Name: using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities
Uploaded: 2021-03-21T15:00:00
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この研究は、中国国立自然科学財団(グラント・91643203、91543208、81502835)によって支援されました。

記載されているすべての手順は、青島大学の施設動物のケアと使用委員会(IACUC)によって承認されました。私たちの研究室では、卵を2つのインキュベーターでインキュベーターでインキュベートしました。卵はインキュベーターで直立して保持され、無作為に棚に置かれました。卵のインキュベーション条件は次の通りであった:インキュベーション温度は37.9°Cで始まり、インキュベーション...

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	<li>Kain, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+as+an+expanding+experimental+model+for+cancer+and+cardiovascular+research.">The chick embryo as an expanding experimental model for cancer and cardiovascular research.</a> Developmental Dynamics. 243 (2), 216-228 (2014).</li><li>Menna, T. M., Mortola, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+posture+on+the+respiratory+mechanics+of+the+chick+embryo.">Effects of posture on the respiratory mechanics of the chick embryo.</a> Journal of Experimental Zoology. 293 (5), 450-455 (2002).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88 (1), 49-92 (1951).</li><li>Yamamoto, F. Y., Neto, F. F., Freitas, P. F., Oliveira Ribeiro, C. A., Ortolani-Machado, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadmium+effects+on+early+development+of+chick+embryos.">Cadmium effects on early development of chick embryos.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 34 (2), 548-555 (2012).</li><li>Lv, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+bone+morphogenetic+protein+2+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+and+l-carnitine+mediated+protection.">The roles of bone morphogenetic protein 2 in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity and l-carnitine mediated protection.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. 352, 68-76 (2018).</li><li>Kmecick, M., Vieira da Costa, M. C., Oliveria Ribeiro, C. A., Ortolani-Machado, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+evidence+of+neurotoxic+effects+in+chicken+embryos+after+exposure+to+perfluorooctanoic+acid+(PFOA)+and+inorganic+cadmium.">Morphological evidence of neurotoxic effects in chicken embryos after exposure to perfluorooctanoic acid (PFOA) and inorganic cadmium.</a> Toxicology. 4227, 152286 (2019).</li><li>Jiang, Q., Lust, R. M., Strynar, M. J., Dagnino, S., DeWitt, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perflurooctanoic+acid+induces+developmental+cardiotoxicity+in+chicken+embryos+and+hatchlings.">Perflurooctanoic acid induces developmental cardiotoxicity in chicken embryos and hatchlings.</a> Toxicology. 293 (1-3), 97-106 (2012).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+ovo+very+early-in-life+exposure+to+diesel+exhaust+induced+cardiopulmonary+toxicity+in+a+hatchling+chick+model.">In ovo very early-in-life exposure to diesel exhaust induced cardiopulmonary toxicity in a hatchling chick model.</a> Environmental Pollution. 264, 114718 (2020).</li><li>Jiang, Q., Lust, R. M., DeWitt, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfluorooctanoic+acid+induced-developmental+cardiotoxicity:+are+peroxisome+proliferator+activated+receptor+alpha+(PPARalpha)+and+bone+morphorgenic+protein+2+(BMP2)+pathways+involved.">Perfluorooctanoic acid induced-developmental cardiotoxicity: are peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPARalpha) and bone morphorgenic protein 2 (BMP2) pathways involved.</a> Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A. 76 (11), 635-650 (2013).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+levels+of+l-carnitine,+acetyl-l-carnitine+and+propionyl-l-carnitine+are+involved+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+in+chicken+embryo.">Changes in the levels of l-carnitine, acetyl-l-carnitine and propionyl-l-carnitine are involved in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity in chicken embryo.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 48, 116-124 (2016).</li><li>Zhao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+PPAR+alpha+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+and+l-carnitine+mediated+protection-Results+of+in+ovo+gene+silencing.">The role of PPAR alpha in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity and l-carnitine mediated protection-Results of in ovo gene silencing.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 56, 136-144 (2017).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particulate+Matter+2.5+Induced+Developmental+Cardiotoxicity+in+Chicken+Embryo+and+Hatchling.">Particulate Matter 2.5 Induced Developmental Cardiotoxicity in Chicken Embryo and Hatchling.