Name: formulating and characterizing lipid nanoparticles for gene delivery using a microfluidic mixing platform
Uploaded: 2021-02-25T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Formulating and Characterizing Lipid Nanoparticles for Gene Delivery using a Microfluidic Mixing Platform at JoVE.com

Gracias a Atul Saluja, Yatin Gokarn, Maria-Teresa Peracchia, Walter Schwenger y Philip Zakas por su orientación y contribuciones al desarrollo de LNP.

En la Figura 1se proporciona un esquema del proceso general.
1. Preparación de tampones
NOTA: El filtrado estéril de los tampones se recomienda aquí para eliminar cualquier partícula que pueda afectar la calidad del ácido nucleico y el LNP.
<ol><li>Solución salina tamponada con fosfato (PBS)<ol>
<li>Prepare 1x PBS usando 8 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4, 137 mM NaCl y 2.7 mM KCl en agua libre...

<ol>
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La reproducibilidad, la velocidad y el cribado de bajo volumen son ventajas significativas del uso de la mezcla microfluídica para formar LNPs en comparación con otros métodos existentes (por ejemplo, hidratación de la película lipídica e inyección de etanol). Hemos demostrado la reproducibilidad de este método sin impacto en la eficiencia de encapsulación o el tamaño de partícula observado con diferentes lotes de LNP. Este es un criterio esencial para que cualquier terapia, incluidos los LNP, esté clínicame...

