Name: activity of posterior lateral line afferent neurons during swimming in zebrafish
Uploaded: 2021-02-10T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Activity of Posterior Lateral Line Afferent Neurons during Swimming in Zebrafish at JoVE.com

ونحن نعرب عن امتناننا للدعم المقدم من المعهد الوطني للصحة (DC010809)، والمؤسسة الوطنية للعلوم (IOS1257150، 1856237)، ومختبر ويتني للعلوم البيولوجية البحرية إلى J.C.L. ونود أن نشكر الأعضاء السابقين والحاليين في مختبر لياو على حفز المناقشات.

تم إجراء جميع رعاية الحيوانات والتجارب وفقا للبروتوكولات التي وافقت عليها اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها في جامعة فلوريدا.
1. إعداد مواد للتسجيلات الكهربية
<ol><li>جعل طبق تسجيل سيليكون الاستومر القاع.<ol>
<li>الاستغناء عن طبقة رقيقة من مكونات الاستومر السيليكون ا...

يوفر البروتوكول التجريبي الموصوف إمكانية مراقبة التغيرات الذاتية في المدخلات الحسية عبر السلوكيات الحركية في فقاريات سليمة ومتصرفة. على وجه التحديد ، فإنه يفصل نهج في الجسم الحي لأداء التسجيلات خارج الخلية في وقت واحد من الخلايا العصبية الجانبية الخط النافر والجذور الحركية البطنية في ح...

