Name: using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities
Uploaded: 2021-03-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Chicken Embryo as a Powerful Tool in Assessment of Developmental Cardiotoxicities at JoVE.com

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (Grant No. 91643203, 91543208, 81502835) tarafından desteklendi.

Açıklanan tüm prosedürler Qingdao Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. Laboratuvarımızda yumurtalar iki kuvözde kuluçkaya yatırıldı. Yumurtalar inkübatörde dik tutuldu ve rastgele raflara yerleştirildi. Yumurtalar için kuluçka koşulları aşağıdaki gibidir: kuluçka sıcaklığı 37,9 ° C'den başladı ve kuluçka ilerledikçe kademeli olarak 37,1 ° C'ye düştü; nem% 50'de başladı ve yavaş yavaş% 70'e yükseldi.
<p class="jove_titl...

<ol>
	<li>Kain, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+as+an+expanding+experimental+model+for+cancer+and+cardiovascular+research.">The chick embryo as an expanding experimental model for cancer and cardiovascular research.</a> Developmental Dynamics. 243 (2), 216-228 (2014).</li><li>Menna, T. M., Mortola, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+posture+on+the+respiratory+mechanics+of+the+chick+embryo.">Effects of posture on the respiratory mechanics of the chick embryo.</a> Journal of Experimental Zoology. 293 (5), 450-455 (2002).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88 (1), 49-92 (1951).</li><li>Yamamoto, F. Y., Neto, F. F., Freitas, P. F., Oliveira Ribeiro, C. A., Ortolani-Machado, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadmium+effects+on+early+development+of+chick+embryos.">Cadmium effects on early development of chick embryos.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 34 (2), 548-555 (2012).</li><li>Lv, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+bone+morphogenetic+protein+2+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+and+l-carnitine+mediated+protection.">The roles of bone morphogenetic protein 2 in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity and l-carnitine mediated protection.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. 352, 68-76 (2018).</li><li>Kmecick, M., Vieira da Costa, M. C., Oliveria Ribeiro, C. A., Ortolani-Machado, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+evidence+of+neurotoxic+effects+in+chicken+embryos+after+exposure+to+perfluorooctanoic+acid+(PFOA)+and+inorganic+cadmium.">Morphological evidence of neurotoxic effects in chicken embryos after exposure to perfluorooctanoic acid (PFOA) and inorganic cadmium.</a> Toxicology. 4227, 152286 (2019).</li><li>Jiang, Q., Lust, R. M., Strynar, M. J., Dagnino, S., DeWitt, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perflurooctanoic+acid+induces+developmental+cardiotoxicity+in+chicken+embryos+and+hatchlings.">Perflurooctanoic acid induces developmental cardiotoxicity in chicken embryos and hatchlings.</a> Toxicology. 293 (1-3), 97-106 (2012).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+ovo+very+early-in-life+exposure+to+diesel+exhaust+induced+cardiopulmonary+toxicity+in+a+hatchling+chick+model.">In ovo very early-in-life exposure to diesel exhaust induced cardiopulmonary toxicity in a hatchling chick model.</a> Environmental Pollution. 264, 114718 (2020).</li><li>Jiang, Q., Lust, R. M., DeWitt, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfluorooctanoic+acid+induced-developmental+cardiotoxicity:+are+peroxisome+proliferator+activated+receptor+alpha+(PPARalpha)+and+bone+morphorgenic+protein+2+(BMP2)+pathways+involved.">Perfluorooctanoic acid induced-developmental cardiotoxicity: are peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPARalpha) and bone morphorgenic protein 2 (BMP2) pathways involved.</a> Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A. 76 (11), 635-650 (2013).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+levels+of+l-carnitine,+acetyl-l-carnitine+and+propionyl-l-carnitine+are+involved+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+in+chicken+embryo.">Changes in the levels of l-carnitine, acetyl-l-carnitine and propionyl-l-carnitine are involved in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity in chicken embryo.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 48, 116-124 (2016).</li><li>Zhao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+PPAR+alpha+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+and+l-carnitine+mediated+protection-Results+of+in+ovo+gene+silencing.">The role of PPAR alpha in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity and l-carnitine mediated protection-Results of in ovo gene silencing.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 56, 136-144 (2017).