Name: doxycycline loaded collagen-chitosan composite scaffold for the accelerated healing of diabetic wounds
Uploaded: 2021-08-21T14:00:00
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Os autores agradecem ao Dr. Ashish D Wadhwani. (Professor Assistente e Chefe do Departamento de Biotecnologia Farmacêutica, JSS College of Pharmacy, Ooty, Índia) por auxiliar em estudos de viabilidade celular in vitro.
Os autores gostariam de agradecer ao Departamento de Ciência e Tecnologia - Fundo de Melhoria da Infraestrutura de Ciência e Tecnologia em Universidades e Instituições de Ensino Superior (DST-FIST), Nova Deli, por apoiar nosso departamento.
Os autores também gostam de agradecer ao Sr. Sanju. S e Sr. Sriram. Narukulla M. Pharm estudantes por seu apoio na filmagem.
Esta pesquisa foi apoiada pela JSS Academy of Higher Education & Research (JSSAHER).

Todos os procedimentos animais realizados foram aprovados pelo comitê institucional de ética animal da JSS College of Pharmacy, Ooty, Índia.
1. Preparação de andaimes porosos carregados do DOX pelo método de secagem congelante
<ol><li>Adicione 1,2 g de COL a 100 mL de água (por exemplo, Millipore) e mantenha-se de lado para o inchaço.</li>
	<li>Mexa a dispersão do COL inchado a 2000 rpm durante a noite para garantir a dissolução completa do COL.</li>
	<li>Prepare a solução CS di...

<ol>
	<li>. IDF Diabetes Atlas, 9th edn Available from: <a target="_blank" href="https://www.diabetesatlas.org">https://www.diabetesatlas.org</a> (2019)</li><li>Falanga, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+and+its+impairment+in+the+diabetic+foot.">Wound healing and its impairment in the diabetic foot.</a> The Lancet. 366 (9498), 1736-1743 (2005).</li><li>Frykberg, R. G., Banks, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+in+the+treatment+of+chronic+wounds.">Challenges in the treatment of chronic wounds.</a> Advances in Wound Care. 4 (9), 560-582 (2015).</li><li>Alexiadou, K., Doupis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+diabetic+foot+ulcers.">Management of diabetic foot ulcers.</a> Diabetes Therapy. 3 (1), 1-15 (2012).</li><li>Karri, V. V. S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+and+emerging+therapies+in+the+management+of+diabetic+foot+ulcers.">Current and emerging therapies in the management of diabetic foot ulcers.</a> Current Medical Research and Opinion. 32 (3), 519-542 (2016).</li><li>Sanapalli, B. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+metalloproteinase-9+delays+wound+healing+in+a+murine+wound+model.">Matrix metalloproteinase-9 delays wound healing in a murine wound model.</a> Surgery. 147 (2), 295-302 (2010).</li><li>Gill, S. E., Parks, W. 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M., Carvalho, E., de Sousa, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+on+the+development+of+wound+dressings+for+diabetic+foot+ulcer+treatment-a+review.">Recent advances on the development of wound dressings for diabetic foot ulcer treatment-a review.</a> Acta Biomaterialia. 9 (7), 7093-7114 (2013).</li><li>Natarajan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanostructured+Lipid+Carriers+of+Pioglitazone+Loaded+Collagen/Chitosan+Composite+Scaffold+for+Diabetic+Wound+Healing.">Nanostructured Lipid Carriers of Pioglitazone Loaded Collagen/Chitosan Composite Scaffold for Diabetic Wound Healing.</a> Advances in Wound Care. 8 (10), 499-513 (2019).</li><li>Karri, V. V. S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Curcumin+loaded+chitosan+nanoparticles+impregnated+into+collagen-alginate+scaffolds+for+diabetic+wound+healing.">Curcumin loaded chitosan nanoparticles impregnated into collagen-alginate scaffolds for diabetic wound healing.</a> International Journal Of Biological Macromolecules. 93, 1519-1529 (2016).</li><li>Hsieh, W. -. C., Chang, C. -. P., Lin, S. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+characterization+of+3D+micro-porous+structured+chitosan+scaffolds+for+tissue+engineering.">Morphology and characterization of 3D micro-porous structured chitosan scaffolds for tissue engineering.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 57 (2), 250-255 (2007).</li><li>Xie, Y., Chen, J., Xiao, A., Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+activity+of+polyphenols:+structure-activity+relationship+and+influence+of+hyperglycemic+condition.">Antibacterial activity of polyphenols: structure-activity relationship and influence of hyperglycemic condition.</a> Molecules. 22 (1913), 1-11 (2017).</li><li>Geerlings, S. E., Brouwer, E. C., Gaastra, W., Verhoef, J., Hoepelman, A. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+method+for+the+analysis+of+hydroxyproline+in+biological+tissues.">A simplified method for the analysis of hydroxyproline in biological tissues.</a> Clinical Biochemistry. 29 (3), 225-229 (1996).</li><li>Charulatha, V., Rajaram, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+different+crosslinking+treatments+on+the+physical+properties+of+collagen+membranes.">Influence of different crosslinking treatments on the physical properties of collagen membranes.</a> Biomaterials. 24 (5), 759-767 (2003).</li><li>Rehakova, M., Bako&#353;, D., Vizarova, K., Sold&#225;n, M., Jur&#237;ckov&#225;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+collagen+and+hyaluronic+acid+composite+materials+and+their+modification+by+chemical+crosslinking.">Properties of collagen and hyaluronic acid composite materials and their modification by chemical crosslinking.</a> Journal of Biomedical Materials Research: An Official Journal of The Society for Biomaterials and The Japanese Society for Biomaterials. 30 (3), 369-372 (1996).</li><li>Chang, M. -. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doxycycline+enhances+survival+and+self-renewal+of+human+pluripotent+stem+cells.">Doxycycline enhances survival and self-renewal of human pluripotent stem cells.</a> Stem Cell Reports. 3 (2), 353-364 (2014).</li><li>Dovi, J. V., He, L. K., DiPietro, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+wound+closure+in+neutrophil-depleted+mice.">Accelerated wound closure in neutrophil-depleted mice.</a> Journal of Leukocyte Biology. 73 (4), 448-455 (2003).</li><li>Lindeman, J. H., Abdul-Hussien, H., van Bockel, J. H., Wolterbeek, R., Kleemann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+Perspective.">Clinical Perspective.</a> Circulation. 119 (16), 2209-2216 (2009).</li><li>Zhang, C., Gong, W., Liu, H., Guo, Z., Ge, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+matrix+metalloproteinase-9+with+low-dose+doxycycline+reduces+acute+lung+injury+induced+by+cardiopulmonary+bypass.">Inhibition of matrix metalloproteinase-9 with low-dose doxycycline reduces acute lung injury induced by cardiopulmonary bypass.</a> International Journal Of Clinical And Experimental Medicine. 7 (12), 4975-4982 (2014).</li></ol>

