Name: using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities
Uploaded: 2021-03-21T15:00:00
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Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China unterstützt (Grant No. 91643203, 91543208, 81502835).

Alle beschriebenen Verfahren wurden vom Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) der Qingdao University genehmigt. In unserem Labor wurden die Eier in zwei Inkubatoren bebrütet. Eier wurden aufrecht im Inkubator gehalten und zufällig in die Regale gestellt. Die Inkubationsbedingungen für die Eier waren wie folgt: Die Inkubationstemperatur begann bei 37,9 ° C und sank allmählich auf 37,1 ° C im Laufe der Inkubation; die Luftfeuchtigkeit begann bei 50% und stieg allmählich auf 70%.
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<ol>
	<li>Kain, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+as+an+expanding+experimental+model+for+cancer+and+cardiovascular+research.">The chick embryo as an expanding experimental model for cancer and cardiovascular research.</a> Developmental Dynamics. 243 (2), 216-228 (2014).</li><li>Menna, T. M., Mortola, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+posture+on+the+respiratory+mechanics+of+the+chick+embryo.">Effects of posture on the respiratory mechanics of the chick embryo.</a> Journal of Experimental Zoology. 293 (5), 450-455 (2002).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. 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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfluorooctanoic+acid+induced-developmental+cardiotoxicity:+are+peroxisome+proliferator+activated+receptor+alpha+(PPARalpha)+and+bone+morphorgenic+protein+2+(BMP2)+pathways+involved.">Perfluorooctanoic acid induced-developmental cardiotoxicity: are peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPARalpha) and bone morphorgenic protein 2 (BMP2) pathways involved.</a> Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A. 76 (11), 635-650 (2013).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+levels+of+l-carnitine,+acetyl-l-carnitine+and+propionyl-l-carnitine+are+involved+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+in+chicken+embryo.">Changes in the levels of l-carnitine, acetyl-l-carnitine and propionyl-l-carnitine are involved in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity in chicken embryo.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 48, 116-124 (2016).</li><li>Zhao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+PPAR+alpha+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+and+l-carnitine+mediated+protection-Results+of+in+ovo+gene+silencing.">The role of PPAR alpha in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity and l-carnitine mediated protection-Results of in ovo gene silencing.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 56, 136-144 (2017).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particulate+Matter+2.5+Induced+Developmental+Cardiotoxicity+in+Chicken+Embryo+and+Hatchling.">Particulate Matter 2.5 Induced Developmental Cardiotoxicity in Chicken Embryo and Hatchling.</a> Front Pharmacol. 11, 841 (2020).</li><li>Molina, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+air+cell+injection+of+perfluorooctane+sulfonate+before+incubation+on+development+of+the+white+leghorn+chicken+(Gallus+domesticus)+embryo.">Effects of air cell injection of perfluorooctane sulfonate before incubation on development of the white leghorn chicken (Gallus domesticus) embryo.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 25 (1), 227-232 (2006).</li><li>Crump, D., Chiu, S., Williams, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl)+sulfone+decreases+embryonic+viability+and+alters+hepatic+mRNA+expression+at+two+distinct+developmental+stages+in+chicken+embryos+exposed+via+egg+injection.">Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl) sulfone decreases embryonic viability and alters hepatic mRNA expression at two distinct developmental stages in chicken embryos exposed via egg injection.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (2), 530-537 (2018).</li><li>Franci, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potency+of+polycyclic+aromatic+hydrocarbons+in+chicken+and+Japanese+quail+embryos.">Potency of polycyclic aromatic hydrocarbons in chicken and Japanese quail embryos.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (6), 1556-1564 (2018).</li><li>Rand, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+exposure+to+methylmercury+and+resultant+muscle+mercury+accumulation+and+adult+motor+deficits+in+mice.">Developmental exposure to methylmercury and resultant muscle mercury accumulation and adult motor deficits in mice.</a> Neurotoxicology. 81, 1-10 (2020).</li><li>Tanaka, T., Suzuki, T., Inomata, A., Moriyasu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+effects+of+maternal+exposure+to+fungicides+on+behavioral+development+in+F1+-generation+mice:+2.+Fixed-dose+study+of+thiabendazole.">Combined effects of maternal exposure to fungicides on behavioral development in F1 -generation mice: 2. Fixed-dose study of thiabendazole.</a> Birth Defects Research. , (2020).</li><li>Kofman, O., Lan, A., Raykin, E., Zega, K., Brodski, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+and+social+deficits+and+enhanced+sensitivity+to+prenatal+chlorpyrifos+in+PON1-/-+mouse+pups+and+adults.">Developmental and social deficits and enhanced sensitivity to prenatal chlorpyrifos in PON1-/- mouse pups and adults.</a> PLoS One. 15 (9), 0239738 (2020).</li><li>Kischel, A., Audouard, C., Fawal, M. A., Davy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ephrin-B2+paces+neuronal+production+in+the+developing+neocortex.">Ephrin-B2 paces neuronal production in the developing neocortex.</a> BMC Developmental Biology. 20 (1), 12 (2020).</li><li>Okolo, F., Zhang, G., Rhodes, J., Gittes, G. K., Potoka, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-Amniotic+Sildenafil+Treatment+Promotes+Lung+Growth+and+Attenuates+Vascular+Remodeling+in+an+Experimental+Model+of+Congenital+Diaphragmatic+Hernia.">Intra-Amniotic Sildenafil Treatment Promotes Lung Growth and Attenuates Vascular Remodeling in an Experimental Model of Congenital Diaphragmatic Hernia.</a> Fetal Diagnosis and Therapy. , 1-13 (2020).</li><li>Vyslouzil, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subchronic+continuous+inhalation+exposure+to+zinc+oxide+nanoparticles+induces+pulmonary+cell+response+in+mice.">Subchronic continuous inhalation exposure to zinc oxide nanoparticles induces pulmonary cell response in mice.</a> Journal of Trace Elements in Medicine and Biology. 61, 126511 (2020).</li><li>Wahle, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+neurological+effects+of+cerium+dioxide+nanoparticles+doped+with+different+amounts+of+zirconium+following+inhalation+exposure+in+mouse+models+of+Alzheimer's+and+vascular+disease.">Evaluation of neurological effects of cerium dioxide nanoparticles doped with different amounts of zirconium following inhalation exposure in mouse models of Alzheimer's and vascular disease.</a> Neurochemistry International. 138, 104755 (2020).</li><li>Tanabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-Dimensional+Echocardiography-+Role+in+Clinical+Practice+and+Future+Directions.">Three-Dimensional Echocardiography- Role in Clinical Practice and Future Directions.</a> Circ J. 84 (7), 1047-1054 (2020).</li></ol>

