Name: co-culture of glioblastoma stem-like cells on patterned neurons to study migration and cellular interactions
Uploaded: 2021-02-24T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Co-culture of Glioblastoma Stem-like Cells on Patterned Neurons to Study Migration and Cellular Interactions at JoVE.com

Questo lavoro è stato supportato da Fondation ARC 2020, Ligue Contre le Cancer (Comite de la Gironde), ARTC, Plan Cancer 2021, INCA PLBIO. Alveole è supportato da Agence Nationale de la Recherche (Grant Labex BRAIN ANR-10-LABX-43). Joris Guyon è un destinatario di una borsa di studio presso l'ospedale universitario di Tolosa (CHU Toulouse).

Il consenso scritto informato è stato ottenuto da tutti i pazienti (dall'ospedale haukeland di Bergen, Norvegia, secondo le normative del comitato etico locale). Questo protocollo segue le linee guida dei comitati etici per la ricerca umana e animale dell'Università di Bordeaux. I ratti gravidi venivano ospitati e trattati nella struttura animale dell'Università di Bordeaux. L'eutanasia di un ratto incinta a tempo E18 è stata eseguita utilizzando CO2. Tutte le procedure sugli animali sono state fatte secon...

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	<li>Shergalis, A., Bankhead, A., Luesakul, U., Muangsin, N., Neamati, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+challenges+and+opportunities+in+treating+glioblastoma.">Current challenges and opportunities in treating glioblastoma.</a> Pharmacology Reviews. 70, 412-445 (2018).</li><li>Scherer, H. 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G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p120-catenin-dependent+collective+brain+infiltration+by+glioma+cell+networks.">p120-catenin-dependent collective brain infiltration by glioma cell networks.</a> Nature Cell Biology. 22, 97-107 (2020).</li><li>Guyon, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+3D+spheroid+model+for+glioblastoma.">A 3D spheroid model for glioblastoma.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (158), (2020).</li><li>Strale, P. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiprotein+Printing+by+Light?Induced+Molecular+Adsorption.">Multiprotein Printing by Light?Induced Molecular Adsorption.</a> Advanced Materials. , (2015).</li><li>Rao, S. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+particle+tracking.+Analysis+of+diffusion+and+flow+in+two-dimensional+systems.">Single particle tracking. Analysis of diffusion and flow in two-dimensional systems.</a> Biophysics Journal. 60, 910-921 (1991).</li><li>Pasturel, A., Strale, P. -. O., Studer, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tailoring+common+hydrogels+into+3D+cell+culture+templates.">Tailoring common hydrogels into 3D cell culture templates.</a> Advance Healthcare Materials. 9, 2000519 (2020).</li><li>Dolmetsch, R., Geschwind, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+brain+in+a+dish:+the+promise+of+iPSC-derived+neurons.">The human brain in a dish: the promise of iPSC-derived neurons.</a> Cell. 145, 831-834 (2011).</li><li>Clark, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-cultures+with+stem+cell-derived+human+sensory+neurons+reveal+regulators+of+peripheral+myelination.">Co-cultures with stem cell-derived human sensory neurons reveal regulators of peripheral myelination.</a> Brain. 140, 898-913 (2017).</li><li>Linkous, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+patient-derived+glioblastoma+with+cerebral+organoids.">Modeling patient-derived glioblastoma with cerebral organoids.</a> Cell Reports. 26, 3203-3211 (2019).</li><li>Han, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interfering+with+long+non-coding+RNA+MIR22HG+processing+inhibits+glioblastoma+progression+through+suppression+of+Wnt/&#946;-catenin+signalling.">Interfering with long non-coding RNA MIR22HG processing inhibits glioblastoma progression through suppression of Wnt/&#946;-catenin signalling.</a> Brain. 143, 512-530 (2020).</li></ol>

I glioblastomi invadono ampiamente il parenchima usando diverse modalità: co-opzione dei vasi sanguigni circostanti, invasione interstiziale o invasione sulleRM 18. Quest'ultima modalità non è ben caratterizzata in letteratura a causa della difficoltà di trovare modelli adatti in vitro o in vivo relativi all'invasione WMT. Qui, è stato proposto un modello semplificato in cui i neuroni roditori coltivati sono stati modellati su superfici rivestite di laminina, e le cellule fl...

