Name: using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities
Uploaded: 2021-03-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Chicken Embryo as a Powerful Tool in Assessment of Developmental Cardiotoxicities at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (Grant No. 91643203, 91543208, 81502835).

Tutte le procedure descritte sono state approvate dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) dell'Università di Qingdao. Nel nostro laboratorio, le uova sono state incubate in due incubatrici. Le uova sono state tenute in posizione verticale nell'incubatrice e posizionate casualmente sugli scaffali. Le condizioni di incubazione per le uova erano le seguenti: la temperatura di incubazione è iniziata a 37,9 °C e gradualmente è diminuita a 37,1 °C man mano che procedeva l'incubazione; l'umidità è inizia...

<ol>
	<li>Kain, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+as+an+expanding+experimental+model+for+cancer+and+cardiovascular+research.">The chick embryo as an expanding experimental model for cancer and cardiovascular research.</a> Developmental Dynamics. 243 (2), 216-228 (2014).</li><li>Menna, T. M., Mortola, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+posture+on+the+respiratory+mechanics+of+the+chick+embryo.">Effects of posture on the respiratory mechanics of the chick embryo.</a> Journal of Experimental Zoology. 293 (5), 450-455 (2002).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88 (1), 49-92 (1951).</li><li>Yamamoto, F. Y., Neto, F. F., Freitas, P. F., Oliveira Ribeiro, C. A., Ortolani-Machado, C. 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F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+evidence+of+neurotoxic+effects+in+chicken+embryos+after+exposure+to+perfluorooctanoic+acid+(PFOA)+and+inorganic+cadmium.">Morphological evidence of neurotoxic effects in chicken embryos after exposure to perfluorooctanoic acid (PFOA) and inorganic cadmium.</a> Toxicology. 4227, 152286 (2019).</li><li>Jiang, Q., Lust, R. M., Strynar, M. J., Dagnino, S., DeWitt, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perflurooctanoic+acid+induces+developmental+cardiotoxicity+in+chicken+embryos+and+hatchlings.">Perflurooctanoic acid induces developmental cardiotoxicity in chicken embryos and hatchlings.</a> Toxicology. 293 (1-3), 97-106 (2012).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+ovo+very+early-in-life+exposure+to+diesel+exhaust+induced+cardiopulmonary+toxicity+in+a+hatchling+chick+model.">In ovo very early-in-life exposure to diesel exhaust induced cardiopulmonary toxicity in a hatchling chick model.</a> Environmental Pollution. 264, 114718 (2020).</li><li>Jiang, Q., Lust, R. M., DeWitt, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfluorooctanoic+acid+induced-developmental+cardiotoxicity:+are+peroxisome+proliferator+activated+receptor+alpha+(PPARalpha)+and+bone+morphorgenic+protein+2+(BMP2)+pathways+involved.">Perfluorooctanoic acid induced-developmental cardiotoxicity: are peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPARalpha) and bone morphorgenic protein 2 (BMP2) pathways involved.</a> Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A. 76 (11), 635-650 (2013).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+levels+of+l-carnitine,+acetyl-l-carnitine+and+propionyl-l-carnitine+are+involved+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+in+chicken+embryo.">Changes in the levels of l-carnitine, acetyl-l-carnitine and propionyl-l-carnitine are involved in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity in chicken embryo.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 48, 116-124 (2016).</li><li>Zhao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+PPAR+alpha+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+and+l-carnitine+mediated+protection-Results+of+in+ovo+gene+silencing.">The role of PPAR alpha in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity and l-carnitine mediated protection-Results of in ovo gene silencing.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 56, 136-144 (2017).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particulate+Matter+2.5+Induced+Developmental+Cardiotoxicity+in+Chicken+Embryo+and+Hatchling.">Particulate Matter 2.5 Induced Developmental Cardiotoxicity in Chicken Embryo and Hatchling.</a> Front Pharmacol. 11, 841 (2020).