Name: using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities
Uploaded: 2021-03-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Chicken Embryo as a Powerful Tool in Assessment of Developmental Cardiotoxicities at JoVE.com

이 작품은 중국 국립 자연 과학 재단 (그랜트 번호 91643203, 91543208, 81502835)에 의해 지원되었다.

설명된 모든 절차는 칭다오 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다. 우리 실험실에서 계란은 두 개의 인큐베이터에서 배양되었습니다. 계란은 인큐베이터에서 똑바로 들고 무작위로 선반에 놓였습니다. 계란에 대한 잠복 조건은 다음과 같이: 인큐베이션 온도는 37.9°C에서 시작되고, 잠복이 진행됨에 따라 37.1°C로 점진적으로 감소; 습도는 50%에서 시작하여 점차 70%로 ...

<ol>
	<li>Kain, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+as+an+expanding+experimental+model+for+cancer+and+cardiovascular+research.">The chick embryo as an expanding experimental model for cancer and cardiovascular research.</a> Developmental Dynamics. 243 (2), 216-228 (2014).</li><li>Menna, T. M., Mortola, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+posture+on+the+respiratory+mechanics+of+the+chick+embryo.">Effects of posture on the respiratory mechanics of the chick embryo.</a> Journal of Experimental Zoology. 293 (5), 450-455 (2002).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88 (1), 49-92 (1951).</li><li>Yamamoto, F. Y., Neto, F. F., Freitas, P. F., Oliveira Ribeiro, C. A., Ortolani-Machado, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadmium+effects+on+early+development+of+chick+embryos.">Cadmium effects on early development of chick embryos.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 34 (2), 548-555 (2012).</li><li>Lv, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+bone+morphogenetic+protein+2+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+and+l-carnitine+mediated+protection.">The roles of bone morphogenetic protein 2 in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity and l-carnitine mediated protection.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. 352, 68-76 (2018).</li><li>Kmecick, M., Vieira da Costa, M. C., Oliveria Ribeiro, C. A., Ortolani-Machado, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+evidence+of+neurotoxic+effects+in+chicken+embryos+after+exposure+to+perfluorooctanoic+acid+(PFOA)+and+inorganic+cadmium.">Morphological evidence of neurotoxic effects in chicken embryos after exposure to perfluorooctanoic acid (PFOA) and inorganic cadmium.</a> Toxicology. 4227, 152286 (2019).</li><li>Jiang, Q., Lust, R. M., Strynar, M. J., Dagnino, S., DeWitt, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perflurooctanoic+acid+induces+developmental+cardiotoxicity+in+chicken+embryos+and+hatchlings.">Perflurooctanoic acid induces developmental cardiotoxicity in chicken embryos and hatchlings.</a> Toxicology. 293 (1-3), 97-106 (2012).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+ovo+very+early-in-life+exposure+to+diesel+exhaust+induced+cardiopulmonary+toxicity+in+a+hatchling+chick+model.">In ovo very early-in-life exposure to diesel exhaust induced cardiopulmonary toxicity in a hatchling chick model.</a> Environmental Pollution. 264, 114718 (2020).</li><li>Jiang, Q., Lust, R. M., DeWitt, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfluorooctanoic+acid+induced-developmental+cardiotoxicity:+are+peroxisome+proliferator+activated+receptor+alpha+(PPARalpha)+and+bone+morphorgenic+protein+2+(BMP2)+pathways+involved.">Perfluorooctanoic acid induced-developmental cardiotoxicity: are peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPARalpha) and bone morphorgenic protein 2 (BMP2) pathways involved.</a> Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A. 76 (11), 635-650 (2013).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+levels+of+l-carnitine,+acetyl-l-carnitine+and+propionyl-l-carnitine+are+involved+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+in+chicken+embryo.">Changes in the levels of l-carnitine, acetyl-l-carnitine and propionyl-l-carnitine are involved in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity in chicken embryo.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 48, 116-124 (2016).</li><li>Zhao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+PPAR+alpha+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+and+l-carnitine+mediated+protection-Results+of+in+ovo+gene+silencing.">The role of PPAR alpha in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity and l-carnitine mediated protection-Results of in ovo gene silencing.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 56, 136-144 (2017).