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particulate+Matter+2.5+Induced+Developmental+Cardiotoxicity+in+Chicken+Embryo+and+Hatchling.">Particulate Matter 2.5 Induced Developmental Cardiotoxicity in Chicken Embryo and Hatchling.</a> Front Pharmacol. 11, 841 (2020).</li><li>Molina, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+air+cell+injection+of+perfluorooctane+sulfonate+before+incubation+on+development+of+the+white+leghorn+chicken+(Gallus+domesticus)+embryo.">Effects of air cell injection of perfluorooctane sulfonate before incubation on development of the white leghorn chicken (Gallus domesticus) embryo.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 25 (1), 227-232 (2006).</li><li>Crump, D., Chiu, S., Williams, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl)+sulfone+decreases+embryonic+viability+and+alters+hepatic+mRNA+expression+at+two+distinct+developmental+stages+in+chicken+embryos+exposed+via+egg+injection.">Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl) sulfone decreases embryonic viability and alters hepatic mRNA expression at two distinct developmental stages in chicken embryos exposed via egg injection.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (2), 530-537 (2018).</li><li>Franci, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potency+of+polycyclic+aromatic+hydrocarbons+in+chicken+and+Japanese+quail+embryos.">Potency of polycyclic aromatic hydrocarbons in chicken and Japanese quail embryos.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (6), 1556-1564 (2018).</li><li>Rand, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+exposure+to+methylmercury+and+resultant+muscle+mercury+accumulation+and+adult+motor+deficits+in+mice.">Developmental exposure to methylmercury and resultant muscle mercury accumulation and adult motor deficits in mice.</a> Neurotoxicology. 81, 1-10 (2020).</li><li>Tanaka, T., Suzuki, T., Inomata, A., Moriyasu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+effects+of+maternal+exposure+to+fungicides+on+behavioral+development+in+F1+-generation+mice:+2.+Fixed-dose+study+of+thiabendazole.">Combined effects of maternal exposure to fungicides on behavioral development in F1 -generation mice: 2. Fixed-dose study of thiabendazole.</a> Birth Defects Research. , (2020).</li><li>Kofman, O., Lan, A., Raykin, E., Zega, K., Brodski, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+and+social+deficits+and+enhanced+sensitivity+to+prenatal+chlorpyrifos+in+PON1-/-+mouse+pups+and+adults.">Developmental and social deficits and enhanced sensitivity to prenatal chlorpyrifos in PON1-/- mouse pups and adults.</a> PLoS One. 15 (9), 0239738 (2020).</li><li>Kischel, A., Audouard, C., Fawal, M. A., Davy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ephrin-B2+paces+neuronal+production+in+the+developing+neocortex.">Ephrin-B2 paces neuronal production in the developing neocortex.</a> BMC Developmental Biology. 20 (1), 12 (2020).</li><li>Okolo, F., Zhang, G., Rhodes, J., Gittes, G. K., Potoka, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-Amniotic+Sildenafil+Treatment+Promotes+Lung+Growth+and+Attenuates+Vascular+Remodeling+in+an+Experimental+Model+of+Congenital+Diaphragmatic+Hernia.">Intra-Amniotic Sildenafil Treatment Promotes Lung Growth and Attenuates Vascular Remodeling in an Experimental Model of Congenital Diaphragmatic Hernia.</a> Fetal Diagnosis and Therapy. , 1-13 (2020).</li><li>Vyslouzil, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subchronic+continuous+inhalation+exposure+to+zinc+oxide+nanoparticles+induces+pulmonary+cell+response+in+mice.">Subchronic continuous inhalation exposure to zinc oxide nanoparticles induces pulmonary cell response in mice.</a> Journal of Trace Elements in Medicine and Biology. 61, 126511 (2020).</li><li>Wahle, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+neurological+effects+of+cerium+dioxide+nanoparticles+doped+with+different+amounts+of+zirconium+following+inhalation+exposure+in+mouse+models+of+Alzheimer's+and+vascular+disease.">Evaluation of neurological effects of cerium dioxide nanoparticles doped with different amounts of zirconium following inhalation exposure in mouse models of Alzheimer's and vascular disease.</a> Neurochemistry International. 138, 104755 (2020).</li><li>Tanabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-Dimensional+Echocardiography-+Role+in+Clinical+Practice+and+Future+Directions.">Three-Dimensional Echocardiography- Role in Clinical Practice and Future Directions.</a> Circ J. 84 (7), 1047-1054 (2020).</li></ol>

Tavuk embriyosu 200 yıldır gelişim çalışmalarında klasik bir model olmuştur1. Bu yazıda sunulan yöntemlerimiz, perflorooktanoik asit, partikül madde ve başarı 5 , 7 ,8,9,10,11,12ile dizel egzoz dahil olmak üzere çeşitli çevresel kirleticilerin değerlendirilmesinde kullanılmıştır.<sup class="xr...

