Name: doxycycline loaded collagen-chitosan composite scaffold for the accelerated healing of diabetic wounds
Uploaded: 2021-08-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Doxycycline Loaded Collagen-Chitosan Composite Scaffold for the Accelerated Healing of Diabetic Wounds at JoVE.com

Yazarlar Dr. Ashish D Wadhwani'ye teşekkür eder. (Yardımcı Doçent ve Farmasötik Biyoteknoloji Bölümü Başkanı, JSS Eczacılık Koleji, Ooty, Hindistan) In vitro hücre canlılığı çalışmalarına yardımcı olduğu için.
Yazarlar, Bölümümüzü desteklemektedirler için Yeni Delhi'deki Üniversiteler ve Yükseköğretim Kurumlarında Bilim ve Teknoloji Altyapısının geliştirilmesi için Bilim ve Teknoloji Bölümü 'ne (DST-FIST) teşekkür ederler.
Yazarlar da Bay Sanju'ya teşekkür etmek istiyor. S ve Bay Sriram. Narukulla M. Pharm öğrencileri video çekimine verdikleri destek için.
Bu araştırma JSS Yükseköğretim ve Araştırma Akademisi (JSSAHER) tarafından desteklendi.

Gerçekleştirilen tüm hayvan prosedürleri, Ooty, Hindistan'daki JSS Eczacılık Koleji'nin kurumsal hayvan etik komitesi tarafından onaylandı.
1. DOX yüklü gözenekli iskelelerin dondurularak kurutma yöntemiyle hazırlanması
<ol><li>100 mL suya (örneğin, Millipore) 1,2 g COL ekleyin ve şişme için bir kenara bırakın.</li>
	<li>COL'un tamamen dağılmasını sağlamak için şişmiş COL dağılımını bir gecede 2000 rpm'de karıştırın.</li>
	<li>%1 asetik asidin 100 mL'si...

