Name: formulating and characterizing lipid nanoparticles for gene delivery using a microfluidic mixing platform
Uploaded: 2021-02-25T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Formulating and Characterizing Lipid Nanoparticles for Gene Delivery using a Microfluidic Mixing Platform at JoVE.com

Obrigado a Atul Saluja, Yatin Gokarn, Maria-Teresa Peracchia, Walter Schwenger e Philip Zakas por suas orientações e contribuições para o desenvolvimento do LNP.

Um esquema do processo global é fornecido na Figura 1.
1. Preparação de tampões
NOTA: A filtragem estéril dos buffers é altamente sugerida aqui para remover quaisquer partículas que possam impactar o ácido nucleico e a qualidade do LNP.
<ol><li>Salina Tamponada fosfato (PBS)<ol>
<li>Prepare 1x PBS usando 8 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4, 137 mM NaCl e 2,7 mM KCl em água livre de nuclease e...

<ol>
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V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bottom-up+design+and+synthesis+of+limit+size+lipid+nanoparticle+systems+with+aqueous+and+triglyceride+cores+using+millisecond+microfluidic+mixing.">Bottom-up design and synthesis of limit size lipid nanoparticle systems with aqueous and triglyceride cores using millisecond microfluidic mixing.</a> Langmuir. 28 (7), 3633-3640 (2012).</li><li>Belliveau, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+synthesis+of+highly+potent+limit-size+lipid+nanoparticles+for+in+vivo+delivery+of+siRNA.">Microfluidic synthesis of highly potent limit-size lipid nanoparticles for in vivo delivery of siRNA.</a> Molecular Therapy - Nucleic Acids. 1 (8), 37 (2012).</li><li>Hassett, K. 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A reprodutibilidade, a velocidade e a triagem de baixo volume são vantagens significativas do uso da mistura microfluida para formar LNPs em comparação com outros métodos existentes (por exemplo, hidratação de filme lipídico e injeção de etanol). Demonstramos a reprodutibilidade deste método sem impacto na eficiência de encapsulamento ou tamanho de partículas observada com diferentes lotes de LNP. Este é um critério essencial para que qualquer terapêutico, incluindo os LNPs, se torne clinicamente disponív...