Tavuk embriyosu, iki yüz yılı aşkın bir süredir kullanılan klasik bir gelişim modelidir1. Tavuk embriyo modeli geleneksel modellere göre çeşitli avantajlara sahiptir. Her şeyden önce, 70 yıldan daha erken bir zamanda, tavuk embriyosunun normal gelişimi hamburger-Hamilton evreleme kılavuzu2'de çok net bir şekilde gösterilmişti Tavuk embriyosu gelişimi sırasında toplam 46 aşamanın kesin zaman ve morfolojik özelliklerle tanımlandığı ve anormal gelişimin tespitini kolaylaştırdığı. Ek olarak, tavuk embriyo modeli, miktar olarak nispeten düşük maliyetli ve yedekli olmak, nispeten doğru maruz kalma-doz kontrolleri, kabuk içinde bağımsız, kapalı bir sistem ve gelişmekte olan embriyonun kolay manipülasyonu gibi başka özelliklere sahiptir ve bunların hepsi güçlü bir toksikolojik değerlendirme modeli olarak kullanılma potansiyelini garanti eder. 
Kardiyotoksiklikte, tavuk embriyosu, memeli kalplerine benzer, ancak daha kalın duvarlara sahip dört odalı bir kalbe sahiptir ve daha kolay morfolojik değerlendirmelere izin verir. Ek olarak, tavuk embriyosu memeli modellerinde mümkün olmayan gelişimsel inhalasyona maruz kalmaya izin verir: gelişimin sonraki aşamasında, tavuk embriyosu iç solunumdan dış solunuma (akciğer yoluyla oksijen almaya) geçiş yapacaktır; ikincisi, embriyonun gaga ile hava hücresi zarını deldiğini ve hava hücresini bir mini inhalasyon odası haline getiren3. Bu fenomen kullanılarak, gaz kirleticilerin kalp (ve diğer organlar) üzerindeki toksikolojik etkileri, özel soluma odası aletlerine gerek kalmadan değerlendirilebilir. 
Bu yazıda, hepsi tavuk embriyosunun çevresel kirleticilere maruz kalmanın ardından gelişim kardiyotoksikliğinin değerlendirilmesinde güçlü bir araç haline getirmeye hizmet eden çeşitli maruz kalma/uç nokta değerlendirme yöntemleri açıklanmıştır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4% phosphate buffered formaldehydefixative</td>
			<td>Biosharp, Hefei, China</td>
			<td>REF: BL539A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% ethanol</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosignaling monitor BL-420E+</td>
			<td>Taimeng, Chengdu, China</td>
			<td>BL-420E+</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Candling lamp</td>
			<td>Zhenwei, Dezhou, China</td>
			<td>WZ-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable syringe</td>
			<td>Zhiyu, Jiangsu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Egg incubator</td>
			<td>Keyu,Dezhou, China</td>
			<td>KFX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical balance</td>
			<td>OHAUS, Shanghai, China</td>
			<td>AR 224CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro-thermal incubator</td>
			<td>Shenxian, Shanghai, China</td>
			<td>DHP-9022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertile chicken egg</td>
			<td>Jianuo, Jining, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Staining Kit</td>
			<td>Beyotime, Bejing, China</td>
			<td>C0105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology paraffin</td>
			<td>Aladdin, Shanghai, China</td>
			<td>P100928-500g</td>
			<td>Melt point 52~54&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology paraffin</td>
			<td>Aladdin, Shanghai, China</td>
			<td>P100936-500g</td>
			<td>Melt point 62~64&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV catheter</td>
			<td>KDL, Zhejiang, China</td>
			<td></td>
			<td>The catheters have to be soft, plastic ones.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lentivirus</td>
			<td>Genechem, Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td>The lentivirus were individually designed/synthesized by Genechem.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson&#39;s trichrome staining kit</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>G1340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal probe</td>
			<td>Jinuotai, Beijing, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjector (5 uL)</td>
			<td>Anting,Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>CAIKON, Shanghai, China</td>
			<td>XSP-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td>HistoCore BIOCUT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blade</td>
			<td>Leica,Germany</td>
			<td>Leica 819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbitual sodium</td>
			<td>Yitai Technology Co. Ltd.,&#160; Wuhan, China</td>
			<td>CAS: 57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetter(10ul)</td>
			<td>Sartorius, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone iodide</td>
			<td>Longyuquan, Taian, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td>Anqisheng,Suzhou, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Kelun,Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sunflower oil</td>
			<td>Mighty Jiage, Jiangsu, China</td>
			<td></td>
			<td>Any commerical sunflower oil for human consumption should work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>M&#38;G, Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tedlar PVF Bag (5L)</td>
			<td>Delin, Dalian, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex mixer</td>
			<td>SCILOGEX, Rocky Hill, CT, US</td>
			<td>MX-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:1330-20-7</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities

Tavuk embriyoları gelişimsel çalışmalarda klasik bir modeldir. Tavuk embriyolarının gelişimi sırasında, kalp gelişiminin zaman aralığı iyi tanımlanmıştır ve birden fazla yöntemle hassas ve zamanında maruz kalma elde etmek nispeten kolaydır. Ayrıca, tavuk embriyolarındaki kalp gelişimi süreci memelilere benzer, ayrıca dört odalı bir kalple sonuçlanır ve gelişimsel kardiyotoksikliklerin değerlendirilmesinde değerli bir alternatif model haline getirir. Laboratuvarımızda tavuk embriyo modeli, per-ve polifloroalkil maddeler (PFAS), partikül madde (PM'ler), dizel egzoz (DE) ve nano malzemeler dahil olmak üzere çeşitli çevresel kirleticilere maruz kalmanın ardından gelişimsel kardiyotoksioksikliklerin değerlendirilmesinde rutin olarak kullanılmaktadır. Maruz kalma süresi, gelişimin başlangıcından (embriyonik gün 0, ED0) yumurtadan çıkmadan önceki güne kadar ihtİyaca göre serbestçe seçilebilir. Başlıca maruz kalma yöntemleri arasında hava hücresi enjeksiyonu, doğrudan mikroenjeksiyon ve hava hücresi solunması (başlangıçta laboratuvarımızda geliştirilmiştir) ve şu anda mevcut uç noktalar arasında kardiyak fonksiyon (elektrokardiyografi), morfoloji (histolojik değerlendirmeler) ve moleküler biyolojik değerlendirmeler (immünofistokimya, qRT-PCR, batı şişkinliği vb.) sayılmalıdır. Tabii ki, tavuk embriyo modelinin antikorların sınırlı mevcudiyeti gibi kendi sınırlamaları vardır. Bununla birlikte, daha fazla laboratuvarın bu modeli kullanmaya başlamasıyla, gelişimsel kardiyotoksikliklerin çalışmasına önemli katkılar sağlamak için kullanılabilir.

Pozlama sonuçları Hava hücresi enjeksiyonu Hava hücresi enjeksiyonu, gelişmekte olan tavuk embriyolarını, daha sonra embriyoların / kuluçka tavuklarının toplanan örneklerinde (serum, doku vb.) tespit edilebilen çeşitli ajanlara etkili bir şekilde maruz bırakabilir. Perflorooktanoik asidin (PFOA) hava hücresi enjekte edildiği ve serum PFOA konsantrasyonlarının daha sonra Ultra performanslı sıvı kromatografi-kütle spektrometresi ile belirlendiği bir örnektir. Serum konsantrasyonları enjekte...

Watch this Scientific Journal Video about Using Chicken Embryo as a Powerful Tool in Assessment of Developmental Cardiotoxicities at JoVE.com

Using Chicken Embryo as a Powerful Tool in Assessment of Developmental Cardiotoxicities

Tavuk embriyoları, klasik bir gelişim modeli olarak, laboratuvarımızda çeşitli çevresel kirleticilere maruz kalmanın ardından gelişimsel kardiyotoksioksiklikleri değerlendirmek için kullanılır. Bu yazıda maruz kalma yöntemleri ve kurulan morfolojik/fonksiyonel değerlendirme yöntemleri açıklanmıştır.