</a> Front Pharmacol. 11, 841 (2020).</li><li>Molina, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+air+cell+injection+of+perfluorooctane+sulfonate+before+incubation+on+development+of+the+white+leghorn+chicken+(Gallus+domesticus)+embryo.">Effects of air cell injection of perfluorooctane sulfonate before incubation on development of the white leghorn chicken (Gallus domesticus) embryo.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 25 (1), 227-232 (2006).</li><li>Crump, D., Chiu, S., Williams, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl)+sulfone+decreases+embryonic+viability+and+alters+hepatic+mRNA+expression+at+two+distinct+developmental+stages+in+chicken+embryos+exposed+via+egg+injection.">Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl) sulfone decreases embryonic viability and alters hepatic mRNA expression at two distinct developmental stages in chicken embryos exposed via egg injection.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (2), 530-537 (2018).</li><li>Franci, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potency+of+polycyclic+aromatic+hydrocarbons+in+chicken+and+Japanese+quail+embryos.">Potency of polycyclic aromatic hydrocarbons in chicken and Japanese quail embryos.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (6), 1556-1564 (2018).</li><li>Rand, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+exposure+to+methylmercury+and+resultant+muscle+mercury+accumulation+and+adult+motor+deficits+in+mice.">Developmental exposure to methylmercury and resultant muscle mercury accumulation and adult motor deficits in mice.</a> Neurotoxicology. 81, 1-10 (2020).</li><li>Tanaka, T., Suzuki, T., Inomata, A., Moriyasu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+effects+of+maternal+exposure+to+fungicides+on+behavioral+development+in+F1+-generation+mice:+2.+Fixed-dose+study+of+thiabendazole.">Combined effects of maternal exposure to fungicides on behavioral development in F1 -generation mice: 2. Fixed-dose study of thiabendazole.</a> Birth Defects Research. , (2020).</li><li>Kofman, O., Lan, A., Raykin, E., Zega, K., Brodski, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+and+social+deficits+and+enhanced+sensitivity+to+prenatal+chlorpyrifos+in+PON1-/-+mouse+pups+and+adults.">Developmental and social deficits and enhanced sensitivity to prenatal chlorpyrifos in PON1-/- mouse pups and adults.</a> PLoS One. 15 (9), 0239738 (2020).</li><li>Kischel, A., Audouard, C., Fawal, M. A., Davy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ephrin-B2+paces+neuronal+production+in+the+developing+neocortex.">Ephrin-B2 paces neuronal production in the developing neocortex.</a> BMC Developmental Biology. 20 (1), 12 (2020).</li><li>Okolo, F., Zhang, G., Rhodes, J., Gittes, G. K., Potoka, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-Amniotic+Sildenafil+Treatment+Promotes+Lung+Growth+and+Attenuates+Vascular+Remodeling+in+an+Experimental+Model+of+Congenital+Diaphragmatic+Hernia.">Intra-Amniotic Sildenafil Treatment Promotes Lung Growth and Attenuates Vascular Remodeling in an Experimental Model of Congenital Diaphragmatic Hernia.</a> Fetal Diagnosis and Therapy. , 1-13 (2020).</li><li>Vyslouzil, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subchronic+continuous+inhalation+exposure+to+zinc+oxide+nanoparticles+induces+pulmonary+cell+response+in+mice.">Subchronic continuous inhalation exposure to zinc oxide nanoparticles induces pulmonary cell response in mice.</a> Journal of Trace Elements in Medicine and Biology. 61, 126511 (2020).</li><li>Wahle, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+neurological+effects+of+cerium+dioxide+nanoparticles+doped+with+different+amounts+of+zirconium+following+inhalation+exposure+in+mouse+models+of+Alzheimer's+and+vascular+disease.">Evaluation of neurological effects of cerium dioxide nanoparticles doped with different amounts of zirconium following inhalation exposure in mouse models of Alzheimer's and vascular disease.</a> Neurochemistry International. 138, 104755 (2020).</li><li>Tanabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-Dimensional+Echocardiography-+Role+in+Clinical+Practice+and+Future+Directions.">Three-Dimensional Echocardiography- Role in Clinical Practice and Future Directions.</a> Circ J. 84 (7), 1047-1054 (2020).</li></ol>

鶏の胚は、200年の間、発達研究における古典的なモデルであった1.この原稿に記載されている我々の方法は、パーフルオロオクタン酸、粒子状物質、およびディーゼル排気を含むいくつかの環境汚染物質の評価に使用されており、成功した5、7、8、9、10、11、12。<sup class=...