Los portadores de fármacos se utilizan para proteger y administrar una terapéutica con propiedades favorables típicas que incluyen baja citotoxicidad, aumento de la biodisponibilidad y mejora dela estabilidad 1,2,3. Las nanopartículas poliméricas, micelas y partículas basadas en lípidos se han explorado previamente para la encapsulación y entrega de ácidos nucleicos4,5,6,7. Los lípidos se han utilizado en diferentes tipos de sistemas de nanoportadores, incluidos los liposomas y las nanopartículas lipídicas, ya que son biocompatibles con altaestabilidad 8. Los LNP pueden encapsular fácilmente los ácidos nucleicos para la entregade genes 9,10. Protegen el ácido nucleico de la degradación por proteasas séricas durante la circulación sistémica11 y pueden mejorar la entrega a sitios específicos, ya que la topografía superficial y las propiedades físicas de los LNPs influyen en su biodistribución12. Los LNPs también mejoran la penetración tisular y la captación celular9. Estudios previos han demostrado el éxito de la encapsulación de siRNA dentro de un LNP13,incluido el primer LNP disponible comercialmente que contiene siRNA terapéutico para el tratamiento de la polineuropatía del tratamiento de la amiloidosis hereditaria mediada por transtiretina14 que fue aprobado por la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos (FDA) y la Agencia Europea de Medicamentos en 2018. Más recientemente, los LNP se están estudiando para la entrega de cantidades de ácidos nucleicos más grandes, a saber, ARNm y ADN9. A partir de 2018, había ~ 22 sistemas de administración de ácidos nucleicos basados en lípidos sometidos a ensayos clínicos14. Además, los ARNm que contienen LNPs son actualmente candidatos líderes y se han empleado para una vacuna COVID-1915,16. El éxito potencial de estas terapias génicas no virales requiere la formación de partículas pequeñas (~ 100 nm), estables y uniformes con alta encapsulación del ácido nucleico.
El uso de un lípido ionizable como componente principal en la formulación de LNP ha mostrado ventajas para la complejidad, encapsulación y eficiencia de entrega14. Los lípidos ionizables suelen tener una constante de disociación ácida (pKa) < 7; por ejemplo, dilinoleylmethyl-4-dimethylaminobutyrate (D-Lin-MC3-DMA), el lípido ionizable utilizado en la formulación de LNP aprobada por la FDA, tiene un pKa de 6.4417. A pH bajo, los grupos amina en el lípido ionizable se protonan y cargan positivamente, lo que permite el ensamblaje con grupos fosfato cargados negativamente en ARNm y ADN. La proporción de grupos amina, "N", a fosfato, "P", se utiliza para optimizar el ensamblaje. La relación N/P depende de los lípidos y ácidos nucleicos utilizados, que varían en función de la formulación18. Después de la formación, el pH se puede ajustar a un pH neutro o fisiológico para permitir la administración terapéutica. A estos valores de pH, el lípido ionizable también se desprotona, lo que imparte carga superficial neutra al LNP.
El lípido ionizable también ayuda en el escape endosomal19,20. Los LNP sufren endocitosis durante la absorción celular y deben liberarse del endosoma para entregar la carga de ARNm en el citoplasma celular o la carga de ADN al núcleo21. Dentro del endosoma es típicamente un ambiente más ácido que el medio extracelular, lo que hace que el lípido ionizable cargado positivamente22,23. El lípido ionizable cargado positivamente puede interactuar con cargas negativas en la membrana lipídica endosomal, lo que puede causar desestabilización del endosoma permitiendo la liberación del LNP y el ácido nucleico. Actualmente se están estudiando diferentes lípidos ionizables para mejorar la eficacia tanto de la distribución de LNP, como del escape endosomal14.
Otros componentes típicos de un LNP incluyen lípidos auxiliares, como un lípido fosfatidilcolina (PC) o fosfoetanolamina (PE). 1,2-Dioleoyl-sn -glycero-3-phosphoethanolamine (DOPE), 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC), y 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DOPC) son lípidos auxiliares de uso común24,25. Se ha demostrado que el DOPE forma una fase hexagonal II invertida (HII) y mejora la transfección por fusión de membrana26,mientras que se ha pensado que el DSPC estabiliza los LNPs con su geometría cilíndrica27. El colesterol también se incorpora en la formulación para aumentar la rigidez de la membrana, ayudando posteriormente en la estabilidad de la LNP. Finalmente, el polietilenglicol conjugado con lípidos (PEG) se incluye en la formulación para proporcionar la barrera estérica necesaria para ayudar en el autoensamblaje de partículas27. PEG también mejora la estabilidad de almacenamiento de los LNP al evitar la agregación. Además, PEG se utiliza a menudo como un componente sigiloso y puede aumentar el tiempo de circulación de los LNP. Sin embargo, este atributo también puede plantear desafíos para el reclutamiento de LNPs a hepatocitos a través de un mecanismo de orientación endógeno impulsado por la apolipoproteína E (ApoE)28. Por lo tanto, los estudios han investigado la longitud de la cadena de acilo para la difusión de PEG desde el LNP, encontrando que las longitudes cortas (C8-14) se disocian del LNP y son más susceptibles al reclutamiento de ApoE en comparación con las longitudes de acilo más largas28. Además, se ha demostrado que el grado de saturación de la cola lipídica con la que se conjuga el PEG influye en la distribución tisular de los LNPs29. Recientemente, se demostró que Tween 20, que es un surfactante de uso común en formulaciones de productos farmacéuticos biológicos y tiene una larga cola lipídica insaturada, tiene una alta transfección en los ganglios linfáticos drenantes en comparación con PEG-DSPE, que transfectó en gran medida el músculo en el sitio de inyección29. Este parámetro se puede optimizar para lograr la biodistribución LNP deseada.
Los métodos convencionales de formación de LNPs incluyen el método de hidratación de película delgada y el método de inyección de etanol27. Si bien estas son técnicas fácilmente disponibles, también requieren mucha mano de obra, pueden resultar en una baja eficiencia de encapsulación y son difíciles de escalar27. Los avances en las técnicas de mezcla han dado como resultado métodos más susceptibles de escalar, mientras que el desarrollo de partículas más uniformes27. Estos métodos incluyen la mezcla de unión en T, la mezcla escalonada de espiga y el enfoque hidrodinámico microfluídico27. Cada método tiene una estructura única, pero todos permiten la mezcla rápida de una fase acuosa que contiene el ácido nucleico con una fase orgánica que contiene los componentes lipídicos, lo que resulta en una alta encapsulación del ácido nucleico27. En este protocolo, se utiliza una mezcla rápida y controlada a través de un cartucho microfluídico, que emplea el diseño de mezcla escalonada de espiga. Este protocolo describe la preparación, ensamblaje y caracterización de ácidos nucleicos que contienen LNPs.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,2-dimyristoyl-rac-glycero-3-methoxypolyethylene glycol-2000 (C-14 PEG)</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>880151P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;l Graduated Filter Tips&#160; (RNase-,DNase-, DNA-free)</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1121-3810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;l Graduated Filter Tips (RNase-,DNase-, DNA-free)</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1111-2831</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 &#181;l Beveled Filter Tips (RNase-,DNase-, DNA-free)</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1120-1810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;l Graudated Filter Tips (RNase-,DNase-, DNA-free)</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1120-8810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3&#946;-Hydroxy-5-cholestene, 5-Cholesten-3&#946;-ol (Cholesterol)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8667</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Slip Tip Sterile Syringes (1 ml syringe)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14-823-434</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Slip Tip Sterile Syringes (3 ml syringe)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14-823-436</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Vacutainer General Use Syringe Needles (BD Blunt Fill Needle 18G)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23-021-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchtop Centrifuge</td>
			<td>Beckman coulter</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black 96 well plates</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14-245-177</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BrandTech BRAND BIO-CERT RNase-, DNase-, DNA-free microcentrifuge tubes (1.5mL)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14-380-813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-002-611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 500ml Vacuum Filter/Storage Bottle System, 0.22 um pore</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430769</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable folded capillary cells</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>DTS1070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl Alcohol, Pure 200 proof</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>459844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisher Brand Semi-Micro Cuvette</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14955127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen Conical Tubes (15 mL) (DNase-RNase-free)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM12500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MilliporeSigma Amicon Ultra Centrifugal Filter Units</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>UFC901024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoAssemblr Benchtop</td>
			<td>Precision Nanyosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free water</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM9930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AM9624</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>&#160;P7589</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quant-iT RiboGreen RNA Assay Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>R11490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-004-036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Citrate, Dihydrate, granular</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-004-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpectraMax i3x</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zetasizer Nano</td>
			<td>Malvern</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

