Name: using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities
Uploaded: 2021-03-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Chicken Embryo as a Powerful Tool in Assessment of Developmental Cardiotoxicities at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av National Natural Science Foundation of China (Grant No. 91643203, 91543208, 81502835).

Alle prosedyrer som er beskrevet ble godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ved Qingdao University. I laboratoriet vårt ble eggene inkubert i to inkubatorer. Egg ble holdt oppreist i inkubatoren og tilfeldig plassert på hyllene. Inkubasjonsforholdene for eggene var som følger: inkubasjonstemperaturen startet ved 37,9 °C, og ble gradvis redusert til 37,1 °C etter hvert som inkubasjonen fortsatte; fuktigheten startet på 50% og økte gradvis til 70%.
1. Eksponeringsme...

<ol>
	<li>Kain, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+as+an+expanding+experimental+model+for+cancer+and+cardiovascular+research.">The chick embryo as an expanding experimental model for cancer and cardiovascular research.</a> Developmental Dynamics. 243 (2), 216-228 (2014).</li><li>Menna, T. M., Mortola, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+posture+on+the+respiratory+mechanics+of+the+chick+embryo.">Effects of posture on the respiratory mechanics of the chick embryo.</a> Journal of Experimental Zoology. 293 (5), 450-455 (2002).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88 (1), 49-92 (1951).</li><li>Yamamoto, F. Y., Neto, F. F., Freitas, P. F., Oliveira Ribeiro, C. A., Ortolani-Machado, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadmium+effects+on+early+development+of+chick+embryos.">Cadmium effects on early development of chick embryos.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 34 (2), 548-555 (2012).</li><li>Lv, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+bone+morphogenetic+protein+2+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+and+l-carnitine+mediated+protection.">The roles of bone morphogenetic protein 2 in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity and l-carnitine mediated protection.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. 352, 68-76 (2018).</li><li>Kmecick, M., Vieira da Costa, M. C., Oliveria Ribeiro, C. A., Ortolani-Machado, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+evidence+of+neurotoxic+effects+in+chicken+embryos+after+exposure+to+perfluorooctanoic+acid+(PFOA)+and+inorganic+cadmium.">Morphological evidence of neurotoxic effects in chicken embryos after exposure to perfluorooctanoic acid (PFOA) and inorganic cadmium.</a> Toxicology. 4227, 152286 (2019).</li><li>Jiang, Q., Lust, R. M., Strynar, M. J., Dagnino, S., DeWitt, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perflurooctanoic+acid+induces+developmental+cardiotoxicity+in+chicken+embryos+and+hatchlings.">Perflurooctanoic acid induces developmental cardiotoxicity in chicken embryos and hatchlings.</a> Toxicology. 293 (1-3), 97-106 (2012).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+ovo+very+early-in-life+exposure+to+diesel+exhaust+induced+cardiopulmonary+toxicity+in+a+hatchling+chick+model.">In ovo very early-in-life exposure to diesel exhaust induced cardiopulmonary toxicity in a hatchling chick model.</a> Environmental Pollution. 264, 114718 (2020).</li><li>Jiang, Q., Lust, R. M., DeWitt, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfluorooctanoic+acid+induced-developmental+cardiotoxicity:+are+peroxisome+proliferator+activated+receptor+alpha+(PPARalpha)+and+bone+morphorgenic+protein+2+(BMP2)+pathways+involved.">Perfluorooctanoic acid induced-developmental cardiotoxicity: are peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPARalpha) and bone morphorgenic protein 2 (BMP2) pathways involved.</a> Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A. 76 (11), 635-650 (2013).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+levels+of+l-carnitine,+acetyl-l-carnitine+and+propionyl-l-carnitine+are+involved+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+in+chicken+embryo.">Changes in the levels of l-carnitine, acetyl-l-carnitine and propionyl-l-carnitine are involved in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity in chicken embryo.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 48, 116-124 (2016).</li><li>Zhao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+PPAR+alpha+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+and+l-carnitine+mediated+protection-Results+of+in+ovo+gene+silencing.">The role of PPAR alpha in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity and l-carnitine mediated protection-Results of in ovo gene silencing.