I gliomi maligni primari, compresi i GBM, sono tumori devastanti, con un tasso medio di sopravvivenza da 12 a 15 mesi riportato per i pazienti affetti da GBM. La terapia attuale si basa su una grande resezione della massa tumorale e sulla chemioterapia accoppiata alla radioterapia, che estende il tasso di sopravvivenza solo di pochi mesi. I fallimenti terapeutici sono intimamente correlati allo scarso parto di farmaci attraverso la barriera ematica (BBB) e alla crescita invasiva in spazi perivascolari, meningi e lungo le WMT1. L'invasione perivascolare, chiamata anche co-opzione vascolare, è un processo ben studiato, e i meccanismi molecolari stanno iniziando ad essere chiariti; tuttavia, il processo di invasione cellulare GBM lungo le MMM non è ben compreso. Le cellule tumorali migrano nel cervello sano lungo le strutture secondarie2 diScherer . Infatti, quasi un secolo fa, Hans-Joachim Scherer descrisse le rotte invasive del GBM, che ora sono indicate come satellitosi perineuronale, satellitosi perivascolare, diffusione subpiale e invasione lungo la WMT (Figura 1A).
Alcune chemiochine e i loro recettori, come il fattore 1α derivato dalle cellule stromali (SDF1α) e il recettore della chemiochina con motivo C-X-C 4 (CXCR4), ma non il fattore di crescita endoteliale vascolare (VEGF), sembrano essere implicati nell'invasione WMT3. Più recentemente, un asse TRANSCELLULAR NOTCH1-SOX2 ha dimostrato di essere un percorso importante nell'invasione WMT delle cellule GBM4. Gli autori hanno descritto come le cellule staminali GBM invadano il parenchima cerebrale su neuroni parzialmente non mielinati, suggerendo la distruzione delle suone di mielina da parte delle cellule GBM. Una pietra miliare è stata raggiunta nel 2019 quando tre articoli sono stati pubblicati inconsacrazione sulla rivista Nature, sottolineando il ruolo dell'attività elettrica nello sviluppo del glioma5,6. Il lavoro seminale di Monje e collaboratori fa luce sul ruolo centrale dell'attività elettrica nella secrezione di neuroligin-3, che promuove lo sviluppo del glioma.
Winkler e collaboratori hanno descritto le connessioni tra cellule GBM (microtubi) cruciali in passaggi invasivi e, ultimamente, interazioni tra cellule GBM e neuroni attraverso sinapsi di neuroglioma appena descritte. Queste strutture favoriscono la stimolazione glutattergica dei recettori dell'acido α-ammino-3-idrossi-5-metil-4-isoxazolepropionico (AMPA) situati nella membrana cellulare GBM, che promuove lo sviluppo e l'invasione del tumore. L'invasione delle cellule tumorali è un processo centrale nella diffusione di metastasi o focolai secondari distanti, come osservato nei pazienti affetti da GBM. Diversi fattori sono stati identificati come importanti nell'invasione gbm come la trombospondina-1, un fattore di crescita beta trasformante (proteina matricellulare regolata da TGFβ o il recettore delle chemiochine CXCR3)7,8.
Qui, è stato descritto un modello biomimetico semplificato per lo studio dell'invasione GBM, in cui i neuroni sono modellati su tracce di laminina, e le cellule GBM sono seminate su di essa, come singole cellule o come sferoidi (Figura 1B). Le due impostazioni sperimentali sono finalizzate a ricapitolare l'invasione sui neuroni, che si osserva in GBM9,10,11. Tali modelli sono stati sviluppati in passato come biomateriali in nanofibra allineati (elettrofilatura a guscio centrale) che consentono di studiare la migrazione cellulare modulando le proprietà meccanicheo chimiche 12. Il modello di co-coltura descritto in questo articolo consente una migliore comprensione di come le cellule GBM fuggono sui neuroni definendo nuove vie molecolari coinvolte in questo processo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>(3-aminopropyl) triethoxysilane</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>440140-100ML</td>
			<td>The amino group is useful for the bioconjugation of mPEG-SVA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well round-bottom plate</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>2582624</td>
			<td>Used to prepare spheroids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A11105-01</td>
			<td>Stored at -20 &#176;C (long-term) or 4 &#176;C (short-term), sphere dissociation enzyme</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12587</td>
			<td>Stored at -20 &#176;C, defrost before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic Fibroblast Growth Factor</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-18B</td>
			<td>Stored at -20 &#176;C, defrost before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess Cell Counting ChamberSlides</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C10283</td>
			<td>Used to cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>Marienfeld</td>
			<td>111580</td>
			<td>Cell culture substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dessicator cartridges</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z363456-6EA</td>
			<td>Used to reduce mosture during (3-aminopropyl) triethoxysilane treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS 10x</td>
			<td>Pan Biotech</td>
			<td>P04-53-500</td>
			<td>Stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji software, MTrack2 macro</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td></td>
			<td>Used to analyze pictures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flask 75 cm&#178;</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>10497302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H8264-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3149-100KU</td>
			<td>Stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td></td>
			<td>114956-81-9</td>
			<td>Promotes neuronal adhesion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leonardo software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>loading of envisioned micropatterns</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MetaMorph Software&#160;</td>
			<td>Molecular Devices LLC</td>
			<td>NA</td>
			<td>Microscopy automation software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylcellulose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M0512</td>
			<td>Diluted in NBM for a 2% final concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21103-049</td>
			<td>Stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon TiE (S Fluor, 20x/0.75 NA)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>inverted microscope equipped with a motorized stage&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin - Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLPP</td>
			<td>Alveole</td>
			<td>PLPPclassic_1ml</td>
			<td>Photoinitiator used to degrade the PEG brush</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly(ethylene glycol)-Succinimidyl Valerate (mPEG-SVA)</td>
			<td>Laysan Bio</td>
			<td>VA-PEG-VA-5000-5g</td>
			<td>Used as an anti-fouling coating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRIMO</td>
			<td>Alveole</td>
			<td>PRIMO1</td>
			<td>Digital micromirror device (DMD)-based UV projection apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue 0.4%</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>T10282</td>
			<td>Used for cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4049-100ML</td>
			<td>Used to detach adherent cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

