Name: monitoring neutrophil elastase and cathepsin g activity in human sputum samples
Uploaded: 2021-05-21T14:00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Neutrophil Elastase and Cathepsin G Activity in Human Sputum Samples at JoVE.com

وقد تم دعم هذا المشروع من خلال منح من وزارة التعليم والبحوث الألمانية (FKZ 82DZL004A1 إلى M.A.M) ومؤسسة البحوث الألمانية (SFB-TR84TP B08 إلى M.A.M). تم دعم العمل الموصوف في هذه المخطوطة من قبل المركز الألماني لأبحاث الرئة (DZL) و EMBL هايدلبرغ من خلال زمالة دكتوراه في M.G. ونشكر ج. شاترني، وس. بوتز، وه. شورمان على المساعدة التقنية الخبيرة.

<ol>
	<li>Korkmaz, B., Moreau, T., Gauthier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+elastase,+proteinase+3+and+cathepsin+G:+Physicochemical+properties,+activity+and+physiopathological+functions.">Neutrophil elastase, proteinase 3 and cathepsin G: Physicochemical properties, activity and physiopathological functions.</a> Biochimie. 90 (2), 227-242 (2008).</li><li>Sheshachalam, A., Srivastava, N., Mitchell, T., Lacy, P., Eitzen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Granule+Protein+Processing+and+Regulated+Secretion+in+Neutrophils.">Granule Protein Processing and Regulated Secretion in Neutrophils.</a> Frontiers in Immunology. 5, 448 (2014).</li><li>Pham, C. T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+serine+proteases:+Specific+regulators+of+inflammation.">Neutrophil serine proteases: Specific regulators of inflammation.</a> Nature Reviews Immunology. 6 (7), 541-550 (2006).</li><li>Gehrig, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+neutrophil+elastase+reduces+inflammation,+mucus+hypersecretion,+and+emphysema,+but+not+mucus+obstruction,+in+mice+with+cystic+fibrosislike+lung+disease.">Lack of neutrophil elastase reduces inflammation, mucus hypersecretion, and emphysema, but not mucus obstruction, in mice with cystic fibrosislike lung disease.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 189 (9), 1082-1092 (2014).</li><li>McKelvey, M. C., Weldon, S., McAuley, D. F., Mall, M. A., Taggart, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+proteases+in+cystic+fibrosis+lung+disease+paradigms,+progress,+and+potential.">Targeting proteases in cystic fibrosis lung disease paradigms, progress, and potential.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 201 (2), 141-147 (2020).</li><li>Clancy, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+Neutrophil+Proteases+Are+Efficient+Regulators+of+IL-1,+IL-33,+and+IL-36+Cytokine+Activity+but+Poor+Effectors+of+Microbial+Killing.">Extracellular Neutrophil Proteases Are Efficient Regulators of IL-1, IL-33, and IL-36 Cytokine Activity but Poor Effectors of Microbial Killing.</a> Cell Reports. 22 (11), 2937-2950 (2018).</li><li>Giacalone, V. D., Margaroli, C., Mall, M. A., Tirouvanziam, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+adaptations+upon+recruitment+to+the+lung:+New+concepts+and+implications+for+homeostasis+and+disease.">Neutrophil adaptations upon recruitment to the lung: New concepts and implications for homeostasis and disease.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (3), 1-21 (2020).</li><li>Sly, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+Factors+for+Bronchiectasis+in+Children+with+Cystic+Fibrosis.">Risk Factors for Bronchiectasis in Children with Cystic Fibrosis.</a> New England Journal of Medicine. 368 (21), 1963-1970 (2013).</li><li>Owen, C. A., Campbell, M. A., Sannes, P. L., Boukedes, S. S., Campbell, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+surface-bound+elastase+and+cathepsin+G+on+human+neutrophils:+A+novel,+non-oxidative+mechanism+by+which+neutrophils+focus+and+preserve+catalytic+activity+of+serine+proteinases.">Cell surface-bound elastase and cathepsin G on human neutrophils: A novel, non-oxidative mechanism by which neutrophils focus and preserve catalytic activity of serine proteinases.</a> Journal of Cell Biology. 131 (3), 775-789 (1995).</li><li>Brinkmann, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+Extracellular+Traps+Kill+Bacteria.">Neutrophil Extracellular Traps Kill Bacteria.</a> Science. 303 (5663), 1532-1535 (2004).</li><li>Margaroli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastase+Exocytosis+by+Airway+Neutrophils+Associates+with+Early+Lung+Damage+in+Cystic+Fibrosis+Children.">Elastase Exocytosis by Airway Neutrophils Associates with Early Lung Damage in Cystic Fibrosis Children.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. , (2018).</li><li>Owen, C., Campbell, M. A., Sannes, P. L., Boukedes, S. S., Carolina, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+surface-bound+elastase+and+cathepsin+G+on+human+neutrophils:+a+novel,+non-oxidative+mechanism+by+which+neutrophils+focus+and+preserve+catalytic+activity+of+serine+proteinases.">Cell surface-bound elastase and cathepsin G on human neutrophils: a novel, non-oxidative mechanism by which neutrophils focus and preserve catalytic activity of serine proteinases.</a> The Journal of cell biology. 131 (3), 775-789 (1995).</li><li>Garland, M., Yim, J. J., Bogyo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Bright+Future+for+Precision+Medicine:+Advances+in+Fluorescent+Chemical+Probe+Design+and+Their+Clinical+Application.">A Bright Future for Precision Medicine: Advances in Fluorescent Chemical Probe Design and Their Clinical Application.