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 56, 136-144 (2017).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particulate+Matter+2.5+Induced+Developmental+Cardiotoxicity+in+Chicken+Embryo+and+Hatchling.">Particulate Matter 2.5 Induced Developmental Cardiotoxicity in Chicken Embryo and Hatchling.</a> Front Pharmacol. 11, 841 (2020).</li><li>Molina, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+air+cell+injection+of+perfluorooctane+sulfonate+before+incubation+on+development+of+the+white+leghorn+chicken+(Gallus+domesticus)+embryo.">Effects of air cell injection of perfluorooctane sulfonate before incubation on development of the white leghorn chicken (Gallus domesticus) embryo.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 25 (1), 227-232 (2006).</li><li>Crump, D., Chiu, S., Williams, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl)+sulfone+decreases+embryonic+viability+and+alters+hepatic+mRNA+expression+at+two+distinct+developmental+stages+in+chicken+embryos+exposed+via+egg+injection.">Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl) sulfone decreases embryonic viability and alters hepatic mRNA expression at two distinct developmental stages in chicken embryos exposed via egg injection.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (2), 530-537 (2018).</li><li>Franci, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potency+of+polycyclic+aromatic+hydrocarbons+in+chicken+and+Japanese+quail+embryos.">Potency of polycyclic aromatic hydrocarbons in chicken and Japanese quail embryos.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (6), 1556-1564 (2018).</li><li>Rand, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+exposure+to+methylmercury+and+resultant+muscle+mercury+accumulation+and+adult+motor+deficits+in+mice.">Developmental exposure to methylmercury and resultant muscle mercury accumulation and adult motor deficits in mice.</a> Neurotoxicology. 81, 1-10 (2020).</li><li>Tanaka, T., Suzuki, T., Inomata, A., Moriyasu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+effects+of+maternal+exposure+to+fungicides+on+behavioral+development+in+F1+-generation+mice:+2.+Fixed-dose+study+of+thiabendazole.">Combined effects of maternal exposure to fungicides on behavioral development in F1 -generation mice: 2. Fixed-dose study of thiabendazole.</a> Birth Defects Research. , (2020).</li><li>Kofman, O., Lan, A., Raykin, E., Zega, K., Brodski, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+and+social+deficits+and+enhanced+sensitivity+to+prenatal+chlorpyrifos+in+PON1-/-+mouse+pups+and+adults.">Developmental and social deficits and enhanced sensitivity to prenatal chlorpyrifos in PON1-/- mouse pups and adults.</a> PLoS One. 15 (9), 0239738 (2020).</li><li>Kischel, A., Audouard, C., Fawal, M. A., Davy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ephrin-B2+paces+neuronal+production+in+the+developing+neocortex.">Ephrin-B2 paces neuronal production in the developing neocortex.</a> BMC Developmental Biology. 20 (1), 12 (2020).</li><li>Okolo, F., Zhang, G., Rhodes, J., Gittes, G. K., Potoka, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-Amniotic+Sildenafil+Treatment+Promotes+Lung+Growth+and+Attenuates+Vascular+Remodeling+in+an+Experimental+Model+of+Congenital+Diaphragmatic+Hernia.">Intra-Amniotic Sildenafil Treatment Promotes Lung Growth and Attenuates Vascular Remodeling in an Experimental Model of Congenital Diaphragmatic Hernia.</a> Fetal Diagnosis and Therapy. , 1-13 (2020).</li><li>Vyslouzil, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subchronic+continuous+inhalation+exposure+to+zinc+oxide+nanoparticles+induces+pulmonary+cell+response+in+mice.">Subchronic continuous inhalation exposure to zinc oxide nanoparticles induces pulmonary cell response in mice.</a> Journal of Trace Elements in Medicine and Biology. 61, 126511 (2020).</li><li>Wahle, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+neurological+effects+of+cerium+dioxide+nanoparticles+doped+with+different+amounts+of+zirconium+following+inhalation+exposure+in+mouse+models+of+Alzheimer's+and+vascular+disease.">Evaluation of neurological effects of cerium dioxide nanoparticles doped with different amounts of zirconium following inhalation exposure in mouse models of Alzheimer's and vascular disease.</a> Neurochemistry International. 138, 104755 (2020).</li><li>Tanabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-Dimensional+Echocardiography-+Role+in+Clinical+Practice+and+Future+Directions.">Three-Dimensional Echocardiography- Role in Clinical Practice and Future Directions.</a> Circ J. 84 (7), 1047-1054 (2020).</li></ol>