co-culture of glioblastoma stem-like cells on patterned neurons to study migration and cellular interactions

I glioblastomi (GBM), gliomi maligni di IV grado, sono uno dei tipi più leciti di cancro umano a causa delle loro caratteristiche aggressive. Nonostante i significativi progressi nella genetica di questi tumori, come le cellule GBM invadano il parenchima cerebrale sano non è ben compreso. In particolare, è stato dimostrato che le cellule GBM invadono lo spazio peritumorale attraverso percorsi diversi; l'interesse principale di questo documento è il percorso lungo i tratti di materia bianca (WMT). Le interazioni delle cellule tumorali con i componenti delle cellule nervose peritumorali non sono ben caratterizzate. Qui è stato descritto un metodo che valuta l'impatto dei neuroni sull'invasione cellulare del GBM. Questo articolo presenta un saggio avanzato di co-coltura in vitro che imita l'invasione wmt analizzando la migrazione delle cellule staminali GBM sui neuroni. Il comportamento delle cellule GBM in presenza di neuroni viene monitorato utilizzando una procedura di tracciamento automatizzato con software open source e ad accesso libero. Questo metodo è utile per molte applicazioni, in particolare, per studi funzionali e meccanicistici nonché per analizzare gli effetti degli agenti farmacologici che possono bloccare la migrazione cellulare GBM sui neuroni.

