Национальным институтом грантов здравоохранения EY022640 (D.-Q.Z.) и Оклендского университета Provost Undergraduate Student Research Award (E.J.A.).

Уход за мышами и все экспериментальные процедуры проводились в соответствии с руководящими принципами Национального института здравоохранения для лабораторных животных и были одобрены институциональными комитетами по уходу за животными и их использованию в Оклендском университет?...

<ol>
	<li>Witkovsky, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+and+retinal+function.">Dopamine and retinal function.</a> Documenta Ophthalmologica. 108 (1), 17-40 (2004).</li><li>McMahon, D. G., Iuvone, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+organization+of+the+mammalian+retina:+from+gene+regulation+to+physiology+and+diseases.">Circadian organization of the mammalian retina: from gene regulation to physiology and diseases.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 39, 58-76 (2014).</li><li>Prigge, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M1+ipRGCs+Influence+Visual+Function+through+Retrograde+Signaling+in+the+Retina.">M1 ipRGCs Influence Visual Function through Retrograde Signaling in the Retina.</a> Journal of Neuroscience. 36 (27), 7184-7197 (2016).</li><li>Zhang, D. Q., Belenky, M. A., Sollars, P. J., Pickard, G. E., McMahon, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanopsin+mediates+retrograde+visual+signaling+in+the+retina.">Melanopsin mediates retrograde visual signaling in the retina.</a> PLoS One. 7 (8), 42647 (2012).</li><li>Liu, L. L., Alessio, E. J., Spix, N. J., Zhang, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+GluA2-containing+calcium-impermeable+AMPA+receptors+on+dopaminergic+amacrine+cells+in+the+mouse+retina.">Expression of GluA2-containing calcium-impermeable AMPA receptors on dopaminergic amacrine cells in the mouse retina.</a> Molecular Vision. 25, 780-790 (2019).</li><li>Liu, L. L., Spix, N. J., Zhang, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+Receptors+Contribute+to+Retrograde+Synaptic+Transmission+from+Ganglion+Cell+Photoreceptors+to+Dopaminergic+Amacrine+Cells.">NMDA Receptors Contribute to Retrograde Synaptic Transmission from Ganglion Cell Photoreceptors to Dopaminergic Amacrine Cells.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 279 (2017).</li><li>Chung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+molecular+interrogation+of+intact+biological+systems.">Structural and molecular interrogation of intact biological systems.</a> Nature. 497 (7449), 332 (2013).</li><li>Poguzhelskaya, E., Artamonov, D., Bolshakova, A., Vlasova, O., Bezprozvanny, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+method+to+perform+CLARITY+imaging.">Simplified method to perform CLARITY imaging.</a> Molecular Neurodegeneration. 9, 19 (2014).</li><li>Epp, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+CLARITY+for+Clearing+Whole-Brain+and+Other+Intact+Organs.">Optimization of CLARITY for Clearing Whole-Brain and Other Intact Organs.</a> eNeuro. 2 (3), (2015).</li><li>Magliaro, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clarifying+CLARITY:+Quantitative+Optimization+of+the+Diffusion+Based+Delipidation+Protocol+for+Genetically+Labeled+Tissue.">Clarifying CLARITY: Quantitative Optimization of the Diffusion Based Delipidation Protocol for Genetically Labeled Tissue.</a> Frontiers in Neuroscience. 10, 179 (2016).</li><li>Yang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+phenotyping+within+transparent+intact+tissue+through+whole-body+clearing.">Single-cell phenotyping within transparent intact tissue through whole-body clearing.</a> Cell. 158 (4), 945-958 (2014).</li><li>Zheng, H., Rinaman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+CLARITY+for+visualizing+immunofluorescence+labeling+in+the+developing+rat+brain.">Simplified CLARITY for visualizing immunofluorescence labeling in the developing rat brain.</a> Brain Structure and Function. 221 (4), 2375-2383 (2016).</li><li>Witkovsky, P., Arango-Gonzalez, B., Haycock, J. W., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+retinal+dopaminergic+neurons:+differential+maturation+of+somatodendritic+and+axonal+compartments.">Rat retinal dopaminergic neurons: differential maturation of somatodendritic and axonal compartments.</a> Journal of Comparative Neurology. 481 (4), 352-362 (2005).</li></ol>

Модификация протокола CLARITY для цельномонтных сетчаток. Мы упростили протокол CLARITY для достижения адекватной полимеризации без необходимости вакуумной вакуумной эвакуации или сухой камеры, как это используется в большинстве предыдущих исследований7,<sup clas...

