Este protocolo está entre os primeiros a descrever o uso de um aparelho autoinjetor na aotransplantação do tumor Drosophila. Um tema que cresceu em popularidade nos últimos anos. A principal vantagem desse método é que ele aumenta a eficiência da pesquisa sobre câncer em Drosophila, melhorando a velocidade, consistência e rendimento da aotransplantação tumoral.
A aotransplantação tumoral em Drosophila é uma técnica delicada que pode ser difícil de dominar. Seja paciente e confie que a prática faz a perfeição. Depois de atravessar as moscas e incubar os ovos por seis dias a 18 graus Celsius, transfira os frascos contendo as larvas eclodidas para uma incubadora a 29 graus Celsius.
Classificar o tipo selvagem anestesiado ou moscas adultas mutantes com base em seus sexos. Fixar um pedaço de fita de mosca de cinco centímetros de comprimento em um slide de microscópio com o lado pegajoso para cima. Imobilize as moscas aderindo suas asas à fita com fórceps.
Coloque a caixa do controlador e o autoinjetor em lados opostos do microscópio de luz. Processe uma extremidade do capilar de vidro usando um puxador de micro pipeta de quatro passos, aquecendo-o a uma extremidade estreita e fechada. Use fórceps para cortar o capilar em um ângulo de aproximadamente 60 graus para preparar um capilar de vidro de 3,5 polegadas.
Levemente desaparafusar a tampa do injetor. Segure o botão vazio para avançar a agulha do injetor até que 70 a 80% do seu comprimento total esteja mostrando. Use uma seringa para encher o capilar de vidro com óleo mineral.
Selecione uma das larvas e transfira para uma placa de dissecção preenchida com 100 microliters do Médio de Schneider para preparar para dissecção do tumor de anel imaginário SG. Usando um par de fórceps para segurar a parte média do corpo larval, belisque a cabeça larval usando outro par de fórceps e aplique uma força de alongamento longitudinalmente. Localize e isole o SG em forma de Y das larvas, em seguida, disseque o tumor do anel imaginário SG removendo o tecido adjacente.
Encha o capilar de vidro com o Médio de Schneider até o segmento superior de 0,5 centímetros segurando o botão de enchimento. Localize um tumor primário e pressione o botão de preenchimento até que o tumor seja aspirado no capilar. Certifique-se de que o tumor está na ponta do capilar ou vários milímetros de distância da ponta do capilar.
Localize uma mosca adulta imobilizada na fita. Em seguida, use fórceps para segurar suavemente o abdômen inferior e perfurar a cutícula lateral inferior do abdômen com o capilar. Pressione o botão vazio até que o tumor entre no novo abdômen hospedeiro.
Usando fórceps, aperte suavemente as asas do host para removê-la da fita. Em seguida, colocá-lo em um novo frasco com alimentos frescos. Tela para tumores que cresceram no abdômen hospedeiro usando um microscópio de fluorescência em torno de 10 a 14 dias após o alusão e dissecar o tumor a todo-enxerto cultivado fora do hospedeiro usando dois pares de fórceps.
Use um par de fórceps para segurar o abdômen e o outro par para incisar a cutícula abdominal, expondo o tumor a todo-enxerto. Isole cuidadosamente o tumor dos tecidos do hospedeiro ligados. Use agulhas estéreis e disseque os tumores em pedaços menores que sejam apropriados para o tamanho capilar.
Repita este processo para uma nova geração de hospedeiros adultos para completar a aotransplantação do tumor. O processo de desenvolvimento do tumor foi rastreado por imagens ao vivo de um tumor de anel imaginário de primeira geração que cresce em um abdômen hospedeiro adulto no dia 10, pós-aotransplante. Um tumor de anel imaginário de sexta geração SG ocupando uma grande parte do abdômen hospedeiro no dia 10, pós-aotransplante é mostrado aqui.
Imagens nesta fase podem ajudar a revelar padrões de crescimento tumoral, bem como seus comportamentos de migração e invasão. O transplante de tumor é uma ótima técnica para estudos longitudinais para progressão do tumor, evolução e metástase. Resultados de grande importância, para o estudo das interações do hospedeiro tumoral.
Este proto tem grande potencial em telas de drogas contra o câncer usando as drogas Temodal. Usando essa técnica, os pesquisadores poderão economizar tempo e esforço significativos na investigação.