<ol>
	<li>. IDF Diabetes Atlas, 9th edn Available from: <a target="_blank" href="https://www.diabetesatlas.org">https://www.diabetesatlas.org</a> (2019)</li><li>Falanga, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+and+its+impairment+in+the+diabetic+foot.">Wound healing and its impairment in the diabetic foot.</a> The Lancet. 366 (9498), 1736-1743 (2005).</li><li>Frykberg, R. G., Banks, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+in+the+treatment+of+chronic+wounds.">Challenges in the treatment of chronic wounds.</a> Advances in Wound Care. 4 (9), 560-582 (2015).</li><li>Alexiadou, K., Doupis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+diabetic+foot+ulcers.">Management of diabetic foot ulcers.</a> Diabetes Therapy. 3 (1), 1-15 (2012).</li><li>Karri, V. V. S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+and+emerging+therapies+in+the+management+of+diabetic+foot+ulcers.">Current and emerging therapies in the management of diabetic foot ulcers.</a> Current Medical Research and Opinion. 32 (3), 519-542 (2016).</li><li>Sanapalli, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+beta+defensins+may+be+a+multifactorial+modulator+in+the+management+of+diabetic+wound.">Human beta defensins may be a multifactorial modulator in the management of diabetic wound.</a> Wound Repair and Regeneration. 28 (3), 416-421 (2020).</li><li>Caley, M. P., Martins, V. L., O'Toole, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metalloproteinases+and+wound+healing.">Metalloproteinases and wound healing.</a> Advances in Wound Care. 4 (4), 225-234 (2015).</li><li>Reiss, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+metalloproteinase-9+delays+wound+healing+in+a+murine+wound+model.">Matrix metalloproteinase-9 delays wound healing in a murine wound model.</a> Surgery. 147 (2), 295-302 (2010).</li><li>Gill, S. E., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metalloproteinases+and+their+inhibitors:+regulators+of+wound+healing.">Metalloproteinases and their inhibitors: regulators of wound healing.</a> The International Journal of Biochemistry &amp; Cell Biology. 40 (6-7), 1334-1347 (2008).</li><li>Stechmiller, J., Cowan, L., Schultz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+doxycycline+as+a+matrix+metalloproteinase+inhibitor+for+the+treatment+of+chronic+wounds.">The role of doxycycline as a matrix metalloproteinase inhibitor for the treatment of chronic wounds.</a> Biological Research for Nursing. 11 (4), 336-344 (2010).</li><li>Griffin, M. O., Fricovsky, E., Ceballos, G., Villarreal, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracyclines:+a+pleitropic+family+of+compounds+with+promising+therapeutic+properties.+Review+of+the+literature.">Tetracyclines: a pleitropic family of compounds with promising therapeutic properties. Review of the literature.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 299 (3), 539-548 (2010).</li><li>Burns, F., Stack, M., Gray, R., Paterson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+purified+collagenase+from+alkali-burned+rabbit+corneas.">Inhibition of purified collagenase from alkali-burned rabbit corneas.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 30 (7), 1569-1575 (1989).</li><li>Kraus, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antioxidant+properties+of+minocycline:+neuroprotection+in+an+oxidative+stress+assay+and+direct+radical-scavenging+activity.">Antioxidant properties of minocycline: neuroprotection in an oxidative stress assay and direct radical-scavenging activity.</a> Journal of Neurochemistry. 94 (3), 819-827 (2005).</li><li>Yrj&#228;nheikki, J., Kein&#228;nen, R., Pellikka, M., H&#246;kfelt, T., Koistinaho, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracyclines+inhibit+microglial+activation+and+are+neuroprotective+in+global+brain+ischemia.">Tetracyclines inhibit microglial activation and are neuroprotective in global brain ischemia.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 95 (26), 15769-15774 (1998).</li><li>Moura, L. I., Dias, A. M., Carvalho, E., de Sousa, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+on+the+development+of+wound+dressings+for+diabetic+foot+ulcer+treatment-a+review.">Recent advances on the development of wound dressings for diabetic foot ulcer treatment-a review.</a> Acta Biomaterialia. 9 (7), 7093-7114 (2013).