Сетчатка позвоночных является, пожалуй, наиболее доступной частью центральной нервной системы (ЦНС), и она служит отличной моделью для изучения развития, структуры и функции мозга. Пять классов нейронов в сетчатке распределены в трех ядерных слоях, разделенных двумя плексиформными слоями. Внешний ядерный слой (ONL) состоит из классических фоторецепторов (стержней и колбочка), которые преобразуют свет в электрические сигналы. Электрические сигналы обрабатываются нейронами во внутреннем ядерном слое (INL), включая биполярные, горизонтальные и амакриновые клетки, а затем передаются в ганглиоцитные клетки сетчатки (RGCs) в ганглиевом клеточном слое (GCL). RGC являются выходными нейронами сетчатки, при этом аксоны проецируются на мозг, чтобы способствовать формированию изображения и не-образующей визуальные функции. Кроме того, три типа глиальных клеток (клетки Мюллера, астроглия и микроглия) обеспечивают нейроны питательными веществами и защищают нейроны от вредных изменений в их внеклеточной среде.
Одна специализированная субпопуляция амакриновых клеток продуцирует и высвобождает дофамин, важный нейромодулятор в ЦНС, реконфигурируемый нейронные цепи сетчатки во время световой адаптации1,2. Дофаминергические амакриновые клетки (ЦАП) обладают уникальной особенностью морфологических профилей. Их соматы расположены в проксимальном INL с дендритами, разветвляющимися в самой дистальной части внутреннего плексиформного слоя (IPL). Аксоноподобные процессы ЦАП немиелиновые, тонкие и длинные, редко разветвленные и несут варикозное расширение вен (места высвобождения дофамина). Они образуют плотное сплетение с дендритами в IPL, включая кольцеподобные структуры вокруг соматов амакриновых клеток AII. Аксоны также проходят через INL к OPL, образуя центробежный путь через сетчатку3. Мы продемонстрировали, что процессы DAC экспрессируют рецепторы в ответ на высвобождение глутамата из пресинаптических нейронов, включая биполярные клетки и внутренне светочувствительные ганглиозные клетки сетчатки (ipRGCs)4,5,6. Однако неясно, экспрессируются ли глутаматные рецепторы на аксонах, дендритах или на обоих, поскольку они отрезаны в вертикальных срезах сетчатки и не могут быть отличимы друг от друга5,6. Иммуноокрашивание необходимо проводить в цельномонтных сетчатках, чтобы выявить трехмерное разветвление ЦАП и наличие глутаматных рецепторов на субклеточных компартментах. Хотя сетчатка относительно прозрачна, толщина сетчатки с целым креплением мыши составляет примерно 200 мкм, что ограничивает проникновение антител в глубокие ткани, а также уменьшает проникновение света для визуализации с высоким разрешением из-за рассеяния света в тканях. Чтобы преодолеть эти ограничения, мы адаптировали иммуноокрашающий совместимый метод делипидации тканевых гидрогелей (CLARITY), разработанный недавно для толстых участков мозга, к цельной сетчатке мыши7.
Метод CLARITY был первоначально разработан лабораторией Дейссерота для иммуноокрашения и визуализации толстых образцов мозга7. Он использует сильное моющее средство, додецилсульфат натрия (SDS) и электрофорез для удаления липидных компонентов (которые вызывают рассеяние света в тканях), оставляя белки и нуклеиновые кислоты на месте. Удаленные липиды заменяются прозрачным каркасом, состоящим из гидрогелевых мономеров, таких как акриламид, для поддержки оставшейся белковой структуры. Очищенная ткань может быть помечена с помощью иммуногистохимии и визуалирована с существенно увеличенной глубиной проникновения света через ткань (до нескольких миллиметров ниже поверхности ткани). С тех пор метод CLARITY был оптимизирован и упрощен несколькими исследовательскими группами8,9,10. Модифицированный протокол CLARITY использует пассивную технику очистки, чтобы избежать возможного повреждения тканей, вызванного электрофорезом для очистки всего мозга и других неповрежденных органов11. Однако этот метод еще не применялся к цельномонтным сетчаткам. Здесь мы адаптировали пассивную технику CLARITY для цельномонтных сетчаток, чтобы сделать их более прозрачными для иммуногистохимии и визуализации. Мы обнаружили, что большинство протестированных белков сетчатки были сохранены во время этого процесса иммуногистохимии. Используя решение для сопоставления показателей преломления, мы смогли получить изображение нейронов сетчатки толщиной около 200 мкм от ONL до GCL в цельных сетчатках.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>16% Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td>Fixative</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrylamide</td>
			<td>Fisher Biotech</td>
			<td>BP170</td>
			<td>Hydrogel monomer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axio Imager.Z2</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Fluorscence microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600</td>
			<td>Blocking agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse Ti</td>
			<td>Nikon Instruments</td>
			<td></td>
			<td>Scanning confocal microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH0258</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5655</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9763</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S0751</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaN3</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td>Bacteriostatic preservative</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NDS</td>
			<td>Aurion</td>
			<td>900.122</td>
			<td>Blocking agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS Elements AR</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1610301</td>
			<td>Delipidation agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorbitol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>51876</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td>Surfactant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP337</td>
			<td>Surfactant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VA-044</td>
			<td>Wako Chemicals</td>
			<td>011-19365</td>
			<td>Thermal initiator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunostaining of whole-mount retinas with the clarity tissue clearing method

