Name: using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities
Uploaded: 2021-03-21T15:00:00
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Ce travail a été soutenu par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (subvention n° 91643203, 91543208, 81502835).

Toutes les procédures décrites ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux (IACUC) de l’Université de Qingdao. Dans notre laboratoire, les œufs ont été incubés dans deux incubateurs. Les œufs étaient maintenus debout dans l’incubateur et placés au hasard sur les étagères. Les conditions d’incubation des œufs étaient les suivantes : la température d’incubation commençait à 37,9 °C et diminuait progressivement jusqu’à 37,1 °C au fur et à mesure ...

<ol>
	<li>Kain, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+as+an+expanding+experimental+model+for+cancer+and+cardiovascular+research.">The chick embryo as an expanding experimental model for cancer and cardiovascular research.</a> Developmental Dynamics. 243 (2), 216-228 (2014).</li><li>Menna, T. M., Mortola, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+posture+on+the+respiratory+mechanics+of+the+chick+embryo.">Effects of posture on the respiratory mechanics of the chick embryo.</a> Journal of Experimental Zoology. 293 (5), 450-455 (2002).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. 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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfluorooctanoic+acid+induced-developmental+cardiotoxicity:+are+peroxisome+proliferator+activated+receptor+alpha+(PPARalpha)+and+bone+morphorgenic+protein+2+(BMP2)+pathways+involved.">Perfluorooctanoic acid induced-developmental cardiotoxicity: are peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPARalpha) and bone morphorgenic protein 2 (BMP2) pathways involved.</a> Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A. 76 (11), 635-650 (2013).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+levels+of+l-carnitine,+acetyl-l-carnitine+and+propionyl-l-carnitine+are+involved+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+in+chicken+embryo.">Changes in the levels of l-carnitine, acetyl-l-carnitine and propionyl-l-carnitine are involved in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity in chicken embryo.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 48, 116-124 (2016).</li><li>Zhao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+PPAR+alpha+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+and+l-carnitine+mediated+protection-Results+of+in+ovo+gene+silencing.">The role of PPAR alpha in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity and l-carnitine mediated protection-Results of in ovo gene silencing.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 56, 136-144 (2017).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particulate+Matter+2.5+Induced+Developmental+Cardiotoxicity+in+Chicken+Embryo+and+Hatchling.">Particulate Matter 2.5 Induced Developmental Cardiotoxicity in Chicken Embryo and Hatchling.</a> Front Pharmacol. 11, 841 (2020).</li><li>Molina, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+air+cell+injection+of+perfluorooctane+sulfonate+before+incubation+on+development+of+the+white+leghorn+chicken+(Gallus+domesticus)+embryo.">Effects of air cell injection of perfluorooctane sulfonate before incubation on development of the white leghorn chicken (Gallus domesticus) embryo.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 25 (1), 227-232 (2006).