Gelişimsel Kardiyotoksikliklerin Değerlendirilmesinde Tavuk Embriyosunun Güçlü Bir Araç Olarak Kullanılması

Chicken embryos are a classical model in developmental studies. During the development of chicken embryos, the time window of heart development is ...

Herkese merhaba. Ben Qixiao Jiang, Qingdao Üniversitesi Halk Sağlığı Okulu Toksikoloji Bölümü'nden Doçent. Araştırma grubum adına, kardiyo toksisite değerlendirmemizi geliştirmede tavuk embriyosunu kullanmanın varlıklarını sunacağım.Tavuk embriyosu kolay manipülasyon, yüksek erişilebilirlik, kapalı bağımsız sistem vesaire gibi birden fazla avantajı olan klasik bir gelişim modelidir. Fenolik tannik asit gibi birden fazla çevresel kirletici ile çalışmak. Dizel egzoz, özellikle karbon nano tüpler üzerinde sorun.Laboratuvarda birden fazla maruz kalma yöntemimiz var, ancak daha büyük bir nedenden dolayı, fonksiyonel değerlendirmeler de rutin olarak gerçekleştirilir. Bu videoda size pozlama yöntemlerinin ve morfolojik fonksiyonel değerlendirme yöntemlerinin ayrıntılarını göstereceğim. İlgileniyorsanız bizimle iletişime geçmek için çekinmeyin.Teşekkürler. İşte size tanıtabileceğim maruz kalma yöntemlerimiz. Şimdi sunacağım ilk yöntem, doğrudan hava hücresine enjekte edeceğin bir hava hücresi enjeksiyonu.Yumurtaların yüzeyini poli-iyot çözeltisi ile temizleyin. Bu, deiyonize su ile seyreltilmiş, 1/5 ticari olarak mevcut poli-iyodür çözeltisidir. Ve sonra, yumurta kabuğuu fırçalamadan kağıt mendille kurutuyorum.Bu önemlidir, çünkü ovma kabuğun dışındaki koruyucu tabaka kaplamalarını kıracaktır. Karanlık odadaki tüm yumurtaları temizledim ve hava hücresini bir kalemle işaretledim. Kabukta çatlaklar olan yumurtaları hariç tutun.Ayrıca yan tarafında hava hücreleri olan yumurtaları hariç tutun. Eğer bunun künt bir ucu varsa, bunların normal şekilde yumurtadan çıkma olasılığı oldukça düşüktür. Hava hücresi alanını ve metal probu %75 alkolle sterilize edin.Onları kurulayın ve ardından sonda ile hava hücresi alanının merkezinde küçük bir delik açın. Sondayı hava hücresinin derinliklerine sokmayın. Bunun yerine, kabuğu sadece sondanın ucuyla kırın.Delik hala yeterince büyük değilse, ucun yerleştirilmesine izin sağlayacak kadar büyük olana kadar kabuğu mevcut deliğin yakınında tekrar kırın. Pipet ucunu iç zara dokunan uçla deliğe yerleştirin. Yavaşça karışımı enjekte edin ve en az 10 saniye orada tutun.Bu, dağıtılan yağın tamamen dağıtılmasını sağlamaktır. Sonra da ucunu çıkar. Şimdi, deliği bir fırça ve bir damla erimiş parafinle kapatın.Erimiş parafinleri iç belleğe damlatmamaya dikkat edin. Mühürlendikten sonra, istenen embriyonik aşamaya ulaşana kadar inkübatöre yumurta yerleştirin. İkincisi, tanıtacağım yöntem mikro enjeksiyon.Her şeyden önce, yumurtaların hava enjeksiyonu bölümünde açıklandığı gibi temizlenmesi ve işlenmesi gerekir. Bu işlemin sterilize edilmiş davlumbazda yapılması gerekir. Hava hücresi alanını ve aletleri asetonla sterilize edin.Metal prob ile hava hücresi alanının merkezinde küçük bir delik açın. Probu hava hücresine derinlemesine sokmayın, aksi takmış olabilir. Ardından, çap yaklaşık iki milimetre olana kadar deliği dikkatlice büyütmek için aynı işlemi kullanın.Bu, iç belleğin oran onayına izin verebilir. Daha sonra çözeltiyi mikro enjektöre yükleyin ve iğneyi delikten iç zara yaklaşık toplam üç milimetre boyunca dikkatlice yerleştirin. Çözeltiyi yavaşça dağıtın ve ardından iğneyi çıkarın.