</li><li>Natarajan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanostructured+Lipid+Carriers+of+Pioglitazone+Loaded+Collagen/Chitosan+Composite+Scaffold+for+Diabetic+Wound+Healing.">Nanostructured Lipid Carriers of Pioglitazone Loaded Collagen/Chitosan Composite Scaffold for Diabetic Wound Healing.</a> Advances in Wound Care. 8 (10), 499-513 (2019).</li><li>Karri, V. V. S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Curcumin+loaded+chitosan+nanoparticles+impregnated+into+collagen-alginate+scaffolds+for+diabetic+wound+healing.">Curcumin loaded chitosan nanoparticles impregnated into collagen-alginate scaffolds for diabetic wound healing.</a> International Journal Of Biological Macromolecules. 93, 1519-1529 (2016).</li><li>Hsieh, W. -. C., Chang, C. -. P., Lin, S. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+characterization+of+3D+micro-porous+structured+chitosan+scaffolds+for+tissue+engineering.">Morphology and characterization of 3D micro-porous structured chitosan scaffolds for tissue engineering.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 57 (2), 250-255 (2007).</li><li>Xie, Y., Chen, J., Xiao, A., Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+activity+of+polyphenols:+structure-activity+relationship+and+influence+of+hyperglycemic+condition.">Antibacterial activity of polyphenols: structure-activity relationship and influence of hyperglycemic condition.</a> Molecules. 22 (1913), 1-11 (2017).</li><li>Geerlings, S. E., Brouwer, E. C., Gaastra, W., Verhoef, J., Hoepelman, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+glucose+and+pH+on+uropathogenic+and+non-uropathogenic+Escherichia+coli:+studies+with+urine+from+diabetic+and+non-diabetic+individuals.">Effect of glucose and pH on uropathogenic and non-uropathogenic Escherichia coli: studies with urine from diabetic and non-diabetic individuals.</a> Journal of Medical Microbiology. 48 (6), 535-539 (1999).</li><li>Eloff, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+and+quick+microplate+method+to+determine+the+minimal+inhibitory+concentration+of+plant+extracts+for+bacteria.">A sensitive and quick microplate method to determine the minimal inhibitory concentration of plant extracts for bacteria.</a> Planta Medica. 64 (8), 711-713 (1998).</li><li>Reddy, G. K., Enwemeka, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+method+for+the+analysis+of+hydroxyproline+in+biological+tissues.">A simplified method for the analysis of hydroxyproline in biological tissues.</a> Clinical Biochemistry. 29 (3), 225-229 (1996).</li><li>Charulatha, V., Rajaram, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+different+crosslinking+treatments+on+the+physical+properties+of+collagen+membranes.">Influence of different crosslinking treatments on the physical properties of collagen membranes.</a> Biomaterials. 24 (5), 759-767 (2003).</li><li>Rehakova, M., Bako&#353;, D., Vizarova, K., Sold&#225;n, M., Jur&#237;ckov&#225;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+collagen+and+hyaluronic+acid+composite+materials+and+their+modification+by+chemical+crosslinking.">Properties of collagen and hyaluronic acid composite materials and their modification by chemical crosslinking.</a> Journal of Biomedical Materials Research: An Official Journal of The Society for Biomaterials and The Japanese Society for Biomaterials. 30 (3), 369-372 (1996).</li><li>Chang, M. -. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doxycycline+enhances+survival+and+self-renewal+of+human+pluripotent+stem+cells.">Doxycycline enhances survival and self-renewal of human pluripotent stem cells.</a> Stem Cell Reports. 3 (2), 353-364 (2014).</li><li>Dovi, J. V., He, L. K., DiPietro, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+wound+closure+in+neutrophil-depleted+mice.">Accelerated wound closure in neutrophil-depleted mice.</a> Journal of Leukocyte Biology. 73 (4), 448-455 (2003).</li><li>Lindeman, J. H., Abdul-Hussien, H., van Bockel, J. H., Wolterbeek, R., Kleemann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+Perspective.">Clinical Perspective.</a> Circulation. 119 (16), 2209-2216 (2009).</li><li>Zhang, C., Gong, W., Liu, H., Guo, Z., Ge, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+matrix+metalloproteinase-9+with+low-dose+doxycycline+reduces+acute+lung+injury+induced+by+cardiopulmonary+bypass.">Inhibition of matrix metalloproteinase-9 with low-dose doxycycline reduces acute lung injury induced by cardiopulmonary bypass.</a> International Journal Of Clinical And Experimental Medicine. 7 (12), 4975-4982 (2014).</li></ol>