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particulate+Matter+2.5+Induced+Developmental+Cardiotoxicity+in+Chicken+Embryo+and+Hatchling.">Particulate Matter 2.5 Induced Developmental Cardiotoxicity in Chicken Embryo and Hatchling.</a> Front Pharmacol. 11, 841 (2020).</li><li>Molina, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+air+cell+injection+of+perfluorooctane+sulfonate+before+incubation+on+development+of+the+white+leghorn+chicken+(Gallus+domesticus)+embryo.">Effects of air cell injection of perfluorooctane sulfonate before incubation on development of the white leghorn chicken (Gallus domesticus) embryo.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 25 (1), 227-232 (2006).</li><li>Crump, D., Chiu, S., Williams, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl)+sulfone+decreases+embryonic+viability+and+alters+hepatic+mRNA+expression+at+two+distinct+developmental+stages+in+chicken+embryos+exposed+via+egg+injection.">Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl) sulfone decreases embryonic viability and alters hepatic mRNA expression at two distinct developmental stages in chicken embryos exposed via egg injection.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (2), 530-537 (2018).</li><li>Franci, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potency+of+polycyclic+aromatic+hydrocarbons+in+chicken+and+Japanese+quail+embryos.">Potency of polycyclic aromatic hydrocarbons in chicken and Japanese quail embryos.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (6), 1556-1564 (2018).</li><li>Rand, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+exposure+to+methylmercury+and+resultant+muscle+mercury+accumulation+and+adult+motor+deficits+in+mice.">Developmental exposure to methylmercury and resultant muscle mercury accumulation and adult motor deficits in mice.</a> Neurotoxicology. 81, 1-10 (2020).</li><li>Tanaka, T., Suzuki, T., Inomata, A., Moriyasu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+effects+of+maternal+exposure+to+fungicides+on+behavioral+development+in+F1+-generation+mice:+2.+Fixed-dose+study+of+thiabendazole.">Combined effects of maternal exposure to fungicides on behavioral development in F1 -generation mice: 2. Fixed-dose study of thiabendazole.</a> Birth Defects Research. , (2020).</li><li>Kofman, O., Lan, A., Raykin, E., Zega, K., Brodski, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+and+social+deficits+and+enhanced+sensitivity+to+prenatal+chlorpyrifos+in+PON1-/-+mouse+pups+and+adults.">Developmental and social deficits and enhanced sensitivity to prenatal chlorpyrifos in PON1-/- mouse pups and adults.</a> PLoS One. 15 (9), 0239738 (2020).</li><li>Kischel, A., Audouard, C., Fawal, M. A., Davy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ephrin-B2+paces+neuronal+production+in+the+developing+neocortex.">Ephrin-B2 paces neuronal production in the developing neocortex.</a> BMC Developmental Biology. 20 (1), 12 (2020).</li><li>Okolo, F., Zhang, G., Rhodes, J., Gittes, G. K., Potoka, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-Amniotic+Sildenafil+Treatment+Promotes+Lung+Growth+and+Attenuates+Vascular+Remodeling+in+an+Experimental+Model+of+Congenital+Diaphragmatic+Hernia.">Intra-Amniotic Sildenafil Treatment Promotes Lung Growth and Attenuates Vascular Remodeling in an Experimental Model of Congenital Diaphragmatic Hernia.</a> Fetal Diagnosis and Therapy. , 1-13 (2020).</li><li>Vyslouzil, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subchronic+continuous+inhalation+exposure+to+zinc+oxide+nanoparticles+induces+pulmonary+cell+response+in+mice.">Subchronic continuous inhalation exposure to zinc oxide nanoparticles induces pulmonary cell response in mice.</a> Journal of Trace Elements in Medicine and Biology. 61, 126511 (2020).</li><li>Wahle, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+neurological+effects+of+cerium+dioxide+nanoparticles+doped+with+different+amounts+of+zirconium+following+inhalation+exposure+in+mouse+models+of+Alzheimer's+and+vascular+disease.">Evaluation of neurological effects of cerium dioxide nanoparticles doped with different amounts of zirconium following inhalation exposure in mouse models of Alzheimer's and vascular disease.</a> Neurochemistry International. 138, 104755 (2020).</li><li>Tanabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-Dimensional+Echocardiography-+Role+in+Clinical+Practice+and+Future+Directions.">Three-Dimensional Echocardiography- Role in Clinical Practice and Future Directions.</a> Circ J. 84 (7), 1047-1054 (2020).</li></ol>