</li><li>Molina, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+air+cell+injection+of+perfluorooctane+sulfonate+before+incubation+on+development+of+the+white+leghorn+chicken+(Gallus+domesticus)+embryo.">Effects of air cell injection of perfluorooctane sulfonate before incubation on development of the white leghorn chicken (Gallus domesticus) embryo.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 25 (1), 227-232 (2006).</li><li>Crump, D., Chiu, S., Williams, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl)+sulfone+decreases+embryonic+viability+and+alters+hepatic+mRNA+expression+at+two+distinct+developmental+stages+in+chicken+embryos+exposed+via+egg+injection.">Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl) sulfone decreases embryonic viability and alters hepatic mRNA expression at two distinct developmental stages in chicken embryos exposed via egg injection.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (2), 530-537 (2018).</li><li>Franci, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potency+of+polycyclic+aromatic+hydrocarbons+in+chicken+and+Japanese+quail+embryos.">Potency of polycyclic aromatic hydrocarbons in chicken and Japanese quail embryos.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (6), 1556-1564 (2018).</li><li>Rand, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+exposure+to+methylmercury+and+resultant+muscle+mercury+accumulation+and+adult+motor+deficits+in+mice.">Developmental exposure to methylmercury and resultant muscle mercury accumulation and adult motor deficits in mice.</a> Neurotoxicology. 81, 1-10 (2020).</li><li>Tanaka, T., Suzuki, T., Inomata, A., Moriyasu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+effects+of+maternal+exposure+to+fungicides+on+behavioral+development+in+F1+-generation+mice:+2.+Fixed-dose+study+of+thiabendazole.">Combined effects of maternal exposure to fungicides on behavioral development in F1 -generation mice: 2. Fixed-dose study of thiabendazole.</a> Birth Defects Research. , (2020).</li><li>Kofman, O., Lan, A., Raykin, E., Zega, K., Brodski, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+and+social+deficits+and+enhanced+sensitivity+to+prenatal+chlorpyrifos+in+PON1-/-+mouse+pups+and+adults.">Developmental and social deficits and enhanced sensitivity to prenatal chlorpyrifos in PON1-/- mouse pups and adults.</a> PLoS One. 15 (9), 0239738 (2020).</li><li>Kischel, A., Audouard, C., Fawal, M. A., Davy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ephrin-B2+paces+neuronal+production+in+the+developing+neocortex.">Ephrin-B2 paces neuronal production in the developing neocortex.</a> BMC Developmental Biology. 20 (1), 12 (2020).</li><li>Okolo, F., Zhang, G., Rhodes, J., Gittes, G. K., Potoka, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-Amniotic+Sildenafil+Treatment+Promotes+Lung+Growth+and+Attenuates+Vascular+Remodeling+in+an+Experimental+Model+of+Congenital+Diaphragmatic+Hernia.">Intra-Amniotic Sildenafil Treatment Promotes Lung Growth and Attenuates Vascular Remodeling in an Experimental Model of Congenital Diaphragmatic Hernia.</a> Fetal Diagnosis and Therapy. , 1-13 (2020).</li><li>Vyslouzil, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subchronic+continuous+inhalation+exposure+to+zinc+oxide+nanoparticles+induces+pulmonary+cell+response+in+mice.">Subchronic continuous inhalation exposure to zinc oxide nanoparticles induces pulmonary cell response in mice.</a> Journal of Trace Elements in Medicine and Biology. 61, 126511 (2020).</li><li>Wahle, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+neurological+effects+of+cerium+dioxide+nanoparticles+doped+with+different+amounts+of+zirconium+following+inhalation+exposure+in+mouse+models+of+Alzheimer's+and+vascular+disease.">Evaluation of neurological effects of cerium dioxide nanoparticles doped with different amounts of zirconium following inhalation exposure in mouse models of Alzheimer's and vascular disease.</a> Neurochemistry International. 138, 104755 (2020).</li><li>Tanabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-Dimensional+Echocardiography-+Role+in+Clinical+Practice+and+Future+Directions.">Three-Dimensional Echocardiography- Role in Clinical Practice and Future Directions.</a> Circ J. 84 (7), 1047-1054 (2020).</li></ol>

L'embrione di pollo è stato un modello classico negli studi sullo sviluppo per 200 anni1. I nostri metodi presentati in questo manoscritto sono stati utilizzati nella valutazione di diversi contaminanti ambientali, tra cui acido perfluoroottanoico, particolato e gas di scarico diesel con successo5,7,8,9,10,...

