Name: antibiotic efficacy testing in an ex vivo model of pseudomonas aeruginosa and staphylococcus aureus biofilms in the cystic fibrosis lung
Uploaded: 2021-01-22T15:00:00
Duration: 9 min 26 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Antibiotic Efficacy Testing in an Ex vivo Model of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus Biofilms in the Cystic Fibrosis Lung at JoVE.com

Мы благодарим всех наших соавторов за оригинальные статьи, из которых мы взяли образцовые результаты. Работа финансировалась за счет исследовательского гранта MRC New Investigator Research Grant (номер гранта MR/R001898/1),присужденного FH; аспирантами BBSRC Midlands Midlands Integrative Biosciences Training Partnership (MIBTP), присужденными NEH и IA; и присуждение Программой поддержки исследований бакалавриата Уорикского университета ФА за проведение исследовательского проекта на летних каникулах. Мы благодарим Стива Куигли, Сыновей (Каббингтон, Уорикшир) и Джона Тейлора, Сына (Эрлсден, Ковентри) за снабжение легких. Мы также хотели бы отметить помощь Центра подготовки средств массовой информации в Школе наук о жизни в Университете Уорика, с особой благодарностью Харрис и Кэролайн Стюарт, а также помощь Аниты Кэтервуд в Уорикском центре антимикробного скрининга.