O principal objetivo deste estudo foi determinar o efeito do andaime COL-CS carregado de DOX na cicatrização de DW em ratos. CL e NCL foram preparados e avaliados em termos de morfologia, índice de inchaço, cinética de liberação in vitro e biocompatibilidade.
Caracterização do DOX carregado NCL e andaime CL Os andaimes preparados foram encontrados porosos com poros interligados. Esses poros interconectados asseguram a natureza porosa e esponjosa que ajuda na difus?...

Diabetes mellitus (DM) é uma condição em que a falha do corpo em fornecer insulina ou reagir aos seus resultados na digestão anormal de açúcares simples provoca um aumento da glicemia 1. O emaranhado mais consecutivo e esmagador do DM é a ferida diabética (DW). Cerca de 25% dos pacientes com DM têm a oportunidade de construir um DW em sua vida 1. A cura dificultada da DW é credenciada a uma triopatia de DM: imunopatia, vasculopatia e neuropatia. Sempre que a DW não for tratada, pode resultar em desenvolvimento de gangrena, levando, portanto, à remoção do órgão em causa 2.
Muitos tratamentos, como instruir os pacientes (inspecionar a ferida diariamente, limpar a ferida, evitar atividades que criam pressão sobre a ferida, monitoramento periódico de glicose, etc.), controlar sua glicemia, desbridamento de feridas, descarga de pressão, procedimento médico, oxigenoterapia hiperbárica e terapias avançadas são na prática 3,4. A maioria desses medicamentos não consegue atender a todos os pré-requisitos vitais para o cuidado da DW à luz das condições fiofofosiológicas multifatoriais e despesas inesperadas relacionadas a esses medicamentos 5. Embora a patogênese dw seja multifatorial, a inflamação persistente com o manejo inadequado do tecido é declarada como a verdadeira razão para a cicatrização retardada em DWs 5,6.
Níveis aumentados de mediadores inflamatórios e pró-inflamatórios na DW resultam em fatores de crescimento diminuídos responsáveis pela cicatrização tardia da ferida 2,6. A formação inadequada de matriz extracelular (ECM) em DWs é credenciada ao aumento dos níveis de metaloproteinases matricial (MMPs) responsáveis pela rápida degradação do ECM formado. Nos MMPs, o MMP-9 é relatado como um dos principais intermediários responsáveis pela inflamação prolongada e degradação rápida do ECM 7. Afirma-se que o tratamento local com um medicamento anti-inflamatório que diminui os níveis elevados de MMP-9 restabelece homeostase cutânea, arranjo de estrutura e solicita melhor cicatrização de DWs 8,9.
A doxiciclina (DOX), inibidora de MMP-9, foi escolhida para suprimir os níveis elevados de MMP-9, um dos principais mediadores inflamatórios responsáveis pela inflamação persistente em DWs 10,11,12. Além disso, o DOX possui antioxidantes (produzem radicais hidroxi e fenoxidos livres capazes de se ligar com espécies reativas de oxigênio) 13 e anti-apoptótico (inibir a expressão caspase e estabilização mitocondrial) 14 atividades essenciais para o tratamento da DW. Foi escolhido o arranjo de quadros contendo DOX, colágeno (COL) e chitosan (CS). A escolha do COL depende da forma como ajuda a fornecer a estrutura necessária responsável pela resistência mecânica e regeneração tecidual 15. Por outro lado, a CS é estruturalmente homóloga ao glicosaminoglicano, associada a várias fases de cicatrização de feridas. Também é relatado que a CS possui uma propriedade antibacteriana significativa 15. Assim, o andaime COL/CS do DOX é formulado para suprimir a inflamação prolongada, seguido por apoiar a formação matricial para cicatrização bem sucedida da ferida em condições de DM.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1-ethyl-(3-3-dimethyl aminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC)</td>
			<td>Merck Millipore, Mumbai, India</td>
			<td>E7750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-(N-morpholino) ethane sulfonic acid (MES)</td>
			<td>Merck Millipore, Mumbai, India</td>
			<td>137074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-(4, 5 dimethyl thiazole-2 yl) -2, 5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT)</td>
			<td>Thermo Fisher, Mumbai, India</td>
			<td>M6494</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deep freezer verticle</td>
			<td>Labline Instruments, Kochi, India</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis sack</td>
			<td>Merck Millipore, Mumbai, India</td>
			<td>D6191-Avg. flat width 25 mm (1.0 in.), MWCO 12,000 Da</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxycycline</td>
			<td>Sigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, India</td>
			<td>D9891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elisa kit</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>RMP900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli (E. coli)</td>
			<td>National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, India</td>
			<td>NCIM 2567</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Merck Millipore, Mumbai, India</td>
			<td>100983</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lyophilizer-SZ042</td>
			<td>Sub-Zero lab instruments, Chennai, India</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mechanical Stirrer-RQ-122/D</td>
			<td>Remi laboratory instruments, Mumbai, India</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium molecular weight Chitosan</td>
			<td>Sisco Research Laboratories Pvt. Ltd., Mumbai, India</td>
			<td>18824</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome-RM2135</td>
			<td>Leica, U.K</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse embryonic fibroblast cells (3T3-L1)</td>
			<td>National Centre for Cell Sciences, Pune, India</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiple plate reader -Inifinte M200 Pro</td>
			<td>Tecan Instruments, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-hydroxy succinimide (NHS)</td>
			<td>Sigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, India</td>
			<td>130672</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa)</td>
			<td>National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, India</td>
			<td>NCIM 2036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning Electron Microscopy (SEM)-S-4800</td>
			<td>Hitachi, India</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH) pellets</td>
			<td>Qualigen fine chemicals, Mumbai, India</td>
			<td>Q27815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staphylococcus aureus (S. aureus)</td>
			<td>National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, India</td>
			<td>NCIM 5022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staphylococcus epidermis (S. epidermis)</td>
			<td>National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, India</td>
			<td>NCIM 5270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptozotocin (STZ)</td>
			<td>Sisco Research Laboratories Pvt. Ltd., Mumbai, India</td>
			<td>14653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Type-1 rat Collagen</td>
			<td>Sigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, India</td>
			<td>C7661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultraviolet&#8211;visible spectroscopy-1700</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

doxycycline loaded collagen-chitosan composite scaffold for the accelerated healing of diabetic wounds