Der Hühnerembryo ist seit 200 Jahren ein klassisches Modell in Entwicklungsstudien1. Unsere in diesem Manuskript vorgestellten Methoden wurden bei der Bewertung mehrerer Umweltkontaminanten, einschließlich Perfluoroctansäure, Feinstaub und Dieselabgasen, mit Erfolg5,7,8,9,10,11,<sup class...

Der Hühnerembryo ist ein klassisches Entwicklungsmodell, das seit über zweihundert Jahren verwendet wird1. Das Hühnerembryo-Modell hat verschiedene Vorteile gegenüber traditionellen Modellen. Zunächst einmal war bereits vor über 70 Jahren die normale Entwicklung des Hühnerembros sehr deutlich im Hamburger-Hamilton Staging Guide2dargestellt worden, in dem insgesamt 46 Stadien während der Hühnerembryoentwicklung mit genauen zeitlichen und morphologischen Merkmalen definiert wurden, was den Nachweis abnormaler Entwicklungen erleichterte. Darüber hinaus weist das Hühnerembryomodell weitere Merkmale auf, wie z. B. relativ kostengünstig und redundant in der Menge, relativ genaue Expositionsdosiskontrollen, ein unabhängiges, geschlossenes System innerhalb der Schale und eine einfache Manipulation des sich entwickelnden Embryos, die alle sein Potenzial garantieren, als leistungsfähiges toxikologisches Bewertungsmodell verwendet zu werden. 
Bei der Kardiotoxizität weist der Hühnerembryo ein Vierkammerherz auf, ähnlich wie Säugetierherzen, aber mit dickeren Wänden, was eine einfachere morphologische Beurteilung ermöglicht. Darüber hinaus ermöglicht der Hühnerembryo eine Entwicklungsinhalationsexposition, die in Säugetiermodellen nicht möglich ist: Im späteren Entwicklungsstadium wechselt der Hühnerembryo von der inneren Atmung zur externen Atmung (Sauerstoff über die Lunge erhalten); Letzteres erfordert, dass der Embryo mit dem Schnabel in die Luftzellmembran eindringt und beginnt, Luft zu atmen3, wodurch die Luftzelle zu einer Mini-Inhalationskammer wird. Unter Ausnutzung dieses Phänomens können die toxikologischen Wirkungen von Gasverunreinigungen auf das Herz (und andere Organe) bewertet werden, ohne dass spezielle Inhalationskammerinstrumente erforderlich sind. 
In diesem Manuskript werden mehrere Expositions- / Endpunktbewertungsmethoden beschrieben, die alle dazu dienen, den Hühnerembryo zu einem leistungsfähigen Werkzeug bei der Beurteilung der Entwicklungskardiotoxizität nach Exposition gegenüber Umweltkontaminanten zu machen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4% phosphate buffered formaldehydefixative</td>
			<td>Biosharp, Hefei, China</td>
			<td>REF: BL539A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% ethanol</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosignaling monitor BL-420E+</td>
			<td>Taimeng, Chengdu, China</td>
			<td>BL-420E+</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Candling lamp</td>
			<td>Zhenwei, Dezhou, China</td>
			<td>WZ-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable syringe</td>
			<td>Zhiyu, Jiangsu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Egg incubator</td>
			<td>Keyu,Dezhou, China</td>
			<td>KFX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical balance</td>
			<td>OHAUS, Shanghai, China</td>
			<td>AR 224CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro-thermal incubator</td>
			<td>Shenxian, Shanghai, China</td>
			<td>DHP-9022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertile chicken egg</td>
			<td>Jianuo, Jining, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Staining Kit</td>
			<td>Beyotime, Bejing, China</td>
			<td>C0105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology paraffin</td>
			<td>Aladdin, Shanghai, China</td>
			<td>P100928-500g</td>
			<td>Melt point 52~54&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology paraffin</td>
			<td>Aladdin, Shanghai, China</td>
			<td>P100936-500g</td>
			<td>Melt point 62~64&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV catheter</td>
			<td>KDL, Zhejiang, China</td>
			<td></td>
			<td>The catheters have to be soft, plastic ones.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lentivirus</td>
			<td>Genechem, Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td>The lentivirus were individually designed/synthesized by Genechem.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson&#39;s trichrome staining kit</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>G1340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal probe</td>
			<td>Jinuotai, Beijing, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjector (5 uL)</td>
			<td>Anting,Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>CAIKON, Shanghai, China</td>
			<td>XSP-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td>HistoCore BIOCUT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blade</td>
			<td>Leica,Germany</td>
			<td>Leica 819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbitual sodium</td>
			<td>Yitai Technology Co. Ltd.,&#160; Wuhan, China</td>
			<td>CAS: 57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetter(10ul)</td>
			<td>Sartorius, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone iodide</td>
			<td>Longyuquan, Taian, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td>Anqisheng,Suzhou, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Kelun,Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sunflower oil</td>
			<td>Mighty Jiage, Jiangsu, China</td>
			<td></td>
			<td>Any commerical sunflower oil for human consumption should work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>M&#38;G, Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tedlar PVF Bag (5L)</td>
			<td>Delin, Dalian, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex mixer</td>
			<td>SCILOGEX, Rocky Hill, CT, US</td>
			<td>MX-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:1330-20-7</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities

Hühnerembryonen sind ein klassisches Modell in Entwicklungsstudien. Während der Entwicklung von Hühnerembryonen ist das Zeitfenster der Herzentwicklung gut definiert, und es ist relativ einfach, eine präzise und rechtzeitige Exposition durch mehrere Methoden zu erreichen. Darüber hinaus ähnelt der Prozess der Herzentwicklung bei Hühnerembryonen Säugetieren, was auch zu einem Vierkammerherz führt, was es zu einem wertvollen alternativen Modell bei der Beurteilung von Entwicklungskardiotoxizitäten macht. In unserem Labor wird das Hühnerembryomodell routinemäßig bei der Bewertung von Entwicklungskardiotoxizitäten nach Exposition gegenüber verschiedenen Umweltschadstoffen verwendet, darunter Per- und Polyfluoralkylsubstanzen (PFAS), Feinstaub (PMs), Dieselabgase (DE) und Nanomaterialien. Die Belichtungszeit kann je nach Bedarf frei gewählt werden, vom Beginn der Entwicklung (Embryonaltag 0, ED0) bis zum Tag vor dem Schlüpfen. Zu den wichtigsten Expositionsmethoden gehören Luftzellinjektion, direkte Mikroinjektion und Luftzellinhalation (ursprünglich in unserem Labor entwickelt), und die derzeit verfügbaren Endpunkte umfassen Herzfunktion (Elektrokardiographie), Morphologie (histologische Bewertungen) und molekularbiologische Bewertungen (Immunhistochemie, qRT-PCR, Western Blotting usw.). Natürlich hat das Hühnerembryomodell seine eigenen Grenzen, wie z.B. die begrenzte Verfügbarkeit von Antikörpern. Da jedoch immer mehr Labore beginnen, dieses Modell zu verwenden, kann es verwendet werden, um signifikante Beiträge zur Untersuchung von Entwicklungskardiotoxizitäten zu leisten.

Belichtungsergebnisse Luftzellen-Injektion Die Injektion von Luftzellen kann sich entwickelnde Hühnerembryonen effektiv verschiedenen Wirkstoffen aussetzen, die anschließend in den gesammelten Proben (Serum, Gewebe usw.) von Embryonen / schlüpfenden Hühnern nachgewiesen werden können. Hier ist ein Beispiel, bei dem Perfluoroctansäure (PFOA) in Luftzellen injiziert wurde und die Serum-PFOA-Konzentrationen dann mit Ultra-Performance-Flüssigkeitschromatographie-Massenspektrometrie bestimmt wurden. Die Serumkonz...

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Using Chicken Embryo as a Powerful Tool in Assessment of Developmental Cardiotoxicities

Hühnerembryonen werden als klassisches Entwicklungsmodell in unserem Labor verwendet, um Entwicklungskardiotoxizitäten nach Exposition gegenüber verschiedenen Umweltkontaminanten zu bewerten. Expositionsmethoden und morphologische/funktionelle Bewertungsmethoden werden in diesem Manuskript beschrieben.

Verwendung von Hühnerembryon als leistungsfähiges Werkzeug bei der Beurteilung von Entwicklungskardiotoxizitäten

Chicken embryos are a classical model in developmental studies. During the development of chicken embryos, the time window of heart development is ...