<ol>
	<li>Elborn, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cystic+fibrosis.">Cystic fibrosis.</a> The Lancet. 388 (10059), 2519-2531 (2016).</li><li>H&#248;iby, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+biofilm+infections+in+cystic+fibrosis+patients.">Diagnosis of biofilm infections in cystic fibrosis patients.</a> APMIS. 125, 339-343 (2017).</li><li>Bjarnsholt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+in+the+respiratory+tract+of+cystic+fibrosis+patients.">Pseudomonas aeruginosa biofilms in the respiratory tract of cystic fibrosis patients.</a> Pediatric Pulmonology. 44 (6), 547-558 (2009).</li><li>H&#248;iby, N., Bjarnsholt, T., Givskov, M., Molin, S., Ciofu, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+resistance+of+bacterial+biofilms.">Antibiotic resistance of bacterial biofilms.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 35 (4), 322-332 (2010).</li><li>Penesyan, A., Gillings, M., Paulsen, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+discovery:+Combatting+bacterial+resistance+in+cells+and+in+biofilm+communities.">Antibiotic discovery: Combatting bacterial resistance in cells and in biofilm communities.</a> Molecules. 20 (4), 5286 (2015).</li><li>Son, M. S., Matthews, W. J., Kang, Y., Nguyen, D. T., Hoang, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+evidence+of+Pseudomonas+aeruginosa+nutrient+Acquisition+and+pathogenesis+in+the+lungs+of+cystic+fibrosis+patients.">In vivo evidence of Pseudomonas aeruginosa nutrient Acquisition and pathogenesis in the lungs of cystic fibrosis patients.</a> Infection and Immunity. 75 (11), 5313-5324 (2007).</li><li>Flynn, J. M., Niccum, D., Dunitz, J. M., Hunter, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+and+role+for+bacterial+mucin+degradation+in+cystic+fibrosis+airway+disease.">Evidence and role for bacterial mucin degradation in cystic fibrosis airway disease.</a> PLoS Pathogens. 12 (8), 1005846 (2016).</li><li>Stites, S. W., Plautz, M. W., Bailey, K., O'Brien-Ladner, A. R., Wesselius, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+concentrations+of+iron+and+isoferritins+in+the+lower+respiratory+tract+of+patients+with+stable+cystic+fibrosis.">Increased concentrations of iron and isoferritins in the lower respiratory tract of patients with stable cystic fibrosis.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 160 (3), 796-801 (1999).</li><li>Cornforth, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+transcriptome+during+human+infection.">Pseudomonas aeruginosa transcriptome during human infection.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 115 (22), 5125-5134 (2018).</li><li>Drevinek, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+changes+linked+to+antimicrobial+resistance,+oxidative+stress,+iron+depletion+and+retained+motility+are+observed+when+Burkholderia+cenocepacia+grows+in+cystic+fibrosis+sputum.">Gene expression changes linked to antimicrobial resistance, oxidative stress, iron depletion and retained motility are observed when Burkholderia cenocepacia grows in cystic fibrosis sputum.</a> BMC Infectious Diseases. 8, 121 (2008).</li><li>Goerke, C., Wolz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+and+genomic+plasticity+of+Staphylococcus+aureus+during+persistent+colonization+and+infection.">Regulatory and genomic plasticity of Staphylococcus aureus during persistent colonization and infection.</a> International Journal of Medical Microbiology. 294 (2-3), 195-202 (2004).</li><li>Wolter, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staphylococcus+aureus+small-colony+variants+are+independently+associated+with+worse+lung+disease+in+children+with+cystic+fibrosis.">Staphylococcus aureus small-colony variants are independently associated with worse lung disease in children with cystic fibrosis.</a> Clin Infect Dis. 57 (3), 384-391 (2013).</li><li>Roberts, A. E. L., Kragh, K. N., Bjarnsholt, T., Diggle, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+limitations+of+in+vitro+experimentation+in+understanding+biofilms+and+chronic+infection.">The limitations of in vitro experimentation in understanding biofilms and chronic infection.</a> Journal of Molecular Biology. 427, 3646-3661 (2015).</li><li>Ceri, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Calgary+biofilm+device:+New+technology+for+rapid+determination+of+antibiotic+susceptibilities+of+bacterial+biofilms.">The Calgary biofilm device: New technology for rapid determination of antibiotic susceptibilities of bacterial biofilms.</a> Journal of Clinical Microbiology. 37 (6), 1771-1776 (1999).