تنقل الخلايا العصبية الأفرنتة في الأنظمة الحساسة الميكانيكية المعلومات من خلايا الشعر إلى الدماغ أثناء السمع والتوازن. يمكن أن يكشف علم الفيزيولوجيا الكهربية عن حساسية الخلايا العصبية من خلال التسجيلات المباشرة. في حين أن ترقيع الخلايا بأكملها من خلايا الشعر يمكن أن يكون تحديا، وتسجيل من الخلايا العصبية afferent المصب أسهل ويسمح تقييم إمكانات العمل استجابة لتحفيز تسيطر عليها1،2،3. تحفيز خلايا الشعر يؤدي إلى انحرافها، الذي يعدل هياكل الميكانيكا، وبالتالي يؤدي إلىزيادةفي إمكانات العمل (المسامير) في الخلايا العصبية afferent 4،5،6. في غياب المحفزات الخارجية ، ترتفع الخلايا العصبية الأفرنت أيضا تلقائيا بسبب تسرب الغلوتامات من خلايا الشعر إلى محطات ما بعد الاشتباك العصبي7،8، وقد ثبت أنها تساهم في الحفاظ علىالحساسية 9،10. التصحيح تسجيل المشبك من النشاط afferent تمكن من مراقبة حساسية خلايا الشعر وديناميات إشارة التي لا يمكن استخدام تقنيات ذات دقة زمنية أقل، كما هو الحال في microphonics11،12 أو التصوير الوظيفي الكالسيوم13،14،15. سيسمح البروتوكول التالي بتسجيل النشاط البؤري المتزامن مع الأوامر الحركية للكشف عن التغيرات الفورية في حساسية خلايا الشعر.
حمار وحشي (دانيو rerio) استخدام خلايا الشعر الواردة في الأورام العصبية التي تشكل نظام الخط الجانبي للكشف عن حركة المياه بالنسبة لجسمهم, الذي يترجم إلى إشارات عصبية ضرورية للملاحة16,17,18, تجنب المفترس, فريسة التقاط19,20, والتعليم21. ويمكن أيضا أن يكون تدفق المياه الذاتي ولدت من قبل حركات السباحة22،23،24، التنفس22،25،26، وتغذية27. وتشمل هذه السلوكيات الحركات المتكررة التي يمكن أن تعب خلايا الشعر وضعف الاستشعار. لذلك، من الضروري أن يميز نظام الخط الجانبي بين محفزات التدفق الخارجية (الخارجية) والمحفزات التدفقية ذاتية المولدة (إعادة الالتقيب). التفريغ الطبيعي يخفف إشارات التدفق الذاتي المولدة أثناء الحركة في حمار وحشي. يتم ترحيل هذه الإشارة الحركية التنبؤية المثبطة عبر الخلايا العصبية التنازلية إلى المستقبلات الحسية لتعديل الإدخال أو مقاطعة معالجة ردود الفعل reafferent28،29. عمل المنوية المساهمة في فهمنا المبكر لهذا النظام feedforward تعتمد على الاستعدادات في المختبر حيث لم يتم الحفاظ على الاتصال والنشاط الداخلي للدائرة العصبية28،30،31،32،33،34،35. يصف هذا البروتوكول نهجا للحفاظ على دائرة عصبية سليمة حيث يتم الحفاظ على ديناميكيات التغذية المرتدة الذاتية مما يتيح فهما أفضل للإفرازات الطبيعية في الجسم الحي.
يصف البروتوكول المبين هنا كيفية مراقبة الخلايا العصبية الجانبية الخلفية ونشاط الخلايا العصبية الحركية في وقت واحد في سمك الحمار الوحشي اليرقات. إن توصيف ديناميكيات الإشارات البؤرية قبل وأثناء وبعد الأوامر الحركية يوفر رؤى حول التغذية المرتدة الذاتية في الوقت الفعلي من الجهاز العصبي المركزي الذي يعدل حساسية خلايا الشعر أثناء الحركة. يحدد هذا البروتوكول المواد التي يجب إعدادها قبل التجارب ثم يصف كيفية شل يرقات حمار وحشي وإعدادها. وسوف يصف البروتوكول كيفية إنشاء تسجيل التصحيح فضفاضة مستقرة من الخلايا العصبية الأفرنت والجذر البطني خارج الخلية (VR) تسجيلات الخلايا العصبية الحركية. وتقدم البيانات التمثيلية التي يمكن الحصول عليها باستخدام هذا البروتوكول من فرد نموذجي، وقد أجريت تحليلات على نسخ متماثلة متعددة للبروتوكول التجريبي. يتم إجراء المعالجة المسبقة للبيانات باستخدام البرامج النصية المكتوبة المخصصة في MATLAB. وعموما، فإن هذا النموذج التجريبي في الجسم الحي يستعد لتوفير فهم أفضل لردود الفعل الحسية أثناء الحركة في نظام خلايا الشعر الفقارية النموذجية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mL beaker</td>
			<td>PYREX</td>
			<td>1000</td>
			<td>resceptacle for etchant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x water immersion objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>UMPLFLN10xW</td>
			<td>low magnification for positioning larvae and recording electrode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40x water immersion objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>LUMPLFLN40XW</td>
			<td>higher magnification for position electrode tip and establishing patch-clamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>abfload.m</td>
			<td></td>
			<td>supplemental coding file</td>
			<td>custom written MATLAB script for converting raw electrophysiology recordings to .mat files</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AffVR_preprocess.m</td>
			<td></td>
			<td>supplemental coding file</td>
			<td>custom written MATLAB script for preprocessing recording data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNC coaxial cables</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>2249-C-12</td>
			<td>connecting amplifier and digitizer channels; require 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>borosilicate glass capillaries w/ filament</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>G150F-3</td>
			<td>inner diameter: 0.86, outer diameter: 1.50; capillary glass used to form recording electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>burst_detect</td>
			<td></td>
			<td>supplemental coding file</td>
			<td>custom written MATLAB function necessary to run AffVR_preprocess.m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>computer</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>any computer should work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DC Power Supply</td>
			<td>Tenma</td>
			<td>72-420</td>
			<td>used for electrically etching dissection pins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electrophysiology digitizer</td>
			<td>Axon Instruments, Molecular Devices</td>
			<td>Axon DigiData 1440A</td>
			<td>enables acquisition of patch-clamp data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>filament</td>
			<td>Sutter Instrument Company</td>
			<td>FB255B</td>
			<td>2.5 mm box filament used in micropipette puller</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fine forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>Dumont #5 (0.05 x 0.02 mm) Item No. 11295-10</td>
			<td>used to manipulate larvae and insert pins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fixed stage DIC microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51WI</td>
			<td>microscope used to visualize and establish patch-clamp recordings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flexible, tapered pipette tip</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-707-169</td>