İğneyi mümkün olduğunca dik tutun. İnce, deliği küçük bir bant parçasıyla kapatın. Embriyo dehidrasyonunu ve sonraki inkübasyon sırasında ölümü önlemek için deliği tamamen kapatın.Sunacağım üçüncü yöntem hava hücresi infüzyonu. Hava hücresine gaz kirleticisi aşılarsınız. Hava hücresi enjeksiyon bölümünde açıklandığı gibi yumurtaları temizleyin ve işleyin.Ve sonra embriyonik 17. Hava hücresi bölgesini işaretlemek için embriyonik 17. Embriyonik 18.Ve sonra hava hücresinin iki tarafında dikkatlice iki küçük delik açın. Biri gaz veya aerosol enjeksiyonu içindir. Diğeri havamızı genişletmek için.Deliklerin boyutunu dikkatlice kontrol edin, böylece enjeksiyon deliğinin tarafı kateter iğnesinin yerleştirilmesi için yeterlidir, genişleyen deliğin çapı biraz daha büyük olmalıdır. Yaklaşık bir milimetre çapında. Bu, hedef gazı veya aerosolü tutmak için kullandığımız örnek torba.Kullandığınız cihazla değiştirebilirsiniz. Bir şırınd içine hafifçe 10 mL gaz veya aerosol dökün. Ve sonra, şırıngayı kateter iğnemize iç iğne uzaktan kumandası ile dikkatlice takın, böylece yumuşak olur.Bu kateter iğnesini infüzyon deliğine yavaşça yerleştirin. İçeri girdikten sonra kateter iğneye basınç uygulayın. Bu, enjeksiyon bölgesinden sızıntıyı en aza indirmektir.infüzyon onayınız için dışarı atma deliği ile başka bir parmak takılabilir. infüzyonu nazikçe yaparsanız, dışarı atılan delikten hava akışı kolayca hissedilmelidir. Hava hücresindeki orijinal hava dışarı atılıyor.infüzyon yapıldığında, her iki deliği de hemen kapatın. Bu kasetler ve yumurtaları inkübatöre geri verin. Uç nokta değerlendirme sürecimizi tanıtabilirim.Hayvanları pentobarbital 33 mg / kg ile tamamen uyuşturun. Açıklar tarafından test edilen IP enjeksiyonu. Daha sonra tavukları operasyon masasına yerleştirin.Karın bölgesini ve elektrotları etanol ile sterilize edin. Daha sonra, karın alt kısmının iki tarafından sürekli olarak iki iğne elektrodu yerleştirin. Cildi biraz kaldırarak iğnelerin karın boşluğuna girmemesine dikkat edin.İğneyi de oradan sok. Yerleştirildikten sonra, iğneyi göğüs boşluğunun kenarına ulaşana kadar dikkatlice ileri itin. İğnenin vücudun derinliklerine gitmediğinden veya ciltten dışarı çıkmadığından emin olun.Daha sonra ölçümleri elektrokardiyografik bir aletle yapın. EKG yapabilen diğer seminer aletleri de kullanılabilir. Bu bizim ikinci uç nokta değerlendirme yöntemimiz Motrin için haritalamaktır.Bu, HME yolundaki kalbin kesitleridir. Bu ölçümle ölçeceğimiz doğru karıncık. Bunu yapmak için iki cetvel kullanıyoruz.Cetvel 1 ve cetvel 2. Şimdi cetvel birini ekrana kopyalıyoruz ve uygun boyuta yeniden boyutlandırıp döndürüyoruz. Ve yatay çizginin iki ucu 3 sağ ventrikül duvarının 2 ucuna dayanması için hareket ettiriyoruz.Ve şimdi üç sağ ventrikül duvarımızdan geçen yedi ölçüm hattımız var. Şimdi ikincil cetveli de resme kopyalıyoruz. Ayrıca biraz yeniden boyutlandırırız ve benzer şekilde yerleştirilecek şekilde döndürüp değiştiririz.Bu yatay çizgi sağ ventrikülün dış duvarına paralel gider. Ve dik olan, cetvelin beyaz madde çizgilerinin iç duvarla veya sağ karıncığın birleştiği noktaya gider. Ve daha sonra J.Bu işlemi örnek başına 7 kez tekrarlayarak sağ ventrikülümüzün temsili ölçümüyle ölçülebilmesi için ölçüm noktaları yapıyoruz.Size mevcut sonuçların bir özetini göstereceğim. Bu, kuluçkadan önce yumurtaya PFOA enjeksiyonudur ve enjeksiyonun arttırılmasıyla serum konsantrasyonu LPF'nin serumdaki etkili bir şekilde arttığını görebilirsiniz. Gösteriye göre, mikro enjeksiyonun etkinliği.A'nın kontrol olduğunu ve B'nin büyük floresan q proteini içeren antivirüs ekspresinin enjekte edildiği yer olduğunu görebilirsiniz. Güçlü bir floresan görebilirsiniz. Ve bu epitel infüzyonunun etkinliği için bir gösteridir.infüzyon ile miyokard dokusunda dramatik lif optik değişiklikler gözlendiğini görebilirsiniz. Tamam. Ayrıca kuluçkalık tavukların R-R Aralıklarının 0, 1 ve 2 hafta olduğunu görebilirsiniz. Ayrıca dizel egzozlu infüzyondan sonra önemli ölçüde değişti.Bu yöntemi hesaba katdığınızı gösterir. Burada, epitel infüzyonunun etkinliğini de bu örnekte görebilirsiniz. Dizel egzoz ile aerosol aşılandıktan sonra kalbin sağ ventriküllerinin etkili bir şekilde arttığını görebilirsiniz.Ve tabii ki, burada histopomorfometrik yöntemleri kullanıyoruz. Sadece gösteriyoruz. Bu oldukça etkilidir. Tamam.Sana sunacağım tüm yöntemler bunlar. Umarım bu, Gelişimsel Toksikoloji'de güçlü bir araştırma aracı olarak diğer insanların tavuk embriyosu ile çalışmalarını kolaylaştırabilir. İyi günler.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