</li><li>Moskowitz, S. M., Foster, J. M., Emerson, J., Burns, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinically+feasible+biofilm+susceptibility+assay+for+isolates+of+Pseudomonas+aeruginosa+from+patients+with+cystic+fibrosis.">Clinically feasible biofilm susceptibility assay for isolates of Pseudomonas aeruginosa from patients with cystic fibrosis.</a> Journal of Clinical Microbiology. 42 (5), 1915-1922 (2004).</li><li>Smith, S., Waters, V., Jahnke, N., Ratjen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+versus+biofilm+antimicrobial+susceptibility+testing+to+guide+antibiotic+therapy+in+cystic+fibrosis.">Standard versus biofilm antimicrobial susceptibility testing to guide antibiotic therapy in cystic fibrosis.</a> Cochrane Database of Systematic Reviews. (6), (2020).</li><li>Trust, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Annual Data Report 2019. , (2019).</li><li>Angelis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+and+economic+costs+and+health-related+quality+of+life+in+non-institutionalised+patients+with+cystic+fibrosis+in+the+United+Kingdom.">Social and economic costs and health-related quality of life in non-institutionalised patients with cystic fibrosis in the United Kingdom.</a> BMC Health Services Research. 15 (1), 428 (2015).</li><li>Eidt-Koch, D., Wagner, T. O. F., Mittendorf, T., von der Schulenburg, J. M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outpatient+medication+costs+of+patients+with+cystic+fibrosis+in+Germany.">Outpatient medication costs of patients with cystic fibrosis in Germany.</a> Applied Health Economics and Health Policy. 8 (2), 111-118 (2010).</li><li>Harrington, N. E., Sweeney, E., Harrison, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Building+a+better+biofilm+-+Formation+of+in+vivo-like+biofilm+structures+by+Pseudomonas+aeruginosa+in+a+porcine+model+of+cystic+fibrosis+lung+infection.">Building a better biofilm - Formation of in vivo-like biofilm structures by Pseudomonas aeruginosa in a porcine model of cystic fibrosis lung infection.</a> Biofilm. 2, 100024 (2020).</li><li>Harrison, F., Diggle, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ex+vivo+lung+model+to+study+bronchioles+infected+with+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms.">An ex vivo lung model to study bronchioles infected with Pseudomonas aeruginosa biofilms.</a> Microbiology. 162, 1755-1760 (2016).</li><li>Sweeney, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ex+vivo+cystic+fibrosis+model+recapitulates+key+clinical+aspects+of+chronic+Staphylococcus+aureus+infection.">An ex vivo cystic fibrosis model recapitulates key clinical aspects of chronic Staphylococcus aureus infection.</a> Microbiology. , (2020).</li><li>Palmer, K. L., Aye, L. M., Whiteley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutritional+cues+control+Pseudomonas+aeruginosa+multicellular+behavior+in+cystic+fibrosis+sputum.">Nutritional cues control Pseudomonas aeruginosa multicellular behavior in cystic fibrosis sputum.</a> Journal of Bacteriology. 189 (22), 8079-8087 (2007).</li><li>Nakagawa, S., Schielzeth, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeatability+for+Gaussian+and+non-Gaussian+data:+A+practical+guide+for+biologists.">Repeatability for Gaussian and non-Gaussian data: A practical guide for biologists.</a> Biological Reviews. 85 (4), 935-956 (2010).</li><li>Sweeney, E., Sabnis, A., Edwards, A. M., Harrison, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+host-mimicking+medium+and+biofilm+growth+on+the+ability+of+colistin+to+kill+Pseudomonas+aeruginosa.">Effect of host-mimicking medium and biofilm growth on the ability of colistin to kill Pseudomonas aeruginosa.</a> Microbiology. 166 (12), 1171-1180 (2020).</li><li>Stalker, D. J., Jungbluth, G. L., Hopkins, N. K., Batts, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetics+and+tolerance+of+single-+and+multiple-dose+oral+or+intravenous+linezolid,+an+oxazolidinone+antibiotic,+in+healthy+volunteers.">Pharmacokinetics and tolerance of single- and multiple-dose oral or intravenous linezolid, an oxazolidinone antibiotic, in healthy volunteers.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 51 (5), 1239-1246 (2003).</li><li>Ager, S., Gould, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+update+on+linezolid+in+the+treatment+of+Gram-positive+bacterial+infections.">Clinical update on linezolid in the treatment of Gram-positive bacterial infections.</a> Infection and Drug Resistance. 5, 87-102 (2012).</li><li>Kirchner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Artificial+Sputum+Medium+to+Test+Antibiotic+Efficacy+Against+Pseudomonas+aeruginosa+in+Conditions+More+Relevant+to+the+Cystic+Fibrosis+Lung.">Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (64), e3857 (2012).</li></ol>

