Name: immunostaining of whole-mount retinas with the clarity tissue clearing method
Uploaded: 2021-03-06T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunostaining of Whole-Mount Retinas with the CLARITY Tissue Clearing Method at JoVE.com

Vi vill tacka Bing Ye, Nathan Spix och Hao Liu för teknisk support. Detta arbete stöddes av National Institute of Health Grants EY022640 (D.-Q.Z.) och Oakland University Provost Undergraduate Student Research Award (E.J.A.).

Musvård och alla experimentella förfaranden utfördes enligt National Institutes of Health riktlinjer för försöksdjur och godkändes av institutionella djurvårds- och användningskommittéer vid Oakland University (protokoll nr 18071).
Obs: Namnen på lösningarna och deras sammansättningar anges i tabell 1.
1. Vävnadsberedning
<ol><li>Avliva musen med en överdos av CO2, följt av livmoderhalscancer förskjutning.</li>
	<li>Fö...

<ol>
	<li>Witkovsky, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+and+retinal+function.">Dopamine and retinal function.</a> Documenta Ophthalmologica. 108 (1), 17-40 (2004).</li><li>McMahon, D. G., Iuvone, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+organization+of+the+mammalian+retina:+from+gene+regulation+to+physiology+and+diseases.">Circadian organization of the mammalian retina: from gene regulation to physiology and diseases.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 39, 58-76 (2014).</li><li>Prigge, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M1+ipRGCs+Influence+Visual+Function+through+Retrograde+Signaling+in+the+Retina.">M1 ipRGCs Influence Visual Function through Retrograde Signaling in the Retina.</a> Journal of Neuroscience. 36 (27), 7184-7197 (2016).</li><li>Zhang, D. Q., Belenky, M. A., Sollars, P. J., Pickard, G. E., McMahon, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanopsin+mediates+retrograde+visual+signaling+in+the+retina.">Melanopsin mediates retrograde visual signaling in the retina.</a> PLoS One. 7 (8), 42647 (2012).</li><li>Liu, L. L., Alessio, E. J., Spix, N. J., Zhang, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+GluA2-containing+calcium-impermeable+AMPA+receptors+on+dopaminergic+amacrine+cells+in+the+mouse+retina.">Expression of GluA2-containing calcium-impermeable AMPA receptors on dopaminergic amacrine cells in the mouse retina.</a> Molecular Vision. 25, 780-790 (2019).</li><li>Liu, L. L., Spix, N. J., Zhang, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+Receptors+Contribute+to+Retrograde+Synaptic+Transmission+from+Ganglion+Cell+Photoreceptors+to+Dopaminergic+Amacrine+Cells.">NMDA Receptors Contribute to Retrograde Synaptic Transmission from Ganglion Cell Photoreceptors to Dopaminergic Amacrine Cells.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 279 (2017).</li><li>Chung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+molecular+interrogation+of+intact+biological+systems.">Structural and molecular interrogation of intact biological systems.</a> Nature. 497 (7449), 332 (2013).</li><li>Poguzhelskaya, E., Artamonov, D., Bolshakova, A., Vlasova, O., Bezprozvanny, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+method+to+perform+CLARITY+imaging.">Simplified method to perform CLARITY imaging.</a> Molecular Neurodegeneration. 9, 19 (2014).</li><li>Epp, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+CLARITY+for+Clearing+Whole-Brain+and+Other+Intact+Organs.">Optimization of CLARITY for Clearing Whole-Brain and Other Intact Organs.</a> eNeuro. 2 (3), (2015).</li><li>Magliaro, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clarifying+CLARITY:+Quantitative+Optimization+of+the+Diffusion+Based+Delipidation+Protocol+for+Genetically+Labeled+Tissue.">Clarifying CLARITY: Quantitative Optimization of the Diffusion Based Delipidation Protocol for Genetically Labeled Tissue.</a> Frontiers in Neuroscience. 10, 179 (2016).</li><li>Yang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+phenotyping+within+transparent+intact+tissue+through+whole-body+clearing.">Single-cell phenotyping within transparent intact tissue through whole-body clearing.</a> Cell. 158 (4), 945-958 (2014).</li><li>Zheng, H., Rinaman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+CLARITY+for+visualizing+immunofluorescence+labeling+in+the+developing+rat+brain.">Simplified CLARITY for visualizing immunofluorescence labeling in the developing rat brain.</a> Brain Structure and Function. 221 (4), 2375-2383 (2016).</li><li>Witkovsky, P., Arango-Gonzalez, B., Haycock, J. W., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+retinal+dopaminergic+neurons:+differential+maturation+of+somatodendritic+and+axonal+compartments.">Rat retinal dopaminergic neurons: differential maturation of somatodendritic and axonal compartments.</a> Journal of Comparative Neurology. 481 (4), 352-362 (2005).</li></ol>