Bu çalışmanın temel amacı, DOX yüklü COL-CS iskelesinin sıçanlarda DW iyileşmesi üzerindeki etkisini belirlemekti. CL ve NCL morfoloji, şişlik indeksi, in vitro sönme kinetiği ve biyouyumluluk açısından hazırlandı ve değerlendirildi.
DOX yüklü NCL ve CL iskelesinin karakterizasyonu Hazırlanan iskelelerin birbirine bağlı gözeneklerle gözenekli olduğu tespit edildi. Bu birbirine bağlı gözenekler, çoğalma ve göç için hücrelere oksijen ve b...

Diabetes mellitus (DM), vücudun insülin vermemesi veya basit şekerlerin anormal sindiriminde sonuçlarına tepki vermemesinin kan şekerinin yükselişine neden olduğu bir durumdur 1. DM'nin en ardışık ve ezici dolanıklığı diyabetik yaradır (DW). DM'li hastaların kabaca% 25'i yaşamları boyunca bir DW oluşturma fırsatına sahiptir 1. DW'nin engellenen iyileşmesi DM üçlüsüne akredite edilmiştir: immünopati, vaskülopati ve nöropati. DW tedavi edilmediğinde, kangren gelişimine neden olabilir, bu nedenle ilgili organın çıkarılmasına neden olur 2.
Hastalara talimat (yarayı günlük olarak incelemek, yarayı temizlemek, yara üzerinde baskı yaratan aktivitelerden kaçınmak, periyodik glikoz izleme vb.), kan glukozlarını kontrol etmek, yara debridmanı, basınç boşaltma, tıbbi prosedür, hiperbarik oksijen tedavisi ve ileri tedaviler pratikte 3,4. Bu ilaçların çoğunluğu, çok yönlü patofizyolojik koşullar ve bu ilaçlarla ilgili beklenmedik harcamalar ışığında DW bakımı için hayati önem taşıyan tüm ön koşulları ele almamaktadır 5. DW patogenez çok yönlü olsa da, uygunsuz doku yönetimi ile kalıcı inflamasyonun DWs 5,6'dagecikmeli iyileşmenin gerçek nedeni olduğu belirtilir.
DW'deki inflamatuar ve pro-enflamatuar mediatörlerin artırılmış seviyeleri, gecikmiş yara iyileşmesinden sorumlu büyüme faktörlerinin azalmasına neden olarak 2,6. DW'lerde yanlış hücre dışı matris (ECM) oluşumu, oluşan ECM'nin hızlı bozulmasından sorumlu olan matris metalloproteinazlarının (MMP) artan seviyelerine akredite edilmiştir. MMP'lerde, MMP-9 uzun süreli iltihaplanma ve hızlı ECM bozulması 7'densorumlu büyük bir aracı olarak bildiriliyor. MMP-9'un yüksek seviyelerini azaltan anti-enflamatuar bir ilaçla lokal tedavinin, küsinöz homeostaz, çerçeve düzenlemesi ve DWs 8,9'undaha iyi iyileşmesini istemektedir.
Bir MMP-9 inhibitörü olan doksiksin (DOX), DWs 10 , 11,12'dekalıcı iltihaplanmadan sorumlu büyük bir enflamatuar arabulucuolanMMP-9'un yüksek seviyelerini bastırmak için seçildi. Ek olarak, DOX antioksidana sahiptir (reaktif oksijen türleriyle bağlanabilen serbest hidroksi ve fenoksi radikalleri üretin) 13 ve anti-apoptotik (kaspaz ekspresyonunu ve mitokondriyal stabilizasyonu inhibe edin) DW tedavisi için gerekli olan 14 aktivite. DOX, kollajen (COL) ve chitosan (CS) içeren çerçevelerin düzenlenmesi seçildi. COL seçimi, mekanik mukavemet ve doku yenilenmesinden sorumlu gerekli çerçevenin sağlanmasına yardımcı olma yoluna bağlıdır 15. Öte yandan, CS yapısal olarak glikozaminojlikan için homologdur ve çeşitli yara iyileşme aşamaları ile ilişkilidir. Ayrıca CS'nin önemli anti-bakteriyel özelliğe sahip olduğu bildirilmektedir 15. Bu nedenle, DOX'un COL / CS iskelesi uzun süreli iltihabı bastırmak için formüle edilmiştir, ardından DM koşullarında başarılı yara iyileşmesi için matris oluşumunu destekler.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1-ethyl-(3-3-dimethyl aminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC)</td>
			<td>Merck Millipore, Mumbai, India</td>
			<td>E7750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-(N-morpholino) ethane sulfonic acid (MES)</td>
			<td>Merck Millipore, Mumbai, India</td>
			<td>137074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-(4, 5 dimethyl thiazole-2 yl) -2, 5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT)</td>
			<td>Thermo Fisher, Mumbai, India</td>
			<td>M6494</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deep freezer verticle</td>
			<td>Labline Instruments, Kochi, India</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis sack</td>
			<td>Merck Millipore, Mumbai, India</td>
			<td>D6191-Avg. flat width 25 mm (1.0 in.), MWCO 12,000 Da</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxycycline</td>
			<td>Sigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, India</td>
			<td>D9891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elisa kit</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>RMP900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli (E. coli)</td>
			<td>National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, India</td>
			<td>NCIM 2567</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Merck Millipore, Mumbai, India</td>
			<td>100983</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lyophilizer-SZ042</td>
			<td>Sub-Zero lab instruments, Chennai, India</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mechanical Stirrer-RQ-122/D</td>
			<td>Remi laboratory instruments, Mumbai, India</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium molecular weight Chitosan</td>
			<td>Sisco Research Laboratories Pvt. Ltd., Mumbai, India</td>
			<td>18824</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome-RM2135</td>
			<td>Leica, U.K</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse embryonic fibroblast cells (3T3-L1)</td>
			<td>National Centre for Cell Sciences, Pune, India</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiple plate reader -Inifinte M200 Pro</td>
			<td>Tecan Instruments, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-hydroxy succinimide (NHS)</td>
			<td>Sigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, India</td>
			<td>130672</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa)</td>
			<td>National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, India</td>
			<td>NCIM 2036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning Electron Microscopy (SEM)-S-4800</td>
			<td>Hitachi, India</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH) pellets</td>
			<td>Qualigen fine chemicals, Mumbai, India</td>
			<td>Q27815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staphylococcus aureus (S. aureus)</td>
			<td>National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, India</td>
			<td>NCIM 5022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staphylococcus epidermis (S. epidermis)</td>
			<td>National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, India</td>
			<td>NCIM 5270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptozotocin (STZ)</td>
			<td>Sisco Research Laboratories Pvt. Ltd., Mumbai, India</td>
			<td>14653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Type-1 rat Collagen</td>
			<td>Sigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, India</td>
			<td>C7661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultraviolet&#8211;visible spectroscopy-1700</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