Os portadores de drogas são usados para proteger e fornecer um terapêutico com propriedades favoráveis típicas, incluindo baixa citotoxicidade, aumento da biodisponibilidade e melhor estabilidade1,2,3. Nanopartículas poliméricas, micelas e partículas à base de lipídios foram previamente exploradas para encapsulamento e entrega de ácido nucleico4,5,6,7. Lipídios têm sido usados em diferentes tipos de sistemas de nanocarrier, incluindo lipossomos e nanopartículas lipídicas, pois são biocompatíveis com alta estabilidade8. Os LNPs podem facilmente encapsular ácidos nucleicos para a entrega de genes9,10. Protegem o ácido nucleico da degradação por proteases soro durante a circulação sistêmica11 e podem melhorar a entrega para locais específicos, pois a topografia superficial e as propriedades físicas dos LNPs influenciam sua biodistribução12. Os LNPs também melhoram a penetração de tecidos e a captação celular9. Estudos anteriores demonstraram o sucesso do encapsulamento do siRNA dentro de um LNP13, incluindo o primeiro LNP comercialmente disponível contendo siRNA terapêutico para o tratamento de poneuropatia de tratamento de amilidação mediada por transtoretinahereditária 14 tratamento que foi aprovado pela Food and Drug Administration (FDA) dos Estados Unidos e pela Agência Europeia de Medicamentos em 2018. Mais recentemente, lNPs estão sendo estudados para a entrega de maiores moieties de ácido nucleico, ou seja, mRNA e DNA9. Em 2018, havia ~ 22 sistemas de entrega de ácido nucleico à base de lipídios submetidos a testes clínicos14. Além disso, o mRNA contendo LNPs são atualmente os principais candidatos e foram empregados para uma vacina COVID-1915,16. O potencial sucesso dessas terapias genéticas não virais requer a formação de partículas pequenas (~100 nm), estáveis e uniformes com alto encapsulamento do ácido nucleico.
O uso de um lipídio ionizável como componente principal na formulação do LNP tem mostrado vantagens para a complexidade, encapsulamento e effciciency de entrega14. Lipídios ionizáveis normalmente têm uma constante de dissociação de ácido (pKa) < 7; por exemplo, dilinoleylmeethyl-4-dimethylaminobutyrate (D-Lin-MC3-DMA), o lipídio ionizável usado na formulação lnp aprovada pela FDA, tem um pKa de 6.4417. No pH baixo, os grupos de amina no lipídio ionizável tornam-se protoados e carregados positivamente, permitindo a montagem com grupos de fosfato carregados negativamente no mRNA e DNA. A razão de amina, "N", grupos para fosfato, "P", grupos é usado para otimizar a montagem. A razão N/P depende dos lipídios e ácidos nucleicos utilizados, que varia dependendo da formulação18. Após a formação, o pH pode ser ajustado a um pH neutro ou fisiológico para permitir a administração terapêutica. A esses valores de pH, o lipídio ionizável também é desprotoado que dá carga de superfície neutra ao LNP.
O lipídio ionizável também auxilia na fuga endossomal19,20. Os LNPs são submetidos à endocitose durante a captação celular e devem ser liberados do endosomhei para entregar a carga de mRNA no citoplasma celular ou carga de DNA para o núcleo21. Dentro do endosomho é tipicamente um ambiente mais ácido do que o meio extracelular, o que torna o lipídio ionizável carregado positivamente22,23. O lipídio ionizável carregado positivamente pode interagir com cargas negativas na membrana lipídica endossomal, o que pode causar desestabilização do endóssomo permitindo a liberação do LNP e do ácido nucleico. Diferentes lipídios ionizáveis estão sendo estudados para melhorar a eficácia tanto da distribuição do LNP, quanto para a fuga endossomal14.
Outros componentes típicos de um LNP incluem lipídios auxiliares, como um lipídio fosfatidylcholina (PC) ou fosfoetanolamina (PE). 1,2-Dioleoyl-sn -gliceo-3-fosfoethanolamina (DOPE), 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phos a foforolina (DSPC) e 1,2-dioleoyl-sn-gliceo-3-fosfocholina (DOPC) são lipídios auxiliares comumente usados24,25. A DOPE tem sido demonstrada para formar uma fase hexagonal ii invertida (HII) e melhorar a transfecção por fusão de membrana26,enquanto o DSPC foi pensado para estabilizar LNPs com sua geometria cilíndrica27. O colesterol também é incorporado na formulação, a fim de aumentar a rigidez da membrana, auxiliando posteriormente na estabilidade do LNP. Finalmente, o polietileno glicol conjugado lipídida (PEG) é incluído na formulação para fornecer a barreira estérica necessária para auxiliar na automontagem de partículas27. A PEG também melhora a estabilidade de armazenamento dos LNPs, impedindo a agregação. Além disso, o PEG é frequentemente usado como um componente furtivo e pode aumentar o tempo de circulação para os LNPs. No entanto, esse atributo também pode representar desafios para o recrutamento de LNPs para hepatócitos através de um mecanismo de segmentação endógeno impulsionado pela apolipoproteína E (ApoE)28. Assim, estudos têm investigado o comprimento da cadeia aciola para difusão de PEG do LNP, descobrindo que os comprimentos curtos (C8-14) se dissociam do LNP e são mais favoráveis ao recrutamento de ApoE em comparação com comprimentos de acicl mais longos28. Além disso, o grau de saturação da cauda lipídica a que o PEG é conjugado tem sido demonstrado para influenciar a distribuição tecidual de LNPs29. Recentemente, o Tween 20, que é um surfactante comumente usado em formulações de produtos biológicos de medicamentos e tem uma longa cauda lipídica insaturada, mostrou-se ter alta transfecção na drenagem de linfonodos em comparação com peg-DSPE, que transfetou em grande parte o músculo no local da injeção29. Este parâmetro pode ser otimizado para alcançar a biodistribução desejada do LNP.
Os métodos convencionais de formação de LNPs incluem o método de hidratação de filme fino e o método de injeção de etanol27. Embora estas sejam técnicas prontamente disponíveis, elas também são intensivas em mão-de-obra, podem resultar em baixa eficiência de encapsulamento e são desafiadoras para escalar27. Os avanços nas técnicas de mistura resultaram em métodos mais favoráveis à escala, ao mesmo tempo em que desenvolvem partículas mais uniformes27. Estes métodos incluem mistura de junção T, mistura de herringbone escalonado e foco hidrodinâmico microfluidic27. Cada método possui uma estrutura única, mas todos permitem a rápida mistura de uma fase aquosa contendo o ácido nucleico com uma fase orgânica contendo os componentes lipídicos, resultando em alto encapsulamento do ácido nucleico27. Neste protocolo é utilizada a mistura rápida e controlada através de um cartucho microfluido, que emprega o design de mistura de herringbone escalonado. Este protocolo descreve a preparação, montagem e caracterização do ácido nucleico contendo LNPs.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,2-dimyristoyl-rac-glycero-3-methoxypolyethylene glycol-2000 (C-14 PEG)</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>880151P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;l Graduated Filter Tips&#160; (RNase-,DNase-, DNA-free)</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1121-3810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;l Graduated Filter Tips (RNase-,DNase-, DNA-free)</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1111-2831</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 &#181;l Beveled Filter Tips (RNase-,DNase-, DNA-free)</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1120-1810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;l Graudated Filter Tips (RNase-,DNase-, DNA-free)</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1120-8810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3&#946;-Hydroxy-5-cholestene, 5-Cholesten-3&#946;-ol (Cholesterol)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8667</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Slip Tip Sterile Syringes (1 ml syringe)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14-823-434</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Slip Tip Sterile Syringes (3 ml syringe)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14-823-436</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Vacutainer General Use Syringe Needles (BD Blunt Fill Needle 18G)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23-021-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchtop Centrifuge</td>
			<td>Beckman coulter</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black 96 well plates</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14-245-177</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BrandTech BRAND BIO-CERT RNase-, DNase-, DNA-free microcentrifuge tubes (1.5mL)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14-380-813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-002-611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 500ml Vacuum Filter/Storage Bottle System, 0.22 um pore</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430769</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable folded capillary cells</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>DTS1070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl Alcohol, Pure 200 proof</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>459844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisher Brand Semi-Micro Cuvette</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14955127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen Conical Tubes (15 mL) (DNase-RNase-free)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM12500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MilliporeSigma Amicon Ultra Centrifugal Filter Units</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>UFC901024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoAssemblr Benchtop</td>
			<td>Precision Nanyosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free water</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM9930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM9624</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>&#160;P7589</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quant-iT RiboGreen RNA Assay Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>R11490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-004-036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Citrate, Dihydrate, granular</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-004-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpectraMax i3x</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zetasizer Nano</td>
			<td>Malvern</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