I neuroni modellati co-coltivati con cellule GBM fluorescenti sono stati preparati come descritto nella sezione del protocollo e sono stati eseguiti esperimenti di tracciamento. Le cellule GBM hanno rapidamente modificato la loro forma durante la migrazione sui neuroni (Figura 1B: pannello 6 e Video 1). Le cellule migrarono lungo le estensioni neuronali, in un movimento casuale (Video 1). Le cellule GBM fluorescenti e i neuroni non fluoresce...

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Co-culture of Glioblastoma Stem-like Cells on Patterned Neurons to Study Migration and Cellular Interactions

Qui presentiamo un saggio di co-coltura facile da usare per analizzare la migrazione del glioblastoma (GBM) sui neuroni modellati. Abbiamo sviluppato una macro nel software FiJi per una facile quantificazione della migrazione cellulare GBM sui neuroni, e abbiamo osservato che i neuroni modificano la capacità invasiva delle cellule GBM.

Co-coltura di cellule simili a staminali di glioblastoma su neuroni modellati per studiare la migrazione e le interazioni cellulari

Glioblastomas (GBMs), grade IV malignant gliomas, are one of the deadliest types of human cancer because of their aggressive characteristics. Despite ...

I glioblastomi sono tumori cerebrali devastanti con un alto profilo invasivo. Questo sistema di co-coltura imita la migrazione delle cellule del glioblastoma sui neuroni per ricapitolare una delle vie invasive osservate nei pazienti. La geometria e la composizione del nostro modello di co-coltura sono controllate con precisione.Facilita una migliore riproducibilità e anche una semplice quantificazione di processi biologici complessi. Questo metodo può essere adattato alla diagnosi clinica co-coltivando cellule e neuroni del glioblastoma appena dissociati. Definisce un indice clinico, che è molto importante come risultato clinico.Il nostro metodo può anche essere utilizzato per quantificare altre cellule migrate, come fibroblasti o cellule immunitarie. A dimostrare la procedura sarà Joris Guyon, dottoranda del mio team. Per realizzare un substrato per il micropatterning, trattare 18 millimetri di coverlips di vetro circolare per attivazione aria o plasma per cinque minuti prima di posizionare i coprispacchi in un essiccatore con 100 microlitri di trietossisilano per un'ora, quindi incubare una soluzione di PEG-SVA a 100 milligrammi per millilitro per un'ora.Per la deposizione di gel, al termine dell'incubazione, aggiungere tre microlitri di PLPP e 50 microlitri di etanolo assoluto al centro dello scivolo e attendere che si ascili completamente. Per il micropatterning a vetri, montare il coverslip in una camera Ludin e posizionare la camera sul palco di un microscopio dotato di un sistema di messa a fuoco automatica. Dopo l'imaging, caricare le immagini micropattern nel software.Dopo il sequenziamento automatico dell'illuminazione UV, utilizzare una pipetta per lavare ampiamente il PLPP dal coperchio con PBS. Quindi incubare il coverslip con 50 microgrammi per millilitro di laminina per 30 minuti, seguito da un altro lavaggio con PBS come dimostrato. Per impostare una coltura neuronale ippocampale del ratto embrionale sui coprili di micropattern, dopo l'ultimo lavaggio, reidratare le diapositive di vetro con il mezzo di coltura cellulare neuronale.Seme cinque volte 10 al quarto ratto neuroni ippocampali sospesi in mezzo neurobasale arricchito con siero di cavallo al 3% per centimetro quadrato su ogni coverslip micropatterned per un'incubazione di 24 ore in un incubatore di anidride carbonica al 5% a 37 gradi Celsius. Centrifugare le cellule di glioblastoma dissociate per cinque minuti a 1.000 RPM e rimostrare il pellet nel mezzo di coltura cellulare del glioblastoma, quindi depositare una volta 10 alle terze cellule GBM sui neuroni micropatterned. Per l'imaging a cellule vive delle cellule, posizionare la co-coltura sullo stadio di un microscopio invertito dotato di una camera termostato Celsius di 37 gradi e selezionare l'obiettivo 20X.Quindi usa la cassetta degli attrezzi di acquisizioni multidimensionali nel software per microscopio per acquisire immagini di pomodoro GFP Brightfield ed epifluorescenza dal vivo ogni due minuti per 12 ore in 16 posizioni diverse in base al numero di modelli con i neuroni. Per l'analisi della rete neuronale, dopo l'imaging, selezionare un'immagine dallo stack. Fare clic con il pulsante destro del mouse sullo strumento di rete per aprire la finestra di dialogo delle opzioni corrispondenti e regolare le impostazioni per produrre una segmentazione precisa delle immagini.Fare clic su OK. Fare clic con il pulsante sinistro del mouse sullo strumento di rete per duplicare l'immagine selezionata e dividere l'immagine nei canali di colore rosso, grigio e verde. Selezionate il canale grigio ed eseguite il miglioramento dell'allungamento del contrasto per migliorare la separazione tra