닭 배아는 200 년 동안 발달 연구에서 고전적인 모델이었다1. 본 원고에 제시된 당사의 방법은 퍼플루오로옥타노산, 미립자 물질 및 디젤 배기기간을포함한 여러 환경 오염 물질의 평가에 사용되어5,7,8,9,10,11,1...

닭 배아는 200 년 이상 사용 된 고전적인 발달모델입니다 1. 닭 배아 모델은 전통적인 모델에 비해 다양한 장점을 가지고 있습니다. 우선, 70여 년 전, 햄버거-해밀턴 스테이징 가이드2에서닭배아의 정상적인 발달이 매우 명확하게 설명되었으며, 닭배아 발달 시 총 46단계가 정확한 시간과 형태학적 특성으로 정의되어 비정상적인 발달의 검출을 용이하게 했습니다. 또한, 닭 배아 모델은 상대적으로 저렴한 비용과 중복수량, 비교적 정확한 노출량 조절, 쉘 내의 독립적이고 폐쇄된 시스템, 개발 배아의 간편한 조작 등 다른 특징을 가지고 있으며, 이 모든 것들은 강력한 독성 평가 모델로 사용될 수 있는 잠재력을 보장한다. 
심장 독성에서 닭 배아는 포유류 심장과 비슷하지만 두꺼운 벽으로 4 개의 챔버 심장을 특징으로하여 쉽게 형태학적 평가를 할 수 있습니다. 추가적으로, 닭 배아는 포유류 모형에서 가능하지 않은 발달 흡입 노출을 허용합니다: 발달의 후반 단계에서, 닭 태아는 외부 호흡으로 내부 호흡에서 (폐를 통해 산소를 얻는); 후자는 배아가 부리를 사용하여 공기 세포막을 관통하고 공기3을호흡하기 시작하여 공기 세포를 미니 흡입 챔버로 만들어야 합니다. 이러한 현상을 이용하여, 심장(및 기타 장기)에 대한 가스 오염물질의 독성 효과는 전용 흡입 챔버 기기없이 평가될 수 있다. 
이 원고에서는, 몇몇 노출/끝점 평가 방법이 기술되고, 모두는 인간 적인 발달 심폐소성 평가에 있는 강력한 공구를 환경 오염물질에 노출한 다음 개발 심폐성 의 평가에 있는 강력한 공구를 만들기 위하여 봉사합니다.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>4% phosphate buffered formaldehydefixative</td>
			<td>Biosharp, Hefei, China</td>
			<td>REF: BL539A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% ethanol</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosignaling monitor BL-420E+</td>
			<td>Taimeng, Chengdu, China</td>
			<td>BL-420E+</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Candling lamp</td>
			<td>Zhenwei, Dezhou, China</td>
			<td>WZ-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable syringe</td>
			<td>Zhiyu, Jiangsu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Egg incubator</td>
			<td>Keyu,Dezhou, China</td>
			<td>KFX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical balance</td>
			<td>OHAUS, Shanghai, China</td>
			<td>AR 224CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro-thermal incubator</td>
			<td>Shenxian, Shanghai, China</td>
			<td>DHP-9022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertile chicken egg</td>
			<td>Jianuo, Jining, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Staining Kit</td>
			<td>Beyotime, Bejing, China</td>
			<td>C0105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology paraffin</td>
			<td>Aladdin, Shanghai, China</td>
			<td>P100928-500g</td>
			<td>Melt point 52~54&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology paraffin</td>
			<td>Aladdin, Shanghai, China</td>
			<td>P100936-500g</td>
			<td>Melt point 62~64&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV catheter</td>
			<td>KDL, Zhejiang, China</td>
			<td></td>
			<td>The catheters have to be soft, plastic ones.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lentivirus</td>
			<td>Genechem, Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td>The lentivirus were individually designed/synthesized by Genechem.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson&#39;s trichrome staining kit</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>G1340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal probe</td>
			<td>Jinuotai, Beijing, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjector (5 uL)</td>
			<td>Anting,Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>CAIKON, Shanghai, China</td>
			<td>XSP-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td>HistoCore BIOCUT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blade</td>
			<td>Leica,Germany</td>
			<td>Leica 819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbitual sodium</td>
			<td>Yitai Technology Co. Ltd.,&#160; Wuhan, China</td>
			<td>CAS: 57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetter(10ul)</td>
			<td>Sartorius, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone iodide</td>
			<td>Longyuquan, Taian, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td>Anqisheng,Suzhou, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Kelun,Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sunflower oil</td>
			<td>Mighty Jiage, Jiangsu, China</td>
			<td></td>
			<td>Any commerical sunflower oil for human consumption should work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>M&#38;G, Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tedlar PVF Bag (5L)</td>
			<td>Delin, Dalian, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex mixer</td>
			<td>SCILOGEX, Rocky Hill, CT, US</td>
			<td>MX-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:1330-20-7</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities

닭 배아는 발달 연구의 고전적인 모델입니다. 닭 배아의 발달 도중, 심장 발달의 시간 창은 잘 정의되고, 다중 방법을 통해 정확하고 적시 노출을 달성하기 위하여 상대적으로 쉽습니다. 더욱이, 닭 배아에 있는 심장 발달의 과정은 포유동물과 유사합니다, 또한 발달 심장 독성의 평가에 있는 귀중한 대안 모형을 만드는 4 개의 실내 심장귀착되는 귀착됩니다. 우리의 실험실에서, 닭 배아 모형은 일상적으로 당 및 polyfluoroalkyl 물질 (PFAS), 미립자 물질 (PMs), 디젤 배기 (DE) 및 나노 물질을 포함하여 각종 환경 오염 물질에 노출된 후에 발달 심폐제의 평가에 일상적으로 이용됩니다. 노출 시간은 개발 의 시작부터 (배아 일 0, ED0)부터 부화 전 날까지필요에 따라 자유롭게 선택할 수 있습니다. 주요 노출 방법은 공기 세포 주입, 직접 미세 주입 및 공기 세포 흡입 (원래 우리의 실험실에서 개발), 현재 사용 가능한 종점은 심장 기능 (전기 장학), 형태학 (조직학적 평가) 및 분자 생물학적 평가 (면역 조직 화학, qRT-PCR, 서쪽 블로팅 등)를 포함한다. 물론, 닭 배아 모델은 항체의 제한된 가용성과 같은 자체 제한이 있습니다. 그럼에도 불구 하 고, 더 많은 실험실이 모델을 활용 하기 시작, 그것은 개발 심장 독성의 연구에 중요 한 기여를 하는 데 사용할 수 있습니다.

노출 결과 공기 세포 주입 공기 세포 주입은 효과적으로 다양한 에이전트에 개발 닭 배아를 노출 할 수 있습니다, 이는 이후 배아 / 부화 닭의 수집 샘플 (혈청, 조직 등)에서 검출 될 수있다. 다음은 퍼플루오로옥타노산(PFOA)이 공기세포를 주입하고 혈청 PFOA 농도가 그 후 초고성능 액체 크로마토그래피 질량 분석법으로 결정된 예입니다. 혈청 농도는 주입된 투여량에 대응하여 이 절차의 효과?...

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Using Chicken Embryo as a Powerful Tool in Assessment of Developmental Cardiotoxicities

닭 배아는 고전적인 발달 모델로서, 다양한 환경 오염 물질에 노출 된 후 발달 심장 독성을 평가하기 위해 실험실에서 사용됩니다. 확립된 노출 방법 및 형태학적/기능 적 평가 방법은 이 원고에 설명되어 있습니다.

발달 심장 독성 평가에 강력한 도구로 닭 배아를 사용

Chicken embryos are a classical model in developmental studies. During the development of chicken embryos, the time window of heart development is ...