</li><li>Crump, D., Chiu, S., Williams, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl)+sulfone+decreases+embryonic+viability+and+alters+hepatic+mRNA+expression+at+two+distinct+developmental+stages+in+chicken+embryos+exposed+via+egg+injection.">Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl) sulfone decreases embryonic viability and alters hepatic mRNA expression at two distinct developmental stages in chicken embryos exposed via egg injection.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (2), 530-537 (2018).</li><li>Franci, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potency+of+polycyclic+aromatic+hydrocarbons+in+chicken+and+Japanese+quail+embryos.">Potency of polycyclic aromatic hydrocarbons in chicken and Japanese quail embryos.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (6), 1556-1564 (2018).</li><li>Rand, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+exposure+to+methylmercury+and+resultant+muscle+mercury+accumulation+and+adult+motor+deficits+in+mice.">Developmental exposure to methylmercury and resultant muscle mercury accumulation and adult motor deficits in mice.</a> Neurotoxicology. 81, 1-10 (2020).</li><li>Tanaka, T., Suzuki, T., Inomata, A., Moriyasu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+effects+of+maternal+exposure+to+fungicides+on+behavioral+development+in+F1+-generation+mice:+2.+Fixed-dose+study+of+thiabendazole.">Combined effects of maternal exposure to fungicides on behavioral development in F1 -generation mice: 2. Fixed-dose study of thiabendazole.</a> Birth Defects Research. , (2020).</li><li>Kofman, O., Lan, A., Raykin, E., Zega, K., Brodski, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+and+social+deficits+and+enhanced+sensitivity+to+prenatal+chlorpyrifos+in+PON1-/-+mouse+pups+and+adults.">Developmental and social deficits and enhanced sensitivity to prenatal chlorpyrifos in PON1-/- mouse pups and adults.</a> PLoS One. 15 (9), 0239738 (2020).</li><li>Kischel, A., Audouard, C., Fawal, M. A., Davy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ephrin-B2+paces+neuronal+production+in+the+developing+neocortex.">Ephrin-B2 paces neuronal production in the developing neocortex.</a> BMC Developmental Biology. 20 (1), 12 (2020).</li><li>Okolo, F., Zhang, G., Rhodes, J., Gittes, G. K., Potoka, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-Amniotic+Sildenafil+Treatment+Promotes+Lung+Growth+and+Attenuates+Vascular+Remodeling+in+an+Experimental+Model+of+Congenital+Diaphragmatic+Hernia.">Intra-Amniotic Sildenafil Treatment Promotes Lung Growth and Attenuates Vascular Remodeling in an Experimental Model of Congenital Diaphragmatic Hernia.</a> Fetal Diagnosis and Therapy. , 1-13 (2020).</li><li>Vyslouzil, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subchronic+continuous+inhalation+exposure+to+zinc+oxide+nanoparticles+induces+pulmonary+cell+response+in+mice.">Subchronic continuous inhalation exposure to zinc oxide nanoparticles induces pulmonary cell response in mice.</a> Journal of Trace Elements in Medicine and Biology. 61, 126511 (2020).</li><li>Wahle, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+neurological+effects+of+cerium+dioxide+nanoparticles+doped+with+different+amounts+of+zirconium+following+inhalation+exposure+in+mouse+models+of+Alzheimer's+and+vascular+disease.">Evaluation of neurological effects of cerium dioxide nanoparticles doped with different amounts of zirconium following inhalation exposure in mouse models of Alzheimer's and vascular disease.</a> Neurochemistry International. 138, 104755 (2020).</li><li>Tanabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-Dimensional+Echocardiography-+Role+in+Clinical+Practice+and+Future+Directions.">Three-Dimensional Echocardiography- Role in Clinical Practice and Future Directions.</a> Circ J. 84 (7), 1047-1054 (2020).</li></ol>