Uma complicação maior do diabetes mellitus são as feridas diabéticas (DW). A fase prolongada de inflamação no diabetes obstrui os estágios adicionais de uma lesão que leva à cicatrização tardia da ferida. Selecionamos a doxiciclina (DOX), como uma droga potencial de escolha, devido às suas propriedades antibacterianas, juntamente com suas propriedades anti-inflamatórias relatadas. O presente estudo visa formular andaimes de colágeno-chitosan carregados do DOX (NCL) e crosslinked (CL) e avaliar sua capacidade de cura em condições diabéticas. O resultado da caracterização dos andaimes revela que o andaime DOX-CL possui porosidade ideal, baixa taxa de inchaço & degradação e uma liberação sustentada de DOX em comparação com o andaime DOX-NCL. Os estudos in vitro revelam que o andaime DOX-CL era biocompatível e melhorou o crescimento celular em comparação com os grupos de controle e tratamento do andaime CL. Os estudos antibacterianos mostraram que o andaime DOX-CL foi mais eficaz do que o andaime CL contra as bactérias mais comuns encontradas na DW. Utilizando a estreptozotocina e o modelo DW induzido pela dieta de alto teor de gordura, observou-se uma taxa significativamente (p≤0,05) mais rápida de contração de feridas no grupo tratado do andaime DOX-CL em comparação com aqueles em grupos de tratamento e controle de andaimes CL. O uso do andaime DOX-CL pode ser uma abordagem promissora para o tratamento local para DWs.

Caracterização do DOX carregado NCL e andaime CL No exame visual, verificou-se que o andaime NCL e CL era de cor creme. Além disso, ambos os andaimes parecem ser como uma esponja, duro e inelástico quando examinados fisicamente. As imagens SEM dos andaimes NCL e CL são mostradas na Figura 1. A partir da figura, ficou claro que houve uma diminuição no tamanho dos poros após a ligação cruzada, formando ligações intermoleculares. Além disso, a porosidade dos and...

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Doxycycline Loaded Collagen-Chitosan Composite Scaffold for the Accelerated Healing of Diabetic Wounds

O andaime DOX-CL preparado satisfazia os pré-requisitos de um curativo DW ideal em resistência mecânica, porosidade, absorção de água, taxa de degradação, liberação sustentada, antibacteriano, biocompatibilidade e propriedades anti-inflamatórias, que são consideradas essenciais para a recuperação de tecido danificado em DWs.

Doxycycline carregado de colágeno-chitosan andaime composto para a cura acelerada de feridas diabéticas

One major complication of diabetes mellitus is diabetic wounds (DW). The prolonged phase of inflammation in diabetes obstructs the further stages of an ...