</a> Cell chemical biology. 23 (1), 122-136 (2016).</li><li>Gehrig, S., Mall, M. A., Schultz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatially+resolved+monitoring+of+neutrophil+elastase+activity+with+ratiometric+fluorescent+reporters.">Spatially resolved monitoring of neutrophil elastase activity with ratiometric fluorescent reporters.</a> Angewandte Chemie - International Edition. 51 (25), 6258-6261 (2012).</li><li>Guerra, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cathepsin+G+Activity+as+a+New+Marker+for+Detecting+Airway+Inflammation+by+Microscopy+and+Flow+Cytometry.">Cathepsin G Activity as a New Marker for Detecting Airway Inflammation by Microscopy and Flow Cytometry.</a> ACS Central Science. 5 (3), 539-548 (2019).</li><li>Hu, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+mouse+tumors+by+a+lipidated+cathepsin+S+substrate.">In vivo imaging of mouse tumors by a lipidated cathepsin S substrate.</a> Angewandte Chemie - International Edition. 53 (29), 7669-7673 (2014).</li><li>Korkmaz, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+elastase,+proteinase+3+and+cathepsin+G+activities+at+the+surface+of+human+neutrophils+with+fluorescence+resonance+energy+transfer+substrates.">Measuring elastase, proteinase 3 and cathepsin G activities at the surface of human neutrophils with fluorescence resonance energy transfer substrates.</a> Nature Protocols. 3 (6), 991-1000 (2008).</li><li>Craven, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Super-silent+FRET+Sensor+Enables+Live+Cell+Imaging+and+Flow+Cytometric+Stratification+of+Intracellular+Serine+Protease+Activity+in+Neutrophils.">Super-silent FRET Sensor Enables Live Cell Imaging and Flow Cytometric Stratification of Intracellular Serine Protease Activity in Neutrophils.</a> Scientific Reports. 8 (1), 13490 (2018).</li><li>Mu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small-molecule+fret+reporter+for+the+real-time+visualization+of+cell-surface+proteolytic+enzyme+functions.">A small-molecule fret reporter for the real-time visualization of cell-surface proteolytic enzyme functions.</a> Angewandte Chemie - International Edition. 53 (52), 14357-14362 (2014).</li><li>Hagner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+method+for+rapid+and+dynamic+quantification+of+elastase+activity+on+sputum+neutrophils+from+patients+with+cystic+fibrosis+using+flow+cytometry.">New method for rapid and dynamic quantification of elastase activity on sputum neutrophils from patients with cystic fibrosis using flow cytometry.</a> European Respiratory Journal. 55 (4), 1902355 (2020).</li><li>Dittrich, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastase+activity+on+sputum+neutrophils+correlates+with+severity+of+lung+disease+in+cystic+fibrosis.">Elastase activity on sputum neutrophils correlates with severity of lung disease in cystic fibrosis.</a> European Respiratory Journal. , 1701910 (2018).</li><li>Cobos-Correa, A., Trojanek, J. B., Diemer, S., Mall, M. A., Schultz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane-bound+FRET+probe+visualizes+MMP12+activity+in+pulmonary+inflammation.">Membrane-bound FRET probe visualizes MMP12 activity in pulmonary inflammation.</a> Nature Chemical Biology. 5 (9), 628-630 (2009).</li><li>Hu, H. -. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FRET-based+and+other+fluorescent+proteinase+probes.">FRET-based and other fluorescent proteinase probes.</a> Biotechnology Journal. 9 (2), 266-281 (2014).</li><li>Trojanek, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Airway+mucus+obstruction+triggers+macrophage+activation+and+matrix+metalloproteinase+12-dependent+emphysema.">Airway mucus obstruction triggers macrophage activation and matrix metalloproteinase 12-dependent emphysema.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 51 (5), 709-720 (2014).</li><li>Wagner, C. J., Schultz, C., Mall, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+elastase+and+matrix+metalloproteinase+12+in+cystic+fibrosis+lung+disease.">Neutrophil elastase and matrix metalloproteinase 12 in cystic fibrosis lung disease.</a> Molecular and Cellular Pediatrics. 3 (1), 25 (2016).</li><li>Gaggar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+matrix+metalloproteinases+in+cystic+fibrosis+lung+disease.">The role of matrix metalloproteinases in cystic fibrosis lung disease.</a> The European respiratory journal. 38 (3), 721-727 (2011).</li><li>Guerra, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protease+FRET+Reporters+Targeting+Neutrophil+Extracellular+Traps.">Protease FRET Reporters Targeting Neutrophil Extracellular Traps.</a> Journal of the American Chemical Society. 142 (48), 20299-20305 (2020).</li><li>Middleton, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elexacaftor-Tezacaftor-Ivacaftor+for+Cystic+Fibrosis+with+a+Single+Phe508del+Allele.">Elexacaftor-Tezacaftor-Ivacaftor for Cystic Fibrosis with a Single Phe508del Allele.</a> New England Journal of Medicine. 381 (19), 1809-1819 (2019).</li></ol>

ولا يعلن صاحبا البلاغ عن وجود تضارب في المصالح.