Kyllingembryoet har vært en klassisk modell i utviklingsstudier i 200 år1. Våre metoder presentert i dette manuskriptet har blitt brukt i vurderingen av flere miljøgifter, inkludert perfluorooctanoic acid, svevestøv og dieseleksos med suksess5,7,8,9,10,11,12. Med...

Kyllingembryoet er en klassisk utviklingsmodell, som har blitt brukt i over to hundre år1. Kyllingembryomodellen har forskjellige fordeler sammenlignet med tradisjonelle modeller. Først av alt, så tidlig som for over 70 år siden, hadde den normale utviklingen av kyllingembryoet blitt illustrert veldig tydelig i Hamburger-Hamilton iscenesettelsesguide2, der totalt 46 stadier under kyllingembryoutvikling ble definert med presis tid og morfologiske egenskaper, noe som letter deteksjon av unormal utvikling. I tillegg har kyllingembryomodellen andre funksjoner som å være relativt lavkostnads og overflødig i mengde, relativt nøyaktige eksponeringsdosekontroller, et uavhengig, lukket system i skallet og enkel manipulering av det utviklende embryoet, som alle garanterer sitt potensial til å bli brukt som en kraftig toksikologiske vurderingsmodell. 
Ved kardiotoksisitet har kyllingembryoet et firekammeret hjerte, som ligner pattedyrhjerter, men med tykkere vegger, noe som gir lettere morfologiske vurderinger. I tillegg tillater kyllingembryoet utviklingsinhalasjonseksponering, noe som ikke er mulig i pattedyrmodeller: i løpet av det senere utviklingsstadiet vil kyllingembryoet gå over fra intern åndedrett til ekstern åndedrett (få oksygen via lungen); sistnevnte krever at embryoet trenger inn i luftcellemembranen med nebbet, og begynner å puste luft3, noe som gjør luftcellen til et miniinnåndingskammer. Ved hjelp av dette fenomenet kan de toksikologiske effektene av gassforurensninger på hjertet (og andre organer) vurderes uten behov for dedikerte innåndingskammerinstrumenter. 
I dette manuskriptet beskrives flere vurderingsmetoder for eksponering/endepunkt, som alle tjener til å gjøre kyllingebryoet til et kraftig verktøy i vurderingen av utviklings kardiotoksisitet etter eksponering for miljøgifter.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4% phosphate buffered formaldehydefixative</td>
			<td>Biosharp, Hefei, China</td>
			<td>REF: BL539A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% ethanol</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosignaling monitor BL-420E+</td>
			<td>Taimeng, Chengdu, China</td>
			<td>BL-420E+</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Candling lamp</td>
			<td>Zhenwei, Dezhou, China</td>
			<td>WZ-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable syringe</td>
			<td>Zhiyu, Jiangsu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Egg incubator</td>
			<td>Keyu,Dezhou, China</td>
			<td>KFX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical balance</td>
			<td>OHAUS, Shanghai, China</td>
			<td>AR 224CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro-thermal incubator</td>
			<td>Shenxian, Shanghai, China</td>
			<td>DHP-9022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertile chicken egg</td>
			<td>Jianuo, Jining, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Staining Kit</td>
			<td>Beyotime, Bejing, China</td>
			<td>C0105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology paraffin</td>
			<td>Aladdin, Shanghai, China</td>
			<td>P100928-500g</td>
			<td>Melt point 52~54&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology paraffin</td>
			<td>Aladdin, Shanghai, China</td>
			<td>P100936-500g</td>
			<td>Melt point 62~64&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV catheter</td>
			<td>KDL, Zhejiang, China</td>
			<td></td>
			<td>The catheters have to be soft, plastic ones.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lentivirus</td>
			<td>Genechem, Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td>The lentivirus were individually designed/synthesized by Genechem.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson&#39;s trichrome staining kit</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>G1340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal probe</td>
			<td>Jinuotai, Beijing, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjector (5 uL)</td>
			<td>Anting,Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>CAIKON, Shanghai, China</td>
			<td>XSP-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td>HistoCore BIOCUT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blade</td>
			<td>Leica,Germany</td>
			<td>Leica 819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbitual sodium</td>
			<td>Yitai Technology Co. Ltd.,&#160; Wuhan, China</td>
			<td>CAS: 57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetter(10ul)</td>
			<td>Sartorius, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone iodide</td>
			<td>Longyuquan, Taian, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td>Anqisheng,Suzhou, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Kelun,Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sunflower oil</td>
			<td>Mighty Jiage, Jiangsu, China</td>
			<td></td>
			<td>Any commerical sunflower oil for human consumption should work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>M&#38;G, Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tedlar PVF Bag (5L)</td>
			<td>Delin, Dalian, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex mixer</td>
			<td>SCILOGEX, Rocky Hill, CT, US</td>
			<td>MX-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:1330-20-7</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities

Kyllingembryoer er en klassisk modell i utviklingsstudier. Under utviklingen av kyllingembryoer er tidsvinduet for hjerteutvikling veldefinert, og det er relativt enkelt å oppnå presis og rettidig eksponering via flere metoder. Videre er prosessen med hjerteutvikling i kyllingembryoer lik pattedyr, noe som også resulterer i et firekammeret hjerte, noe som gjør det til en verdifull alternativ modell i vurderingen av utviklingsmessige kardiotoksisiteter. I laboratoriet vårt brukes kyllingembryomodellen rutinemessig i vurderingen av utviklingsmessige kardiotoksisiteter etter eksponering for ulike miljøgifter, inkludert per- og polyfluoroalkyle stoffer (PFAS), svevestøv (PMs), dieseleksos (DE) og nanomaterialer. Eksponeringstiden kan velges fritt basert på behovet, fra begynnelsen av utviklingen (embryonal dag 0, ED0) helt til dagen før luke. De viktigste eksponeringsmetodene inkluderer luftcelleinjeksjon, direkte mikroinjeksjon og luftcelleinnånding (opprinnelig utviklet i laboratoriet vårt), og de tilgjengelige endepunktene inkluderer hjertefunksjon (elektrokardiografi), morfologi (histologiske vurderinger) og molekylære biologiske vurderinger (immunohistokjemi, qRT-PCR, vestlig blotting, etc.). Selvfølgelig har kyllingembryomodellen sine egne begrensninger, for eksempel begrenset tilgjengelighet av antistoffer. Likevel, med flere laboratorier som begynner å bruke denne modellen, kan den brukes til å gi betydelige bidrag til studiet av utviklingsmessige kardiotoksisiteter.

Resultater av eksponering Injeksjon av luftceller Luftcelleinjeksjon kan effektivt utsette utvikling av kyllingembryoer til ulike midler, som senere kan oppdages i de innsamlede prøvene (serum, vev, etc.) av embryoer / hatchling kyllinger. Her er et eksempel, der perfluorooctanoic acid (PFOA) ble luftcelle injisert, og serum PFOA konsentrasjoner ble deretter bestemt med Ultra-ytelse flytende kromatografi-masse spektrometri. Serumkonsentrasjonene korresponderte med de injiserte dosene, noe som indikerer effektivite...