Метод делипидации тканевого гидрогеля (CLARITY), первоначально разработанный лабораторией Дейссерота, был модифицирован и широко используется для иммуноокрашения и визуализации толстых образцов мозга. Однако эта передовая технология еще не использовалась для цельномонтных сетчаток. Хотя сетчатка частично прозрачна, ее толщина примерно 200 мкм (у мышей) по-прежнему ограничивает проникновение антител в глубокие ткани, а также уменьшает проникновение света для визуализации с высоким разрешением. Здесь мы адаптировали метод CLARITY для цельномонтовых сетчаток мышей, полимеризовав их акриламидным мономером с образованием нанопористого гидрогеля, а затем очистив их в додецилсульфате натрия, чтобы свести к минимуму потерю белка и избежать повреждения тканей. Обработанные CLARITY сетчатки были иммуноокражены антителами к нейронам сетчатки, глиальным клеткам и синаптическим белкам, установлены в растворе, соответствующем индексу преломления, и визуалированы. Наши данные показывают, что CLARITY может улучшить качество стандартного иммуногистохимического окрашивания и визуализации нейронов сетчатки и глиальных клеток при подготовке к целому по креплению. Например, 3D-разрешение тонких аксоноподобных и дендритных структур дофаминергических амакриновых клеток было значительно улучшено CLARITY. По сравнению с необработанными цельномонтными сетчатками, CLARITY может выявить иммуноокрашивание синаптических белков, таких как белок постсинаптической плотности 95. Наши результаты показывают, что CLARITY делает сетчатку более оптически прозрачной после удаления липидов и сохраняет тонкие структуры нейронов сетчатки и их белков, которые могут обычно использоваться для получения визуализации нейронов сетчатки и их субклеточных структур с высоким разрешением при подготовке к целому монтажу.

Модифицированные сетчатки, обработанные CLARITY, представляют собой оптически прозрачную ткань. Чтобы сформулировать метод очистки тканей, совместимый с иммуногистохимическими приложениями в сетчатке, обеспечивая при этом адекватную делипидацию и сохраняя структурную целос...

Watch this Scientific Journal Video about Immunostaining of Whole-Mount Retinas with the CLARITY Tissue Clearing Method at JoVE.com

Immunostaining of Whole-Mount Retinas with the CLARITY Tissue Clearing Method

Здесь мы представляем протокол адаптации метода CLARITY тканей мозга для цельномонтных сетчаток для улучшения качества стандартного иммуногистохимического окрашивания и визуализации с высоким разрешением нейронов сетчатки и их субклеточных структур.

Иммуноокрашивание цельно-маунтных сетчаток с помощью метода очистки тканей CLARITY

The tissue hydrogel delipidation method (CLARITY), originally developed by the Deisseroth laboratory, has been modified and widely used for immunostaining ...