Ändring av CLARITY-protokollet för helmonterade näthinner. Vi har förenklat CLARITY-protokollet för att uppnå adekvat polymerisation utan behov av en vakuumevakuerings- eller uttorkningskammare, som används i de flesta tidigarestudier 7,9,11. Polymerisationsprocessen hämmas av syre, vilket kräver att provet isoleras från luft under protokollets polymerisationssteg. Men i stället för att avgasa med...

Ryggkotor näthinnan är kanske den mest tillgängliga delen av centrala nervsystemet (CNS), och det fungerar som en utmärkt modell för att studera hjärnans utveckling, struktur och funktion. Fem klasser av nervceller i näthinnan fördelas i tre nukleära lager åtskilda av två plexiforma lager. Det yttre kärnskiktet (ONL) består av klassiska fotoreceptorer (stavar och koner) som omvandlar ljus till elektriska signaler. Elektriska signaler bearbetas av nervceller i det inre kärnskiktet (INL), inklusive bipolära, horisontella och amacrine celler, och överförs sedan till retinal ganglion celler (RGCs) i ganglion cell skiktet (GCL). RGCs är utdataneuroner i näthinnan, med axonerna som projicerar till hjärnan för att bidra till bildbildande och icke-bildbildande visuell funktion. Dessutom ger tre typer av gliaceller (Mullerceller, astroglia och mikroglia) näringsämnen till nervceller och skyddar nervceller från skadliga förändringar i deras extracellulära miljö.
En specialiserad subpopulation av amacrine celler producerar och släpper dopamin, en viktig neuromodulator i CNS, omkonfigurera retinal neurala kretsar under ljus anpassning1,2. Dopaminergiska amacrine celler (DACs) har en unik egenskap hos morfologiska profiler. Deras somata ligger i det proximala INL med dendriter som förargar i den mest distala delen av det inre plexiformskiktet (IPL). Axon-liknande processer av DACs är unmyelinated, tunn och lång, glest förgrenad och bär varicosities (platserna för dopamin release). De bildar en tät plexus med dendriter i IPL, inklusive ringliknande strukturer runt somata av AII amacrine celler. Axonerna löper också genom INL mot OPL och bildar en centrifugalväg över näthinnan3. Vi har visat att DAC processer uttrycker receptorer som svar på glutamat release från presynaptic nervceller, inklusive bipolära celler och inneboende ljuskänsliga retinal ganglion celler (ipRGCs)4,5,6. Det är dock oklart om glutamatreceptorer uttrycker på axonerna, dendriterna eller båda eftersom de är avskurna i vertikala näthinnesektioner och inte kan särskiljas från varandra5,6. Immunostaining måste utföras i helmonterade näthinner för att avslöja tredimensionell förgrening av DACs och förekomsten av glutamatreceptorer på subcellulära fack. Även om näthinnan är relativt genomskinlig är tjockleken på en mus helmonterad näthinna cirka 200 μm, vilket begränsar penetrationen av antikroppar i den djupa vävnaden samt minskar ljuspenetrationen för högupplöst avbildning på grund av vävnadsljusspridning. För att övervinna dessa begränsningar anpassade vi den immunostaining kompatibla vävnad hydrogellipidation metod (CLARITY) utvecklats nyligen för tjocka hjärnsektioner till hela mount mus näthinnor7.
CLARITY-metoden utvecklades ursprungligen av Deisseroth-laboratoriet för immunostaining och avbildning av tjocka hjärnprover7. Den använder ett starkt tvättmedel, natriumdidcylsulfat (SDS) och elektrofores för att ta bort lipidkomponenterna (som orsakar vävnadsljusspridning), vilket lämnar proteinerna och nukleinsyrorna på plats. De borttagna lipiderna ersätts med en genomskinlig byggnadsställning som består av hydrogelmonomerer som akrylamid för att stödja den återstående proteinstrukturen. Den rensade vävnaden kan märkas via immunohistokemi och avbildas med väsentligt ökat ljuspenetrationsdjup genom vävnaden (upp till flera millimeter under vävnadsytan). Sedan dess har CLARITY-metoden optimerats och förenklats av flera forskargrupper8,9,10. Ett modifierat CLARITY-protokoll använder en passiv clearingteknik för att undvika eventuella vävnadsskador som orsakas av elektrofores för att rensa hela hjärnan och andra intakta organ11. Denna metod har dock ännu inte tillämpats på helmonterade näthinner. Här anpassade vi den passiva CLARITY-tekniken för helmonterade näthinner för att göra dem mer transparenta för immunohistokemi och avbildning. Vi fann att en majoritet av de retinal proteiner som testades bevarades under denna process för immunohistokemi. Med hjälp av brytning index matchningslösningen kunde vi avbilda näthinneneuroner över den cirka 200 μm tjockleken från ONL till GCL i helmonterade näthinnor.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>16% Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td>Fixative</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrylamide</td>
			<td>Fisher Biotech</td>
			<td>BP170</td>
			<td>Hydrogel monomer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axio Imager.Z2</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Fluorscence microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600</td>
			<td>Blocking agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse Ti</td>
			<td>Nikon Instruments</td>
			<td></td>
			<td>Scanning confocal microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH0258</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5655</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9763</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S0751</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaN3</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td>Bacteriostatic preservative</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NDS</td>
			<td>Aurion</td>
			<td>900.122</td>
			<td>Blocking agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS Elements AR</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1610301</td>
			<td>Delipidation agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorbitol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>51876</td>
			<td>Buffer component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td>Surfactant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP337</td>
			<td>Surfactant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VA-044</td>
			<td>Wako Chemicals</td>
			<td>011-19365</td>
			<td>Thermal initiator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunostaining of whole-mount retinas with the clarity tissue clearing method