Авторам нечего раскрывать.

Модель ex vivo lung имеет высокую пропускную способность и недорогую, и, поскольку она использует отходы мясной промышленности после потребления, она не представляет никаких этических проблем. Он предназначен для имитации хронически инфицированных дыхательных путей человека CF лучше, чем доступные в настоящее время платформы IN vitro AST. Результаты, представленные здесь, показывают, что он может более точно предсказать восприимчивость к антибиотикам в этих обстоятельствах.
Критические шаги в протоколе, которые обеспечат надежные и воспроизводимые результаты, включают следующее:
<ol><li>Используйте последовательное время и методы хранения между убоем, сбором и обработкой образцов легких. Важно использовать легкие как можно скорее после убоя и свести к минимуму вероятность загрязнения. Наблюдались различия в способности экспериментальных культур расти в легких, если они не настолько свежи, насколько это возможно.</li>
	<li>Поддержание стерильности при производстве SCFM и рассечении легочных кусочков имеет важное значение. Здоровые легкие не стерильны, и поэтому присутствие комменсальных бактерий может отражать «естественную» среду для хронической инфекции. Тем не менее, как отмечалось ранее, бактериальные взаимодействия в многовидовых популяциях могут изменить результаты и восприимчивость к антибиотикам, поэтому следует избегать загрязнения и стерилизовать легкие перед использованием. Мы выступаем за использование УФ-стерилизации, так как она, по-видимому, не вызывает изменений целостности оловянной ткани и, при необходимости, дополнительных промывок антибиотиками. Тем не менее, антибиотики следует использовать с осторожностью, так как они могут влиять на результаты путем введения селективного давления и могут изменить экспрессию генов в тестовых бактериальных популяциях.</li>
	<li>Используйте имитационную инфицированные, отрицательные контрольные образцы тканей и пластины подсчета клеток, выращенные на неселективной, богатой среде, чтобы подчеркнуть рост любых загрязняющих или комменсальных бактерий, которые не были удалены во время стерилизации. Это необходимо для смягчения любого воздействия этих бактерий на АСТ. Также полезно производить дубликаты, селективные агары, пластины подсчета клеток, специфичные для интересующего организма, поскольку дублирующие пластины ускоряют идентификацию колоний и перечисление клеток.</li>
	<li>Проводить пилотные эксперименты при первом использовании модели и при ее использовании с новыми штаммами или генотипом бактерий для оценки вариаций биопленки КОЕ между участками ткани, что позволяет выбрать оптимальные экспериментальные размеры выборки (например, сколько реплицируемых участков ткани получить из скольких реплицированных легких) с помощью расчетов мощности.</li>
	<li>В анализе используется нестандартизированный инокулят, так как это позволяет быстро привить после 48 часов инкубации и формирования относительно последовательных нагрузок биопленок (особенно для P. aeruginosa). Чтобы провести анализ антибактериальной эффективности на ранних стадиях роста биопленки, рассмотрите возможность инокуляции стандартизированной КОЕ колониальных бактерий, взвешенных в ASM. Не рекомендуется инокуляция планктонными бактериями: ранние пилотные эксперименты показали, что это приводит к острому, инвазивному росту не достоверного образования биопленки.</li>
</ol>Этот протокол создает надежную прототипную модель для использования с P. aeruginosa,с большим потенциалом для разработки для использования с S. aureus,но у него есть некоторые ограничения, которые необходимо будет устранить для определенных приложений в будущем. Ткань была инокулирована из отдельных колоний, чтобы обеспечить развитие клональных популяций. Результаты показывают, что для P. aeruginosaэто мало влияет на количество клеток через 48 ч. Однако для S. aureus наблюдалась большая вариабельность бактериальной нагрузки, и, учитывая, что различные бактерии могут расти по-разному в рамках модели, стандартизированный начальный инокулят и строгое производство образцов тканей одинакового размера и веса могут зависеть от организма исследования. Также могут быть различия между лабораториями из-за различий в точных методах вскрытия / заражения или местной породы свиней / ландраса. Для оценки воспроизводимости бактериальных популяций для отдельных реализаций модели мы предлагаем использовать расчеты повторяемости в рамках статистического анализа результатов25 и использовать расчеты повторяемости/мощности на основе пилотных экспериментов для расчета оптимального размера выборки для их использования в итоговых экспериментах.
Одним из ключевых преимуществ EVPL перед традиционными пластинчатыми анализами является то, что вместо тестирования бактерий, растущих планктонально или на абиотических поверхностях, он позволяет пространственно структурировать бактериальные биопленки в среде хозяина и с дифференцировкой клеток. Это имеет важное значение для рассмотрения влияния физико-химических и питательных градиентов на активность противомикробных агентов, а также на доставку и доступность активной терапии в различных микросредах в рамках хронической инфекции и клеточно-клеточного взаимодействия между бактериями. Этот последний момент особенно важен, поскольку многовидовые инфекции обычно наблюдаются при муковисцидозе и становятся все более важными для инфекций, связанных с другими респираторными заболеваниями, такими как астма и хроническая обструктивная болезнь легких. Существует потенциал для разработки этой модели для АСТ для индивидуального забора мокроты пациента в клинической диагностике. Аналогичное испытание уже проводится с использованием модели in vitro, имитирующих раны, для роста и АСТ дебризой биопленки из хронических ран (Юго-западный региональный центр по уходу за ранами в Лаббоке, штат Техас, доктор Р. Уолкотт).
Кроме того, модель использует посмертную ткань, поэтому влияние иммунного ответа хозяина на восприимчивость к антибиотикам ограничено. Современные модели in vitro также не учитывают иммунные реакции хозяина, поэтому мы не рассматриваем это как барьер для будущего использования модели в приложениях AST. Однако иммунный ответ учитывается при определении фармакокинетических и фармакодинамических параметров и рекомендаций по дозированию антибиотиков. Хотя наши исследования показали доказательства остаточных иммунных клеток и реакций вткани 23 (и S. Azimi, личное общение), это основная область для дальнейшей оптимизации и развития модели, если желательно большее соответствие условиям in vivo.
Предоставление более клинически обоснованного АСТ для МВ поможет выполнить ключевую рекомендацию Закона Великобритании о здравоохранении и социальном обеспечении 2008 года о том, что «должны быть разработаны процедуры для обеспечения разумного назначения и управления противомикробными препаратами». Мы считаем, что EVPL является идеальной моделью-кандидатом, чтобы помочь удовлетворить эту потребность.