وتشرح البروتوكولات المبلغ عنها نهجا مختلفة لقياس نشاط إيلاستاز العدلات والكاثيبسين G في عينات البلغم البشري. النقاط الحرجة لقياس نشاط إنزيم ناجح هي 1) التوقيت الدقيق وتوحيد الإجراء المنطوق و2) استخدام ضوابط سلبية وإيجابية موثوقة. إذا تم استيفاء هذه الشروط، لا تقتصر الطرق الموصوفة على البلغم ولكن يمكن أيضا تكييفها بسهولة لتحليل نشاط البروتيز في الدم وسوائل الحمم الهوائية وأقسام الأنسجة أو المتجانسات.
كل من التقنيات الثلاث لها نقاط قوتها والقيود، والتي غالبا ما تكمل بعضها البعض. على سبيل المثال، يسمح قياس التدفق الخلوي بالتحليل السريع لتجمعات الخلايا النادرة وكذلك الفينوتينينج الخلوي ولكنه يفتقر إلى معلومات الاستبانة المكانية، والتي يمكن تحقيقها عن طريق المجهر. بدلا من ذلك، تسمح قياسات قارئ اللوحة بإجراء تقييم مواز لعدة عينات أو ظروف بطريقة عالية الإنتاجية. وبما أنه لا يمكن تجميد خلايا البلغم الطازجة وتخزينها، فإن الطرق الثلاث تتطلب معالجة العينات بسرعة بعد التوقع. وهذا يحد من مرونة أو إنتاجية قياسات النشاط المرتبطة بالغشاء. تطوير بروتوكول قياس التدفق الخلوي الذي يسمح لإصلاح الخلايا بعد إضافة التحقيق والانقسام الأنزيمي من شأنه أن يفتح على القياس الموازي لعدد أكبر من الأنابيب. وعلاوة على ذلك، ينبغي إيلاء اهتمام خاص لمعالجة وتخزين مسابير فريت. في الواقع، تخضع بعض الأمينواسيدات الموجودة في ركيزة الببتيد، مثل الميثيونين، للأكسدة مما يؤدي إلى انخفاض حساسية المراسل. لزيادة العمر الافتراضي للمراسل (يقدر بحوالي ثلاثة أشهر عند 20 درجة مئوية) ، يمكن تخزينها في حجم صغير aliquots (1-2 ميكرولتر) تحت غاز خامل مثل النيتروجين أو الأرجون.
في CF وأمراض الرئة الالتهابية المزمنة الأخرى من المهم الكشف عن الالتهاب في أقرب وقت ممكن ، والمؤشرات الحيوية الموثوقة لديها القدرة على تحقيق مثل هذا الهدف. إمكانية الكشف عن نشاط NSPs المرتبط بالسطح ، والذي ثبت أنه ضار للأنسجة المحيطة ، أيضا في الظروف التي لا يوجد فيها نشاط NE مجاني أو قليل ، يضيف مستوى آخر من المعلومات القيمة ، والتي لا يمكن تحقيقها بصعوبة عن طريق الطرق الأخرى الموجودة4،11.
يمكن استخدام المراسلين لدراسة ارتباط نشاط NSP المرتبط بالغشاء مع شدة وتطور أمراض الرئة ، خاصة في بدايتها المبكرة. يمكن استخدام الأساليب لمراقبة فعالية العلاج (على سبيل المثال ، العلاجات المضادة للالتهابات أو تحوير CFTR الفعال للغاية وأجهزة القوية28)والتحقيق في التثبيط الناتج عن الالتهاب المدفوع بالنيوتروف. بالإضافة إلى ذلك ، تستند البروتوكولات إلى إجراءات عينة غير جراحية تحمل مخاطر منخفضة للغاية للمريض ، وبالتالي ، يمكن استخدامها على نطاق واسع جدا وفتح الأبواب أمام العديد من التطبيقات المثيرة.