Vävnad hydrogel delipidation metod (CLARITY), ursprungligen utvecklat av Deisseroth laboratoriet, har modifierats och används ofta för immunostaining och bildbehandling av tjocka hjärnan prover. Denna avancerade teknik har dock ännu inte använts för helmonterade näthinner. Även om näthinnan är delvis genomskinlig begränsar dess tjocklek på cirka 200 μm (hos möss) fortfarande penetrationen av antikroppar i den djupa vävnaden samt minskar ljuspenetrationen för högupplöst avbildning. Här anpassade vi CLARITY-metoden för helmonterade musretinor genom att polymerisera dem med en akrylamidmonomer för att bilda en nanoporös hydrogel och sedan rensa dem i natrium dodecylsulfat för att minimera proteinförlust och undvika vävnadsskador. CLARITY-bearbetade näthinnor var immunostained med antikroppar för retinal nervceller, stödjeceller och synaptiska proteiner, monterade i ett brytning index matchande lösning och avbildas. Våra data visar att CLARITY kan förbättra kvaliteten på standard immunohistochemical färgning och bildbehandling för retinal nervceller och stödjeceller i hela montering beredning. Till exempel förbättrades 3D-upplösning av fina axon-liknande och dendritiska strukturer av dopaminerg amacrine celler mycket av CLARITY. Jämfört med icke-bearbetade helmonterade näthinnemat kan CLARITY avslöja immunostaining för synaptiska proteiner såsom postsynaptiskt densitetsprotein 95. Våra resultat visar att CLARITY gör näthinnan mer optiskt transparent efter avlägsnandet av lipider och bevarar fina strukturer av näthinneneuroner och deras proteiner, som rutinmässigt kan användas för att erhålla högupplöst bildbehandling av näthinneneuroner och deras subcellulära strukturer i hela monteringsberedningen.

Modifierade CLARITY-bearbetade näthinner är optiskt transparent vävnad. För att formulera en vävnadsrensningsmetod som är kompatibel med immunohistokemiska applikationer i näthinnan samtidigt som vi tillhandahåller adekvat delipidation och behåller cellulära proteiner strukturella integritet, anpassade vi CLARITY-vävnadsrensningsmetoden till helmonterade mushinnor. Vi kunde förenkla protokollet och ändra det för helmonterade näthinner (se protokollet). Efter avslutad hybridisering, clea...

Watch this Scientific Journal Video about Immunostaining of Whole-Mount Retinas with the CLARITY Tissue Clearing Method at JoVE.com

Immunostaining of Whole-Mount Retinas with the CLARITY Tissue Clearing Method

Här presenterar vi ett protokoll för att anpassa CLARITY-metoden för hjärnvävnaderna för helmonterade näthinnor för att förbättra kvaliteten på standard immunohistokemisk färgning och högupplöst bildbehandling av retinal nervceller och deras subcellulära strukturer.