formulating and characterizing lipid nanoparticles for gene delivery using a microfluidic mixing platform

Os portadores de medicamentos à base de lipídio têm sido usados para sistemas de entrega clinicamente e comercialmente disponíveis devido ao seu pequeno tamanho, biocompatibilidade e alta eficiência de encapsulamento. O uso de nanopartículas lipídicas (LNPs) para encapsular ácidos nucleicos é vantajoso para proteger o RNA ou DNA da degradação, ao mesmo tempo em que promove a absorção celular. Os LNPs geralmente contêm múltiplos componentes lipídesis, incluindo um lipídio ionizável, lipídio auxiliar, colesterol e lipídio conjugado de polietileno glicol (PEG). Os LNPs podem facilmente encapsular ácidos nucleicos devido à presença lipídica ionizável, que em pH baixo é cationic e permite a complexação com RNA ou DNA carregados negativamente. Aqui os LNPs são formados por encapsular o RNA mensageiro (mRNA) ou DNA plasmídeo (pDNA) usando a mistura rápida dos componentes lipídicos em uma fase orgânica e o componente ácido nucleico em uma fase aquosa. Esta mistura é realizada usando uma plataforma de mistura microfluida precisa, permitindo a automontagem de nanopartículas enquanto mantém o fluxo laminar. O tamanho hidrodinâmico e a polidispersidade são medidos usando dispersão dinâmica de luz (DLS). A carga de superfície eficaz no LNP é determinada medindo o potencial zeta. A eficiência de encapsulamento é caracterizada usando um corante fluorescente para quantificar o ácido nucleico preso. Os resultados representativos demonstram a reprodutibilidade deste método e a influência que diferentes formulações e parâmetros de processo têm sobre as LNPs desenvolvidas.