			<td>flexible tips enable insertion into recording electrode to dispense extracellular solution at the tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FluoroDish</td>
			<td>World Precision Instruments Inc.</td>
			<td>FD3510-100</td>
			<td>cover glass bottomed dish recording dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KimWipe</td>
			<td>KimTech</td>
			<td>34155</td>
			<td>task wipe used for wicking away excess fluid from larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kwik-Gard</td>
			<td>World Precision Instruments Inc.</td>
			<td>710172</td>
			<td>self-mixing sylgard elastomer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB</td>
			<td>MathWorks</td>
			<td>R2020b</td>
			<td>command line software for preprocessing data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microelectrode amplifier</td>
			<td>Axon Instruments, Molecular Devices</td>
			<td>MultiClamp 700B</td>
			<td>patch clamp amplifier for dual channel recordings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microforge</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>MF-830 microforge</td>
			<td>to polish recording electrode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micromanipulator control unit</td>
			<td>Siskiyou</td>
			<td>MC1000-eR/T</td>
			<td>4-axis dial coordinator for controlling micromanipulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instrument Company</td>
			<td>Flaming/Brown P-97</td>
			<td>for pulling capillary glass into recording electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope control unit</td>
			<td>Siskiyou</td>
			<td>MC1000e</td>
			<td>positions the microscope around the fixed stage and preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>motorized micromanipulator</td>
			<td>Siskiyou</td>
			<td>MX7600</td>
			<td>positions the headstage and attached recording electrode for patch-clamp recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiClamp Commander</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>2.2.2</td>
			<td>downloadable from Axon MultiClamp 700B Commander download page</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>optical air table</td>
			<td>Newport Corporation</td>
			<td>VH3036W-OPT</td>
			<td>breadboard isolation table to float microscope and minimize vibrations during recordings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCLAMP</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>10.7.0</td>
			<td>downloadable from Axon pCLAMP 10 Electrophysiology Data Acquisition &#38; Analysis Software Download page</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>permanent ink marker</td>
			<td>Sharpie</td>
			<td>order from amazon.com</td>
			<td>for marking the leading edge side of the VR electrode to ensure proper orientation when inserting into pipette holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>petri-dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>35-3001</td>
			<td>used to immerse larvae in paralytic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pipette holder</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>1-HL-U</td>
			<td>hold recording electrode and connect to the headstage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pneumatic transducer</td>
			<td>Fluke Biomedical Instruments</td>
			<td>DPM1B</td>
			<td>for controlling recording electrode internal pressure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>potassium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>221473-25G</td>
			<td>etchant for etching dissection pins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>silicone tubing</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>14-169-1A</td>
			<td>tubing to connect pneumatic transducer to pipette holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>spike_detect</td>
			<td></td>
			<td>supplemental coding file</td>
			<td>custom written MATLAB function necessary to run AffVR_preprocess.m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stereomicroscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>Stemi 2000-C</td>
			<td>used to visualize pin tips and during preparation of larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>straight edge razor blade</td>
			<td>Canopus</td>
			<td>order from amazon.com</td>
			<td>cuts the tungsten wire while making dissection pins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>swimbout_detect</td>
			<td></td>
			<td>supplemental coding file</td>
			<td>custom written MATLAB function necessary to run AffVR_preprocess.m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>syringe</td>
			<td>Becton Dickinson Compoany</td>
			<td>309602</td>
			<td>filled with extracellular solution to inject into recording electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>transfer pipette</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z135003-500EA</td>
			<td>single use, non-sterile pipette for transfering larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tricaine methanesulfonate</td>
			<td>Syndel</td>
			<td>12854</td>
			<td>pharmaceutical aneasthetic used to euthanize larvae with high dosage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tungsten wire</td>
			<td>World Precision Instruments Inc.</td>
			<td>715500</td>
			<td>0.002 inch, 50.8 &#956;m diameter; used to make dissection pins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vacuum filtration unit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SCGVU11RE</td>
			<td>single use, sterile, vacuum filtration units used to sterilize extracellular solution used for electrophysiology electrode ringer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>voltage-clamp current-clamp headstage</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>CV-7B</td>
			<td>supplied with MultiClamp 700B amplifier used as left and right headstages</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-bungarotoxin</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>B1601</td>
			<td>for immobilizing the larvae prior to recording</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