Immunostaining av helmonterade näthinnor med CLARITY Tissue Clearing Method

The tissue hydrogel delipidation method (CLARITY), originally developed by the Deisseroth laboratory, has been modified and widely used for immunostaining ...

Detta protokoll möjliggör undersökning av den fina morfologi av retinal nervceller och kan ge insikt i cellulära och subcellulära morfologiska förändringar som uppstår i sjukdom stater. Denna metod förbättrar avsevärt den optiska transparensen i näthinnan och möjliggör högupplöst, tredimensionell avbildning, kretsledningar och fina subcellulära strukturer av näthinneneuroner i hormon näthinnepreparat. Enucleate musögonen med böjda tångar och överför dem till en liten Petri-maträtt med 0,1 M PBS.Peta ett litet hål längs hornhinnans sclera-korsning med nålen under dissektionsmikroskopet och överför sedan ögat till 4% kraftformigdehyd i en timme. Överför ögat tillbaka till en maträtt med PBS. Använd dissekeringssaxen under ett dissekeringsmikroskop för att skära hela vägen runt corneoscleral-korsningen.Ta bort hornhinnan och linsen. Skär sedan av den vid basen av synnerven och skala försiktigt av sclera med tång för att isolera näthinnan. Gör fyra små snitt jämnt runt näthinnan och använd en fin spetsborste doppad i PBS för att lägga den platt GCL-sida ner i klöverliknande form på ett litet fyrkantigt snitt från nitrocellulosafilterpapper.Plocka upp hörnet av nitrocellulosapapperet med tång och placera det i en 48-brunnsplatta med 4% effekt formaldehyd i en timme, överför sedan filterpapperet och näthinnan till en brunn med PBS och tvätta tre gånger i fem minuter vardera. Tina upp A4P0-lösningen på is. Överför sedan näthinnan till A4P0-lösningen och inkubera över natten vid fyra grader Celsius med mild agitation.Tillsätt vegetabilisk olja i brunnen för att helt täcka A4P0-lösningen. Inkubera i ett vattenbad vid 40 grader Celsius i tre timmar utan skakningar. Tvätta sedan tre gånger i PBS i fem minuter per tvätt.Inkubera näthinnan i 10% natriumdupcylsulfat vid 40 grader Celsius i två dagar med mild skakning och överför sedan filterpapperet och näthinnan till PBS med Triton X-100 och tvätta fem gånger i 90 minuter per tvätt. Efter den slutliga tvätten, lagra näthinnan vid fyra grader Celsius i PBS-T med 0,01% natriumazid eller flytta direkt till immunfärgning. Ta bort näthinnan från filterpapperet genom att försiktigt skala av den med en fin spetsborste i PBS-T.Inkuberas i primär antikropp utspädd i blockerande lösning i två dagar vid 40 grader Celsius med mild skakning. Efter inkubationen, tvätta fem gånger i 90 minuter i PBS-T. Inkubera näthinnan med lämpliga sekundära antikroppar utspädda i blockeringslösning i två dagar vid 40 grader Celsius med skonsam skakning.Skydda proverna mot ljus under resten av proceduren. Tvätta näthinnan fem gånger i 90 minuter i 0,02 M fosfatbuffert. Inkubera slutligen näthinnan i sorbitol-baserade brytning index matchning lösning vid 40 grader Celsius över natten med mild skakning.Skissera en glaskåpa slip med en fin spets permanent markör för att markera en fyrkantig gräns på baksidan av en glasmikroskop glid. Vänd på rutschkanan och använd en spruta för att spåra gränsen med en tunn linje silikonfett på bildens framsida. Lämna ett litet mellanrum i ett hörn för överflödig monteringslösning för att komma ut.Överför näthinnan till mitten av det avgränsade området och placera den med en fin spetsborste så att den ligger platt med fotoreceptorsidan mot glasrutschbanan. Pipetten är cirka 60 mikroliter sRIMS så att den täcker den utplattade näthinnan och sträcker sig till ett hörn av höljet. Se till att näthinnan förblir platt och på plats.Applicera täckspingen, börja från hörnet med sRIMS och sänk den långsamt tills den vidrör fettet på alla sidor. Placera en stapel med tre täckslipsar på varje sida av den monterade näthinnan som distans. Använd långsidan på en annan bild för att trycka ner täcksnederdelen så att fästet är platt och jämnt.Förvara rutschkanorna på fyra grader Celsius tills de avbildningar. Börja med att placera bilden på mikroskopstadiet och lokalisera provet. För att få Z-staplade bilder av prover, fokusera först på signalen i varje kanal individuellt och ställ in exponeringstiden eller skanningshastigheten för fluorescens- respektive konfokala mikroskop.Ställ in intervallet för Z-stacken antingen genom att manuellt ställa in brännplanet högst upp och längst ned i önskat intervall eller genom att ställa in mittpunkten och sedan ange ett intervall runt mittpunkten. Justera stegstorleken eller antalet segment efter behov. Ta bilden och spara originalfilen.Exporteras sedan som en TIF-fil eller ett annat önskat format. Använd bildanalys, valfri programvara för att justera ljusstyrkan och kontrasten i varje kanal tills optimal klarhet uppnås i både de enskilda bilderna och den tredimensionella renderingen av Z-stacken. När den behandlades med det modifierade CLARITY-protokollet observerades fullständig optisk genomskinlighet genom näthinnans tjocklek jämfört med icke-bearbetade kontrollhinner.Z staplade bilder för Arrestin-märkta koner i ONL, TH-märkta DAC i INL och RBPMS-märkta RGCs i GCL visas här. Den relativa platsen för nervceller i hela tjockleken på näthinnan observerades i överlagringsbilden. TH färgning och KLARHET bearbetade hela Mount näthinnorna jämfördes med bilder från standard förberedelse.Dendriter och axon-liknande processer av DACs avslöjades tydligare i en klarhet bearbetade näthinnan än i en standard näthinnan. Axon-liknande processer av DACs uppvisade kompletta ringliknande strukturer i en klarhet näthinna jämfört med en standard näthinnan. Ringliknande strukturer av CLARITY näthinnan tas med fluorescensmikroskopi var nästan identiska med de som observerats med confocal mikroskopi.De axonliknande processerna gick också mot den yttre näthinnan. Immun färgning mot GluA2 och PSD-95 visade distinkt puncta, avslöjar enskilda GluA2 som innehåller AMPA-receptorer och förmodade post synaptiska platser, respektive. En överläggsbild visade lite puncta på DAC-processer.Punkterna för försättande samlokalisering presenterades i XZ, YZ och XY-plan och TH samlokalisering tydligt med både GluA2 och PSD-95. Det är viktigt att näthinnan förblir platt under hydrogelpolymeriseringsprocessen så att den rensade näthinnan kan ligga platt för monterings- och bildbehandlingsprocessen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualisering av embryonala nervsystemet i hela-fäste Drosophila Embryon