Хронические инфекции биопленки поражают людей, чья нормальная иммунная защита скомпрометирована. Группы риска включают лиц с генетическим состоянием муковисцидоза(МВ) 1. Колонизация аномально густой, адгезивной слизи в дыхательных путях в раннем младенчестве приводит к трудноизлечимым инфекциям биопленки бронхиол2,3. Рост бактерий в виде обширных инкапсулированных матрицей биопленок является одним из факторов, который отличает хронические инфекции людей с ослабленным иммунитетом от острых инфекций здоровых хозяев, а состояние биопленки защищает бактерии от воздействия антибиотиков (из-за снижения диффузии через матрицу) и снижает их восприимчивость к антибиотикам (например, путем индукции покоя или регуляции эффлюксных насосов)4,5. Однако специфические для заболевания изменения в физиологии и химии тканей хозяина еще больше изменяют физиологию бактерий по той, которая наблюдается при острых инфекциях или в стандартных лабораторных условиях роста. Ключевые примеры при муковисцидозе включают использование необычных источников углерода, таких как жирные кислоты и аминокислоты, высвобождаемые из поверхностно-активного вещества легких и продуцируемые микробной деградацией муцина, высвобождение микроэлементов, таких как железо, из поврежденных тканей и микроэробиоз6,7,8.
Поэтому специфические физико-химические условия в конкретном контексте биопленочной инфекции могут влиять на реакцию на антибиотики. Во-первых, структура и глубина внеклеточного матрикса зависит от местных условий окружающей среды, таких как питательные вещества или силы сдвига. Во-вторых, экологические сигналы могут вызывать экспрессию специфических генов устойчивости к антибиотикам. Например, патоген МУКовисцидоза Pseudomonas aeruginosa показывает повышенную экспрессию бета-лактамазы и сниженную экспрессию поринов в мокроте муковисцидоза по сравнению с in vitro9,в то время как другой патоген муковисцидоза, Burkholderia cenocepacia,повышает регуляцию бета-лактамаз и эфлюксных насосов при выращивании в мокроте CF10. В-третьих, условия в хозяине могут сигнализировать о физиологическом или генетическом переходе к антибиотикоустойчивым фенотипам, которые трудно резюмировать in vitro. К ним относятся малые колониальные варианты возбудителя муковисцида Staphylococcus aureus11,12.
Все эти данные указывают на то, что когда диагностические лаборатории изолируют отдельные клоны из патогенной биопленки и выполняют АСТ на планктонных или агаровых культурах, выращенных в стандартных лабораторных средах (микроразбавление бульона, диффузия диска или Etest), результаты часто не предсказывают, какие антибиотики действительно будут работать in vivo. Даже если используются анализы биопленки in vitro, они могут не сигнализировать о фенотипе биопленки in vivo из-за различий в используемой среде и поверхности прикрепления, поэтому анализы с использованием проточных клеток или высокопроизводительных платформ микропластин могут переоценить чувствительность к антибиотикам13. Та же проблема относится к исследователям в академических кругах и промышленности, стремящимся разработать новые антибиопленочные агенты: тестирование лекарственного потенциала с использованием платформ in vitro, таких как проточные клетки, микротитрные пластины или биопленочные реакторы Центра по контролю за заболеваниями, может установить слишком низкую планку эффективности биопленки и производить ложные срабатывания в процессе исследований, разработок.
Плохая корреляция между результатами АСТ и клиническим исходом после лечения антибиотиками при муковисцидозе хорошо известна. Многие клиницисты просто игнорируют диагностический лабораторный АСТ, поскольку нет единых, специфичных для муковисцидоза рекомендаций по интерпретации этих результатов, и вместо этого принимают решения о назначении в каждом конкретном случае. Были предприняты попытки улучшить CF AST с помощью устройства биопленки Калгари, которое использует биопленки, выращенные на поверхности пластиковых колышков, установленных в колодцах микропластины, содержащей стандартную среду AST (например, катион-скорректированный бульон Мюллера-Хинтона)14,15. Этот анализ не лучше предсказывает, какие антибиотики будут работать in vivo, чем стандартный планктонныйAST 16. Влияние на пациентов с муковисцидозом является резким. Несмотря на повторное введение антибиотиков (регулярное ингаляционное введение антибиотиков и в среднем 27 дней в год внутривенного введения антибиотиков для лиц с муковисцидозом в Соединенном Королевстве)17,частые и непредсказуемые эпизоды острого легочного обострения приводят к прогрессирующему повреждению легких и, примерно в 90% случаев, смерти от дыхательной недостаточности. В недавнем анализе бактериальная инфекция легких была самым сильным предиктором затрат на лекарства при муковисцидозе, добавив в среднем 3,6 тысячи евро / пациента / год к прямым расходам на здравоохранение18,19.
Для острых инфекций здоровых людей текущие исследования и политика, ориентированные на быстрый АСТ, основанные, например, на геномном прогнозировании в месте оказания медицинской помощи, идеально подходят20. Но в случае хронических инфекций муковисцидоза ясно, что необходим другой подход: реализация АСТ в моделях, имитирующих хозяина, которые лучше повторяют среду in vivo и метаболическое состояние патогена и позволяют формировать реалистичную структуру биопленки.
Ранее мы разработали модель биопленки CF, которая включает в себя участки бронхиол свиней, инкубированных в синтетической мокроте CF и инфицированных P. aeruginosa или S. aureus. Неинфицированный EVPL сохраняет нормальную гистопатологию в течение 7 дней, но лабораторные или клинические изоляты P. aeruginosa и S. aureus воспроизводимо образуются in vivo-подобные агрегаты вокруг ткани, имитируя этиологию инфекции CF21,22,23. Мы представляем протокол для использования этой высокой валидности, высокопроизводительной модели в качестве специализированной платформы биопленки AST для МВ и представляем примерные результаты, показывающие высокую толерантность патогенных биопленок к клинически используемым антибиотикам при выращивании в модели. Модель может быть легко включена в исследования, разработки для управления или предотвращения образования биопленки и, возможно, в диагностический АСТ. Большинство используемого оборудования (см. Таблицу материалов) можно легко найти в типичной микробиологической лаборатории, хотя бисер необходим, и мы обнаружили из работы с сотрудниками, что подходящий ультрафиолетовый гермицидный шкаф также может потребоваться приобрести. Поскольку легкие получают от коммерческих мясников или скотоскотобойн, модель не представляет никаких этических проблем.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 mL insulin syringes with 29G needle attached</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well culture plates</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol or similar for surface sterilizaton and flamin gof dissection equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar plates to prepare streaks of P. aeruginosa/S. aureus (any suitable medium)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum foil - pre-sterilised by autoclaving - to cover the chopping board on whcih you wil dissect lungs.</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bead beater designed to take 2 mL tubes</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>116004500</td>
			<td>FastPrep-24 Classic bead beating grinder and lysis system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Breathe-easy or Breathe-easier sealing membrane for multiwell plates</td>
			<td>Diversified Biotech</td>
			<td>BEM-1 or BERM-2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bunsen burner&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chopping board - we recommend a plastic board to allow for easy decontamination with alcohol.</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coolbox to transport lungs to lab</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection scissors in different sizes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle medium (DMEM)&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand 2 mL reinforced tubes&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>15545809</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand 2.38 mm metal beads</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>15505809</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Germicidal UV cabinet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringes -&#160; 0.5 mL with 29G needle attached.</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDAM324892</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large pallet knife</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB agar plates to assess CFU in lung biofilm homogenate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounted razor blades</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene RapidFlow PES 75 mm x 0.1 &#181;m x 500 ml sterile filter unit</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10474415</td>
			<td>For filter-sterilizing SCFM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic chopping board and aluminium foil to create a sterile and cleanable dissection surface</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medium</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCFM ingredients as listed in Table S1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Selection of forceps (blunt tips recommended)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Selective agar plates to specifically assess P. aeruginosa / S. aureus CFU in lung biofilm homogenate, if required.</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suitable containers for disposing of contaminated sharps and pig ung tissue, according to your institution&#39;s health &#38; safety policies.</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