L'embrione di pollo è un modello di sviluppo classico, che è stato utilizzato per oltre duecento anni1. Il modello di embrione di pollo ha vari vantaggi rispetto ai modelli tradizionali. Prima di tutto, già oltre 70 anni fa, il normale sviluppo dell'embrione di pollo era stato illustrato molto chiaramente nella guida alla stadiazione Hamburger-Hamilton2, in cui un totale di 46 fasi durante lo sviluppo dell'embrione di pollo sono state definite con precise caratteristiche temporali e morfologiche, facilitando il rilevamento di uno sviluppo anormale. Inoltre, il modello di embrione di pollo ha altre caratteristiche come l'essere relativamente a basso costo e ridondante in quantità, controlli relativamente accurati della dose di esposizione, un sistema indipendente e chiuso all'interno del guscio e una facile manipolazione dell'embrione in via di sviluppo, il che garantisce il suo potenziale per essere utilizzato come un potente modello di valutazione tossicologica. 
In cardiotossicità, l'embrione di pollo presenta un cuore a quattro camere, simile ai cuori dei mammiferi ma con pareti più spesse, consentendo valutazioni morfologiche più facili. Inoltre, l'embrione di pollo consente l'esposizione per inalazione dello sviluppo, che non è possibile nei modelli di mammiferi: durante la fase successiva dello sviluppo, l'embrione di pollo passerà dalla respirazione interna alla respirazione esterna (ottenendo ossigeno attraverso il polmone); quest'ultimo richiede che l'embrione penetri nella membrana cellulare dell'aria con il becco e inizi a respirare aria3, rendendo la cellula aerea una mini-camera di inalazione. Utilizzando questo fenomeno, gli effetti tossicologici dei contaminanti gassosi sul cuore (e su altri organi) possono essere valutati senza la necessità di strumenti dedicati alla camera di inalazione. 
In questo manoscritto sono descritti diversi metodi di valutazione dell'esposizione / endpoint, che servono a rendere l'embrione di pollo un potente strumento nella valutazione della cardiotossicità dello sviluppo a seguito dell'esposizione a contaminanti ambientali.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4% phosphate buffered formaldehydefixative</td>
			<td>Biosharp, Hefei, China</td>
			<td>REF: BL539A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% ethanol</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosignaling monitor BL-420E+</td>
			<td>Taimeng, Chengdu, China</td>
			<td>BL-420E+</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Candling lamp</td>
			<td>Zhenwei, Dezhou, China</td>
			<td>WZ-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable syringe</td>
			<td>Zhiyu, Jiangsu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Egg incubator</td>
			<td>Keyu,Dezhou, China</td>
			<td>KFX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical balance</td>
			<td>OHAUS, Shanghai, China</td>
			<td>AR 224CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro-thermal incubator</td>
			<td>Shenxian, Shanghai, China</td>
			<td>DHP-9022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertile chicken egg</td>
			<td>Jianuo, Jining, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Staining Kit</td>
			<td>Beyotime, Bejing, China</td>
			<td>C0105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology paraffin</td>
			<td>Aladdin, Shanghai, China</td>
			<td>P100928-500g</td>
			<td>Melt point 52~54&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology paraffin</td>
			<td>Aladdin, Shanghai, China</td>
			<td>P100936-500g</td>
			<td>Melt point 62~64&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV catheter</td>
			<td>KDL, Zhejiang, China</td>
			<td></td>
			<td>The catheters have to be soft, plastic ones.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lentivirus</td>
			<td>Genechem, Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td>The lentivirus were individually designed/synthesized by Genechem.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson&#39;s trichrome staining kit</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>G1340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal probe</td>
			<td>Jinuotai, Beijing, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjector (5 uL)</td>
			<td>Anting,Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>CAIKON, Shanghai, China</td>
			<td>XSP-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td>HistoCore BIOCUT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blade</td>
			<td>Leica,Germany</td>
			<td>Leica 819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbitual sodium</td>
			<td>Yitai Technology Co. Ltd.,&#160; Wuhan, China</td>
			<td>CAS: 57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetter(10ul)</td>
			<td>Sartorius, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone iodide</td>
			<td>Longyuquan, Taian, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td>Anqisheng,Suzhou, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Kelun,Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sunflower oil</td>
			<td>Mighty Jiage, Jiangsu, China</td>
			<td></td>
			<td>Any commerical sunflower oil for human consumption should work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>M&#38;G, Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tedlar PVF Bag (5L)</td>
			<td>Delin, Dalian, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex mixer</td>
			<td>SCILOGEX, Rocky Hill, CT, US</td>
			<td>MX-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:1330-20-7</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities

Gli embrioni di pollo sono un modello classico negli studi sullo sviluppo. Durante lo sviluppo degli embrioni di pollo, la finestra temporale dello sviluppo del cuore è ben definita ed è relativamente facile ottenere un'esposizione precisa e tempestiva attraverso più metodi. Inoltre, il processo di sviluppo cardiaco negli embrioni di pollo è simile ai mammiferi, risultando anche in un cuore a quattro camere, rendendolo un valido modello alternativo nella valutazione delle cardiotossicità dello sviluppo. Nel nostro laboratorio, il modello dell'embrione di pollo viene utilizzato abitualmente nella valutazione delle cardiotossicità dello sviluppo a seguito dell'esposizione a vari inquinanti ambientali, tra cui sostanze per- e polifluoroalchiliche (PFAS), particolato (PM), gas di scarico diesel (DE) e nano materiali. Il tempo di esposizione può essere liberamente selezionato in base alle necessità, dall'inizio dello sviluppo (giorno embrionale 0, ED0) fino al giorno prima della schiusa. I principali metodi di esposizione includono l'iniezione di cellule aeree, la microiniezione diretta e l'inalazione di cellule aeree (originariamente sviluppate nel nostro laboratorio), e gli endpoint attualmente disponibili includono la funzione cardiaca (elettrocardiografia), la morfologia (valutazioni istologiche) e le valutazioni biologiche molecolari (immunoistochimica, qRT-PCR, western blotting, ecc.). Naturalmente, il modello di embrione di pollo ha i suoi limiti, come la limitata disponibilità di anticorpi. Tuttavia, con più laboratori che iniziano a utilizzare questo modello, può essere utilizzato per dare contributi significativi allo studio delle cardiotossicità dello sviluppo.

Risultati dell'esposizione Iniezione di celle d'aria L'iniezione di cellule aeree può esporre efficacemente lo sviluppo di embrioni di pollo a vari agenti, che possono essere successivamente rilevati nei campioni raccolti (siero, tessuto, ecc.) di embrioni / polli da cova. Ecco un esempio, in cui l'acido perfluoroottonico (PFOA) è stato iniettato da cellule d'aria e le concentrazioni sieriche di PFOA sono state quindi determinate con cromatografia liquida ad alte prestazioni-spettrometria di massa. Le concentrazi...

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Using Chicken Embryo as a Powerful Tool in Assessment of Developmental Cardiotoxicities

Gli embrioni di pollo, come modello di sviluppo classico, vengono utilizzati nel nostro laboratorio per valutare le cardiotossicità dello sviluppo a seguito dell'esposizione a vari contaminanti ambientali. I metodi di esposizione e i metodi di valutazione morfologica/funzionale stabiliti sono descritti in questo manoscritto.

Utilizzo dell'embrione di pollo come potente strumento nella valutazione delle cardiotossicità dello sviluppo

Chicken embryos are a classical model in developmental studies. During the development of chicken embryos, the time window of heart development is ...