le diverse aree. Utilizzate il rilevatore di spigoli Sobel per eseguire la convoluzione di elaborazione del segnale 2D raggruppata sotto il comando trova bordo.Per il doppio filtraggio, applicate la sfocatura gaussiana e un filtro mediano per ridurre il rumore e smussare il segnale dell'oggetto. Per convertire in maschera, eseguire algoritmi di soglia adattati per ottenere un'immagine binaria con pixel in bianco e nero. Successivamente, scheletrare l'area cellulare in una semplice rete e utilizzare particelle di filtro per rimuovere piccole particelle non in rete nei risultati.Particelle di filtro di rete in un'immagine di rete. Per ottenere canali rossi e verdi, eseguire il doppio filtraggio e convertirlo in maschera, come illustrato utilizzando il metodo di soglia adattato. Utilizzare le particelle di analisi per determinare la morfologia cellulare nell'immagine verde binaria.Utilizzare l'operatore o per unire tutti i canali utilizzando le rispettive aree di interesse e riadattare il colore iniziale in una semplice immagine RGB. Per eseguire un'analisi della motilità a cella singola, fare clic con il pulsante destro del mouse sullo strumento di rilevamento di singole celle per aprire la finestra di dialogo delle opzioni corrispondenti e regolare le impostazioni per produrre una segmentazione precisa delle immagini. Fare clic su OK e fare clic con il pulsante sinistro del mouse sul rilevamento a cella singola per rimuovere il canale grigio.Per generare un'immagine corrispondente a uno stack di immagini in base all'ora, applicare la proiezione Z e il doppio filtro e convertire in maschera le tracce lasciate dalle celle. Rimuovere le piccole particelle dall'immagine binaria rossa e verde come dimostrato. Utilizzate lo strumento Area di interesse (Region of Interest) per selezionare ogni contorno della traccia delle celle e selezionare la casella ignora rilevamento spigoli nella finestra di dialogo delle opzioni.Isolare il canale rosso nello stack originale e selezionare un'area di interesse. Filtrare due volte tutte le immagini e convertirsi in maschera per consentire di determinare la posizione XY baricentro di ogni nucleo binarizzato. Le posizioni XY possono essere utilizzate per calcolare lo spostamento quadrativo medio, il rapporto direzionalità e la velocità media per la cella.Per l'analisi del rilevamento di più celle, fare clic con il pulsante destro del mouse sullo strumento di tracciamento per aprire la finestra di dialogo delle opzioni corrispondenti e regolare le impostazioni per produrre una segmentazione precisa delle immagini. Fare clic con il pulsante sinistro del mouse sullo strumento di tracciamento per rimuovere il canale grigio. Dividere i canali rosso e verde, filtrare due filtri e convertirli in maschera.Quindi utilizzare il comando calcolatrice immagine con l'operatore e per unire i canali lasciando solo il segnale del nucleo situato all'interno delle membrane e calcolare il grafico della traiettoria, lo spostamento quadrato medio, il rapporto direzionalità e la velocità media per le cellule come dimostrato. Gbm fluorescente co-coltivato con neuroni modellati modificano rapidamente la loro forma e mostrano la migrazione lungo le estensioni neuronali in un movimento casuale. Le cellule GBM seminate sui neuroni mostrano una forma allungata con protrusioni multiple che seguono le tracce neuronali mentre le cellule mantengono la loro forma arrotondata quando coltivate sulla laminina.Nelle fasi successive della coltura, sottili sporgenze che si collegano alle cellule possono essere osservate nelle co-culture neuronali GBM. Le cellule GBM sedate sui neuroni dimostrano una maggiore capacità migratoria rispetto alle cellule GBM sedate sulla laminina come osservato in questi appezzamenti di traiettoria. L'analisi della confluenza fluorescente delle cellule dimostra che in un periodo di osservazione di 500 minuti, si osserva una maggiore migrazione cellulare quando gli sferoidi sono co-coltivati con i neuroni rispetto a quando le cellule sono coltivate solo sulla laminina.Infatti, alla fine dell'analisi, quasi la metà del modello è coperto da cellule GBM mentre gli sferoidi coltivati sulla laminina rimangono non aderenti al coverslip. A seconda delle domande biologiche a cui vuoi rispondere, dovresti fare attenzione che il design del modello e anche la densità cellulare siano rappresentativi delle condizioni in vivo. Le cellule possono essere fisse e immagini mediante microscopia confocale.L'imaging dal vivo è anche possibile poiché il nostro metodo non compromette le capacità di imaging. Questa tecnica è adatta per studiare l'interazione molecolare, come gli scambi metabolici tra cellule di glioblastoma e neuroni. Permette l'esplorazione di processi biologici di funzione.Gli esperimenti ad alta produttività possono essere eseguiti anche per scopi clinici.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