안녕하세요 여러분. 저는 칭다오대학교 공중보건학부 독물학과 부교수인 치샤오 장(Qixiao Jiang)입니다. 연구 그룹을 대신하여 심장 독성 평가 의 개발에 닭 배아를 사용하는 자산을 제시 할 것입니다.치킨 배아는 쉬운 조작, 높은 접근성, 폐쇄 된 독립적 인 시스템, 등 세테라와 같은 여러 가지 장점을 갖는 고전적인 발달 모델입니다. 페놀 탄닌산과 같은 여러 환경 오염 물질과 협력합니다. 디젤 배기, 특히 탄소 나노 튜브의 문제.우리는 실험실에 여러 노출 방법을 설치하지만, 더 큰 원인에 대한, 기능 평가도 일상적으로 수행됩니다. 이 비디오에서는 노출 방법 및 형태학적 기능 평가 방법에 대한 세부 사항을 보여 드리겠습니다. 관심이 있으시면 저희에게 연락주시기 바랍니다.감사합니다. 제가 소개할 수 있는 노출 방법은 다음과 같습니다. 이제 내가 소개할 첫 번째 방법은 공기 세포 주입이며, 공기 세포에 직접 주입할 것입니다.폴리 요오드 용액으로 계란표면을 청소하십시오. 이것은 시판되는 폴리 요오드 용액으로, 1/5 의 탈온화물로 희석됩니다. 그리고 나서, 나는 문지르지 않고 티슈 페이퍼로 달걀 껍질을 건조시다.스크러빙은 쉘 바깥쪽에 보호층 코팅을 깨뜨리기 때문에 중요합니다. 어두운 방에있는 모든 계란을 청소하고 연필로 공기 셀을 표시합니다. 껍질에 균열이 있는 계란을 제외합니다.또한 측면에 공기 세포와 계란을 제외. 무딘 팁이 있는 경우 정상적으로 부화할 가능성이 매우 낮습니다. 공기 세포 영역뿐만 아니라 금속 프로브를 75 % 알코올로 소독합니다.말리기 닦은 다음 프로브로 공기 셀 영역의 중앙에 작은 구멍을 뚫습니다. 프로브를 공기 셀 깊숙이 고정시키지 마십시오. 대신 프로브 끝만 으로 쉘을 끊습니다.구멍이 아직 충분히 크지 않은 경우 팁을 삽입할 수 있을 만큼 충분히 커질 때까지 기존 구멍 부근에서 셸을 다시 끊습니다. 내부 멤브레인에 닿는 팁으로 파이펫 팁을 구멍에 삽입합니다. 천천히, 혼합물을 주입하고 적어도 10 초 동안 거기에 누를.이것은 분배된 기름이 완전히 분배될 수 있도록 하기 위한 것입니다. 그런 다음 팁을 제거합니다. 이제 브러시와 녹은 파라핀 한 방울로 구멍을 밀봉하십시오.녹인 파라핀을 내부 메모리에 떨어뜨리지 않도록 주의하십시오. 일단 밀봉되면, 그들이 원하는 배아 단계에 도달 할 때까지 인큐베이터에 계란을 배치합니다. 둘째, 내가 소개하려고하는 방법은 마이크로 주입입니다.우선, 계란은 공기 주입 섹션에 설명된 대로 세척하고 처리되어야 합니다. 이 절차는 멸균 된 후드에서 수행해야합니다. 에어 셀 영역과 아세톤으로 계측기 살균.금속 프로브와 함께 공기 전지 영역의 중심에 작은 구멍을 드릴. 프로브를 공기 셀에 깊이 고정시키지 마십시오, 또는 내부 메모리가 손상될 수 있습니다. 그런 다음 동일한 프로세스를 사용하여 직경이 약 2밀리미터가 될 때까지 구멍을 조심스럽게 확대합니다.이렇게 하면 내부 메모리의 비율 확인을 허용할 수 있습니다. 그런 다음 용액을 마이크로 인젝터에 적재하고 구멍을 통해 바늘을 내부 막에 조심스럽게 삽입하여 약 3 밀리미터를 합니다. 용액을 부드럽게 분배한 다음 바늘을 제거합니다.바늘을 가능한 한 수직으로 유지하십시오. 작은 테이프조각으로 구멍을 감습니다. 구멍은 구멍을 완전히 덮어 후속 배양 중에 배아 탈수와 사망을 방지합니다.내가 소개할 세 번째 방법은 공기 세포 주입입니다. 공기 셀에 가스 오염 물질을 주입하는 곳. 공기 세포 주입 섹션에 설명 된 대로 계란을 청소 하 고 처리 합니다.그리고 배아 일 17까지 계란을 읽을 수 있습니다. 17일 배아일에 계란을 처리하여 공기 세포 영역을 표시합니다. 배아 일 18, 인큐베이터에서 계란을 꺼내, 아세톤으로 공기 세포 영역과 악기를 살균.그리고 조심스럽게 공기 셀의 양면에 두 개의 작은 구멍을 드릴. 하나는 가스 또는 에어로졸의 주입입니다. 다른 하나는 공기를 확장하는 것입니다.구멍의 크기를 주의 깊게 제어하여 주입 구멍의 측면이 카테터 바늘을 삽입하기에 충분하도록, 팽창 구멍의 직경은 조금 커야한다. 