Watch this Scientific Journal Video about Using Chicken Embryo as a Powerful Tool in Assessment of Developmental Cardiotoxicities at JoVE.com

Using Chicken Embryo as a Powerful Tool in Assessment of Developmental Cardiotoxicities

Kyllingembryoer, som en klassisk utviklingsmodell, brukes i laboratoriet vårt for å vurdere utviklingsmessige kardiotoksisiteter etter eksponering for ulike miljøgifter. Eksponeringsmetoder og morfologiske/funksjonelle vurderingsmetoder som er etablert er beskrevet i dette manuskriptet.

Bruke kyllingembryo som et kraftig verktøy i vurdering av utviklingsmessige kardiotoksisiteter

Chicken embryos are a classical model in developmental studies. During the development of chicken embryos, the time window of heart development is ...

Hei alle sammen. Jeg er Qixiao Jiang, førsteamanuensis ved Institutt for toksikologi, Folkehelsehøgskolen ved Qingdao University. På vegne av min forskningsgruppe skal jeg presentere eiendelene ved å bruke kyllingembryoet i utviklingen av vår kardiotoksisitetsvurdering.Kyllingembryo er en klassisk utviklingsmodell som har flere fordeler som enkel manipulering, høy tilgjengelighet, lukket uavhengig system, et cetera. Arbeid med flere miljøgifter, for eksempel fenolsyre. Diesel eksos, spesielt saken på karbon nano rør.Vi har etablert flere eksponeringsmetoder i laboratoriet, men av større grunn utføres også de funksjonelle vurderingene rutinemessig. I denne videoen skal jeg vise deg detaljene, eksponeringsmetodene og de morfologiske funksjonelle vurderingsmetodene for deg. Ta gjerne kontakt med oss hvis du er interessert.Takk. Her er våre eksponeringsmetoder som jeg kan introdusere for deg. Nå er den første metoden jeg skal introdusere en luftcelleinjeksjon, hvor du direkte injiserer i luftcellen.Rengjør overflaten av eggene med poly-jodoppløsning. Dette er kommersielt tilgjengelig polyjodoppløsning, fortynnet med deionisert vann, 1/5. Og så tørker jeg eggeskallet med papir, uten å skrubbe.Det er viktig fordi skrubbing vil bryte deres beskyttende lagbelegg på utsiden av skallet. Renset alle eggene i det mørke rommet og merket luftcellen med en blyant. Utelukke egg med sprekker på skallet.Utelukke også egg med luftceller på siden. Hvis det har en stump spiss, er det svært usannsynlig at de klekkes normalt. Desinfiser luftcelleområdet, så vel som metallsonden, med 75% alkohol.Tørk dem tørre, og bor deretter et lite hull i midten av luftcelleområdet med sonden. Ikke stikk sonden dypt inn i luftcellen. I stedet bryter du bare skallet med spissen av sonden.Hvis hullet fortsatt ikke er stort nok, bryter du skallet igjen i nærheten av det eksisterende hullet, til det er stort nok til at du kan sette inn spissen. Sett pipettespissen inn i hullet med spissen som berører den indre membranen. Injiser blandingen sakte og hold den der i minst 10 sekunder.Dette er for å la den dispenserte oljen bli fullstendig dispensert. Og fjern deretter spissen. Nå forsegler du hullet med en børste og en dråpe smeltet paraffin.Pass på at du ikke drypper smeltet parafin på det indre minnet. Når de er forseglet, legg egg i inkubatoren til de når ønsket embryonal stadium. Den andre metoden jeg skal introdusere er Mikroinjeksjonen.Først av alt må eggene rengjøres og håndteres som beskrevet i luftinjeksjonsdelen. Denne prosedyren må utføres i sterilisert hette. Steriliser luftcelleområdet og instrumenter med aceton.Bor et lite hull i midten av luftcelleområdet med metallsonden. Ikke stikk sonden dypt inn i luftcellen, ellers kan det indre minnet bli skadet. Bruk deretter den samme prosessen for å forstørre hullet forsiktig til diameteren er ca. to millimeter.Dette kan tillate mellomforholdsbekreftelsen for det indre minnet. Last deretter løsningen i mikroinjektor og sett nålen forsiktig gjennom hullet i den indre membranen i omtrent tre millimeter. Dispenser oppløsningen forsiktig og fjern deretter kanylen.Hold kanylen så vinkelrett som mulig. Tett hullet tynt med et lite stykke tape. Dekk hullet helt for å forhindre embryodehydrering og død under etterfølgende inkubasjon.Den tredje metoden jeg skal introdusere er luftcelleinfusjonen. der du innpoder en gassforurensning i luftcellen. Rengjør og håndter eggene som beskrevet i luftcelleinjeksjonsdelen.Og så kan du lese egg til embryonal dag 17. Håndter eggene på embryonal dag 17 for