Hallo an alle. Ich bin Qixiao Jiang, außerordentlicher Professor an der Abteilung für Toxikologie, School of Public Health an der Qingdao University. Im Namen meiner Forschungsgruppe werde ich die Vorteile der Verwendung des Hühnerembros bei der Entwicklung unserer Kardiotoxizitätsbewertung vorstellen.Hühnerembryo ist ein klassisches Entwicklungsmodell, das mehrere Vorteile wie einfache Manipulation, hohe Zugänglichkeit, geschlossenes unabhängiges System usw. hat. Arbeiten mit mehreren Umweltschadstoffen wie phenolischer Gerbsäure. Dieselabgase, insbesondere die Materie auf den Kohlenstoff-Nanoröhren.Wir haben mehrere Expositionsmethoden im Labor etabliert, aber für größere Ursachen werden die funktionellen Bewertungen auch routinemäßig durchgeführt. In diesem Video zeige ich Ihnen die Details, die Belichtungsmethoden und die morphologischen Methoden zur funktionellen Beurteilung. Zögern Sie nicht, uns zu kontaktieren, wenn Sie interessiert sind.Vielen Dank. Hier sind unsere Belichtungsmethoden, die ich Ihnen vorstellen kann. Jetzt ist die erste Methode, die ich vorstellen werde, eine Luftzelleninjektion, bei der Sie direkt in die Luftzelle injizieren.Reinigen Sie die Oberfläche der Eier mit Polyiodidlösung. Dies ist eine kommerziell erhältliche Polyiodidlösung, verdünnt mit entionisiertem Wasser, 1/5. Und dann trockne ich die Eierschale mit Seidenpapier, ohne zu schrubben.Es ist wichtig, weil das Schrubben ihre Schutzschichtbeschichtung auf der Außenseite der Schale aufbricht. Alle Eier im dunklen Raum gereinigt und die Luftzelle mit einem Bleistift markiert. Eier mit Rissen auf der Schale ausschließen.Schließen Sie auch Eier mit Luftzellen an der Seite aus. Wenn das eine stumpfe Spitze hat, ist es sehr unwahrscheinlich, dass diese normal schlüpfen. Desinfizieren Sie den Luftzellenbereich sowie die Metallsonde mit 75% Alkohol.Wischen Sie sie trocken und bohren Sie dann mit der Sonde ein kleines Loch in der Mitte des Luftzellenbereichs. Stecken Sie die Sonde nicht tief in die Luftzelle. Brechen Sie stattdessen die Schale nur mit der Spitze der Sonde.Wenn das Loch immer noch nicht groß genug ist, brechen Sie die Schale in der Nähe des vorhandenen Lochs erneut auf, bis sie groß genug ist, um das Einsetzen der Spitze zu ermöglichen. Setzen Sie die Pipettenspitze in das Loch ein, wobei die Spitze die innere Membran berührt. Injizieren Sie die Mischung langsam und halten Sie sie mindestens 10 Sekunden lang dort.Dies soll es ermöglichen, das dosierte Öl vollständig zu dosieren. Und dann entfernen Sie die Spitze. Verschließen Sie nun das Loch mit einer Bürste und einem Tropfen geschmolzenem Paraffin.Achten Sie darauf, geschmolzenes Paraffin nicht auf das innere Gedächtnis zu tropfen. Nach dem Versiegeln legen Sie die Eier in den Inkubator, bis sie das gewünschte Embryonalstadium erreichen. Die zweite, die Methode, die ich vorstellen werde, ist die Mikroinjektion.Zunächst müssen die Eier gereinigt und gehandhabt werden, wie im Abschnitt Lufteinspritzung beschrieben. Dieses Verfahren muss in einer sterilisierten Kapuze durchgeführt werden. Sterilisieren Sie den Luftzellenbereich