Vários lotes de LNPs com a mesma formulação lipídica e razão N/P de 6 foram desenvolvidos em dias separados para demonstrar a reprodutibilidade da técnica. Lote 1 e 2 resultaram em distribuições de tamanho sobrepostas com polidispersidade semelhante(Figura 2A) Nenhuma diferença significativa foi observada no tamanho ou eficiência de encapsulamento entre os dois lotes diferentes(Figura 2B). A eficiência de encapsulament...

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Formulating and Characterizing Lipid Nanoparticles for Gene Delivery using a Microfluidic Mixing Platform

As nanopartículas lipídicas são desenvolvidas usando uma abordagem de plataforma de mistura microfluida para encapsulamento de mRNA e DNA.

Formulando e caracterizando nanopartículas lipídicas para entrega de genes usando uma plataforma de mistura microfluida

Lipid-based drug carriers have been used for clinically and commercially available delivery systems due to their small size, biocompatibility, and high ...

Este protocolo pode ser usado para produzir nanopartículas lipídicas encapsuladas com alta reprodutibilidade e velocidade e baixos volumes. Os parâmetros de formulação podem ser ajustados para alcançar uma distribuição biológica desejada com base na aplicação clínica. O design padrão do herringbone do cartucho microfluido permite um fluxo laminar rápido, preciso e controlado durante a mistura.O método é capaz de escalar e gera partículas uniformes e altamente encapsuladas. Com a maioria dos produtos de terapia genética aprovados comercialmente, baseando-se em métodos virais, este procedimento pode fornecer informações sobre a entrega de genes, já que sua abordagem não viral permite aplicações para as quais a dosagem repetida é necessária. Comece adicionando a quantidade apropriada de cada solução de estoque líquido a um frasco de vidro com vórtice intermitente.conforme indicado na tabela, seguido pela adição de 200 etanol à prova de etanol a um volume final de 533 microliters. Em seguida, adicione a quantidade apropriada de estoque de mRNA e dilua com tampão de citrato para alcançar um volume final de 1,5 mililitros na concentração desejada. Para prime os canais microfluidos, primeiro digite o parâmetro de escorraça no software de instrumento, conforme descrito na tabela.Em seguida, abra a tampa do instrumento e coloque um cartucho microfluido no bloco rotativo. Carregue pelo menos 500 microliters de etanol em uma seringa de 1 mililitro, cuidando que não há bolhas ou aberturas de ar na ponta da seringa e insira a seringa na entrada direita do cartucho. Carregue uma seringa de cinco mililitros com 1,5 mililitros de tampão citrato, tomando cuidado para que não haja bolhas de ar ou lacunas, e insira a seringa na entrada esquerda do cartucho.Coloque dois tubos cônicos de 15 mililitros nos suportes de clipe para servir como recipientes de resíduos e clique em Ir"para misturar as soluções. Quando o instrumento parar de escorraçar conforme indicado pela luz azul inferior desligando, abra o atraso e descarte corretamente os tubos cônicos e seringas. Para formação de nanopartículas lipídicas, defina os parâmetros de formulação adequados conforme indicado na tabela e carregue uma seringa de 1 mililitro com uma mistura lipídica previamente preparada.Remova quaisquer lacunas de ar ou bolhas na ponta da seringa e insira a seringa no lado direito do cartucho. Carregue a solução de ácido nucleico previamente preparada em uma seringa de 3 mililitros, cuidando que não há bolhas ou aberturas de ar na ponta da seringa, e insira a seringa na entrada esquerda do cartucho. Coloque um tubo cônico sem 15 mililitros RNAase rotulado com o nome da amostra no clipe do tubo esquerdo e coloque um resíduo de 15 mililitros cônicos no clipe do tubo direito.Feche a tampa do instrumento e clique em Go.As soluções lipídicas e mRNA fluirão através do cartucho microfluido e a solução de nanopartículas lipídicas será coletada nos tubos cônicos. Retenha o tubo cônico no final do processo de formulação e, em seguida, dilua as nanopartículas lipídicas com 5 mililitros de PBS e um gabinete de segurança biológica. Para realizar uma troca de buffer, primeiro pré-lave um filtro ultracentrifuge tamanho poros de 100 kilodalton com 2 mililitros de PBS, centrífuga e, em seguida, esvazie o PBS do compartimento inferior.Adicione as nanopartículas lipídicas diluídas ao compartimento superior do filtro de ultracentrifuuge pré-lavado para três lavagens centrífugas, descartando o fluxo através e adicionando 5 mililitros de PBS ao filtro ultracentrífuga após