O trabalho de pesquisa atual é doxycycline carregado de cetamimes compostos de colágeno-chitosano para a cura acelerada de feridas diabéticas. Diabetes é uma doença metabólica crônica caracterizada por níveis elevados de glicose no sangue. Quanto maior o tempo que o indivíduo tem diabetes, maior o risco de complicações, como doenças cardiovasculares, nefropatia, neuropatia, retinopatia e dano no pé, etc.Danos nos nervos nos pés e também fluxo sanguíneo ruim para os pés aumentam o risco de várias complicações do pé. Se não tratadas, essas feridas podem, em última análise, exigir amputações nos dedos, pés ou pernas. Aproximadamente, 25% dos pacientes com diabetes mellitus têm a oportunidade de construir uma ferida diabética durante a vida.O manejo terapêutico das feridas diabéticas continua sendo um obstáculo até o momento que precisa ser eventualmente cruzado. Embora a fisiopatologia da ferida diabética seja multifatorial, acredita-se que o tratamento local com anti-inflamatórios poderia diminuir os níveis elevados de MMP-9 e restabelecer o arranjo da estrutura cutânea da homeostase e provocar a cicatrização em feridas diabéticas. Doxycycline, o inibidor MMP-9, foi escolhido neste estudo para suprimir esses níveis elevados de MMP-9, uma das principais moléculas inflamatórias responsáveis pela inflamação contínua das feridas diabéticas.Por outro lado, os biomateriais fascinam os seres humanos por várias décadas e têm sido o cerne de muitos avanços médicos que mudam o jogo para a entrega eficiente de drogas e macromoleculares e o desenvolvimento de dispositivos biomédicos sob medida. Assim, com esta breve introdução, preparamos um andaime de colágeno-chitosano carregado de doxiciclina para atenuar, para acelerar a cicatrização retardada em feridas diabéticas. Este é Bharat Kumar Reddy, pesquisador do Departamento de Farmacologia, JSS College of Pharmacy, Ooty, Índia.Hoje estamos aqui para olhar o procedimento, como preparar o andaime de colágeno carregado de doxiciclina para a cura acelerada de feridas diabéticas. Vamos ter um vislumbre do procedimento, como se preparar. Vamos preparar 1,2% da solução de colágeno, para a qual estamos tomando 1,2 gramas de colágeno Tipo-I, que é de origem rabo de rato.Para isso, estamos adicionando 100 ml de água millipore e manteve-a de lado por meia hora, a fim de permitir que o colágeno fique protuberância na água. Na etapa seguinte, foi preparada 0,8% da solução quitosana, para a qual estamos tomando 0,8 gramas de quitosan de peso molecular médio, e isso foi misturado com 100 ml de ácido acético de 1%. Esta solução também, nós mantivemos de lado por meia hora.Após meia hora, ambas as soluções foram submetidas a agitação mecânica durante a noite em um RPM de 2000. Para a solução de colágeno agitado durante a noite estamos lentamente adicionando um grama de doxiciclina. E a solução contendo este colágeno e doxiciclina foi submetida por meia hora de agitação em um RPM de 2000.Para esta solução estamos lentamente adicionando solução chitosana agitada durante a noite. E isso, certifique-se de que é rotulado como mistura física que contém doxiciclina, colágeno, chitosan. Esta mistura física que submetemos por mais meia hora de agitação em um RPM de 2000.Após meia hora, essa mistura física foi transferida para os respectivos moldes de alumínio, que tem uma dimensão de dois a dois centímetros e uma espessura de 0,5 centímetro. Mais tarde, esses moldes foram transferidos para um recipiente de metal. Estes recipientes metálicos continham os moldes de alumínio, foi submetido a congelamento profundo.Depois de 24 