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Ricerca

Ricerca sul cancro

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Flow Cytometry-based Drug Screening System for the Identification of Small Molecules That Promote Cellular Differentiation of Glioblastoma Stem Cells

Farmaco a base di citometria a flusso sistema di Screening per l'identificazione di piccole molecole che promuovono la differenziazione cellulare delle cellule staminali di Glioblastoma

Glioblastoma (GBM) is the most common and most lethal primary brain tumor in adults, causing roughly 14,000 deaths each year in the U.S. alone. Median ...

Using the Dot Assay to Analyze Migration of Cell Sheets

Usando l'analisi di Dot per analizzare la migrazione degli strati delle cellule

Although complex organisms appear static, their tissues are under a continuous turnover. As cells age, die, and are replaced by new cells, cells move ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

Modello del polmone acellulare e cellulari per lo studio di metastasi del tumore

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

Analisi Live Cell Imaging Studio Glioblastoma cerebrale tumore cellule staminali migrazione e invasione

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Isolamento di cellule staminali mesenchimali da tessuto della polpa e co-coltura con cellule tumorali per studiare le loro interazioni

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Using Microarrays to Interrogate Microenvironmental Impact on Cellular Phenotypes in Cancer

Utilizzo di microarray per interrogare l'impatto microambientale sui fenotipi cellulari nel cancro

Understanding the impact of the microenvironment on the phenotype of cells is a difficult problem due to the complex mixture of both soluble growth ...

Isolation of Stem-like Cells from 3-Dimensional Spheroid Cultures

Isolamento di cellule simili a stelo dalle colture speroidi a 3 dimensioni

Despite advances in adult stem cell research, identification and isolation of stem cells from tissue specimens remains a major challenge. While resident ...

Studying the Effects of Tumor-Secreted Paracrine Ligands on Macrophage Activation using Co-Culture with Permeable Membrane Supports

Studiare gli effetti dei ligandi paracrini setosecreti dal tumore sull'attivazione dei macrofagi utilizzando la co-cultura con i supporti membrana permeabili

Tumor-derived paracrine signaling is an overlooked component of local immunosuppression and can lead to a permissive environment for continued cancer ...