doxycycline loaded collagen-chitosan composite scaffold for the accelerated healing of diabetic wounds

Diabetes mellitus'un en önemli komplikasyonlarından biri diyabetik yaralardır (DW). Diyabette iltihabın uzun süreli evresi, yara iyileşmesinin gecikmesine yol açan bir yaralanmanın ileri aşamalarını engeller. Bildirilen antienflamatuar özellikleri ile birlikte anti-bakteriyel özellikleri nedeniyle, tercih edilen potansiyel bir ilaç olarak doksiksin (DOX) seçtik. Mevcut çalışma, DOX yüklü kollajen-kitosan çapraz bağlı olmayan (NCL) ve çapraz bağlı (CL) iskeleleri formüle etmeyi ve diyabetik koşullarda iyileşme yeteneklerini değerlendirmeyi amaçlamaktadır. İskelelerin karakterizasyon sonucu, DOX-CL iskelesinin DOX-NCL iskelesine kıyasla ideal gözeneklilik, düşük şişlik ve bozulma oranı ve sürekli bir DOX salınımı barındırdığını ortaya koymaktadır. Tüp bebek çalışmaları, DOX-CL iskelesinin cl iskelesi tedavi ve kontrol gruplarına kıyasla biyouyumlu ve gelişmiş hücre büyümesi olduğunu ortaya koymaktadır. Anti-bakteriyel çalışmalar, DOX-CL iskelesinin DW'de bulunan en yaygın bakterilere karşı CL iskelesinden daha etkili olduğunu göstermiştir. Streptozotosin ve yüksek yağlı diyet kaynaklı DW modeli kullanılarak, CL iskelesi tedavi ve kontrol gruplarındakilere kıyasla DOX-CL iskelesi tedavi grubunda önemli ölçüde (p≤0.05) daha hızlı bir yara kasılma oranı gözlendi. DOX-CL iskelesinin kullanımı, DW'ler için yerel tedavi için umut verici bir yaklaşım olabilir.

DOX yüklü NCL ve CL iskelesinin karakterizasyonu Yapılan görsel incelemede NCL ve CL iskelesinin krem renginde olduğu tespit edildi. Ayrıca, her iki iskele de fiziksel olarak incelendiğinde sert ve inelastik bir sünger gibi görünmektedir. NCL ve CL iskelelerinin SEM görüntüleri Şekil 1'degösterilmiştir. Rakamdan, intermoleküler bağlar oluşturarak çapraz bağlama yapıldıktan sonra gözenek boyutunda azalma olduğu açıktı. Ayrıca, NCL ve CL iskele ...

Watch this Scientific Journal Video about Doxycycline Loaded Collagen-Chitosan Composite Scaffold for the Accelerated Healing of Diabetic Wounds at JoVE.com

Doxycycline Loaded Collagen-Chitosan Composite Scaffold for the Accelerated Healing of Diabetic Wounds

Hazırlanan DOX-CL iskelesi, DW'lerde hasarlı dokunun geri kazanılması için gerekli olduğu düşünülen mekanik mukavemet, gözeneklilik, su emme, bozulma oranı, sürekli salınım, anti-bakteriyel, biyouyumluluk ve antienflamatuar özelliklerde ideal bir DW pansumanının önkoşullarını karşıladı.

Diyabetik Yaraların Hızlandırılmış İyileşmesi İçin Doksiksin Yüklü Kollajen-Kitosan Kompozit İskele

One major complication of diabetes mellitus is diabetic wounds (DW). The prolonged phase of inflammation in diabetes obstructs the further stages of an ...