horas, podemos ver claramente a mistura física solidificada contendo doxilalina, colágeno e chitosan. Essa mistura física solidificada foi ainda mais submetida à liofilização. A liofilização foi realizada a menos 85 graus mais ou menos quatro graus Celsius durante 72 horas.Após 72 horas, o material liofilizado foi retirado do liofilizado. E aqui podemos ver claramente a mistura física completamente seca, que não é nada além de conhecida como doxycycline carregado de colágeno-chitosan andaime. Estes andaimes foram submetidos a crosslinking A fim de realizar crosslinking, inicialmente, o buffer MES foi preparado tomando 0,488 gramas de MES e 15 ml de água, dos quais estamos tirando 20 ml de buffer MES e transferindo separadamente para o seu béquer.Para estes 20 ml de béquer, 50 mg de doxycycline carregado colágeno-chitosan foi adicionado. E a imersão deste andaime foi realizada por meia hora. Depois de meia hora, o andaime de colágeno-chitosano carregado de doxycycline foi retirado do buffer MES de 20 ml.Além disso, foi embebido em uma solução contendo 19,5 ml de tampão MES, 0,1264 gramas de EDC e 0,014 gramas de NHS. A imersão foi realizada durante quatro horas de intervalo de tempo para a conclusão do crosslinking. Após o crosslinking, o andaime de doxiciclina carregado de doxiciclina foi retirado da solução e transferido para um recipiente, que foi detalhado no procedimento anteriormente, e secou separadamente.Aqui podemos ver claramente o andaime não-cruzado e transligado, juntamente com as mesmas imagens. A partir das imagens é claro que a interligação do andaime resultou na diminuição do tamanho dos poros devido à formação de fortes ligações intramoleculares. O rato Wistar macho foi levado e os dois em marca de dois centímetros foram desenhados na região torácica dorsal.A ferida de excisão foi criada em torno da marca e o rastreamento da ferida foi levado em uma folha de OHP. O traço da ferida foi medido com a ajuda do método gráfico. A ferida criada no animal foi de cerca de 176 mm.Mais tarde, a ferida criada foi tratada com doxycycline crosslinked carregado de ceta de colágeno-chitosan com o curativo primário e monitorado por 21 dias. Uma vez que o animal foi recuperado da anestesia, cada animal foi enjaulado individualmente. E esses animais foram alimentados com dieta normal e água.Todos os animais, após a criação da ferida, foram divididos em três grupos em que cada grupo continha seis animais. Aqui podemos ver claramente a diferença entre zero dia e sete dias em que a doxiciclina carregada de escaminho cruzado foi de cerca de 48% E nesta imagem podemos ver claramente a diferença entre o dia 14 e o dia 21 de todos os grupos em que o andaime de colágeno carregado de doxiciclina foi curado em torno de 99% A área curada foi isolada e processada para estudos histopatológicos com a ajuda da coloração do HMB. Aqui podemos ver claramente a epiderme reepithelizada, no dia 21, no andaime de colágeno carregado de doxiciclina.Considerando que no controle e no andaime cruzado, nada além de placebo, ainda assim a epiderme tinha que ser formada. Como nosso próprio estudo, os andaimes cruzados doxiciclina preparados têm exibido muitas propriedades ideais, como boa resistência mecânica, biocompatibilidade, absorção sustentada de água de liberação, juntamente com propriedades antibacterianas e anti-inflamatórias. Estes andaimes podem ser uma forma ideal de dosis para o tratamento de feridas diabéticas.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Constructing a Collagen Hydrogel for the Delivery of Stem Cell-loaded Chitosan Microspheres