Этот протокол позволяет и исследование тонкой морфологии нейронов сетчатки и может дать представление о клеточных и субклеточных морфологических изменениях, которые происходят в болезненных состояниях. Этот метод значительно улучшает оптическую прозрачность сетчатки и позволяет проводить трехмерную визуализацию с высоким разрешением, проводку схем и тонкие субклеточные структуры нейронов сетчатки в гормональной подготовке сетчатки. Энуклеат глаз мыши изогнутыми щипцами и переведите их в небольшую чашку Петри с 0,1 М PBS.Проделайте небольшое отверстие вдоль соединения склеры роговицы с иглой под рассеченным микроскопом, затем переведите глаз в формальдегид 4% мощности в течение одного часа. Перенесите глаз обратно к блюду с PBS. Под рассеченным микроскопом используйте ножницы для рассечения, чтобы разрезать весь путь вокруг корнеосклерального соединения.Удалите роговицу и хрусталик. Затем отрежьте его у основания зрительного нерва и аккуратно отклейте склеру щипцами, чтобы изолировать сетчатку. Сделайте четыре небольших разреза равномерно вокруг сетчатки и используйте тонкую кисть, смоченную в PBS, чтобы положить ее плоской GCL стороной вниз в клеверной форме на небольшой квадратный срез из нитроцеллюлозной фильтровальной бумаги.Возьмите угол нитроцеллюлозной бумаги щипцами и поместите его в 48-ю пластину с 48-ти питательным формальдегидом на один час, затем переложите фильтровальную бумагу и сетчатку в колодец с PBS и промыть три раза в течение пяти минут каждый. Разморозить раствор А4П0 на льду. Затем переведите сетчатку в раствор А4П0 и высиживают в течение ночи при четырех градусах Цельсия с мягким перемешиванием.Добавьте растительное масло в колодец, чтобы полностью покрыть раствор А4П0. Инкубировать на водяной бане при 40 градусах Цельсия в течение трех часов без встряхивания. Затем трижды мойте в PBS в течение пяти минут за одну стирку.Инкубировать сетчатку в 10% додецилсульфате натрия при 40 градусах Цельсия в течение двух дней с легким встряхиванием, затем переложить фильтровальную бумагу и сетчатку на PBS с Triton X-100 и промыть пять раз в течение 90 минут за одну стирку. После окончательной промывки храните сетчатку при четырех градусах Цельсия в PBS-T с 0,01% азида натрия или переходите непосредственно к иммуноокраслениям. Удалите сетчатку с фильтровальной бумаги, аккуратно отклеив ее тонкой щеткой в PBS-T.Инкубируют в первичном антителе, разведенном в блокирующем растворе в течение двух суток при 40 градусах Цельсия с легким встряхиванием. После инкубации промыть пять раз в течение 90 минут в PBS-T. Инкубируют сетчатку с соответствующими вторичными антителами, разведенными в блокирующем растворе в течение двух дней при 40 градусах Цельсия с легким встряхиванием.Защитите образцы от света на протяжении всей оставшейся части процедуры. Промыть сетчатку пять раз в течение 90 минут в 0,02 М фосфатного буфера. Наконец, инкубируют сетчатку в растворе для согласования рефракционного показателя на основе сорбита при 40 градусах Цельсия в течение ночи с легким встряхиванием.Очертите стеклянную крышку с помощью тонкого наконечника постоянного маркера, чтобы отметить квадратную границу на задней части слайда стеклянного микроскопа. Переверните слайд и с помощью шприца проследите границу тонкой линией силиконовой смазки на передней части слайда. Оставьте небольшой зазор в одном углу, чтобы лишний монтажный раствор вырвался.Перенесите сетчатку в центр ограниченной области и расположите ее тонкой кончиком кисти так, чтобы она была плоской стороной фоторецептора на стеклянном слайде. Пипетка примерно 60 микролитров sRIMS так, чтобы она покрывала уплощенной сетчатку и простиралась до одного угла корпуса. Убедитесь, что сетчатка остается ровной и на месте.Нанесите крышку, начиная с угла с помощью sRIMS, и медленно опустите ее, пока она не коснется смазки со всех сторон. Поместите стопку из трех слипов крышки с каждой стороны установленной сетчатки в качестве прокладки. Используйте длинный край другого слайда, чтобы нажать на скольжение крышки, чтобы крепление было плоским и ровным.Храните слайды при четырех градусах Цельсия до тех пор, пока не будет повыставка. Начните с размещения слайда на ступень микроскопа и найдите образец. Чтобы получить Z-сложенные изображения образцов, сначала сосредоточьтесь на сигнале в каждом канале индивидуально и установите время экспозиции или скорость сканирования для флуоресцентных или конфокальных микроскопов соответственно.Установите диапазон для стека Z, вручную установив фокальную плоскость в верхней и нижней части требуемого диапазона, либо установив среднюю точку, а затем указав диапазон вокруг средней точки. Отрегулируйте размер шага или количество фрагментов по желанию. Запишите образ и сохраните исходный файл.Затем экспортируется в виде файла TIF или другого требуемого формата. Используйте анализ изображений, программное обеспечение по выбору для настройки яркости и контрастности в каждом канале до тех пор, пока не будет достигнута оптимальная четкость как отдельных изображений, так и трехмерного рендеринга стека Z. При обработке с модифицированным протоколом CLARITY наблюдалась полная оптическая прозрачность по всей толщине сетчатки по сравнению с необработанными контрольными сетчатками.Здесь показаны Z-образы для конусов с маркировкой Arrestin в ONL, TH с метками DAC в INL и RGC с маркировкой RBPMS в GCL. Относительное расположение нейронов по всей толщине сетчатки наблюдалось на наложенном изображении. Окрашивание TH и CLARITY, обработанные всей сетчаткой Mount, сравнивали с изображениями, полученными при стандартной подготовке.Дендриты и аксоноподобные процессы ЦАП были более четко выявлены в четко обработанной сетчатке, чем в стандартной сетчатке. Аксоноподобные процессы ЦАП демонстрировали полные кольцеподобные структуры в чистоте сетчатки по сравнению со стандартной сетчаткой. Кольцеподобные структуры сетчатки CLARITY, взятые с помощью флуоресцентной микроскопии, были почти идентичны тем, которые наблюдались с помощью конфокальной микроскопии.Аксоноподобные отростки также шли к внешней сетчатке. Иммуноокрасивание против GluA2 и PSD-95 показало отчетливую пункту, выявляя отдельные GluA2, содержащие рецепторы AMPA и мтутивные постсинаптические участки, соответственно. На наложенном изображении показаны некоторые пункты на процессах DAC.Точки предполагаемой совместной локализации были представлены в плоскостях XZ, YZ и XY, а TH четко локализован как с GluA2, так и с PSD-95. Важно, чтобы сетчатка оставалась плоской во время процесса полимеризации гидрогеля, чтобы очищенная сетчатка могла лежать плоско для процесса монтажа и визуализации.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Визуализация Эмбриональные нервной системы в целом монтажа Drosophila Эмбрионы