鶏の胚は、200年以上にわたって使用されてきた古典的な発達モデルです。鶏胚モデルは、従来のモデルと比較して様々な利点を有する。まず、70年以上前に、鶏胚の正常な発達は、鶏胚の発達中に合計46段階が正確な時間と形態学的特徴で定義され、異常な発達の検出を促進するハンブルガー・ハミルトンステージングガイド2で非常に明確に示されていた。さらに、鶏胚モデルは、比較的低コストで冗長な量、比較的正確な暴露量制御、シェル内の独立した閉じたシステム、発達中の胚の容易な操作など、強力な毒物学的評価モデルとして使用される可能性を保証する他の特徴を有する。 
心毒性では、鶏の胚は哺乳類の心臓に似ているが、より厚い壁を有する4つのチャンバー心臓を特徴とし、形態学的評価を容易にする。さらに、鶏の胚は哺乳類モデルでは不可能な発達吸入暴露を可能にする:発達の後半段階では、鶏の胚は内部呼吸から外部呼吸(肺を介して酸素を得る)に移行する。後者は、胚がくちばしで空気細胞膜を貫通し、空気3を呼吸し始め、空気細胞をミニ吸入室にすることを要求する。この現象を利用して、心臓(および他の器官)に対するガス汚染物質の毒物学的影響は、専用の吸入室器具を必要とせずに評価され得る。 
本稿では、いくつかの曝露/エンドポイント評価方法が記載されており、そのすべてが、環境汚染物質への暴露後の発達心毒性の評価において鶏胚を強力なツールにするのに役立つ。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4% phosphate buffered formaldehydefixative</td>
			<td>Biosharp, Hefei, China</td>
			<td>REF: BL539A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% ethanol</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosignaling monitor BL-420E+</td>
			<td>Taimeng, Chengdu, China</td>
			<td>BL-420E+</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Candling lamp</td>
			<td>Zhenwei, Dezhou, China</td>
			<td>WZ-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable syringe</td>
			<td>Zhiyu, Jiangsu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Egg incubator</td>
			<td>Keyu,Dezhou, China</td>
			<td>KFX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical balance</td>
			<td>OHAUS, Shanghai, China</td>
			<td>AR 224CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro-thermal incubator</td>
			<td>Shenxian, Shanghai, China</td>
			<td>DHP-9022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertile chicken egg</td>
			<td>Jianuo, Jining, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Staining Kit</td>
			<td>Beyotime, Bejing, China</td>
			<td>C0105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology paraffin</td>
			<td>Aladdin, Shanghai, China</td>
			<td>P100928-500g</td>
			<td>Melt point 52~54&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology paraffin</td>
			<td>Aladdin, Shanghai, China</td>
			<td>P100936-500g</td>
			<td>Melt point 62~64&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV catheter</td>
			<td>KDL, Zhejiang, China</td>
			<td></td>
			<td>The catheters have to be soft, plastic ones.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lentivirus</td>
			<td>Genechem, Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td>The lentivirus were individually designed/synthesized by Genechem.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson&#39;s trichrome staining kit</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>G1340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal probe</td>
			<td>Jinuotai, Beijing, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjector (5 uL)</td>
			<td>Anting,Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>CAIKON, Shanghai, China</td>
			<td>XSP-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td>HistoCore BIOCUT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blade</td>
			<td>Leica,Germany</td>
			<td>Leica 819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbitual sodium</td>
			<td>Yitai Technology Co. Ltd.,&#160; Wuhan, China</td>
			<td>CAS: 57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetter(10ul)</td>
			<td>Sartorius, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone iodide</td>
			<td>Longyuquan, Taian, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td>Anqisheng,Suzhou, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Kelun,Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sunflower oil</td>
			<td>Mighty Jiage, Jiangsu, China</td>
			<td></td>
			<td>Any commerical sunflower oil for human consumption should work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>M&#38;G, Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tedlar PVF Bag (5L)</td>
			<td>Delin, Dalian, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex mixer</td>
			<td>SCILOGEX, Rocky Hill, CT, US</td>
			<td>MX-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:1330-20-7</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities

鶏の胚は、発達研究における古典的なモデルです。鶏胚の発達の間、心臓の発達の時間枠は明確に定義されており、複数の方法を用いて正確かつタイムリーな暴露を達成することは比較的容易である。さらに、鶏の胚の心臓の発達のプロセスは哺乳類に似ていて、4つの心臓を生じさせ、発達的心毒性の評価において貴重な代替モデルとなる。当研究室では、鶏胚モデルは、PFAS(PFAS)およびポリフルオロアルキル物質、粒子状物質(PM)、ディーゼル排気(DE)およびナノ材料を含む様々な環境汚染物質への暴露後の発達的心毒性の評価に日常的に使用されています。露光時間は、開発の開始(胚の日0、ED0)から孵化の前日まで、必要性に基づいて自由に選択することができる。主な暴露方法には、空気細胞注射、直接マイクロインジェクション、および空気細胞吸入(もともと私たちの研究室で開発された)が含まれ、現在利用可能なエンドポイントには、心機能(心電図)、形態(組織学的評価)および分子生物学的評価(免疫組織化学、qRT-PCR、ウェスタンブロッティングなど)が含まれます。もちろん、鶏胚モデルには、抗体の入手が限られているなど、独自の制限があります。それにもかかわらず、より多くの実験室がこのモデルを利用し始めると、それは発達的な心毒性の研究に大きな貢献をするために使用することができる。

露出結果 空気細胞の注入 空気細胞注射は、開発中の鶏胚を様々な薬剤に効果的に暴露することができ、その後、胚/孵化鶏の採取サンプル(血清、組織など)で検出される可能性があります。ここに、パーフルオロオクタン酸(PFOA)を空気細胞注入した例を挙げ、次いで、血清PFOA濃度を超高性能液体クロマトグラフィー質量分析法で測定した。血清濃度は、注射された用量に対応し、この手?...

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Using Chicken Embryo as a Powerful Tool in Assessment of Developmental Cardiotoxicities

鶏の胚は、古典的な発達モデルとして、様々な環境汚染物質への暴露後の発達的な心毒性を評価するために私たちの研究室で使用されています。この原稿には、露光法と形態・機能評価法が定められております。

発達的心毒性の評価における強力なツールとしての鶏胚の使用

Chicken embryos are a classical model in developmental studies. During the development of chicken embryos, the time window of heart development is ...