الإلستازي العدلي (NE), الكاثيبسين G (CG), بروتيناز 3 (PR3) وبروتياز سيرين العدلات 4 (NSP4) هي بروتياز سيرين العدلات الأربعة (NSPs)1. يتم تخزينها، جنبا إلى جنب مع myeloperoxidase، داخل حبيبات العدلات الأولية أو azurophilic. نظرا لمحتواها المرتفع من البروتيوليك ، يتم تنظيم إفراز الحبيبات الأولية بإحكام ويجب تحدي العدلات بشكل متسلسل مع فتيلة وتفعيل المحفزات2.
داخل البلعوم، NSPs وظيفة وكلاء مبيدات الجراثيم داخل الخلايا3. عندما يفرز, NSPs تصبح وسطاء قوية للالتهاب: أنها تصلب السيتوكينات ومستقبلات السطح, تفعيل مسارات موازية الموالية للالتهابات3. الأهم من ذلك ، تتميز الظروف الالتهابية بإفراز NSPs غير المنضبط. على سبيل المثال، داخل الشعب الهوائية الملتهبة، النشاط NE المفرط يسبب فرط أمان المخاط، الخلايا الكؤوس metaplasia، تعطيل CFTR ومصفوفة خارج الخلية إعادة عرض4،5. كاثيبسين G يشارك في التهاب كذلك: فإنه يشق على وجه التحديد وينشط عنصرين من الأسرة IL-1, IL-36α وIL-36β6. بالتنسيق مع NE، CG يشق مستقبلات protease تنشيط على ظهارة مجرى الهواء وينشط أيضا TNF-α وIL-1β.
الذاتية المضادة للبروتياز مثل ألفا-1-أنتيتريبسين, ألفا-1-أنتيتشيموتريبسين ومثبط بروتياز الكريات البيض إفراز تنظيم elastase العدلات وكاثيبسين G النشاط5. ومع ذلك ، على مدار تطور مرض الرئة ، يتجاوز إفراز البروتياز المستمر ستويتشيومتريا الدرع المضاد للبروتيز ، مما يؤدي إلى عدم حل العدلات في الشعب الهوائية ، وتفاقم الالتهاب وتلف الأنسجة5،7. على الرغم من أن تركيز NE والنشاط في الكسور القابلة للذوبان من الشعب الهوائية المريض وقد ثبت أن علامة بيولوجية واعدة من شدة المرض8, NE وCG المنتسبين أيضا إلى غشاء البلازما العدلات والحمض النووي خارج الخلية عن طريق التفاعلات الكهروستاتيكية9,10 حيث تصبح أقل سهولة لمكافحة proteases. الأهم من ذلك، حددت الدراسات ما قبل السريرية سيناريو حيث يظهر نشاط البروتيز المرتبط بسطح الخلية في وقت سابق و / أو بشكل مستقل عن نظيره القابل للذوبان4،11. في الواقع ، لتصبح قابلة للكشف ، والنشاط بروتياز الحرة يحتاج أولا إلى تطغى على الدرع المضادة للبروتيز. بدلا من ذلك، على سطح الخلية، نشاط بروتياز غشاء ملزمة لا تزال سليمة جزئيا على الأقل بسبب عدم إمكانية الوصول إلى مثبطات كبيرة لغشاء البلازما الخلية12. مثل هذا السلوك protease معقدة لها عواقب هامة على ظهور التهاب بوساطة العدلات وانتشار, وبالتالي يحتاج إلى التحقيق مع أدوات دقيقة وغنية بالمعلومات.
على مر السنين، وجدت المسابير المستندة إلى نقل الطاقة بالرنين Förster (FRET) العديد من التطبيقات الطبية الحيوية كأدوات تقيم بكفاءة وسرعة نشاط بروتياز محدد في العينات البشرية13. للعمل، تتكون مراسلي البروتيز من عزر التعرف (أي الببتيد)، الذي يتم التعرف عليه من قبل الإنزيم المستهدف والاعتماد على FRET، وهي عملية مادية حيث، عند الإثارة، يقوم الفلوروفور المانح بنقل الطاقة إلى جزيء مقبول. المعالجة التي يشغلها الإنزيم على المراسل ، وهي انشقاق جزء الاعتراف ، تؤدي إلى أن ينتشر المقبول بعيدا عن المتبرع: وبالتالي يتم قياس نشاط الإنزيم على أنه تغيير يعتمد على الوقت في المتبرع على مضان المقبول. وهذه القراءة هي تطبيع ذاتي ونسبة، وبالتالي تتأثر بشكل هامشي فقط بالظروف البيئية مثل الحموضة وتركيز المسبار المحلي. NEmo-114 و sSAM15 هي تحقيقات FRET التي تقدم تقارير محددة عن نشاط NE و CG على التوالي. ومع ذلك، فإن هؤلاء المراسلين لا ي توطين على وجه التحديد إلى أي مقصورة الخلوية، وبالتالي يتم استخدامها لرصد نشاط البروتيز الموجود في السوائل البشرية. من أجل رصد نشاط البروتيز بطريقة موضعية مكانيا ، قمنا نحن وآخرون بتطوير مسابير FRET التي ترتبط بمكونات دون الخلية عبر العلامات الجزيئية14و15و16و17و18و19. سمحت هذه الاستراتيجية الاصطناعية بتطوير NEmo-2 و mSAM ، وهما مسباران FRET مجهزان بمراسي الدهون التي يتم توطينها في غشاء البلازما. هؤلاء المراسلين غذت فهم أعمق من NE وCG proteases في التليف الكيسي وأمراض الانسداد الرئوي المزمن14,15.
هنا، يتم توفير بروتوكولات مفصلة لتصور وتكميم للذوبان والأغشية ملزمة NE وCG الأنشطة في البلغم البشري عن طريق سلسلة نيمو وسام من تحقيقات FRET. لمعالجة الجوانب المتنوعة من الفيزيولوجيا المرضية NSPs وتوفير مجموعة من الأساليب التي يمكن استخدامها وفقا للحاجة الخاصة بالمستخدم ، يتم عرض التحليل عبر التحليل الطيفي الفلوري ، والتنظير المجهري الفلوري وقياس التدفق الخلوي.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 &#181;m Nylon cell strainer</td>
			<td>Corning Inc.</td>
			<td>431752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2300 EnSpire (Multilabel Plate Reader)</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35x10mm Dish, Nunclon Delta</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>150318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m Nylon cell strainer</td>
			<td>Corning Inc.</td>
			<td>431750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>10535253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-AAD, viability dye</td>
			<td>Bio Legend</td>
			<td>420404</td>
			<td>5 &#181;L/100 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balance</td>
			<td>OHAUS Instruments (Shanghai) Co., Ltd.</td>
			<td>PR124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Falcon Round-Bottom Tubes 5 mL</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>352054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD LSRFortessa cell analyzer</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>black flat bottom 96 well half area plate</td>
			<td>Corning Life Science</td>
			<td>3694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cathepsin G</td>
			<td>Elastin Products Company</td>
			<td>SG623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cathepsin G Inhibitor I</td>
			<td>Merck KGaA</td>
			<td>219372</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5418R</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>EP5401000137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Combitips advanced 1.0 mL</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>0030 089 430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cOmplete proteinase inhibitor</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11697498001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countig chambers improved Neubauer</td>
			<td>Glaswarenfabrik Karl Hecht GmbH &#38; Co KG</td>
			<td>40442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>coverslips &#216; 25mm</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>MENZCB00250RA003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytospin 4</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DRAQ5 (nuclear stain)</td>
			<td>BioStatus Limited</td>
			<td>DR50050</td>
			<td>1:10000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSDiva software, v8.0.1</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FcBlock</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>564219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji (Fiji Is Just ImageJ)</td>
			<td>fiji.sc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow Jo software, v10</td>
			<td>TreeStar</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FluoQ Plugin, v3-97</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heraeus Megafuge 16R</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Sputum Leucocyte Elastase</td>
			<td>Elastin Products Company</td>
			<td>SE563</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP8 confocal microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Rock-Shaker</td>
			<td>PEQLAB Biotechnologie GmbH</td>
			<td>MR-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human CD14, Pe-Cy7, clone M5E2</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>557742 Lot:8221983</td>
			<td>1:50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human CD16, AF700, clone 3G8</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>557820 Lot:8208791</td>
			<td>1:50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human CD45, APC-Cy7, clone 2D1</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>557833 Lot:8059688</td>
			<td>1:33</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-human CD66b, PE/Dazzel 594, clone G10F5</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>305122 Lot:B241921</td>
			<td>1:50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mSAM</td>
			<td>in house</td>
			<td></td>
			<td>2 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multipette plus</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEmo-1</td>
			<td>SiChem</td>
			<td>SC-0200</td>
			<td>1 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEmo-2E</td>
			<td>SiChem</td>
			<td>SC-0201</td>
			<td>2 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pari Boy SX with an LC Sprint jet nebulizer</td>
			<td>Pari</td>
			<td>085G3001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phosphate buffered saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROTI Histokitt (mounting medium)</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co.KG</td>
			<td>6638.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salbutamol</td>
			<td>Teva GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sivelestat</td>
			<td>Cayman Chemicals</td>
			<td>17779</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sputolysin</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>560000-1SET</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sSAM</td>
			<td>in house</td>
			<td></td>
			<td>2 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperFrost Plus Adhesion slides</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10149870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring neutrophil elastase and cathepsin g activity in human sputum samples