Construindo um hidrogel de colágeno para a entrega de células-tronco carregado microesferas

Multipotent stem cells have been shown to be extremely useful in the field of regenerative medicine1-3. However, in order to use these cells effectively ...

Bioengenharia

Tissue Engineering: Construction of a Multicellular 3D Scaffold for the Delivery of Layered Cell Sheets

Engenharia de Tecidos: Construção de um multicelular 3D andaime para a entrega de camadas celulares Sheets

Many tissues, such as the adult human hearts, are unable to adequately regenerate after damage.2,3 Strategies in tissue engineering propose innovations to ...

Manufacturing Of Robust Natural Fiber Preforms Utilizing Bacterial Cellulose as Binder

Fabricação de fibras naturais robustos Preformas Utilizando bacteriana Celulose como Binder

A novel method of manufacturing rigid and robust natural fiber preforms is presented here. This method is based on a papermaking process, whereby loose ...

An Injectable and Drug-loaded Supramolecular Hydrogel for Local Catheter Injection into the Pig Heart

Um Supramolecular hidrogel injetável e carregado com a droga para a injeção local por cateter no coração de porco

Regeneration of lost myocardium is an important goal for future therapies because of the increasing occurrence of chronic ischemic heart failure and the ...

Composite Scaffolds of Interfacial Polyelectrolyte Fibers for Temporally Controlled Release of Biomolecules

Andaimes de mistura de fibras Interfacial polieletrólito para lançamento Temporalmente controlada de biomoléculas

Various scaffolds used in tissue engineering require a controlled biochemical environment to mimic the physiological cell niche. Interfacial ...

Fabrication of Inverted Colloidal Crystal Poly(ethylene glycol) Scaffold: A Three-dimensional Cell Culture Platform for Liver Tissue Engineering

Fabrication of Inverted Colloidal Crystal Polyethylene glycol Scaffold: A Three-dimensional Cell Culture Platform for Liver Tissue Engineering

Fabricação de Inverted coloidal de cristal poli (etileno-glicol) Andaime: Uma Plataforma Cultura celular tridimensional para Liver Engenharia de Tecidos

The ability to maintain hepatocyte function in vitro, for the purpose of testing xenobiotics&#39; cytotoxicity, studying virus infection and developing ...

Scaffold-supported Transplantation of Islets in the Epididymal Fat Pad of Diabetic Mice

Transplante de islotes apoiado em andaimes na almofada de gordura epidídmica de ratos diabéticos

Islet transplantation has been clinically proven to be effective at treating type 1 diabetes. However, the current intrahepatic transplantation strategy ...

An Ultrasonic Tool for Nerve Conduction Block in Diabetic Rat Models

Um instrumento ultra-sônico para condução nervosa bloquear em modelos de ratos diabéticos

Nerve conduction block with a high intensity-focused ultrasound (HIFU) transducer has been performed in normal and diabetic animal models recently. HIFU ...

A Net Mold-based Method of Scaffold-free Three-Dimensional Cardiac Tissue Creation

Um método baseado em molde líquido de criação livre de andaime tridimensional de tecido cardíaco

This protocol describes a novel and easy net mold-based method to create three-dimensional (3-D) cardiac tissues without additional scaffold material. ...

Fabrication of the Composite Regenerative Peripheral Nerve Interface (C-RPNI) in the Adult Rat

Fabrication of the Composite Regenerative Peripheral Nerve Interface C-RPNI in the Adult Rat

Fabricação da Interface Nervosa Periférica Regenerativa Composta (C-RPNI) no Rato Adulto

Recent advances in neuroprosthetics have enabled those living with extremity loss to reproduce many functions native to the absent extremity, and this is ...