activity of posterior lateral line afferent neurons during swimming in zebrafish

تجمع الأنظمة الحسية الإشارات الضرورية لتوجيه السلوك ، ولكن يجب على الحيوانات فك شفرة المعلومات ذات الصلة بيولوجيا. يولد Locomotion إشارات إعادة أحشاء أن الحيوانات يجب أن تنفصل عن الإشارات الحسية ذات الصلة للبيئة المحيطة. على سبيل المثال، عندما تسبح سمكة، يتم الكشف عن التدفق المتولد عن تموج الجسم من قبل الأورام العصبية الميكانورية، التي تتألف من خلايا الشعر، التي تشكل نظام الخط الجانبي. خلايا الشعر ثم نقل معلومات حركة السوائل من جهاز الاستشعار إلى الدماغ عن طريق الخلايا العصبية الحسية afferent. في الوقت نفسه ، يتم ترحيل التفريغ الطبيعي للأمر الحركي إلى خلايا الشعر لمنع الحمل الزائد الحسي. ولذلك، فإن حساب التأثير المثبط للإشارات الحركية التنبؤية أثناء الحركة أمر بالغ الأهمية عند تقييم حساسية نظام الخط الجانبي. لقد طورنا نهجا كهربيا في الجسم الحي لمراقبة الخلايا العصبية الجانبية الخلفية ونشاط الجذر الحركي البطني في يرقات حمار وحشي (4-7 أيام بعد الإخصاب) في وقت واحد يمكن أن تستمر لعدة ساعات. يتم تحقيق التسجيلات خارج الخلية من الخلايا العصبية afferent باستخدام تقنية المشبك التصحيح فضفاضة، والتي يمكن الكشف عن النشاط من الخلايا العصبية واحد أو متعددة. يتم إجراء تسجيلات الجذر البطني من خلال الجلد مع أقطاب زجاجية للكشف عن نشاط الخلايا العصبية الحركية. يوفر بروتوكولنا التجريبي إمكانية مراقبة التغيرات الذاتية أو المثارة في المدخلات الحسية عبر السلوكيات الحركية في فقاريات سليمة ومتصرفة.