Mevcut araştırma çalışması diyabetik yaraların hızlandırılmış iyileşmesi için doksiksin yüklü kollajen-kitosan kompozit iskeleler. Diyabet, yüksek kan şekeri seviyeleri ile karakterize kronik metabolik bir hastalıktır. Birey diyabete ne kadar uzun süre sahipse, kardiyovasküler hastalık, nefropati, nöropati, retinopati ve ayak hasarı gibi komplikasyon riski o kadar yüksektir.Ayaklardaki sinir hasarı ve ayrıca ayaklara zayıf kan akışı çeşitli ayak komplikasyonları riskini arttırır. Tedavi edilmezse, bu yaralar sonuçta ayak baş ayak, ayak veya bacak amputasyonları gerektirebilir. Kabaca, diyabetli mellituslu hastaların% 25'i yaşamları boyunca diyabetik bir yara oluşturma fırsatına sahiptir.Diyabetik yaraların terapötik yönetimi, sonunda aşılması gereken bugüne kadar bir engel olmaya devam etmektedir. Diyabetik yaranın patofizyolojisi multifaktöriyel olsa da, antienflamatuar ilaçlarla lokal tedavinin MMP-9'un yüksek seviyelerini azaltabileceğine ve lütenöz homeostaz çerçeve düzenini yeniden kurabileceğine ve diyabetik yaralarda iyileşmeye neden olabileceğine inanılmaktadır. MMP-9 inhibitörü olan doksiksin, diyabetik yaraların sürekli iltihaplanmasından sorumlu büyük bir inflamatuar molekül olan MMP-9'un bu yüksek seviyelerini bastırmak için bu çalışmada seçilmiştir.Öte yandan, biyomalzemeler onlarca yıldır insanları büyülemiştir ve verimli ilaç ve makromoleküler teslimat ve özel yapım biyomedikal cihazların geliştirilmesi için birçok ezber bozan tıbbi atılımın merkezinde yer haline gelmektedir. Bu nedenle, bu kısa girişle, diyabetik yaralarda gecikmeli iyileşmeyi hızlandırmak için zayıflamak için bir doksiksin yüklü kollajen-chitosan iskelesi hazırladık. Bu Bharat Kumar Reddy, Ooty, Hindistan'daki JSS Eczacılık Koleji Farmakotik Bölümü'nden araştırma uzmanı.Bugün, diyabetik yaraların hızlandırılmış iyileşmesi için doksiksin yüklü kollajen-chitosan iskelesinin nasıl hazırlanacağını, prosedürü, nasıl hazırlanacağını görmek için buradayız. Prosedüre bir göz atalım, nasıl hazırlanılacağı. Sıçan kuyruğu kökenli 1.2 gram Tip-I kolajen aldığımız kollajen çözeltisinin% 1.2'sini hazırlayacağız.Buna, kollajenin suda şişkinlik elde etmesini sağlamak için 100 ml Millipore suyu ekliyoruz ve yarım saat boyunca bir kenarda tutuyoruz. Bir sonraki adımda, 0,8 gram orta moleküler ağırlık kitosan aldığımız chitosan çözeltisinin% 0,8'i hazırlandı ve bu 100 ml% 1 asetik asit ile karıştırıldı. Bu çözüm aynı zamanda yarım saat boyunca bir kenarda tuttuk.Yarım saat sonra, her iki çözelti de 2000 RPM'de bir gecede mekanik karıştırma için tabi tutuldu. Gece karıştırılmış kollajen çözeltisine yavaşça bir gram doksiklin ekliyoruz. Ve bu kollajen ve doksiklin içeren çözelti, 2000 RPM'sinde yarım saat boyunca karıştırıldı.Bu çözüme yavaşça bir gecede karıştırılmış chitosan çözeltisi ekliyoruz. Ve bu, doksiksin, kollajen, chitosan içeren fiziksel karışım olarak etiketli olduğundan emin olun. Bu fiziksel karışımı 2000 RPM'de yarım saat daha karıştırarak maruz kaldık.Yarım saat sonra bu fiziksel karışım, iki ila iki santimetre boyuta ve 0,5 santimetre kalınlığa sahip ilgili alüminyum kalıplara aktarıldı. Daha sonra, bu kalıplar metal bir kaba aktarıldı. Bu metal kap alüminyum kalıpları içeriyordu, derin donmaya maruz kaldı.24 