직경약 1mm. 이제 이것은 우리가 대상 가스 또는 에어로졸을 보유하는 데 사용하는 샘플 가방입니다.당신은 당신이 사용하는 모든 장치로 대체 할 수 있습니다. 가스 또는 에어로졸 10mL를 주사기에 부드럽게 붓습니다. 그리고, 주사기를 카테터 바늘에 조심스럽게 부착하여 내부 바늘리모컨을 리모컨으로 부착하여 부드러워집니다.이 카테터 바늘을 주입 구멍에 부드럽게 삽입합니다. 일단 거기에, 카테터 바늘에 대 한 압력을 적용. 이것은 사출 부위에서 누출을 최소화하기 위한 것이다.또 다른 손가락은 주입 확인을 위해 추방 구멍으로 주위에 넣을 수 있습니다. 주입을 부드럽게 하면 추방 구멍에서 공기 흐름을 쉽게 느낄 수 있어야 합니다. 즉, 추방되는 공기 셀의 원래 공기입니다.주입이 완료되면 즉시 두 구멍을 밀봉하십시오. 이 테이프와 인큐베이터에 계란을 반환합니다. 엔드포인트 평가 프로세스를 소개할 수 있습니다.완전히 펜토바르비탈 33 mg / kg으로 동물을 마취. 오픈에 의해 테스트 된 IP 사사. 그런 다음 수술 테이블에 닭을 놓습니다.복부 부위와 에탄올로 전극을 살균합니다. 그런 다음 복부 서브의 양면에서 2개의 바늘 전극을 지속적으로 삽입합니다. 바늘이 피부를 조금 들어 올려 복부 구멍에 들어가지 않도록하십시오.그리고 거기에서 바늘을 삽입합니다. 삽입되면 가슴 구멍의 측면에 도달 할 때까지 조심스럽게 바늘을 앞으로 밀어 넣습니다. 바늘이 몸 깊숙이 들어가거나 피부에서 튀어 나오지 않도록 하십시오.그런 다음 심전도 기기로 측정합니다. EKG가 가능한 다른 세미나리 악기도 사용할 수 있습니다. 이것은 우리의 두 번째 엔드 포인트 평가 방법은 Motrin에 대 한 지도.이것은 HME의 방법으로 마음의 단면입니다. 이것은 우리가 측정 할 수있는 올바른 심실입니다. 이를 위해 우리는 두 명의 통치자를 사용합니다.통치자 1, 그리고 통치자 2. 이제 눈금자를 화면에 복사한 다음 적절한 크기로 크기를 조정한 다음 회전합니다. 그리고 우리는 수평 선의 두 끝이 3 오른쪽 심실 벽의 2 끝에 놓여 있도록 이동합니다.그리고 이제 우리는 우리의 세 개의 오른쪽 심실 벽을 가로 질러 가는 일곱 측정 라인을 가지고있다. 이제 보조 눈금자를 그림에 복사합니다. 우리는 또한 그것을 조금 크기를 조정하 고 회전 하 고 모두 배치 될 수 있도록 교체.이 수평 선은 오른쪽 심실의 외벽과 평행하게 이동합니다. 그리고 수직은 통치자의 흰색 물질 선이 내부 벽이나 오른쪽 심실을 만나는 지점을 가로 질러 갈 것입니다. 그리고 나서 J.We가 시료당 7회 반복하여 오른쪽 심실을 대표할 수 있도록 나중에 측정 점을 측정할 수 있습니다.나는 당신에게 현재 결과의 요약을 보여 줄 것이다. 이것은 인큐베이션 전에 계란에 PFOA 주입, 그리고 주사의 그 증가와 함께 혈청에서 혈청 농도 LPF 효과적으로 증가 볼 수 있습니다. 데모에 따라, 마이크로 주입의 효과.A가 제어되고 B가 큰 형광 q 단백질로 발현되는 곳을 볼 수 있습니다. 당신은 강한 형광을 볼 수 있습니다. 그리고 이것은 상피 주입의 효과에 대한 데모입니다.당신은 주입과 함께, 극적인 광섬유 변화가 심근 조직에서 관찰된 것을 볼 수 있습니다. 그래. 또한 부화 닭의 R-R 간격0, 1, 2 주 것을 볼 수 있습니다. 또한 디젤 배기가스주입 후 크게 변경되었습니다.이 메서드를 고려했음을 나타냅니다. 여기서, 당신은 또한이 예에서 상피 주입의 효과를 볼 수 있습니다. 디젤 배기가스가 주입된 에어로졸이후에 심장의 오른쪽 심실이 효과적으로 증가한다는 것을 알 수 있습니다.그리고 물론, 여기에 우리는 조직 학적 방법을 사용하고 있습니다. 우리는 단지 당신에게 보여줍니다. 이것은 매우 효과적입니다. 그래.이것은 내가 당신에게 제시 할 모든 방법입니다. 나는 이것이 발달 독성학에 있는 강력한 연구 공구로 닭 배아를 가진 그밖 사람들의 일을 촉진할 수 있기를 바랍니다. 즐거운 하루 보내세요.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