und instrumente mit Aceton.Bohren Sie mit der Metallsonde ein kleines Loch in der Mitte des Luftzellenbereichs. Stecken Sie die Sonde nicht tief in die Luftzelle, da sonst das innere Gedächtnis beschädigt werden kann. Verwenden Sie dann den gleichen Prozess, um das Loch vorsichtig zu vergrößern, bis der Durchmesser etwa zwei Millimeter beträgt.Dies kann die Verhältnisbestätigung des inneren Gedächtnisses ermöglichen. Dann laden Sie die Lösung in den Mikroinjektor und führen Sie die Nadel vorsichtig durch das Loch in die innere Membran für insgesamt etwa drei Millimeter ein. Dosieren Sie die Lösung vorsichtig und entfernen Sie dann die Nadel.Halten Sie die Nadel so senkrecht wie möglich. Verschließen Sie das Loch dünn mit einem kleinen Stück Klebeband. Decken Sie das Loch vollständig ab, um die Austrocknung des Embryos und den Tod während der anschließenden Inkubation zu verhindern.Die dritte Methode, die ich vorstellen werde, ist die Luftzelleninfusion. wo Sie eine Gasverunreinigung in die Luftzelle einflößen. Reinigen und behandeln Sie die Eier wie im Abschnitt Luftzelleninjektion beschrieben.Und dann können Sie Eier bis zum embryonalen Tag 17 lesen. Behandeln Sie die Eizellen am embryonalen Tag 17, um den Luftzellenbereich zu markieren. Nehmen Sie am embryonalen Tag 18 die Eier aus dem Inkubator, sterilisieren Sie den Luftzellenbereich und die Instrumente mit Aceton.Und dann bohren Sie vorsichtig zwei kleine Löcher auf zwei Seiten der Luftzelle. Einer ist für die Injektion von Gas oder Aerosol. Die andere ist für die Erweiterung unserer Luft.Kontrollieren Sie sorgfältig die Größe der Löcher, so dass die Seite des Injektionslochs gerade ausreicht, um die Katheternadel einzulegen, während der Durchmesser des expandierenden Lochs etwas größer sein sollte. Etwa ein Millimeter Durchmesser. Jetzt ist dies der Probenbeutel, den wir verwenden, um das Zielgas oder Aerosol zu halten.Sie können mit jedem Gerät, das Sie verwenden, ersetzen. Gießen Sie vorsichtig 10 ml Gas oder Aerosol in eine Spritze. Und dann befestigen Sie die Spritze vorsichtig mit der inneren Nadelfernbedienung an unserer Katheternadel, damit sie weich ist.Führen Sie diese Katheternadel vorsichtig in das Infusionsloch ein. Sobald es drin ist, drücken Sie Aufdruck auf die Katheternadel. Dies dient dazu, die Leckage von der Injektionsstelle zu minimieren.Ein weiterer Finger kann mit dem Ausstoßloch für Ihre Infusionsbestätigung herumgelegt werden. Wenn Sie die Infusion sanft durchführen, sollte der Luftstrom aus dem Ausstoßloch leicht zu spüren sein. Das ist originale Luft in der Luftzelle, die ausgestoßen wird.Wenn die Infusion abgeschlossen ist, versiegeln Sie beide Löcher sofort. Diese Bänder und die geben die Eier in Ihren Inkubator zurück. Ich kann unseren Endpunktbewertungsprozess vorstellen.Betäubung der Tiere mit Pentobarbital 33 mg/kg. IP-Injektion durch die Öffnungen getestet. Dann legen Sie Hühner auf den Operationstisch.Sterilisieren Sie den Bauchbereich und die Elektroden mit Ethanol. Führen Sie dann zwei Nadelelektroden von zwei Seiten des Abdomens sub kontinuierlich ein. Stellen Sie sicher, dass