antibiotic efficacy testing in an ex vivo model of pseudomonas aeruginosa and staphylococcus aureus biofilms in the cystic fibrosis lung

Эффективное назначение антибиотиков для бактериальных биопленок, присутствующих в легких людей с муковисцидозом (МВ), ограничено плохой корреляцией между результатами тестирования чувствительности к антибиотикам (АСТ) с использованием стандартных методов диагностики (например, микроразбавливание бульона, диффузия диска или Etest) и клиническими результатами после лечения антибиотиками. Попытки улучшить АСТ с помощью готовых платформ для роста биопленки показывают незначительное улучшение результатов. Ограниченная способность систем биопленки in vitro имитировать физико-химическую среду легкого МУКовисцидоза и, следовательно, бактериальную физиологию и архитектуру биопленки, также действует как тормоз для открытия новых методов лечения инфекции муковисцидоза. Здесь мы представляем протокол для выполнения АСТ патогенов муковисцидоза, выращенных как зрелые, in vivo-подобные биопленки в модели легкого ex vivo CF, состоящей из бронхиолярной ткани свиньи и синтетической мокроты CF (ex vivo pig lung, EVPL).
Существует несколько анализов in vitro для тестирования чувствительности биопленки с использованием либо стандартной лабораторной среды, либо различных составов синтетической мокроты CF в микротитрных пластинах. Как среда роста, так и субстрат биопленки (полистирольная пластина против бронхиолярной ткани), вероятно, влияют на устойчивость биопленки к антибиотикам. Показана повышенная переносимость клинических изолятов Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus в модели ex vivo; эффекты лечения биопленками антибиотиками не коррелируют с минимальной ингибирующей концентрацией (МИК) в стандартных анализах микроразбавливания или чувствительной/резистентной классификацией в дисковых диффузионных анализах.
Платформа ex vivo может быть использована для индивидуального АСТ биопленки образцов пациентов и в качестве расширенной платформы для тестирования потенциальных антибиопленковых агентов во время фармацевтических исследований и разработок. Улучшение рецептуры или ускорения открытия антибиопленковых препаратов за счет использования большего количества платформ тестирования in vivo может значительно улучшить результаты в отношении здоровья людей с муковисцидозом, а также снизить затраты на клиническое лечение и исследования открытий.

Watch this Scientific Journal Video about Antibiotic Efficacy Testing in an Ex vivo Model of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus Biofilms in the Cystic Fibrosis Lung at JoVE.com

Antibiotic Efficacy Testing in an Ex vivo Model of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus Biofilms in the Cystic Fibrosis Lung

Этот рабочий процесс может быть использован для проведения тестирования чувствительности к антибиотикам с использованием установленной модели ex vivo бактериальной биопленки в легких людей с муковисцидозом. Использование этой модели может повысить клиническую обоснованность анализов MBEC (минимальная концентрация эрадикации биопленки).

Тестирование эффективности антибиотиков в модели Ex vivo биопленок Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus в легком муковисцидозе

The effective prescription of antibiotics for the bacterial biofilms present within the lungs of individuals with cystic fibrosis (CF) is limited by a ...