Proteases هي المنظمين لعدد لا يحصى من العمليات الفسيولوجية والتحقيق الدقيق في أنشطتها لا يزال تحديا الطب الحيوي مثيرة للاهتمام. من بين ~600 proteases المشفرة من قبل الجينوم البشري, يتم التحقيق بدقة proteases سيرين العدلات (NSPs) لتورطهم في بداية وتطور الظروف الالتهابية بما في ذلك أمراض الجهاز التنفسي. فريد, NSPs يفرز ليس فقط منتشر داخل السوائل خارج الخلية ولكن أيضا توطين لأغشية البلازما. خلال تشكيل فخ خارج الخلية العدلية (NETs) ، تصبح NSPs جزءا لا يتجزأ من الكروماتين المفرز. مثل هذا السلوك المعقد يجعل فهم الفيزيولوجيا المرضية NSPs مهمة صعبة. هنا، تظهر بروتوكولات مفصلة لتصور وقياس وتميز خالية والأغشية ملزمة العدلات elastase (NE) وكاثيبسين G (CG) الأنشطة في عينات البلغم. NE و CG هي NSPs التي أنشطتها لها أدوار منشط الذهن في مسببات الأمراض من التليف الكيسي (CF) ومرض الانسداد الرئوي المزمن (COPD): أنها تعزز إعادة عرض الأنسجة، وتنظيم الاستجابات المناعية المصب وترتبط مع شدة أمراض الرئة. تظهر البروتوكولات كيفية فصل الكسر السائل والخلوي ، وكذلك عزل العدلات عن البلغم البشري لتحديد كمية النشاط الأنزيمي عبر مراسلي نقل الطاقة بالرنين بالرنين الصغير Förster (FRET). لجمع رؤى محددة في الدور النسبي للأنشطة NE وCG، يمكن قياس قراءات FRET من خلال تقنيات مختلفة: 1) في قياسات قارئ لوحة المختبر تسمح للكشف عن الإنتاجية العالية والجزء الأكبر من نشاط البروتيز؛ '2' في قياسات قارئ لوحة المختبر تسمح للكشف عن الإنتاجية العالية والجزء الأكبر من نشاط البروتيز؛ '2' في قياسات قارئ الصفائح المختبرية؛ '2' إتاحة إمكانية زيادة الإنتاجية والكشف بالجملة عن نشاط البروتيز؛ '2' في قياسات قارئ الصفائح المختبرية؛ '2' إتاحة إمكانية الكشف عن نشاط البروتيز على نحو كبير؛ '2' القياسات التي يمكن أن تكون ذات إنتاجية عالية أو ii) المجهر confocal يحل بشكل كبير نشاط الغشاء ملزمة على سطح الخلية; 3) صغير جزيء FRET تدفق قياس الخلايا تمكن من التقييم السريع للعلاجات المضادة للالتهابات عن طريق خلية واحدة protease النشاط الكمي وphenotyping. إن تنفيذ هذه الطرق يفتح الأبواب لاستكشاف علم الأحياء المرضية NSPs وإمكاناتها كعلامات بيولوجية لشدة المرض ل CF و COPD. ونظرا لإمكانات التوحيد القياسي، والقراءة القوية وبساطة النقل، فإن التقنيات الموصوفة قابلة للمشاركة على الفور للتنفيذ عبر مختبرات البحوث والتشخيص.