die Nadeln nicht in die Bauchhöhle gelangen, indem Sie die Haut ein wenig anheben.Und führen Sie die Nadel von dort ein. Drücken Sie die Nadel nach dem Einsetzen vorsichtig nach vorne, bis sie die Seite der Brusthöhle erreicht. Achten Sie darauf, dass die Nadel nicht tief in den Körper eindreckt oder aus der Haut herausragt.Dann nehmen Sie die Messungen mit einem elektrokardiographischen Instrument vor. Andere Seminarinstrumente, die EKG-fähig sind, können ebenso verwendet werden. Dies ist unsere zweite Endpunktbewertungsmethode, um Motrin zu kartieren.Dies ist der Querschnitt des Herzens im Weg von HME. Dies ist der richtige Ventrikel, mit dem wir messen werden. Dazu verwenden wir zwei Lineale.Lineal 1 und Lineal 2. Jetzt kopieren wir einfach das Lineal auf den Bildschirm und ändern die Größe auf die entsprechende Größe und drehen es dann. Und wir bewegen es so, dass die beiden Enden der horizontalen Linie auf den 2 Enden der 3 rechten Ventrikelwände ruhen.Und jetzt haben wir sieben Messlinien, die über unsere drei rechten Ventrikelwände verlaufen. Jetzt kopieren wir auch das sekundäre Lineal auf das Bild. Wir ändern auch die Größe ein wenig und drehen und ersetzen es, so dass es gleich platziert wird.Diese horizontale Linie verläuft parallel zur Außenwand des rechten Ventrikels. Und der senkrechte würde über den Punkt gehen, wo die weißen Linien des Herrschers auf die innere Wand oder den rechten Ventrikel treffen. Und dann machen wir Messpunkte, damit es später mit Bild J gemessen werden kann.Wir wiederholen diesen Vorgang 7 mal pro Probe, so dass unsere repräsentative Messung des rechten Ventrikels.Ich zeige Ihnen eine Zusammenfassung der aktuellen Ergebnisse. Dies ist die PFOA-Injektion in das Ei vor der Inkubation, und Sie können sehen, dass mit der Erhöhung der Serumkonzentration LPF im Serum effektiv erhöht wird. Laut der Demonstration, die Wirksamkeit, der Mikroinjektion.Sie können sehen, dass A Kontrolle ist, und das B ist, wo der Antivirus-Express in großer Fluoreszenz q Protein injiziert wurde. Sie können eine starke Fluoreszenz sehen. Und dies ist der Beweis für die Wirksamkeit der Epithelinfusion.Sie können sehen, dass mit der Infusion dramatische faseroptische Veränderungen im Myokardgewebe beobachtet wurden. Okay. Und Sie können auch sehen, dass die R-R-Intervalle der schlüpfenden Hühner 0, 1 und 2 Wochen. Es änderte sich auch signifikant nach der Infusion mit Dieselabgasen.Geben Sie an, dass Sie dies berücksichtigen, diese Methode. Hier können Sie auch sehen, dass die Wirksamkeit der Epithelinfusion in diesem Beispiel. Sie können sehen, dass die rechten Ventrikel des Herzens effektiv erhöht wurden, nachdem sie mit Dieselabgasen infundiert wurden.Und natürlich verwenden wir auch hier die histomorphometrischen Methoden. Wir zeigen es Ihnen einfach. Das ist sehr effektiv. Okay.Dies sind alle Methoden, die ich Ihnen vorstellen werde. Ich hoffe, dass dies die Arbeit anderer Menschen mit Hühnerembryonen als leistungsfähiges Forschungswerkzeug in der Entwicklungstoxikologie erleichtern kann. Schönen Tag.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