Ciao a tutti. Sono Qixiao Jiang, professore associato presso il Dipartimento di Tossicologia, Scuola di Sanità Pubblica dell'Università di Qingdao. A nome del mio gruppo di ricerca, presenterò le risorse dell'utilizzo dell'embrione di pollo nello sviluppo della nostra valutazione della cardiotossicità.L'embrione di pollo è un modello di sviluppo classico che ha molteplici vantaggi come la facile manipolazione, l'alta accessibilità, il sistema indipendente chiuso, eccetera. Lavorare con più inquinanti ambientali, come l'acido tannico fenolico. Scarico diesel, in particolare la questione sui nanotubi di carbonio.Abbiamo un metodo di esposizione multipla stabilito in laboratorio, ma per una causa più grande, anche le valutazioni funzionali vengono eseguite di routine. In questo video, ti mostrerò i dettagli, i metodi di esposizione e i metodi di valutazione funzionale morfologica. Non esitate a contattarci se siete interessati.Grazie. Ecco i nostri metodi di esposizione che posso presentarvi. Ora il primo metodo che sto per introdurre è un'iniezione di cellule d'aria, in cui inietterai direttamente nella cella d'aria.Pulire la superficie delle uova con una soluzione di poli-ioduro. Questa è una soluzione di poli-ioduro disponibile in commercio, diluita con acqua deionizzata, 1/5. E poi, asciugo il guscio d'uovo con carta velina, senza strofinare.È importante perché lo scrubbing romperà il rivestimento dello strato protettivo all'esterno del guscio. Pulito tutte le uova nella stanza buia e segnare la cella d'aria con una matita. Escludere le uova con crepe sul guscio.Escludere anche le uova con celle d'aria sul lato. Se questo ha una punta smussata, è altamente improbabile che si schiudano normalmente. Disinfettare l'area della cella d'aria, così come la sonda metallica, con il 75% di alcol.Asciugarli e quindi praticare un piccolo foro al centro dell'area della cella d'aria con la sonda. Non infilare la sonda in profondità nella cella d'aria. Invece, rompere il guscio solo con la punta della sonda.Se il foro non è ancora abbastanza grande, rompere nuovamente il guscio in prossimità del foro esistente, fino a quando non è abbastanza grande da consentire l'inserimento della punta. Inserire la punta della pipetta nel foro con la punta che tocca la membrana interna. Lentamente, iniettare la miscela e tenerla lì per almeno 10 secondi.Questo per consentire all'olio erogato di essere completamente erogato. E poi rimuovere la punta. Ora, sigilla il buco con un pennello e una goccia di paraffina fusa.Fare attenzione a non gocciolare paraffina fusa sulla memoria interna. Una volta sigillate, mettere le uova nell'incubatrice fino a quando non raggiungono lo stadio embrionale desiderato. Il secondo, il metodo che sto per introdurre è la Micro iniezione.Prima di tutto, le uova devono essere pulite e maneggiate come descritto nella sezione di iniezione d'aria. Questa procedura deve essere eseguita in cappuccio sterilizzato. Sterilizzare l'area delle cellule d'aria e gli strumenti con acetone.Praticare un piccolo foro al centro dell'area della cella d'aria con la sonda metallica. Non infilare la sonda in profondità nella cella d'aria o la memoria interna potrebbe essere danneggiata. Quindi, utilizzare lo stesso processo per ingrandire attentamente il foro fino a quando il diametro è di circa due millimetri.Ciò può consentire la conferma del rapporto della memoria interna. Quindi caricare la soluzione in microiniettore e inserire con attenzione l'ago attraverso il foro nella membrana interna per circa tre millimetri totali. Erogare delicatamente la soluzione e quindi rimuovere l'ago.Tenere l'ago il più perpendicolare possibile. Sigillare sottile il foro con un piccolo pezzo di nastro. Coprire completamente il foro per prevenire la disidratazione e la morte dell'embrione durante la successiva incubazione.Il terzo metodo che sto per introdurre è l'infusione di cellule d'aria. dove si instilla un contaminante gassoso nella cella dell'aria. Pulire e maneggiare le uova come descritto nella sezione di iniezione delle cellule d'aria.E poi puoi leggere le uova fino al giorno embrionale 17. Maneggiare le uova al giorno embrionale 17 per contrassegnare l'area delle cellule aeree. Al giorno embrionale 18, togliere le uova dall'incubatrice, sterilizzare l'area delle cellule aeree e gli strumenti, con acetone.E poi praticare con cura due piccoli fori su due lati della cella d'aria. Uno è per iniezione di gas o aerosol. L'altro è per espandere la nostra aria.Controllare attentamente le dimensioni dei fori, in modo che il lato del foro di iniezione sia appena sufficiente per l'inserimento dell'ago del catetere, mentre il diametro del foro di espansione dovrebbe essere un po 'più grande. Circa un millimetro di diametro. Ora questo è il sacchetto