formulating and characterizing lipid nanoparticles for gene delivery using a microfluidic mixing platform

Los portadores de fármacos basados en lípidos se han utilizado para sistemas de administración disponibles clínica y comercialmente debido a su pequeño tamaño, biocompatibilidad y alta eficiencia de encapsulación. El uso de nanopartículas lipídicas (LNP) para encapsular ácidos nucleicos es ventajoso para proteger el ARN o el ADN de la degradación, al tiempo que promueve la absorción celular. Los LNP a menudo contienen múltiples componentes lipídicos, incluidos un lípido ionizable, lípido auxiliar, colesterol y lípido conjugado de polietilenglicol (PEG). Los LNP pueden encapsular fácilmente los ácidos nucleicos debido a la presencia de lípidos ionizables, que a pH bajo es catiónico y permite la complejación con ARN o ADN cargado negativamente. Aquí los LNPs se forman encapsulando arn mensajero (ARNm) o ADN plásmido (pDNA) utilizando la mezcla rápida de los componentes lipídicos en una fase orgánica y el componente de ácido nucleico en una fase acuosa. Esta mezcla se realiza utilizando una plataforma de mezcla microfluídica precisa, lo que permite el autoensamblaje de nanopartículas mientras se mantiene el flujo laminar. El tamaño hidrodinámico y la polidispersidad se miden mediante dispersión dinámica de la luz (DLS). La carga superficial efectiva en el LNP se determina midiendo el potencial zeta. La eficiencia de encapsulación se caracteriza utilizando un tinte fluorescente para cuantificar el ácido nucleico atrapado. Los resultados representativos demuestran la reproducibilidad de este método y la influencia que los diferentes parámetros de formulación y proceso tienen en los LNPs desarrollados.

Se desarrollaron múltiples lotes de LNPs con la misma formulación lipídica y una relación N/P de 6 en días separados para demostrar la reproducibilidad de la técnica. Los lotes 1 y 2 dieron lugar a distribuciones de tamaño superpuestas con polidispersidad similar (Figura 2A) No se observaron diferencias significativas en el tamaño o la eficiencia de encapsulación entre los dos lotes diferentes (Figura 2B). La eficiencia ...

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Formulating and Characterizing Lipid Nanoparticles for Gene Delivery using a Microfluidic Mixing Platform

Las nanopartículas lipídicas se desarrollan utilizando un enfoque de plataforma de mezcla microfluídica para la encapsulación de ARNm y ADN.

Formulación y caracterización de nanopartículas lipídicas para la administración de genes utilizando una plataforma de mezcla microfluídica

Lipid-based drug carriers have been used for clinically and commercially available delivery systems due to their small size, biocompatibility, and high ...