L’embryon de poulet est un modèle classique dans les études développementales depuis 200 ans1. Nos méthodes présentées dans ce manuscrit ont été utilisées dans l’évaluation de plusieurs contaminants environnementaux, y compris l’acide perfluorooctanoïque, les particules et les gaz d’échappement diesel avec succès5,7,8,9,1...

L’embryon de poulet est un modèle de développement classique, qui est utilisé depuis plus de deux cents ans1. Le modèle d’embryon de poulet présente divers avantages par rapport aux modèles traditionnels. Tout d’abord, dès plus de 70 ans, le développement normal de l’embryon de poulet avait été illustré très clairement dans le guide destadification Hamburger-Hamilton 2, dans lequel un total de 46 étapes au cours du développement de l’embryon de poulet ont été définies avec des caractéristiques temporelles et morphologiques précises, facilitant la détection d’un développement anormal. En outre, le modèle d’embryon de poulet présente d’autres caractéristiques telles qu’un coût relativement faible et redondant en quantité, des contrôles exposition-dose relativement précis, un système indépendant et fermé dans la coquille et une manipulation facile de l’embryon en développement, ce qui garantit son potentiel d’utilisation comme un puissant modèle d’évaluation toxicologique. 
En cardiotoxicité, l’embryon de poulet présente un cœur à quatre chambres, semblable aux cœurs de mammifères mais avec des parois plus épaisses, ce qui permet des évaluations morphologiques plus faciles. De plus, l’embryon de poulet permet une exposition par inhalation développementale, ce qui n’est pas possible dans les modèles de mammifères: au stade ultérieur de développement, l’embryon de poulet passera de la respiration interne à la respiration externe (obtenir de l’oxygène par les poumons); ce dernier nécessite que l’embryon pénètre dans la membrane cellulaire de l’air avec le bec et commence à respirer de l’air3, faisantde la cellule d’air une mini-chambre d’inhalation. En utilisant ce phénomène, les effets toxicologiques des contaminants gazeux sur le cœur (et d’autres organes) peuvent être évalués sans avoir besoin d’instruments de chambre d’inhalation dédiés. 
Dans ce manuscrit, plusieurs méthodes d’évaluation de l’exposition et des paramètres sont décrites, qui servent toutes à faire de l’embryon de poulet un outil puissant dans l’évaluation de la cardiotoxicité du développement après une exposition à des contaminants environnementaux.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4% phosphate buffered formaldehydefixative</td>
			<td>Biosharp, Hefei, China</td>
			<td>REF: BL539A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% ethanol</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosignaling monitor BL-420E+</td>
			<td>Taimeng, Chengdu, China</td>
			<td>BL-420E+</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Candling lamp</td>
			<td>Zhenwei, Dezhou, China</td>
			<td>WZ-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable syringe</td>
			<td>Zhiyu, Jiangsu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Egg incubator</td>
			<td>Keyu,Dezhou, China</td>
			<td>KFX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical balance</td>
			<td>OHAUS, Shanghai, China</td>
			<td>AR 224CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro-thermal incubator</td>
			<td>Shenxian, Shanghai, China</td>
			<td>DHP-9022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertile chicken egg</td>
			<td>Jianuo, Jining, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Staining Kit</td>
			<td>Beyotime, Bejing, China</td>
			<td>C0105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology paraffin</td>
			<td>Aladdin, Shanghai, China</td>
			<td>P100928-500g</td>
			<td>Melt point 52~54&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology paraffin</td>
			<td>Aladdin, Shanghai, China</td>
			<td>P100936-500g</td>
			<td>Melt point 62~64&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV catheter</td>
			<td>KDL, Zhejiang, China</td>
			<td></td>
			<td>The catheters have to be soft, plastic ones.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lentivirus</td>
			<td>Genechem, Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td>The lentivirus were individually designed/synthesized by Genechem.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson&#39;s trichrome staining kit</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>G1340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal probe</td>
			<td>Jinuotai, Beijing, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjector (5 uL)</td>
			<td>Anting,Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>CAIKON, Shanghai, China</td>
			<td>XSP-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td>HistoCore BIOCUT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blade</td>
			<td>Leica,Germany</td>
			<td>Leica 819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbitual sodium</td>
			<td>Yitai Technology Co. Ltd.,&#160; Wuhan, China</td>
			<td>CAS: 57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetter(10ul)</td>
			<td>Sartorius, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone iodide</td>
			<td>Longyuquan, Taian, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td>Anqisheng,Suzhou, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Kelun,Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sunflower oil</td>
			<td>Mighty Jiage, Jiangsu, China</td>
			<td></td>
			<td>Any commerical sunflower oil for human consumption should work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>M&#38;G, Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tedlar PVF Bag (5L)</td>
			<td>Delin, Dalian, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex mixer</td>
			<td>SCILOGEX, Rocky Hill, CT, US</td>
			<td>MX-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:1330-20-7</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities

Les embryons de poulet sont un modèle classique dans les études sur le développement. Au cours du développement des embryons de poulet, la fenêtre temporelle du développement cardiaque est bien définie et il est relativement facile d’obtenir une exposition précise et opportune via de multiples méthodes. De plus, le processus de développement cardiaque chez les embryons de poulet est similaire à celui des mammifères, ce qui donne également un cœur à quatre chambres, ce qui en fait un modèle alternatif précieux dans l’évaluation des cardiotoxicités développementales. Dans notre laboratoire, le modèle d’embryon de poulet est couramment utilisé dans l’évaluation des cardiotoxicités du développement après exposition à divers polluants environnementaux, y compris les substances perfluoroalkyles et polyfluoroalkyles (PFAS), les particules (PM), les gaz d’échappement diesel (DE) et les nanomatériaux. Le temps d’exposition peut être librement choisi en fonction des besoins, depuis le début du développement (jour embryonnaire 0, ED0) jusqu’à la veille de l’éclosion. Les principales méthodes d’exposition comprennent l’injection de cellules d’air, la micro-injection directe et l’inhalation de cellules d’air (développées à l’origine dans notre laboratoire), et les critères d’évaluation actuellement disponibles comprennent la fonction cardiaque (électrocardiographie), la morphologie (évaluations histologiques) et les évaluations biologiques moléculaires (immunohistochimie, qRT-PCR, transfert de Western, etc.). Bien sûr, le modèle d’embryon de poulet a ses propres limites, telles que la disponibilité limitée des anticorps. Néanmoins, avec plus de laboratoires commençant à utiliser ce modèle, il peut être utilisé pour apporter des contributions significatives à l’étude des cardiotoxicités développementales.

Résultats de l’exposition Injection de cellules d’air L’injection de cellules d’air peut exposer efficacement les embryons de poulet en développement à divers agents, qui peuvent ensuite être détectés dans les échantillons prélevés (sérum, tissu, etc.) d’embryons / poulets nouveau-nés. Voici un exemple, dans lequel de l’acide perfluorooctanoïque (APFO) a été injecté dans des cellules d’air, et les concentrations sériques d’APFO ont ensuite été déterminées par chromatographie liqu...

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Using Chicken Embryo as a Powerful Tool in Assessment of Developmental Cardiotoxicities

Les embryons de poulet, en tant que modèle de développement classique, sont utilisés dans notre laboratoire pour évaluer les cardiotoxicités développementales après une exposition à divers contaminants environnementaux. Les méthodes d’exposition et les méthodes d’évaluation morphologique/fonctionnelle établies sont décrites dans ce manuscrit.

Utilisation de l’embryon de poulet comme outil puissant dans l’évaluation des cardiotoxicités développementales

Chicken embryos are a classical model in developmental studies. During the development of chicken embryos, the time window of heart development is ...