as duas primeiras lavagens. Após a última lavagem, pipeta a solução de nanopartículas lipídicas contra as paredes do filtro ultracentrífuga algumas vezes para minimizar a perda de nanopartículas antes de transferir a solução de nanopartículas para um frasco sem nuclease. Em seguida, adicione PBS para trazer a suspensão da nanopartícula à concentração experimental e volume necessários.Para avaliar a eficiência de encapsulamento das nanopartículas lipídicas, primeiro preparem diluições serial duplas da solução de ácido nucleico em funcionamento na PBS para gerar uma curva padrão, partindo de 500 nanogramas por mililitro e fazendo pelo menos cinco diluições. Em seguida, prepare as diluições da amostra de nanopartículas na PBS para obter uma concentração teórica apropriada que fica ao redor do ponto médio da curva padrão. Em seguida, prepare o reagente RNA verde ribo para detectar a presença de RNA dentro e fora da nanopartícula lipídica misturando as quantidades apropriadas de reagente RNA, Triton X100 e PBS.Em seguida, para detectar a presença de RNA fora da nanopartícula líquida, misture as quantidades apropriadas de reagentes de RNA e apenas PBS. Carregar réplicas do padrão nucleico de ácido e soluções de nanopartículas lipídicas em uma placa de poço 96 resistente à fluorescência negra, em seguida, adicionar um volume igual de reagente de quantificação de RNA com, e sem Triton X100 ao padrão e a amostra replica. Agite a placa no leitor de placas por cinco minutos à temperatura ambiente protegida da luz para obter uma mistura completa das amostras, em seguida, meça a fluorescência em um leitor de microplaca em um comprimento de onda de excitação de 480 nanômetros e um comprimento de onda de emissão de 520 nanômetros.Para medir o tamanho hidrodinâmico e a poli dispersão das nanopartículas lipídicas, primeiro diluir a solução de nanopartículas 40 vezes em PBS e adicionar a solução a um semi micro cuvette. Carregue o cuvette no Zetasizer e selecione um procedimento operacional padrão para definir o instrumento para medir as nanopartículas de acordo com seu material, dispersante, temperatura e tipo de célula. Em seguida, clique em Iniciar"para medir o tamanho hidrodinâmico e a poli dispersão das nanopartículas lipídicas.Para medir o potencial zeta de nanopartículas lipídicas, diluir a solução de nanopartículas 40 vezes em água sem nuclease e carregar a solução em um cuvette para a linha de enchimento. Coloque o cuvette em um analisador potencial Zeta, tomando cuidado para que os eletrodos façam contato com o instrumento, e defina o instrumento para medir o potencial zeta de acordo com a composição específica das nanopartículas lipídicas. Em seguida, clique em Iniciar"para medir o potencial de nanopartículas lipídicas zeta.Nesta análise, vários lotes de nanopartículas lipídicas com a mesma formulação lipídica e razão de amina para fosfato foram desenvolvidos em dias separados para demonstrar a reprodutibilidade da técnica. Como observado, os lotes um e dois apresentaram distribuições de tamanho sobrepostas com uma poli dispersidade semelhante, sem diferenças significativas observadas no tamanho ou eficiência de encapsulamento entre os lotes. Normalmente, mudanças nos parâmetros de formulação induzem algumas pequenas, mas estatisticamente significativas diferenças.Por exemplo, a diminuição da relação amina para fosfato resulta em uma redução de 4% na eficiência do encapsulamento, com um aumento concomitante no diâmetro hidrodinâmico das nanopartículas. As nanopartículas lipídicas formuladas com lipídios ionizáveis diferentes, mas a mesma razão amina para fosfato, apresentam uma mudança significativa na eficiência do encapsulamento, bem como pequenas diferenças no diâmetro das partículas. O encapsulamento do DNA plasmídeo resulta em partículas maiores em comparação com as nanopartículas lipídicas de encapsulamento mRA, embora ambos os tipos de nanopartículas demonstrem uma eficiência de encapsulamento semelhante.Alterações no parâmetro do processo de fluxo, no entanto, não afetam o desenvolvimento de nanopartículas lipídicas. As nanopartículas lipídicas têm ótimas aplicações, sendo o exemplo perfeito as vacinas COVID-19 recentemente aprovadas. Esta técnica serve como um grande conjunto de ferramentas e abre caminho para aplicações futuras, permitindo a triagem de formulação de membros inferiores.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Therapeutic Gene Delivery and Transfection in Human Pancreatic Cancer Cells using Epidermal Growth Factor Receptor-targeted Gelatin Nanoparticles