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

Dissekering av en mus Eye för en hel berget av pigmentepitelet

The retinal pigment epithelium (RPE) lies at the back of the mammalian eye, just under the neural retina, which contains the photoreceptors (rods and ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Sensory Nerve Fibers Innervating Skin and Limb Bones

Tissue Upprättande och immunfärgning av Mouse känselnervtrådar Innervating Hud och Limb Bones

Detection and primary processing of physical, chemical and thermal sensory stimuli by peripheral sensory nerve fibers is key to sensory perception in ...

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissekering av Transversus Abdominis muskel för hela berget Neuromuskulär junction analys

Analysis of neuromuscular junction morphology can give important insight into the physiological status of a given motor neuron. Analysis of thin flat ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Hela Mount immunomärkning av luktreceptor nervceller i<em&gt; Drosophila</em&gt; Antenn

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Whole-mount Imaging of Mouse Embryo Sensory Axon Projections

Hela-mount avbildning av Mouse Embryo Sensorisk Axon Projektioner

The visualization of full-length neuronal projections in embryos is essential to gain an understanding of how mammalian neuronal networks develop. Here we ...

Whole Mount Labeling of Cilia in the Main Olfactory System of Mice

Hela Mount Märkning av Cilia i huvud Olfactory systemet Möss

The mouse olfactory system comprises 6-10 million olfactory sensory neurons in the epithelium lining the nasal cavity. Olfactory neurons extend a single ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

Hela Mount Dissekering och Immunofluorescence i vuxen mus Cochlea

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

Optical Clearing of the Mouse Central Nervous System Using Passive CLARITY

Optisk Clearing av Mouse centrala nervsystemet med passiv CLARITY

Traditionally, tissue visualization has required that the tissue of interest be serially sectioned and imaged, subjecting each tissue section to unique ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

En enkel steg Dissection protokoll för hel-mount Framställning av Adult<em&gt; Drosophila</em&gt; Brains

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...