Bonjour à tous. Je suis Qixiao Jiang, professeur agrégé au Département de toxicologie de l’École de santé publique de l’Université de Qingdao. Au nom de mon groupe de recherche, je vais présenter les atouts de l’utilisation de l’embryon de poulet dans le développement de notre évaluation de la toxicité cardio.L’embryon de poulet est un modèle de développement classique qui présente de multiples avantages tels qu’une manipulation facile, une grande accessibilité, un système indépendant fermé, etc. Travailler avec plusieurs polluants environnementaux, tels que l’acide tannique phénolique. Gaz d’échappement diesel, en particulier la matière sur les nanotubes de carbone.Nous avons plusieurs méthodes d’exposition établies en laboratoire, mais pour une cause plus importante, les évaluations fonctionnelles sont également effectuées régulièrement. Dans cette vidéo, je vais vous montrer les détails, les méthodes d’exposition et les méthodes d’évaluation fonctionnelle morphologique. N’hésitez pas à nous contacter si vous êtes intéressé.Merci. Voici nos méthodes d’exposition que je peux vous présenter. Maintenant, la première méthode que je vais introduire est une injection de cellule d’air, où vous allez injecter directement dans la cellule d’air.Nettoyez la surface des œufs avec une solution de poly-iodure. Il s’agit d’une solution de poly-iodure disponible dans le commerce, diluée avec de l’eau désionisée, 1/5. Et puis, je sèche la coquille d’œuf avec du papier de soie, sans frotter.C’est important parce que le lavage brisera leur couche protectrice à l’extérieur de la coque. Nettoyez tous les œufs dans la pièce sombre et marquez la cellule d’air avec un crayon. Exclure les œufs présentant des fissures sur la coquille.Excluez également les œufs avec des cellules d’air sur le côté. Si cela a une pointe émoussée, il est très peu probable que ceux-ci éclosent normalement. Désinfectez la zone de la cellule d’air, ainsi que la sonde métallique, avec 75% d’alcool.Essuyez-les, puis percez un petit trou au centre de la zone de la cellule d’air avec la sonde. Ne collez pas la sonde profondément dans la cellule d’air. Au lieu de cela, ne cassez la coque qu’avec la pointe de la sonde.Si le trou n’est toujours pas assez grand, cassez à nouveau la coque à proximité du trou existant, jusqu’à ce qu’il soit assez grand pour vous permettre d’insérer la pointe. Insérez la pointe de la pipette dans le trou avec la pointe touchant la membrane interne. Injectez lentement le mélange et maintenez-le là pendant au moins 10 secondes.Il s’agit de permettre à l’huile distribuée d’être entièrement distribuée. Et puis retirez la pointe. Maintenant, scellez le trou avec une brosse et une goutte de paraffine fondue.Veillez à ne pas égoutter de paraffine fondue sur la mémoire interne. Une fois scellés, placez les œufs dans l’incubateur jusqu’à ce qu’ils atteignent le stade embryonnaire souhaité. La deuxième, la méthode que je vais introduire est la Micro injection.Tout d’abord, les œufs doivent être nettoyés et manipulés comme décrit dans la section d’injection d’air. Cette procédure doit être effectuée dans une hotte stérilisée. Stérilisez la zone des cellules d’air et les instruments avec de l’acétone.Percez un petit trou au centre de la zone de la cellule d’air avec la sonde métallique. Ne collez pas la sonde profondément dans la cellule d’air, sinon la mémoire interne pourrait être endommagée. Ensuite, utilisez le même processus pour agrandir soigneusement le trou jusqu’à ce que le diamètre soit d’environ deux millimètres.Cela peut permettre la confirmation du rapport de la mémoire interne. Ensuite, chargez la solution dans un micro-injecteur et insérez soigneusement l’aiguille à travers le trou dans la membrane interne pendant environ trois millimètres au total. Distribuer doucement la solution, puis retirer l’aiguille.Gardez l’aiguille aussi perpendiculaire que possible. Scellez finement le trou avec un petit morceau de ruban adhésif. Couvrez complètement le trou pour éviter la déshydratation de l’embryon et la mort pendant l’incubation ultérieure.La troisième méthode que je vais introduire est l’infusion de cellules d’air. où vous instillez un contaminant gazeux dans la cellule de l’air. Nettoyez et manipulez les œufs comme décrit dans la section d’injection de cellules d’air.Et puis vous pouvez lire les œufs jusqu’au jour embryonnaire 17. Manipulez les œufs au jour embryonnaire 17 pour marquer la zone des cellules d’air. Au jour embryonnaire 18, sortez les œufs de l’incubateur, stérilisez la zone des cellules d’air et les instruments, avec de l’acétone.Et puis percez soigneusement deux petits trous sur les deux côtés de la cellule d’air. L’un est pour l’injection de gaz ou d’aérosol. L’autre est pour agrandir notre air.Contrôlez soigneusement la taille des trous, de sorte que le côté du trou d’injection soit juste suffisant pour que l’aiguille du cathéter soit insérée, tandis que le diamètre du trou en expansion doit être un peu plus grand. Environ un millimètre de diamètre. Maintenant, c’est le