å markere luftcelleområdet. På den embryonale dagen 18, ta egg ut fra inkubatoren, steriliser luftcelleområdet og instrumentene, med aceton.Og bor deretter forsiktig to små hull på to sider av luftcellen. Den ene er til injeksjon av gass eller aerosol. Den andre er for å utvide luften vår.Kontroller forsiktig størrelsen på hullene, slik at siden av injeksjonshullet er akkurat nok til at katetersålen settes inn, mens diameteren på ekspanderende hull skal være litt større. Omtrent en millimeter i diameter. Nå er dette prøveposen vi bruker til å holde målgassen eller aerosolen.Du kan erstatte med hvilken enhet du bruker. Hell forsiktig 10 ml gass eller aerosol i en sprøyte. Og fest deretter sprøyten forsiktig til katetersålen vår med den indre nålefjernkontrollen slik at den er myk.Sett forsiktig denne kateternålen inn i infusjonshullet. Når den er der inne, trykk mot katetersålen. Dette er for å minimere lekkasjen fra injeksjonsstedet.En annen finger kan settes rundt med ekspelhullet for infusjonsbekreftelsen. Hvis du gjør infusjonen forsiktig, bør luftstrømmen fra utvisningshullet lett føles. Det er den opprinnelige luften i luftcellen som blir utvist.Når infusjonen er ferdig, forsegle begge hullene umiddelbart. Disse båndene og returner eggene til inkubatoren din. Jeg kan introdusere vår sluttpunktvurderingsprosess.Bedøv dyrene fullt ut med pentobarbital 33 mg/kg. IP-injeksjon testet av åpningene. Plasser deretter kyllinger på operasjonsbordet.Steriliser mageområdet og elektrodene med etanol. Sett deretter inn to nåleelektroder fra to sider av underlivet kontinuerlig. Pass på at nålene ikke kommer inn i magehulen ved å løfte huden litt.Og sett inn nålen derfra. Når den er satt inn, skyver du nålen forsiktig fremover til den når siden av brysthulen. Pass på at nålen ikke går dypt inn i kroppen eller stikker ut av huden.Gjør deretter målingene med et elektrokardiografisk instrument. Andre seminarinstrumenter som er i stand til EKG kan også brukes. Dette er vår andre vurderingsmetode for sluttpunkt er å kartlegge for Motrin.Dette er hjertets tverrsnitt i veien for HME. Dette er den rette ventrikelen vi skal måle med. For å gjøre dette bruker vi to linjaler.Linjal 1 og linjal 2. Nå kopierer vi bare linjal en til skjermen, og vi endrer størrelsen til riktig størrelse og roterer deretter den. Og vi flytter den slik at de to endene av den horisontale linjen hviler på de 2 endene av de 3 høyre ventrikelveggene.Og nå har vi syv målelinjer som går over vår tre høyre ventrikelvegg. Nå kopierer vi den sekundære linjalen til bildet også. Vi endrer også størrelsen litt og roterer og erstatter det slik at det blir plassert likt.Denne horisontale linjen går parallelt med ytterveggen til høyre ventrikel. Og den vinkelrette ville gå over punktet til der linjalens hvite materielinjer møter den indre veggen eller høyre ventrikel. Og så gjør vi målepunkter slik at den kan måles senere med bilde J.Vi gjentar denne prosessen 7 ganger per prøve, slik at vår representative måling av høyre ventrikel.Jeg skal vise deg et sammendrag av nåværende resultater. Dette er PFOA-injeksjonen i egget før inkubasjon, og du kan se at serumkonsentrasjonen LPF i serum økte effektivt med å øke injeksjonen. Per demonstrasjonen, effektiviteten, av mikroinjeksjonen.Du kan se at A er kontroll, og B, er der antivirusekspressen i stor fluorescens q protein har blitt injisert. Du kan se en sterk fluorescens. Og dette er demonstrasjonen for effektiviteten av epitelinfusjonen.Du kan se at med infusjonen har dramatiske fiberoptiske endringer blitt observert i myokardivevet. OK. Og du kan også se at R-R-intervallene til klekkekyllene 0, 1 og 2 uker. Det endret seg også betydelig etter infusjonen med dieseleksos.Denne metoden angir at du tar hensyn til dette. Her kan du også se at effektiviteten av epitelinfusjonen i dette eksemplet. du kan se at de riktige ventriklene i hjertet effektivt økte etter å ha blitt aerosol infundert med Diesel eksos.Og også selvfølgelig, her bruker vi histomorfometriske metoder. Vi bare viser deg. Dette er ganske effektivt. OK.Dette er alle metodene jeg skal presentere for deg. Jeg håper dette kan legge til rette for andres arbeid med kyllingembryo som et kraftig forskningsverktøy innen utviklingstoksikologi. Ha en fin dag.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