みなさん。青島大学公衆衛生学部毒物学科准教授のQixiao Jiangです。私の研究グループを代表して、私は心臓毒性評価の開発に鶏の胚を使用する資産を提示するつもりです。鶏胚は、容易な操作、高いアクセシビリティ、閉鎖された独立系、エトセトラのような複数の利点を有する古典的な発達モデルである。フェノールタン酸などの複数の環境汚染物質を扱う。ディーゼル排気、特にカーボンナノ管上の問題。ラボには複数の暴露方法が確立されていますが、より大きな原因のために、機能評価も日常的に行われます。このビデオでは、露出方法と形態学的機能評価方法の詳細を紹介します。ご興味のある方は、お気軽にお問い合わせください。ありがとうございました。ここに私があなたに紹介できる私たちの露出方法があります。さて、私が紹介する最初の方法は、空気細胞に直接注入する空気細胞注入です。卵の表面をポリヨウ化溶液で洗浄します。これは市販のポリヨウ化液であり、脱イオン水で希釈し、1/5である。そして、卵殻をこすらずにティッシュペーパーで乾かします。スクラブはシェルの外側の保護層コーティングを破るので重要です。暗い部屋のすべての卵をきれいにし、鉛筆で空気セルをマークします。殻に亀裂が入った卵を除外します。また、側面に空気細胞を持つ卵を除外します。それが鈍い先端を持っている場合、それらは正常に孵化する可能性は非常に低いです。75%アルコールで空気細胞領域、ならびに金属プローブを消毒する。それらを乾燥させて拭き取り、次にプローブで空気細胞領域の中央に小さな穴を開けます。プローブを空気細胞の奥深くに突き刺さないで下さいます。代わりに、プローブの先端でシェルを壊すだけです。穴がまだ十分な大きさでない場合は、既存の穴の近くで、先端を挿入できる大きさになるまでシェルを再び壊します。ピペットチップを穴に挿入し、先端が内膜に触れます。ゆっくりと、混合物を注入し、少なくとも10秒間そこに保持します。これは、分配された油を完全に分配できるようにするためです。次に、チップを取り外します。さて、ブラシと溶かしたパラフィンの滴で穴を密封します。溶かしたパラフィンを内側の記憶に滴り落とさないように注意してください。密封したら、卵が望ましい胚段階に達するまでインキュベーターに卵を入れます。第二に、私が紹介する方法はマイクロインジェクションです。まず第一に、卵は空気注入セクションで説明されているようにきれいにし、取り扱う必要があります。この手順は、殺菌フードで行う必要があります。空気セル領域、およびアセトンで器具を殺菌します。金属プローブで空気細胞領域の中央に小さな穴を開けます。プローブを空気細胞に深く突き刺さないか、内部メモリが破損する可能性があります。次に、同じプロセスを使用して、直径が約2ミリメートルになるまで慎重に穴を拡大します。これにより、内部メモリの比率を確認できます。その後、マイクロインジェクターで溶液をロードし、慎重に約合計3ミリメートルの内膜に穴を通して針を挿入します。溶液をそっと分配し、針を取り除きます。針をできるだけ垂直に保ちます。小さなテープで穴を薄く密封します。完全に胚の脱水と、その後のインキュベーション中に死を防ぐために穴をカバーします。私が紹介する3番目の方法は、空気細胞の注入です。空気セルにガス汚染物質を植え付ける場所。空気細胞注入セクションに記載されているように、卵をきれいにし、取り扱います。そして、あなたは胚の日17まで卵を読むことができます。胚性17日目に卵を処理して空気細胞領域をマークする。胚性18日目に、インキュベーターから卵を取り出し、空気細胞領域と器具をアセトンで殺菌する。そして、空気セルの両側に2つの小さな穴を慎重に掘削します。1つはガスやエアロゾルの注入用です。もう一つは、私たちの空気を広げるためのためです。慎重に穴のサイズを制御し、注入穴の側面はカテーテル針を挿入するのに十分であり、膨張穴の直径は少し大きくする必要があります。直径約1ミリメートル。今、これは私たちがターゲットガスやエアロゾルを保持するために使用するサンプルバッグです。使用するデバイスは、何でも置き換えることができます。10mLのガスまたはエアロゾルを注射器にそっと注ぎます。そして、注射器を慎重に内側の針をリモートでカテーテル針に取り付け、柔らかくします。このカテーテル針を注入穴にそっと挿入します。それが入ったら、カテーテル針に圧力をかける。これは、注射部位からの漏出を最小限に抑えるためである。あなたの注入の確認のための外出の穴と別の指を置くことができる。注入をやさしく行うと、流出孔からの空気の流れが容易に感じられるはずです。それは追放される空気細胞の元の空気です。注入が終わったら、すぐに両方の穴を密封する。これらのテープとあなたのインキュベーターに卵を返します。エンドポイント評価プロセスについて紹介します。ペントバルビタール33mg/kgで動物を完全に麻酔します。開いてテストされたIPインジェクション。次に、操作テーブルの上に鶏を置きます。腹部の面積と電極をエタノールで殺菌します。次に、2本の針電極を腹部サブの両側から連続的に挿入する。針が皮膚を少し持ち上げることによって腹部の空洞に入らないようにしてください。そして、そこから針を挿入します。挿入したら、胸腔の側面に届くまで針を慎重に前方に押し出します。針が体の奥深くまで入ったり、皮膚から突き出たりしないようにしてください。次に、心電図装置で測定を行います。EKGが可能な他のセミナリー器具も同様に使用することができます。これは、Motrin のマップを行う第 2 のエンド ポイント評価方法です。これはHMEの方法で心臓の断面です。これは私たちが測定しようとしている右心室です。これを行うには、2 つのルーラーを使用します。ルーラー 1、およびルーラー 2。ここで、ルーラー 1 を画面にコピーし、適切なサイズに変更してから回転させます。そして、水平線の両端が3つの右心室壁の2つの端に置かるように移動します。そして今、私たちは3つの右心室の壁を横切る7つの測定ラインを持っています。次に、セカンダリルーラーを図にコピーします。また、それを少しサイズ変更し、回転して置き換えて、同様に配置されるようにします。この水平線は右心室の外壁と平行に行きます。そして、垂直なものは、定規の白質線が内壁または右心室と交差するポイントを横切ります。そして、後で画像J.を使用して測定できるように測定ドットを作り、このプロセスをサンプルごとに7回繰り返し、右心室の代表的な測定を行います。現在の結果の概要を示します。これは、インキュベーション前の卵へのPFOA注入であり、そして、注射のそれらの増加に伴って血清中の血清濃度LPFが効果的に増加することを見ることができる。実施例に従って、マイクロインジェクションの有効性。Aがコントロールであり、Bは、大きな蛍光qタンパク質中のウイルス対策表現が注入されている場所であることがわかります。強い蛍光を見ることができます。そして、これは上皮注入の有効性のためのデモンストレーションです。輸液では、心筋組織に劇的な光ファイバーの変化が見られたことがわかります。大丈夫です。また、孵化鶏のR-R間隔が0、1、2週間であることがわかります。また、ディーゼル排気を注入した後も大きく変化した。このメソッドを考慮に入れ、このメソッドを考慮します。ここで、この例では上皮注入の有効性もわかる。ディーゼル排気を注入したエアロゾルの後に心臓の右心室が効果的に増加したことがわかります。そしてもちろん、ここではヒストモルフォメトリクス法を用いている。私たちはあなたに見せるだけです。これは非常に効果的です。大丈夫です。これは私があなたに提示しようとしているすべての方法です。私はこれが発達毒性学の強力な研究ツールとして鶏の胚と他の人々の仕事を促進できることを願っています。よい一日を。