Charakterisierung von Thymic Einschwingzeit Vorläufern in der Mouse Embryo Verwendung<em&gt; In Vivo</em&gt; Und<em&gt; In-vitro-</em&gt; Assays

Characterizing thymic settling progenitors is important to understand the pre-thymic stages of T cell development, essential to devise strategies for T ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Microbead Implantation im Zebrafischembryo

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Grafting of Beads into Developing Chicken Embryo Limbs to Identify Signal Transduction Pathways Affecting Gene Expression

Pfropfen von Beads in die Entwicklung von Hühnerembryo-Glieder zu identifizieren Signaltransduktionswegen Beeinflussung der Genexpression

Using chicken embryos it is possible to test directly the effects of either growth factors or specific inhibitors of signaling pathways on gene expression ...

In Ovo Electroporation in the Chicken Auditory Brainstem

In Ovo Electroporation in the Chicken Auditory Brainstem

In Ovo Electroporation im Hühnchen auditorischen Hirnstamm

Electroporation is a method that introduces genes of interest into biologically relevant organisms like the chicken embryo. It is long established that ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Organotypischen Kultur-Methode, die Entwicklung der embryonalen Gewebe zu studieren

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

Minimal invasiven Embryotransfer und Embryo-Vitrifizierung auf der Optimal-Botn-Bühne im Kaninchenmodell

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging und Analyse von Muskelkontraktionen im Drosophila-Embryo

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

X-ray Diffraction of Intact Murine Skeletal Muscle as a Tool for Studying the Structural Basis of Muscle Disease

Röntgenbeugung von intakten Murine Skelettmuskel als Werkzeug zur Untersuchung der strukturellen Basis von Muskelerkrankungen

Transgenic mouse models have been important tools for studying the relationship of genotype to phenotype for human diseases including those of skeletal ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Bewertung von oxidativen Schäden in den primären Maus-Augen-Oberflächenzellen/Stammzellen als Reaktion auf Uv-C-Schäden (UV-C)

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

Using Immunofluorescence to Detect PM2.5-induced DNA Damage in Zebrafish Embryo Hearts

Using Immunofluorescence to Detect PM2.5-induced DNA Damage in Zebrafish Embryo Hearts

Verwendung von Immunfluoreszenz zum Nachweis von PM2,5-induziertenDNA-Schäden in Zebrafisch-Embryoherzen

Ambient fine particulate matter (PM2.5) exposure can lead to cardiac developmental toxicity but the underlying molecular mechanisms are still unclear. ...