Este protocolo se puede utilizar para producir nanopartículas lipídicas encapsuladas en ácido nucleico con alta reproducibilidad y velocidad y bajos volúmenes. Los parámetros de formulación se pueden ajustar para lograr una biodisponsión deseada basada en la aplicación clínica. El diseño estándar de espiga del cartucho microfluídico permite un flujo laminar rápido, preciso y controlado durante la mezcla.El método es susceptible de escalar y genera partículas uniformes y altamente encapsuladas. Con la mayoría de los productos de terapia génica aprobados comercialmente que se basan en métodos virales, este procedimiento puede proporcionar información sobre la administración de genes, ya que su enfoque no viral permite aplicaciones para las que es necesaria la dosificación repetida. Comience agregando la cantidad adecuada de cada solución de caldo líquido a un vial de vidrio con vórtice intermitente.como se indica en la tabla, seguido de la adición de 200 etanol a prueba a un volumen final de 533 microlitros. A continuación, añadir la cantidad adecuada de material de ARNm y diluir con tampón de citrato para lograr un volumen final de 1,5 mililitros a la concentración deseada. Para cebar los canales microfluídicos, primero ingrese el parámetro de cebado en el software del instrumento como se describe en la tabla.A continuación, abra la tapa del instrumento y coloque un cartucho microfluídico en el bloque giratorio. Cargue al menos 500 microlitros de etanol en una jeringa de 1 mililitro, cuidando de que no haya burbujas ni espacios de aire en la punta de la jeringa e inserte la jeringa en la entrada derecha del cartucho. Cargue una jeringa de cinco mililitros con 1,5 mililitros de tampón de citrato, teniendo cuidado de que no haya burbujas de aire ni huecos, e inserte la jeringa en la entrada izquierda del cartucho.Coloque dos tubos cónicos de 15 mililitros en los soportes de clip para que sirvan como contenedores de residuos y haga clic en "Ir" para mezclar las soluciones. Cuando el instrumento deje de cebarse como lo indica el cierre de la luz azul inferior, abra el último y deseche adecuadamente los tubos cónicos y las jeringas. Para la formación de nanopartículas lipídicas, establezca los parámetros de formulación apropiados como se indica en la tabla y cargue una jeringa de 1 mililitro con una mezcla de lípidos previamente preparada.Retire los espacios de aire o burbujas en la punta de la jeringa e inserte la jeringa en el lado derecho del cartucho. Cargue la solución de ácido nucleico previamente preparada en una jeringa de 3 mililitros, cuidando de que no haya burbujas ni espacios de aire en la punta de la jeringa, e inserte la jeringa en la entrada izquierda del cartucho. Coloque un tubo cónico libre de RNAsa de 15 mililitros etiquetado con el nombre de la muestra en el clip del tubo izquierdo y coloque un cónico de desecho de 15 mililitros en el clip del tubo derecho.Cierre la tapa del instrumento y haga clic en Go.Las soluciones de lípidos y ARNm fluirán a través del cartucho microfluídico y la solución de nanopartículas lipídicas se recogerá en los tubos cónicos. Retenga el tubo cónico al final del proceso de formulación, luego diluya las nanopartículas lipídicas con 5 mililitros de PBS y un gabinete de seguridad biológica. Para realizar un intercambio de búfer, primero prelavado un filtro de ultracentrífuga de tamaño de poro de 100 kilodalton con 2 mililitros de PBS, centrífuga y luego vacíe el PBS desde el compartimiento inferior.Agregue las nanopartículas lipídicas diluidas al compartimento superior del filtro de ultracentrífuga prelavado para tres lavados de centrífuga, descartando el flujo y agregando 5 mililitros de PBS al filtro de ultracentrífuga después de los dos primeros lavados. Después del último lavado, pipetee la solución de nanopartículas lipídicas contra las paredes del filtro de la ultracentrífuga varias veces para minimizar la pérdida de nanopartículas antes de transferir la solución de nanopartículas a un vial libre de nucleasas. Luego agregue PBS para llevar la suspensión de nanopartículas a la concentración y volumen experimental apropiados según sea necesario.Para evaluar la eficiencia de encapsulación de las nanopartículas lipídicas, primero prepare diluciones seriales dobles de solución de ácido nucleico de trabajo en PBS para generar una curva estándar, comenzando a partir de 500 nanogramos por mililitro y haciendo al menos cinco diluciones. A continuación, prepare las diluciones de muestra de nanopartículas en PBS para lograr una concentración teórica adecuada que se encuentre alrededor del punto medio de la curva estándar. Luego prepare el reactivo de ARN verde ribo para detectar la presencia de ARN tanto dentro como fuera de la nanopartícula lipídica mezclando las cantidades apropiadas de reactivo de ARN, Triton X100 y PBS.Luego, para detectar la presencia de ARN fuera de la nanopartícula líquida, mezcle las cantidades apropiadas de reactivos de ARN y PBS solamente. La carga se replica de las soluciones estándar de ácido nucleico y nanopartículas lipídicas en una placa de 96 pozos con capacidad de fluorescencia negra, luego agrega un volumen igual de reactivo de cuantificación de ARN con y sin Triton X100 al estándar y replica la muestra. Agite la placa en el lector de placas durante cinco minutos a temperatura ambiente protegida de la luz para obtener una mezcla completa de las muestras, luego mida la fluorescencia en un lector de microplacas a una longitud de onda de excitación de 480 nanómetros y una longitud de onda de emisión de 520 nanómetros.Para medir el tamaño hidrodinámico y la polidispersión de las nanopartículas lipídicas, primero diluya la solución de nanopartículas 40 veces en PBS y agregue la solución a una semi micro cubeta. Cargue la cubeta en el Zetasizer y seleccione un procedimiento operativo estándar para configurar el instrumento para medir las nanopartículas de acuerdo con su material, dispersante, temperatura y tipo de célula. A continuación, haga clic en Iniciar" para medir el tamaño hidrodinámico y la polidisparidad de las nanopartículas lipídicas.Para medir el potencial Zeta de las nanopartículas lipídicas, diluya la solución de nanopartículas 40 veces en agua libre de nucleasas y cargue la solución en una cubeta hasta la línea de llenado. Cargue la cubeta en un analizador de potencial Zeta, teniendo cuidado de que los electrodos entren en contacto con el instrumento, y configure el instrumento para medir el potencial Zeta de acuerdo con la composición específica de las nanopartículas lipídicas. Luego haga clic en Inicio" para medir el potencial de nanopartículas lipídicas Zeta.En este análisis, se desarrollaron múltiples lotes de nanopartículas lipídicas con la misma formulación lipídica y proporción de amina a fosfato en días separados para demostrar la reproducibilidad de la técnica. Como se observó, los lotes uno y dos exhibieron distribuciones de tamaño superpuestas con una dispersión poli similar, sin que se observaran diferencias significativas en el tamaño o la eficiencia de encapsulación entre los lotes. Por lo general, los cambios en los parámetros de formulación inducen algunas diferencias pequeñas pero estadísticamente significativas.Por ejemplo, la disminución de la relación amina-fosfato da como resultado una disminución del 4% en la eficiencia de encapsulación, con un aumento concomitante en el diámetro hidrodinámico de las nanopartículas. Las nanopartículas lipídicas formuladas con diferentes lípidos ionizables pero la misma proporción de amina a fosfato, exhiben un cambio significativo en la eficiencia de encapsulación, así como ligeras diferencias en el diámetro de la partícula. La encapsulación del ADN plásmido da como resultado partículas más grandes en comparación con las nanopartículas lipídicas encapsulantes de mRA, aunque ambos tipos de nanopartículas demuestran una eficiencia de encapsulación similar.Sin embargo, los cambios en el parámetro del proceso de caudal no afectan el desarrollo de nanopartículas lipídicas. Las nanopartículas lipídicas tienen grandes aplicaciones, siendo el ejemplo perfecto las vacunas COVID-19 recientemente aprobadas. Esta técnica sirve como un gran conjunto de herramientas y allana el camino para futuras aplicaciones al permitir la detección de formulaciones de miembros inferiores.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Therapeutic Gene Delivery and Transfection in Human Pancreatic Cancer Cells using Epidermal Growth Factor Receptor-targeted Gelatin Nanoparticles