흉선의 특성 사용하여 마우스 배아에서 전구 세포를 정착<em&gt; 생체</em&gt;와<em&gt; 체외</em&gt; 분석 실험

Characterizing thymic settling progenitors is important to understand the pre-thymic stages of T cell development, essential to devise strategies for T ...

연구

발생학

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Zebrafish의 배아에 주입 마이크로 비드

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Grafting of Beads into Developing Chicken Embryo Limbs to Identify Signal Transduction Pathways Affecting Gene Expression

유전자 발현에 영향을 미치는 신호 전달 진학을 확인하기 위해 닭 배아 사지 개발에 구슬의 접목

Using chicken embryos it is possible to test directly the effects of either growth factors or specific inhibitors of signaling pathways on gene expression ...

In Ovo Electroporation in the Chicken Auditory Brainstem

In Ovo Electroporation in the Chicken Auditory Brainstem

닭 오라클 Brainstem의 Ovo Electroporation에서

Electroporation is a method that introduces genes of interest into biologically relevant organisms like the chicken embryo. It is long established that ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Organotypic 문화 메서드 배아 치킨 조직 개발 연구를

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

토끼 모형에 있는 최적 배아 단계에서 최소 침 습 배아 이식 및 배아 확산

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

초파리 배아에서 근육 수축의 라이브 이미징 및 분석

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

X-ray Diffraction of Intact Murine Skeletal Muscle as a Tool for Studying the Structural Basis of Muscle Disease

근육 질환의 구조적 기초를 연구하기위한 도구로 그대로 뮤린 골격 근육의 X 선 회절

Transgenic mouse models have been important tools for studying the relationship of genotype to phenotype for human diseases including those of skeletal ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

자외선-C (UV-C) 손상에 응하여 1 차 마우스 안구 표면 세포/줄기 세포에 있는 산화 손상의 평가

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

Using Immunofluorescence to Detect PM2.5-induced DNA Damage in Zebrafish Embryo Hearts

Using Immunofluorescence to Detect PM2.5-induced DNA Damage in Zebrafish Embryo Hearts

면역 형광을 사용하여 제브라피시 배아 심장에서 PM2.5-유도 된 DNA 손상을 감지합니다.

Ambient fine particulate matter (PM2.5) exposure can lead to cardiac developmental toxicity but the underlying molecular mechanisms are still unclear. ...