Этот метод позволяет выращивать бактерии в среде, которая вызывает сходную физиологию клеток и морфологию биопленки с той, которую вы видите при инфекциях легких муковисцидоза. Легкие являются отходами в мясной промышленности, поэтому этических проблем нет. Модель предлагает платформу для имитации инфекции человека без необходимости в живой животной модели.Этот метод дает исследователям новый способ скрининга лекарств-кандидатов на возможность входить и разрушать биопленки, которые образуются в легких муковисцидоза. С дальнейшим развитием и валидацией мы считаем, что модель EVPR может иметь потенциальное применение для специализированного и индивидуализированного тестирования чувствительности к антибиотикам. Добывайте легкие сразу после убоя и транспортировать их в лабораторию в домашней прохладной коробке.Работа на стерилизованной поверхности и под пламенем. Поместите легкие на чистую пластиковую разделочную доску, покрытую автоклавной алюминиевой фольгой, и проверьте, чтобы бронхиолы остались нетронутыми. Легкие не пригодны для использования, если на скотобойни или во время транспортировки были какие-либо повреждения.Нагрейте нож поддоном под пламенем и очень коротко прикоснитесь ножом к области легкого, окружающей бронхиолу, чтобы стерилизовать поверхность ткани. Отрежьте поверхностную ткань, окружающую бронхиолу, используя стерильное лезвие бритвы, делая разрезы параллельно бронхиоле, чтобы предотвратить любое повреждение. После того, как бронхиола была обнажена, сделайте поперечный разрез через бронхиолу в самой высокой видимой точке.Используя стерильные щипцы, слегка удерживайте свободный конец бронхиолы и отрежьте любую оставшуюся нежелательную ткань с помощью стерильного лезвия бритвы. Сделайте окончательный поперечный разрез через бронхиолу, прежде чем будет видно какое-либо ветвление, чтобы удалить бронхиолу из легких. Поместите бронхиолу в первую промывку DMEM RPMI 1640.Оставьте его в промывке и соберите дополнительные участки бронхиол из того же легкого, чтобы получить достаточное количество участков ткани для запланированного эксперимента. Поместите любые дополнительные бронхиолярные участки из того же легкого в промывку и оставьте их в промывке не менее чем на две минуты. Извлеките бронхиолы из первой промывки и поместите образцы в стерильную чашку Петри.Слегка удерживайте каждую бронхиолу стерильными щипцами, заботясь о том, чтобы не повредить ткани. Удалите как можно больше оставшихся мягких тканей и разрежьте ткань на полоски шириной пять миллиметров с помощью стерильных ножниц для рассечения. Поместите все полоски бронхиолярной ткани во вторую промывку DMEM RPMI 1640.Оставьте их в стирке не менее чем на две минуты, затем удалите полоски ткани из второй стирки стерильными щипцами и поместите их в чистую, стерильную чашку Петри. Удалите все оставшиеся мягкие ткани, прикрепленные к бронхиоле, и разрежьте полоски на квадраты с помощью стерильных ножниц для рассечения. Добавьте третью смывку DMEM RPMI 1640 в чашку Петри и слегка перемешайте кусочки ткани в стирке, закручивая посуду.Вылейте третью промывку из чашки Петри, не удаляя кусочки ткани. Затем добавьте окончательную промывку SCFM, убедив, что все кусочки ткани покрыты. Стерилизуйте ткани в SCFM под ультрафиолетовым светом в течение пяти минут.Используйте стерильные щипцы для переноса каждого стерилизованного кусочка бронхиолярной ткани в отдельные колодцы из 24-х скважинной пластины, содержащей агарозные прокладки SCFM. Чтобы заразить каждый кусочек ткани желаемым бактериальным штаммом, прикоснитесь к колонии, выращенной на агаровой пластине, кончиком иглы 29-го калибра, прикрепленной к стерильному 0,5-миллилитрового инсулинового шприца, затем коснитесь колонии на куске ткани, осторожно прокалывая поверхность. Для неинфицированных контрольных органов осторожно проколите поверхность кусочка ткани кончиком иглы, затем используйте пипетку, чтобы добавить 500 микролитров SCFM в каждую лунку.Стерилизуйте дышащей уплотнительной мембраной для каждой 24-скважинной пластины под ультрафиолетовым светом в течение 10 минут. Снимите крышку с 24-колодезной пластины и замените ее дышащей мембраной, затем высиживают пластины при 37 градусах Цельсия без встряхивания. Настройте реплицированные наборы легочных кусочков по крайней мере из двух независимых легких, используя один набор для отрицательного контроля и один набор на каждую концентрацию антибиотика, который будет протестирован.После 48 часов инкубации визуально осмотрите неинфицированные кусочки ткани на предмет роста эндогенных бактерий, которые приведут к тому, что среда вокруг этих участков будет мутной. Если наблюдается рост, характерный для выбранного исследуемого вида, возобновим эксперимент со свежими легкими. Если неинфицированные участки ткани не показывают никакого или минимального роста бактерий, подготовьте одну 24-хорошую промывочную пластину и одну 24-хорошую обработочную пластину.Каждая лунка лечебной пластины должна содержать 500 микролитров свежего SCFM без антибиотиков или с антибиотиком, представляющим интерес. Удалите каждый зараженный кусочек ткани из инкубационной пластины с помощью стерилизованных щипцами. Закрутите его ненадолго в свежем колодце промывной пластины, чтобы удалить любые бактериальные клетки, не связанные с биопленкой, и перенести их в соответствующий колодец лечебной пластины.Запечатайте лечебную пластину свежей дышащей мембраной, затем высиживайте ее при 37 градусах Цельсия без встряхивания в течение 18-24 часов. Используйте огненно-стерилизованные щипцы, чтобы удалить каждый кусок легкого из 24-луночной пластины, и поместите его в стерильную двухмиллилитровую гомогенизационную трубку, содержащую один миллилитр PBS и один грамм металлических шариков. Бисер бьется в течение 40 секунд со скоростью четыре метра в секунду.Последовательно разбавляйте гомогенат легких с помощью PBS и наносите его на агар LB, чтобы определить колониеобразующие единицы в отдельных, необработанных и обработанных антибиотиками кусочках ткани. При выращивании в легких свиньи ex-vivo или EVPL биопленки P.aeruginosa и S.aureus демонстрируют повышенную толерантность к антибиотикам по сравнению с восприимчивостью в стандартных, одобренных промышленностью анализах MIC и дисках бульона с использованием стандартных сред. Различные эффекты различных антибиотиков на биопленку, установленную EVPL, различимы.Например, убийство P.aeruginosa достигается при EVPL с 4 до 16X МИК ципрофлоксацина, но не с 4-8X МИК хлорамфеникола. Популяции S.aureus, которые восприимчивы к линезолиду в дисковом анализе, способны выживать в целевых концентрациях в сыворотке и выше при EVPL. Даже оптимизированный анализ in vitro не может точно предсказать восприимчивость P.aeruginosa к колистину в EVPL.Количество антибиотика, необходимое для достижения трех log 10 уничтожения бактерий, выращенных EVPL, часто значительно выше, чем MIC или MBEC, рассчитанные на основе стандартных анализов in vitro. В дополнение к различию различий между антимикробными агентами, эта модель может выделять изменения восприимчивости на разных стадиях роста бактерий и для разных интервалов дозирования антибиотиков. Здесь показана возрастающая толерантность биопленок P.aeruginosa к меропенему по мере их созревания.Выживаемость S.aureus измеряли через 4 и 24 часа после воздействия флуклоксациллина, что позволило наблюдать различия в снижении количества бактериальных клеток во времени и между изолятами. Вариации бактериальной нагрузки часто увеличиваются с увеличением времени культивируется. Это можно увидеть в необработанный контроль после 48-часового развития биопленки и дальнейшего 24-часового воздействия, чтобы учесть интервал дозирования антибиотиков.Крайне важно поддерживать отличную стерильную технику на протяжении всего рассечения, поэтому мы рекомендуем делать вскрытие в лаборатории или в области вашей лаборатории, которую вы никогда не используете для микробиологической работы. Недавно мы использовали модель для изучения поступления колистина в биопленку, и модель имеет хороший потенциал для использования в исследованиях по улучшению доставки лекарств в биопленки.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Antibiotic Efficacy Testing in an Ex vivo Model of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus Biofilms in the Cystic Fibrosis Lung