Karakterisering av Thymus- Bosetting stamfedre i Mouse Embryo hjelp<em&gt; I Vivo</em&gt; Og<em&gt; In Vitro</em&gt; Analyser

Characterizing thymic settling progenitors is important to understand the pre-thymic stages of T cell development, essential to devise strategies for T ...

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Mikro Implantasjon i sebrafisk Embryo

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Grafting of Beads into Developing Chicken Embryo Limbs to Identify Signal Transduction Pathways Affecting Gene Expression

Negl Perler inn Utvikling kyllingembryo Limbs å identifisere signaltransduksjonsveier Påvirker Gene Expression

Using chicken embryos it is possible to test directly the effects of either growth factors or specific inhibitors of signaling pathways on gene expression ...

In Ovo Electroporation in the Chicken Auditory Brainstem

In Ovo Electroporation in the Chicken Auditory Brainstem

I Ovo Electroporation i Kylling Auditory Brainstem

Electroporation is a method that introduces genes of interest into biologically relevant organisms like the chicken embryo. It is long established that ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Organotypic kultur metoden å studere utviklingen av embryonale kylling vev

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

Minimalt invasiv embryo Transfer og embryo vitrifikasjon på optimal embryo Stage i Rabbit Model

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging og analyse av muskelsammentrekninger i Drosophila embryo

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

X-ray Diffraction of Intact Murine Skeletal Muscle as a Tool for Studying the Structural Basis of Muscle Disease

X-ray Diffraksjon av intakt murine skjelettmuskulatur som et verktøy for å studere den strukturelle grunnlaget for muskel sykdom

Transgenic mouse models have been important tools for studying the relationship of genotype to phenotype for human diseases including those of skeletal ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Vurdering av oksidativ skade i primær mus okulære overflateceller / stamceller som svar på ultrafiolett-C (UV-C) skade

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

Using Immunofluorescence to Detect PM2.5-induced DNA Damage in Zebrafish Embryo Hearts

Using Immunofluorescence to Detect PM2.5-induced DNA Damage in Zebrafish Embryo Hearts

Bruke immunfluorescens for å oppdage PM2,5-indusertDNA-skade i sebrafisk embryohjerter

Ambient fine particulate matter (PM2.5) exposure can lead to cardiac developmental toxicity but the underlying molecular mechanisms are still unclear. ...