saat sonra, doksiksin, kollajen ve chitosan içeren katılaşmış fiziksel karışımı açıkça görebiliriz. Bu katılaştırılmış fiziksel karışım daha fazla lyophilization için tabi tutuldu. Liyofilizasyon 72 saat boyunca eksi 85 derece artı veya eksi dört santigrat derecede gerçekleştirildi.72 saat sonra, liyofilize malzeme liofilizerden çıkarıldı. Ve burada tamamen kurutulmuş fiziksel karışımı açıkça görebiliyoruz, bu da doksiksin yüklü kollajen-chitosan iskelesi olarak bilinen bir şey değil. Bu iskeleler çapraz bağlama için tabi tutuldu Çapraz bağlama yapmak için başlangıçta, 20 ml MES tamponu çıkardığımız ve kabınıza ayrı ayrı aktardığımız 0.488 gram MES ve 15 ml su alınarak MES tamponu hazırlandı.Bu 20 ml'lik behere 50 mg doksiksin yüklü kollajen-chitosan eklendi. Ve bu iskelenin ıslatma işlemi yarım saat boyunca yapıldı. Yarım saat sonra, doksiksin yüklü kollajen-chitosan iskelesi 20 ml MES tamponundan çıkarıldı.Ayrıca, 19,5 ml MES tamponu, 0,1264 gram EDC ve 0,014 gram NHS içeren bir çözeltiye batırıldı. Islatma, çapraz bağlamanın tamamlanması için dört saatlik zaman aralığı boyunca gerçekleştirildi. Çapraz bağlamadan sonra, çapraz bağlanmış doksiksin yüklü kollajen-chitosan iskelesi çözeltiden çıkarılarak daha önce işlemde ayrıntılı olarak açıklanan bir kaba aktarıldı ve ayrı olarak kurutuldu.Burada, aynı görüntülerle birlikte çapraz bağlanmış ve çapraz bağlanmış iskeleyi açıkça görebiliyoruz. Görüntülerden, iskelenin çapraz bağlantısının güçlü intramoleküler bağların oluşumu nedeniyle gözenek boyutunun azalmasına neden olduğu açıktır. Erkek Wistar sıçanı alındı ve ikisi sırt torasik bölgesine iki santimetreye çekildi.İzin etrafında eksizyon yarası yaratıldı ve ohp levhasına yara izi alındı. Yaranın izi grafik yöntem yardımıyla ölçüldü. Hayvanda oluşturulan yara yaklaşık 176 mm idi.Daha sonra, oluşturulan yara çapraz bağlanmış doksiklin yüklü kollajen-chitosan iskelesi ile birincil pansuman ile tedavi edildi ve 21 gün boyunca izlendi. Hayvan anesteziden kurtarıldıktan sonra, her hayvan ayrı ayrı kafese konuldu. Ve bu hayvanlar normal diyet ve su ile beslendi.Tüm hayvanlar, yarayı oluşturduktan sonra, her grubun altı hayvan içerdiği üç gruba ayrıldı. Burada, doksiksin yüklü çapraz bağlı iskele yarası azalmasının% 48 civarında olduğu sıfır gün ile yedi gün arasındaki farkı açıkça görebiliyoruz ve bu görüntüde 14 gün ile 21. doksiksin yüklü kollajen çapraz bağlı iskelenin %99 civarında iyileştiği tüm gruplardan iyileşmiş bölge izole edilmiş ve HMB boyama yardımıyla histopatolojik çalışmalar için işlenmiştir. Burada, 21. günde, doksicycline yüklü kollajen chitosan iskelesinde reepithelized epidermisi açıkça görebiliyoruz.Kontrolde ve çapraz bağlanmış iskelede plasebodan başka bir şey yokken, yine de epidermisin oluşması gerekiyordu. Kendi çalışmamız gibi, hazırlanan doksiksin çapraz bağlantılı iskeleler, antibakteriyel ve antienflamatuar özelliklerin yanı sıra iyi mekanik mukavemet, biyouyumluluk, sürekli salınımlı su emilimi gibi birçok ideal özellik sergilemektedir. Bu iskeleler diyabetik yaraların tedavisi için ideal bir dosis formu olabilir.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Constructing a Collagen Hydrogel for the Delivery of Stem Cell-loaded Chitosan Microspheres