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Сотрудничество культуры Модели Синегнойной палочки Биопленки выращенных на живые человеческие клетки дыхательных путей

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living ...

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Использование искусственного среднего мокроты для тестирования антибиотиков эффективность против<em&gt; Синегнойной палочки</em&gt; В условиях более актуальными для кистозного фиброза легких

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

Experimental Endocarditis Model of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in Rat

Experimental Endocarditis Model of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus MRSA in Rat

Экспериментальная модель Эндокардит метициллин устойчивый<em&gt; Золотистый стафилококк</em&gt; (MRSA) у крыс

Endovascular infections, including endocarditis, are life-threatening infectious syndromes1-3. Staphylococcus aureus is the most common world-wide cause ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Долгосрочная Хронический<em&gt; Синегнойной палочки</em&gt; Дыхательных инфекции у мышей

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Синегнойная палочка Индуцированные легких травм Модель

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Изучение микробных сообществ<em&gt; В Vivo</em&gt;: Модель узла опосредованного взаимодействия между<em&gt; Candida Albicans</em&gt; И<em&gt; Синегнойной палочки</em&gt; В Airways

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Создание установки с высокой пропускной способностью для скрининга малых молекул, которые модулируют с-ди-GMP Передача сигналов в<em&gt; Синегнойной</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

Модель переходной трансгенерации IL-8 для<em&gt; В Виво</em&gt; Долгосрочный мониторинг воспалительных реакций

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Приходите в сторону света: В Vivo мониторинг Pseudomonas aeruginosa биопленки инфекций, хронических ран в диабетической голые мышиных модели

The presence of bacteria as structured biofilms in chronic wounds, especially in diabetic patients, is thought to prevent wound healing and resolution. ...

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

Мыши модель для оценки врожденный иммунный ответ инфекции стафилококк

Staphylococcus aureus (S. aureus)&#160;infections, including methicillin resistant stains, are an enormous burden on the healthcare system. With incidence ...