وتوضح النتائج المبينة في الشكل 1 أ مجموعة بيانات تمثيلية للفحص المجهري. وتستخدم الإشارة النووية لتحديد العدلات من خلال نواتها المجزأة المميزة. يتم تحديد منطقة الاهتمام (ROI) يدويا (خط متقطع في الشكل 1a). يتم حساب صورة نسبة D/A بقسمة شدة القناة المانحة على كثافة قناة المقبول على أساس بكسل بكسل. في الخطوة الأخيرة يتم حساب متوسط نسبة D/A لكل خلية (ROI). في الشكل 1ب تمثل كل نقطة متوسط عائد استثمار واحد (العدلات). من المستحسن تصوير وتقييم حوالي 100 خلية لكل حالة.
تظهر استراتيجية قياس التدفق الخلوي التمثيلية في الشكل 2a. مثل هذا اللغات يسمح للتمييز ودراسة العدلات البلغم. لتجنب امتداد الفلورية أو تعويض القطع الأثرية، فمن المستحسن أن يخصص خط ليزر (مثل الليزر الأزرق) للكشف عن مضان التحقيق FRET. يجب إجراء تعويض فلوري قياس التدفق الخلوي للأجسام المضادة وليس للتحقيق FRET. يصور الشكل 2ب توزيع MFI في 0 و 10 دقائق بعد إضافة المراسل. يشير كل صف في الشكل 2c إلى متوسط قيم المانحة والمقبلة ل MFIs ل 1000 نيوتروفل البلغم. وتحسب نسبة ال D/A بقسمة المؤسسات المانحة والمقبلة للرعاية. تظهر الدورة الزمنية في الشكل 2c على الجانب الأيمن تطور القياس: بعد زيادة أولية سريعة ، تصل نسبة D /A إلى هضبة ، وفقا لنشاط الإنزيم المرتبط بالغشاء.

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Neutrophil Elastase and Cathepsin G Activity in Human Sputum Samples at JoVE.com

Monitoring Neutrophil Elastase and Cathepsin G Activity in Human Sputum Samples

توفر البروتوكولات الموصوفة هنا دليلا لتصور وقياس نشاط البروتياز العدلي في البلغم البشري. تمتد تطبيقات هذا التحليل من تقييم العلاجات المضادة للالتهابات ، إلى التحقق من صحة العلامات الحيوية ، وفحص الأدوية والدراسات السريرية الفوج الكبيرة.

رصد نيوتروفيلي إيلاستاز وكاثيبسين G النشاط في عينات البلغم البشري

Proteases are regulators of countless physiological processes and the precise investigation of their activities remains an intriguing biomedical ...