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

胸腺の特性を用いてマウス胚における前駆細胞をセトリング<em&gt;インビボ</em&gt;と<em&gt;インビトロ</em&gt;アッセイ

Characterizing thymic settling progenitors is important to understand the pre-thymic stages of T cell development, essential to devise strategies for T ...

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

ゼブラフィッシュ胚におけるマイクロビーズの移植

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Grafting of Beads into Developing Chicken Embryo Limbs to Identify Signal Transduction Pathways Affecting Gene Expression

遺伝子発現に影響を​​及ぼすシグナル伝達経路を同定するために、ニワトリ胚手足の開発にビーズのグラフト

Using chicken embryos it is possible to test directly the effects of either growth factors or specific inhibitors of signaling pathways on gene expression ...

In Ovo Electroporation in the Chicken Auditory Brainstem

In Ovo Electroporation in the Chicken Auditory Brainstem

鶏の聴覚脳幹における卵の電気穿孔

Electroporation is a method that introduces genes of interest into biologically relevant organisms like the chicken embryo. It is long established that ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

ニワトリ胚組織の開発培養法

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

ウサギモデルにおける最適胚期における低侵襲胚移植と胚ガラス化

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

ショウジョウバエ胚における筋収縮のライブイメージングと解析

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

X-ray Diffraction of Intact Murine Skeletal Muscle as a Tool for Studying the Structural Basis of Muscle Disease

筋肉疾患の構造的基礎を研究するためのツールとしての無傷のマウス骨格筋のX線回折

Transgenic mouse models have been important tools for studying the relationship of genotype to phenotype for human diseases including those of skeletal ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

紫外C(UV-C)損傷に対する主なマウス眼表面細胞/幹細胞における酸化的損傷の評価

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

Using Immunofluorescence to Detect PM2.5-induced DNA Damage in Zebrafish Embryo Hearts

Using Immunofluorescence to Detect PM2.5-induced DNA Damage in Zebrafish Embryo Hearts

免疫蛍光を使用して、ゼブラフィッシュ胚の心臓におけるPM2.5誘導DNA損傷を検出する

Ambient fine particulate matter (PM2.5) exposure can lead to cardiac developmental toxicity but the underlying molecular mechanisms are still unclear. ...