Entrega y transfección de genes en células humanas de cáncer de páncreas con factor de crecimiento epidérmico receptor dirigidos a base de gelatina Nanovectors Ingeniería

More than 32,000 patients are diagnosed with pancreatic cancer in the United States per year and the disease is associated with very high mortality 1. ...

Investigación

Bioingeniería

High-throughput Protein Expression Generator Using a Microfluidic Platform

Proteínas de alto rendimiento del generador de expresiones utilizando una plataforma de microfluidos

Rapidly increasing fields, such as systems biology, require the development and implementation of new technologies, enabling high-throughput and ...

Evaluation of Polymeric Gene Delivery Nanoparticles by Nanoparticle Tracking Analysis and High-throughput Flow Cytometry

La evaluación de la administración de genes nanopartículas poliméricas por nanopartículas de análisis de seguimiento y de alto rendimiento Citometría de Flujo

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a ...

Cell Squeezing as a Robust, Microfluidic Intracellular Delivery Platform

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Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This ...

Lipid Bilayer Vesicle Generation Using Microfluidic Jetting

Lípidos bicapa vesículas Generación Usando Microfluidic Jetting

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Analyzing Mixing Inhomogeneity in a Microfluidic Device by Microscale Schlieren Technique

Analizando Mezcla falta de homogeneidad en un dispositivo de microfluidos por Microscale Schlieren Técnica

In this paper, we introduce the use of microscale schlieren technique to measure mixing inhomogeneity in a microfluidic device. The microscale schlieren ...

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Sólido lípidos nanopartículas (GLC) Aplicaciones para intracelular de focalización

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Una plataforma microfluídica para el aislamiento de gran procesamiento de celda única y Cultura

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