campione che usiamo per contenere il gas o l'aerosol bersaglio.Puoi sostituire con qualsiasi dispositivo tu usi. Versare delicatamente 10 ml di gas o aerosol in una siringa. E poi, attacca con attenzione la siringa al nostro ago del catetere con il telecomando dell'ago interno in modo che sia morbido.Inserire delicatamente questo ago del catetere nel foro di infusione. Una volta che è lì, applicare pressione contro l'ago del catetere. Questo per ridurre al minimo la perdita dal sito di iniezione.Un altro dito può essere messo in giro con il foro di espellere per la conferma dell'infusione. Se si esegue l'infusione delicatamente, il flusso d'aria dal foro di espellere deve essere facilmente percepito. Questa è l'aria originale nella cella d'aria che viene espulsa.Al termine dell'infusione, sigillare immediatamente entrambi i fori. Questi nastri e il ritorno delle uova alla tua incubatrice. Posso introdurre il nostro processo di valutazione degli endpoint.Anestetizzare completamente gli animali con pentobarbital 33 mg/kg. Iniezione IP testata dalle aperture. Quindi posizionare i polli sul tavolo operatorio.Sterilizzare l'area dell'addome e gli elettrodi con etanolo. Quindi, inserire due elettrodi ad ago da due lati dell'addome sub continuamente. Assicurarsi che gli aghi non entrino nella cavità dell'addome sollevando un po 'la pelle.E inserisci l'ago da lì. Una volta inserito, spingere con attenzione l'ago in avanti fino a raggiungere il lato della cavità toracica. Assicurarsi che l'ago non vada in profondità nel corpo o scuota dalla pelle.Quindi effettuare le misurazioni con uno strumento elettrocardiografico. Possono essere utilizzati anche altri strumenti del Seminario in grado di ECG. Questo è il nostro secondo metodo di valutazione del punto finale è quello di mappare per Motrin.Questa è la sezione trasversale del cuore nel modo di HME. Questo è il ventricolo giusto con cui misureremo. Per fare questo, usiamo due righelli.Righello 1 e righello 2. Ora copiamo semplicemente il righello uno sullo schermo e lo ridimensionamo alla dimensione appropriata e quindi lo ruotiamo. E lo spostiamo in modo che le due estremità della linea orizzontale riposino sulle 2 estremità delle 3 pareti del ventricolo destro.E ora abbiamo sette linee di misurazione che attraversano la nostra parete a tre ventricoli destro. Ora copiamo anche il righello secondario nell'immagine. Lo ridimensionamo anche un po 'e lo ruotiamo e lo sostituiamo in modo che venga posizionato allo stesso modo.Questa linea orizzontale va parallela alla parete esterna del ventricolo destro. E quello perpendicolare attraverserebbe il punto in cui le linee della sostanza bianca del sovrano incontrano la parete interna o il ventricolo destro. E poi facciamo punti di misurazione in modo che possa essere misurato in seguito con l'immagine J.Ripetiamo questo processo 7 volte per campione, in modo che la nostra misurazione rappresentativa del ventricolo destro.Ti mostrerò un riepilogo dei risultati attuali. Questa è l'iniezione di PFOA nell'uovo prima dell'incubazione, e puoi vedere che con l'aumento di quelli dell'iniezione la concentrazione sierica di LPF nel siero è aumentata efficacemente. Per la dimostrazione, l'efficacia, della micro iniezione.Puoi vedere che A è controllo, e il B, è dove l'antivirus esprime in grande fluorescenza la proteina q è stata iniettata. Puoi vedere una forte fluorescenza. E questa è la dimostrazione dell'efficacia dell'infusione di epitelio.Puoi vedere che con l'infusione sono stati osservati drammatici cambiamenti della fibra ottica nel tessuto del miocardio. Ok. E puoi anche vedere che gli intervalli R-R dei polli da cova 0, 1 e 2 settimane. È anche cambiato significativamente dopo l'infusione con scarico diesel.Indicando che si tiene conto di questo, questo metodo. Qui, puoi anche vedere che l'efficacia dell'infusione di epitelio in questo esempio. puoi vedere che i ventricoli giusti del cuore sono aumentati efficacemente dopo essere stati infusi con lo scarico diesel.E anche, naturalmente, qui stiamo usando i metodi istomorfometrici. Ti mostriamo e basta. Questo è abbastanza efficace. Ok.Questi sono tutti i metodi che vi presenterò. Spero che questo possa facilitare il lavoro di altre persone con l'embrione di pollo come potente strumento di ricerca nella tossicologia dello sviluppo. Buona Giornata.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

Caratterizzazione di timica assestamento Progenitori nell&#39;embrione mouse Uso<em&gt; In Vivo</em&gt; E<em&gt; In Vitro</em&gt; Saggi

Characterizing thymic settling progenitors is important to understand the pre-thymic stages of T cell development, essential to devise strategies for T ...

Ricerca

Biologia dello sviluppo

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