Timus Karakterizasyonu kullanma Fare Embriyo atalarıdır Settling<em&gt; In Vivo</em&gt; Ve<em&gt; In Vitro</em&gt; Tahliller

Characterizing thymic settling progenitors is important to understand the pre-thymic stages of T cell development, essential to devise strategies for T ...

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Zebra balığı Embriyo microbead İmplantasyonu

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Grafting of Beads into Developing Chicken Embryo Limbs to Identify Signal Transduction Pathways Affecting Gene Expression

Gen İfade Etkileyen Sinyal İletimi Pathways tanımak Tavuk Embriyo uzuvlar Geliştirme içine Boncuk eklenme

Using chicken embryos it is possible to test directly the effects of either growth factors or specific inhibitors of signaling pathways on gene expression ...

In Ovo Electroporation in the Chicken Auditory Brainstem

In Ovo Electroporation in the Chicken Auditory Brainstem

Tavuk İşitsel Beyinsapındaki Ovo Elektroporasyonunda

Electroporation is a method that introduces genes of interest into biologically relevant organisms like the chicken embryo. It is long established that ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Embriyonik tavuk doku gelişimi çalışmaya Organotypic kültür yöntemi

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

En düşük Invaziv embriyo transferi ve tavşan modelinde optimum embriyo aşamasında embriyo vitrifikasyon

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Canlı görüntüleme ve Drosophila embryo kas kasılmaları Analizi

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

X-ray Diffraction of Intact Murine Skeletal Muscle as a Tool for Studying the Structural Basis of Muscle Disease

Kas hastalığının yapısal temelini Incelemek için bir araç olarak bozulmamış Murine Iskelet kasının X-ışını kırması

Transgenic mouse models have been important tools for studying the relationship of genotype to phenotype for human diseases including those of skeletal ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Ultraviyole-C (UV-C) Hasarına Yanıt Olarak Birincil Fare Oküler Yüzey Hücrelerinde/Kök Hücrelerinde Oksidatif Hasarın Değerlendirilmesi

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

Using Immunofluorescence to Detect PM2.5-induced DNA Damage in Zebrafish Embryo Hearts

Using Immunofluorescence to Detect PM2.5-induced DNA Damage in Zebrafish Embryo Hearts

Zebra Balığı Embriyo Kalplerinde PM2.5kaynaklı DNA Hasarını Tespit Etmek için İmmünofluoresans Kullanma

Ambient fine particulate matter (PM2.5) exposure can lead to cardiac developmental toxicity but the underlying molecular mechanisms are still unclear. ...