sac d’échantillon que nous utilisons pour contenir le gaz ou l’aérosol cible.Vous pouvez remplacer par n’importe quel appareil que vous utilisez. Versez doucement 10 mL de gaz ou d’aérosol dans une seringue. Et puis, attachez soigneusement la seringue à notre aiguille de cathéter avec la télécommande de l’aiguille interne pour qu’elle soit douce.Insérez doucement cette aiguille de cathéter dans le trou de perfusion. Une fois qu’il est là, appliquez une pression contre l’aiguille du cathéter. Il s’agit de minimiser les fuites du site d’injection.Un autre doigt peut être placé avec le trou d’expellation pour votre confirmation de perfusion. Si vous faites la perfusion doucement, le flux d’air du trou d’expulsement devrait être facilement ressenti. C’est l’air d’origine dans la cellule d’air qui est expulsé.Lorsque la perfusion est terminée, scellez immédiatement les deux trous. Ces bandes et le retour des œufs à votre incubateur. Je peux vous présenter notre processus d’évaluation des points de terminaison.Anesthésier complètement les animaux avec du pentobarbital 33 mg / kg. Injection IP testée par les ouvreurs. Ensuite, placez les poulets sur la table d’opération.Stériliser la région de l’abdomen et les électrodes avec de l’éthanol. Ensuite, insérez deux électrodes à aiguille des deux côtés de l’abdomen en continu. Assurez-vous que les aiguilles ne pénètrent pas dans la cavité abdominale en soulevant un peu la peau.Et insérez l’aiguille à partir de là. Une fois insérée, poussez soigneusement l’aiguille vers l’avant jusqu’à ce qu’elle atteigne le côté de la cavité thoracique. Assurez-vous que l’aiguille ne pénètre pas profondément dans le corps ou ne dépasse pas de la peau.Ensuite, effectuez les mesures avec un instrument électrocardiographique. D’autres instruments de séminaire capables d’ECG peuvent également être utilisés. Il s’agit de notre deuxième méthode d’évaluation du point final consiste à cartographier Motrin.C’est la section transversale du cœur sur le chemin de HME. C’est le bon ventricule avec lequel nous allons mesurer. Pour ce faire, nous utilisons deux règles.Règle 1 et règle 2. Maintenant, nous copions simplement la règle un sur l’écran et nous le redimensionnons à la taille appropriée, puis le faisons pivoter. Et nous le déplaçons de sorte que les deux extrémités de la ligne horizontale reposent sur les 2 extrémités des 3 parois du ventricule droit.Et maintenant, nous avons sept lignes de mesure qui traversent notre paroi de ventricule droit. Maintenant, nous copions également la règle secondaire dans l’image. Nous le redimensionnons également un peu et le faisons pivoter et le remplaçons afin qu’il soit placé de la même manière.Cette ligne horizontale est parallèle à la paroi externe du ventricule droit. Et la perpendiculaire traverserait le point où les lignes de la substance blanche de la règle rencontrent la paroi interne ou le ventricule droit. Et puis nous faisons des points de mesure afin qu’il puisse être mesuré plus tard avec l’image J.Nous répétons ce processus 7 fois par échantillon, de sorte que notre mesure représentative du ventricule droit.Je vais vous montrer un résumé des résultats actuels. Il s’agit de l’injection d’APFO dans l’œuf avant l’incubation, et vous pouvez voir qu’avec l’augmentation de celles de l’injection, la concentration sérique LPF dans le sérum a augmenté efficacement. Selon la démonstration, l’efficacité, de la micro injection.Vous pouvez voir que A est le contrôle, et le B, est l’endroit où l’antivirus exprime en grande fluorescence q protéine a été injecté. Vous pouvez voir une forte fluorescence. Et c’est la démonstration de l’efficacité de la perfusion d’épithélium.Vous pouvez voir qu’avec la perfusion, des changements spectaculaires de la fibre optique ont été observés dans le tissu du myocarde. D’accord. Et vous pouvez également voir que les intervalles R-R des poulets à couver 0, 1 et 2 semaines. Il a également changé de manière significative après l’infusion avec échappement diesel.Indiquant que vous tenez compte de cela, cette méthode. Ici, vous pouvez également voir que l’efficacité de la perfusion d’épithélium dans cet exemple. vous pouvez voir que les ventricules droits du cœur ont effectivement augmenté après avoir été infusés d’aérosol avec des gaz d’échappement diesel.Et aussi bien sûr, nous utilisons ici les méthodes histomorphométriques. Nous vous montrons simplement. C’est très efficace. D’accord.Ce sont toutes les méthodes que je vais vous présenter. J’espère que cela pourra faciliter le travail d’autres personnes avec l’embryon de poulet en tant qu’outil de recherche puissant en toxicologie du développement. Bonne journée.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

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Caractérisation des progéniteurs thymique décantation dans l&#39;embryon de souris Utilisation<em&gt; In Vivo</em&gt; Et<em&gt; In Vitro</em&gt; Essais

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Recherche

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