Entrega de genes e Transfection em células pancreáticas humanas Cancer usando Fator de Crescimento Epidérmico Receptor-alvo à base de gelatina Nanovectors Engineered

More than 32,000 patients are diagnosed with pancreatic cancer in the United States per year and the disease is associated with very high mortality 1. ...

Bioengenharia

High-throughput Protein Expression Generator Using a Microfluidic Platform

Alto rendimento Gerador Protein Expression Usando uma plataforma microfluídica

Rapidly increasing fields, such as systems biology, require the development and implementation of new technologies, enabling high-throughput and ...

Evaluation of Polymeric Gene Delivery Nanoparticles by Nanoparticle Tracking Analysis and High-throughput Flow Cytometry

Avaliação de Entrega Gene Polimérico Nanopartículas por Análise Nanoparticle Rastreamento e alta capacidade de Citometria de Fluxo

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a ...

Cell Squeezing as a Robust, Microfluidic Intracellular Delivery Platform

Espremendo celular como uma plataforma de entrega intracelular Robust Microfluidic

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This ...

Lipid Bilayer Vesicle Generation Using Microfluidic Jetting

Lipid Bilayer Vesicle Geração Usando Microfluidic jateamento

Bottom-up synthetic biology presents a novel approach for investigating and reconstituting biochemical systems and, potentially, minimal organisms. This ...

Analyzing Mixing Inhomogeneity in a Microfluidic Device by Microscale Schlieren Technique

Analisando falta de homogeneidade de mistura em um dispositivo micro, pela técnica Microscale Schlieren

In this paper, we introduce the use of microscale schlieren technique to measure mixing inhomogeneity in a microfluidic device. The microscale schlieren ...

Solid Lipid Nanoparticles (SLNs) for Intracellular Targeting Applications

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Nanopartículas Lipídicas Sólidas (NLS) para intracelular Segmentação Aplicações

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A Microfluidic Platform for High-throughput Single-cell Isolation and Culture

Uma plataforma microfluídica para a isolação de alta taxa de transferência de célula única e Cultura

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Plataforma microfluídico com multiplexada detecção electrónica do Ordenamento do Rastreamento de Partículas

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A Microfluidic Platform for Longitudinal Imaging in Caenorhabditis elegans

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