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

Препарирование Мышь Око за полного горе пигментный эпителий сетчатки

The retinal pigment epithelium (RPE) lies at the back of the mammalian eye, just under the neural retina, which contains the photoreceptors (rods and ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Sensory Nerve Fibers Innervating Skin and Limb Bones

Подготовка тканей и Иммуноокрашивание Мыши чувствительные нервные волокна, иннервирующие кожу и кости конечностей

Detection and primary processing of physical, chemical and thermal sensory stimuli by peripheral sensory nerve fibers is key to sensory perception in ...

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Рассечение мышц Transversus Abdominis для анализа нервно-мышечной развязки

Analysis of neuromuscular junction morphology can give important insight into the physiological status of a given motor neuron. Analysis of thin flat ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Всего Гора иммунного обонятельных рецепторов нейронов в<em&gt; Дрозофилы</em&gt; Антенны

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Whole-mount Imaging of Mouse Embryo Sensory Axon Projections

Всего монтажа Визуализация эмбриона мыши Сенсорная Axon прогнозам

The visualization of full-length neuronal projections in embryos is essential to gain an understanding of how mammalian neuronal networks develop. Here we ...

Whole Mount Labeling of Cilia in the Main Olfactory System of Mice

Всего горе Маркировка ресничек в Главном обонятельной системе мышей

The mouse olfactory system comprises 6-10 million olfactory sensory neurons in the epithelium lining the nasal cavity. Olfactory neurons extend a single ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

Всего горе Вскрытие и Иммунофлуоресценции взрослых мышей улитки

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

Optical Clearing of the Mouse Central Nervous System Using Passive CLARITY

Оптический Клиринговый нервной системы мыши Центральной использованием пассивных ЯСНОСТИ

Traditionally, tissue visualization has required that the tissue of interest be serially sectioned and imaged, subjecting each tissue section to unique ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

Простой Одношаговый Вскрытие Протокол целом монтажа подготовки взрослых<em&gt; Drosophila</em&gt; Мозги

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...