لدينا التحقيق FRET والبروتوكولات تمكين القياس الكمي السريع والحساس من elastase الحرة والسطح ملزمة والنشاط cathespin G في البلغم من المرضى الذين يعانون من أمراض مجرى الهواء العدلات. هذه الأساليب، تجعل من الممكن لاستكشاف جوانب مختلفة من الفيزيولوجيا المرضية proteases. تسمح قياسات قارئ اللوحات بإجراء فحوصات كبيرة.تصور المجهر البؤري نشاط الإنزيم بمحلول دون خلايا. في حين تدفق قياس الخلايا، وتمكن فينومتيبينج خلية واحدة وكمية النشاط بروتياز بطريقة شخصية. يمكن توسيع نطاق هذه التقنية لتشمل أمراض مجرى الهواء المختلفة مثل التليف الكيسي أو التهاب القصبات الهوائية أو مرض الانسداد الرئوي المزمن.ويمكن تكييفها مع BioSamples مختلفة مثل الدم أو الهوائيات الحويصلات أو عينات الفئران. قبل البدء في إجراء تحريض البلغم، يستنشق 200 ميكروغرام من مستقبلات بيتا 2 الخصوم سالبوتامول. بعد ذلك ، يستنشق محلول ملحي مفرط 6٪ لمدة 15 دقيقة باستخدام البخاخات.جمع البلغم المتوقع في طبق بيتري. كتل مخاط منفصلة من اللعاب إلى طبق بيتري بمساعدة طرف ماصة. وزن المخاط، ثم إضافة أربعة أجزاء حجم لكل وزن من 10٪ Sputolysin وبرنامج تلفزيوني إلى البلغم.احتضان الخليط في درجة حرارة الغرفة على شاكر هزاز لمدة 15 دقيقة لإذابة المخاط. إخماد رد الفعل عن طريق إضافة ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني الباردة لكل ملليلتر من 10٪ Sputolysin. ماصة الخليط للحصول على حل متجانس.تصفية الخليط من خلال مصفاة خلية النايلون 100 ميكرون في أنبوب 50 ملليلتر. كرر خطوة الترشيح من خلال مصفاة 40 ميكرون ، ثم الطرد المركزي لمدة 10 دقائق في 300 مرة G في أربع درجات مئوية. نقل supernatant في أنبوب جديد وتخزينها على الجليد.إعادة إنفاق بلطف بيليه الخلية في 500 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني الباردة ووضعها على الجليد. تذوب الانزيمات على الجليد واقامة منحنى معيار الانزيم كما هو موضح في المخطوطة النصية. بالتوازي مع إعداد القياسية، تمييع عينات البلغم في المخزن المؤقت التنشيط.على قارئ لوحة، تعيين الطول الموجي الإثارة للمسبار NE FRET NEmo-1 إلى 354 نانومتر والطول الموجي للانبعاثات إلى 400 نانومتر للمتبرع و 490 نانومتر للقبول. بالنسبة للمسبار CG FRET sSam ، حدد الطول الموجي للإثارة إلى 405 نانومتر والانبعاثات إلى 485 نانومتر للمتبرع ، و 580 نانومتر للمقبول. إضافة 40 ميكرولتر من العينات والمعايير، أو الفراغات في آبار سوداء 96 جيدا نصف لوحة المنطقة وإضافة المزيج الرئيسي.بدء قارئ لوحة وتسجيل المانح لزيادة نسبة القبول بعد كل 60 إلى 90 ثانية لمدة 20 دقيقة على الأقل، أو حتى الزيادة في إشارة تصل إلى هضبة. تصدير البيانات وحساب نسبة المانح إلى المقبول عن طريق قسمة RFU المانحة على RFU القبول لكل نقطة زمنية وعينة. ثم حساب المانحة إلى نسبة القبول متوسط الانحراف المعياري.تحديد الميل ضمن النمو الخطي للمانح لتغيير نسبة القبول. لكل قياس، resuspend 30،000 خلايا البلغم في حجم 50 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني في أنبوب 1.5 ملليلتر. احتضان خلايا البلغم مع مثبط محدد كتحكم سلبي وانزيم مناسب كتحكم إيجابي لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.إضافة 50 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني يحتوي على مراسل FRET ووصمة عار نووية إلى كل أنبوب للحصول على تركيز نهائي من 2 ميكرومولار. احتضان الخليط في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 إلى 20 دقيقة. إخماد رد الفعل عن طريق إضافة 100 ميكرولتر من الجليد البارد PBS ووضع العينات على الجليد.Cytospin الخليط على الشرائح المجهرية. ثم يجف الهواء وإصلاح الخلايا مع الجليد الباردة 10٪ الميثانول لمدة 10 دقائق. بعد التثبيت، والهواء الجاف وجبل العينة مع وسيطة تركيب المناسبة.التقط الصور باستخدام مجهر كونفوجكال. صورة ما لا يقل عن 100 خلية لكل شرط للحصول على إحصاءات قاطعة. Resuspend 1 مليون خلية في 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني في خمسة ملليلتر FACS البوليسترين جولة أنبوب القاع، ووضع الأنبوب على الجليد.إضافة اثنين ميكرولتر من كتلة FC إلى كل عينة. ثم احتضان العينات لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. إضافة الأجسام المضادة كل أنبوب واحتضان على الجليد في الظلام لمدة 30 دقيقة.غسل الخلايا مع اثنين من ملليلتر من برنامج تلفزيوني الباردة والطرد المركزي في 300 مرة G وأربع درجات مئوية. وأخيرا ، إعادة الإنفاق في 200 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني. تقسيم التعليق إلى أنبوبين، 100 ميكرولتر لكل منهما وإضافة خمسة ميكرولترات من وصمة عار صلاحية الخلية.إضافة مثبطات NSP محددة مناسبة إلى أنبوب التحكم السلبي واحتضان العينة لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة في الظلام. إضافة برنامج تلفزيوني إلى العينة وتصفية من خلال مرشح 40 ميكرون في أنبوب FACS نظيفة. إضافة المراسل إلى عينة التحكم السلبية ودوامة بلطف.بدء الحصول على خلايا المحتضنة مع هذا المثبط محددة وإذا لزم الأمر، وضبط قليلا البوابات، فضلا عن الجهد PMTs مراسل. لتسجيل التغيرات في المتبرع لقبول نسبة بسبب نشاط البروتيز المرتبط بالغشاء ، سجل 1000 العدلات من كل أنبوب ، كل خمس إلى 10 دقائق. حساب نسبة FRET بقسمة المانح على قيم قناة المقبول للعينات التي تم قياسها على العدلات المفردة القابلة للتطبيق.صور العدلات قبل احتضانها مع 100 ميكرومولار سيفيليستات أو تركت دون علاج قبل أن يتم عرض إضافة NEmo-2 المراسل هنا. واستخدمت الإشارة النووية لتحديد العدلات من خلال خصائصها النوى المجزأة، واختير عائد الاستثمار يدويا. المتبرع لقبول نسبة من العدلات البلغم تم رسمها.تمثل كل نقطة متوسط عائد استثمار واحد. تدفق قياس الخلايا gating يجعل من الممكن التمييز ودراسة العدلات البلغم. ولوحظ توزيع ال MFI في صفر و 10 دقائق بعد إضافة المراسل.تم حساب متوسط قيم MFI المانحة والمقبلة ل 1000 نيوتروفل البلغم. ووصلت نسبة D/A إلى مستوى مرتفع بعد زيادة أولية. المتبرعين الأصحاء البلغم التعريفي يأخذ بعض الممارسة قبل الكمال.تذكر أن تسترخي وتتنفس الهباء الجوي لمدة 10 إلى 15 دقيقة قبل توقع. بالإضافة إلى ذلك، يحتفظ دائما خلايا البلغم على الجليد ومعالجتها في أقرب وقت ممكن بعد توقع. وجدنا أن نشاط البروتيز المرتبط بالسطح يرتبط بتلف الرئة المبكر لدى الأطفال وشدة أمراض الرئة لدى مرضى CF البالغين.ولذلك معا، وهذه الأساليب تمكين استكشاف البروتياز والمؤشرات الحيوية التهاب في وقت مبكر في أمراض مجرى الهواء العدلات.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Determining the Phagocytic Activity of Clinical Antibody Samples