Kök Hücre yüklü Chitosan Mikrokürelerin teslimi için bir Kollajen Hidrojel oluşturma

Multipotent stem cells have been shown to be extremely useful in the field of regenerative medicine1-3. However, in order to use these cells effectively ...

Tissue Engineering: Construction of a Multicellular 3D Scaffold for the Delivery of Layered Cell Sheets

Doku Mühendisliği: Katmanlı Hücre Sheets teslimi için bir Multisellüler 3D İskele İnşaatı

Many tissues, such as the adult human hearts, are unable to adequately regenerate after damage.2,3 Strategies in tissue engineering propose innovations to ...

Manufacturing Of Robust Natural Fiber Preforms Utilizing Bacterial Cellulose as Binder

Binder Bakteriyel Selüloz kullanmak Sağlam Doğal Elyaf preform üretim

A novel method of manufacturing rigid and robust natural fiber preforms is presented here. This method is based on a papermaking process, whereby loose ...

An Injectable and Drug-loaded Supramolecular Hydrogel for Local Catheter Injection into the Pig Heart

Domuz Kalbe Yerel Kateter Enjeksiyon için bir Enjekte ve İlaç yüklü Supramoleküler Hidrojel

Regeneration of lost myocardium is an important goal for future therapies because of the increasing occurrence of chronic ischemic heart failure and the ...

Composite Scaffolds of Interfacial Polyelectrolyte Fibers for Temporally Controlled Release of Biomolecules

Biyomoleküllerin Geçici olarak Kontrollü Release için Yüzey Polielektrolit Elyaf Kompozit Yapı iskeleleri

Various scaffolds used in tissue engineering require a controlled biochemical environment to mimic the physiological cell niche. Interfacial ...

Fabrication of Inverted Colloidal Crystal Poly(ethylene glycol) Scaffold: A Three-dimensional Cell Culture Platform for Liver Tissue Engineering

Fabrication of Inverted Colloidal Crystal Polyethylene glycol Scaffold: A Three-dimensional Cell Culture Platform for Liver Tissue Engineering

Ters Kolloidal Kristal Poli (etilen glikol) İskele imalatı: Karaciğer Doku Mühendisliği için Üç boyutlu Hücre Kültürü Platformu

The ability to maintain hepatocyte function in vitro, for the purpose of testing xenobiotics&#39; cytotoxicity, studying virus infection and developing ...

Scaffold-supported Transplantation of Islets in the Epididymal Fat Pad of Diabetic Mice

Diyabetik Farenin Epididimal Yağ Tabağında Iskelelerin İskele Destekli Nakli

Islet transplantation has been clinically proven to be effective at treating type 1 diabetes. However, the current intrahepatic transplantation strategy ...

An Ultrasonic Tool for Nerve Conduction Block in Diabetic Rat Models

Sinir iletim için ultrasonik bir araç diyabetik sıçan modellerinde engelleme

Nerve conduction block with a high intensity-focused ultrasound (HIFU) transducer has been performed in normal and diabetic animal models recently. HIFU ...

A Net Mold-based Method of Scaffold-free Three-Dimensional Cardiac Tissue Creation

Net kalıp tabanlı yöntemi iskele ücretsiz üç boyutlu kalp doku oluşturma

This protocol describes a novel and easy net mold-based method to create three-dimensional (3-D) cardiac tissues without additional scaffold material. ...

Fabrication of the Composite Regenerative Peripheral Nerve Interface (C-RPNI) in the Adult Rat

Fabrication of the Composite Regenerative Peripheral Nerve Interface C-RPNI in the Adult Rat

Yetişkin Sıçanda Kompozit Rejeneratif Periferik Sinir Arabiriminin (C-RPNI) Imalatı

Recent advances in neuroprosthetics have enabled those living with extremity loss to reproduce many functions native to the absent extremity, and this is ...