تحديد نشاط أكلة العينات السريرية جسم

Antibody-driven phagocytosis is induced via the engagement of Fc receptors on professional phagocytes, and can contribute to both clearance as well as ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

اللعاب، الغدد اللعابية، وجمع اللمف الدموي من القراد اللبود الكتفي

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

كمي<em&gt; في المختبر</em&gt; الفحص لقياس التصاق العدلات إلى تنشيط الخلايا البطانية الاوعية الدموية الدقيقة الإنسان الأساسية بموجب الشروط ثابت

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

Human Neutrophil Flow Chamber Adhesion Assay

غرفة تدفق العدلات الإنسان التصاق الفحص

Neutrophil firm adhesion to endothelial cells plays a critical role in inflammation in both health and disease. The process of neutrophil firm adhesion ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

عزل وتحليل العدلة لتحديد ما دورها في الغدد اللمفاوية حساسية الخلية وكلاء العلاجية

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

تدفق تحليل Cytometric من القاتل الطبيعي خلية التحللي آخر في الدم الجامع البشري

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

تصور آثار البلغم للتنمية بيوفيلم باستخدام نموذج غرف ساترة

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

In Vitro Differentiation Model of Human Normal Memory B Cells to Long-lived Plasma Cells

في المختبر التمايز نموذج الذاكرة البشرية العادية ب الخلايا إلى خلايا البلازما المعمرة

Plasma cells (PCs) secrete large amounts of antibodies and develop from B cells that have been activated. PCs are rare cells located in the bone marrow or ...

Measurement of Chitinase Activity in Biological Samples

قياس نشاط الكيتيناز في العينات البيولوجية

Chitinases are the enzymes that cleave chitin. Even in the absence of chitin, mammalians have significant amounts of chitinases present in the body ...

Quantifying Myeloperoxidase-DNA and Neutrophil Elastase-DNA Complexes from Neutrophil Extracellular Traps by Using a Modified Sandwich ELISA

القياس الكمي لمعقدات الميلوبيروكسيديز - الحمض النووي و Neutrophil Elastase-DNA من مصائد العدلات خارج الخلية باستخدام شطيرة ELISA المعدلة

Certain stimuli, such as microorganisms, cause neutrophils to release neutrophil extracellular traps (NETs), which are basically web-like structures ...