بعد شل حركة يرقات حمار وحشي بشكل صحيح وتحقيق العقدة الجانبية الخلفية وتسجيل الواقع الافتراضي ، يمكن قياس النشاط في كل من الخلايا العصبية الأفرنتة والحركية في وقت واحد. يتم عرض قنوات التسجيل باستخدام بروتوكولات تسجيل خالية من الثغرات (الخطوة 1.4) للرصد المستمر لنشاط afferent وVR. في الوقت الحقيق?...

Watch this Scientific Journal Video about Activity of Posterior Lateral Line Afferent Neurons during Swimming in Zebrafish at JoVE.com

Activity of Posterior Lateral Line Afferent Neurons during Swimming in Zebrafish

نحن نصف بروتوكول لرصد التغيرات في نشاط الخلايا العصبية afferent خلال الأوامر الحركية في نموذج نظام خلايا الشعر الفقارية.

نشاط الخلايا العصبية الجانبية الخلفية Afferent خلال السباحة في حمار وحشي

Sensory systems gather cues essential for directing behavior, but animals must decipher what information is biologically relevant. Locomotion generates ...

هذا البروتوكول يمكن الباحث من رصد نشاط واستجابة الخلايا العصبية الحسية واحدة لتحفيز تسيطر عليها في فقرات سليمة تتصرف. هذا التصحيح الكهربية هو وسيلة سريعة ومباشرة لتسجيل من النشاط ارتفاع الخلايا العصبية الفردية في الوقت الحقيقي. وهذا يوفر دقة وقت وحساسية أفضل بتكلفة أقل من معظم تقنيات التصوير البصري.خلايا الشعر الخط الجانبي هي متجانسة لتلك التي من الأذن الداخلية البشرية. لذلك تستعد هذه التقنية للكشف عن خصائص دوائر خلايا الشعر التي تنطبق على الصمم البشري واضطرابات السمع. علم الفيزيولوجيا الكهربية هو حرفة تستخدم المهارات الحركية الدقيقة التي تحتاج إلى أن ينظر إليها وتقليدها جسديا.التعليمات النصية فقط تترك مساحة كبيرة جدا لسوء التفسير. للبدء، والاستغناء عن طبقة رقيقة من الاستومر السيليكون الذاتي خلط مثل سيلغارد في طبق زراعة الأنسجة غطاء الزجاج القاع لجعل طبق تسجيل أسفل elastomer السيليكون. لجعل دبابيس تشريح، وتوفير تهمة سلبية من خمسة فولت إلى كوب 100 ملليلتر من إيشانت باستخدام إمدادات الطاقة DC وإرفاق سلك التنغستن إلى الإخراج مشحونة إيجابيا.تراجع مرارا وتكرارا غيض من السلك في حمام إيشانت حتى يضيق الطرف إلى نقطة حادة. تحت مجهر ستيريو، قطع السلك ما يقرب من ملليمتر واحد من طرف مع شفرة حلاقة حافة مستقيمة. كرر هذا ثلاث مرات ثم إدراج دبابيس في طبق تسجيل الشفاء باستخدام ملقط ناعم.لإعداد أقطاب تسجيل، سحب أنابيب الشعيرات الدموية الزجاجية borosilicate باستخدام سحب micropipette مع خيوط مربع. يجب أن يكون القطب طرف قطرها 30 ميكرومتر مع تفتق التي سيتم استخدامها لتسجيل الخلايا العصبية afferent من الخط الجانبي الخلفي. سحب أنبوب إضافي البوروسيليكات الزجاج الشعرية في زوج من الأقطاب الكهربائية مع أصغر قطر تلميح واحد إلى خمسة ميكرومتر.عقد قطب واحد في كل يد، تشغيل بلطف نصائح عبر بعضها البعض لكسر النصائح. باستخدام مثقبية، قم بتلميع الطرف المفلت حتى يصبح ناعما. يجب أن يتراوح قطر الطرف النهائي بين 30 إلى 50 ميكرومتر.شل يرقات حمار وحشي ونقلها إلى طبق بتري 35 ملليمتر باستخدام طرف كبير لنقل ماصة. إزالة أكبر قدر ممكن من الحل المحيطة بها. تزج اليرقات في 10 ميكرولتر من 0.1٪ ألفا-Bungarotoxin لمدة خمس دقائق تقريبا.اغسل اليرقة المشلولة بمحلول خارج الخلية لمدة 10 دقائق. ثم استخدم ماصة نقل لنقل اليرقة من حمام المحلول خارج الخلية إلى طبق التسجيل القاعي للسيليكون. تحت مجهر ستيريو ، ضع اليرقات برفق مع ملقط ناعم فوق مركز حصيرة السيليكون هذه ، الجانب الجانبي مع النهايات الأمامية والخلفية للجسم التي تعمل من اليسار إلى اليمين.باستخدام ملقط يميل غرامة، إدراج دبوس حافة متعامدة إلى السيليكون من خلال نوتوشورد الظهري من اليرقات الظهرية مباشرة إلى فتحة الشرج. إدراج دبوس الثاني من خلال notochord قرب نهاية الذيل وإدراج دبوس الثالث من خلال ظهرية notochord من المثانة الغاز. إدراج دبوس الرابع من خلال الحويذ فيتيك مع توفير دوران طفيف كما يدخل دبوس في encapsulant.كما يتم تطبيق دوران طفيف، ومشاهدة للأنسجة بين الحويزل المشقوق وotic للكشف عن مجموعة من سوماتا أففيرنت. ضع يرقة الدبوس تحت هدف 10 مرات على مرحلة ثابتة من مجهر DIC وتوجيه الشقوق الميسيبتية للكتل العضلية الموازية لنواقل مرحلة الرأس الأيسر. ضع السلك الأرضي في محلول الحمام وتأكد من توصيله بمرحلة الرأس اليسرى.املأ قطب تسجيل الواقع الافتراضي ب 30 ميكرولتر من المحلول خارج الخلية باستخدام طرف ماصة مرن لتحميل الجل وأدخله في حامل ماصة مرحلة الرأس اليسرى. زيادة التكبير إلى 40 مرة وخفض ماصة التسجيل في محلول الطبق مع تطبيق الضغط الإيجابي الناتج عن محول هوائي. جلب طرف القطب على myoseptum بين اثنين من المايوميرات البطني إلى الخط الجانبي حتى يتم تركز الشق في فتحة طرف القطب VR خفض ماصة حتى حافة متخلفة من فتحة طرف الاتصالات بلطف الظهارة.بعد الاتصال الأولي، والمناورة ماصة قطريا لضمان حافة الرائدة يجعل الاتصال ويمكن أن تولد ختم. تطبيق الضغط السلبي مع محول هوائي وعقد عليه. في برنامج المشبك التصحيح، انقر على زر التشغيل على شريط الأدوات لمراقبة إشارة VR.تأكد من أن يتم تحقيق تسجيل VR مرة واحدة يتم ملاحظة نشاط الخلايا العصبية الحركية مع ديناميات إشارة انفجار ويلز النمطية. ملء القطب تسجيل afferent مع 30 ميكرولتر من محلول خارج الخلية وإدراجه في حامل ماصة مرحلة الرأس الأيمن. ثم خفضه في محلول الطبق مع تطبيق الضغط الإيجابي الناتج عن محول هوائي.حدد موقع القطب الكهربائي وأحضر طرف القطب الكهربائي فوق العينة. باستخدام ميكرومانيبولاتور، خفض طرف القطب afferent حتى يتم عقد موقف فوق cleithrum. زيادة التكبير إلى 40 مرة الغمر وتحديد موقع تقاطع العصب الخط الجانبي الخلفي وcleithrum.جلب طرف القطب فوق العقدة afferent وخفض ماصة حتى طرف الاتصالات ظهارة. بلطف، مناورة القطب بحيث محيط طرف كامل الاتصالات العقدة afferent. تطبيق الضغط السلبي مع محول هوائي وعقد عليه.بعد النقر فوق تشغيل في برنامج المشبك التصحيح، تأكد من أن يتم تحقيق تسجيل التصحيح فضفاضة الخلية بأكملها من الخلايا العصبية afferent عندما تحدث طفرات تلقائيا تقريبا كل 100 إلى 200 مللي ثانية. مرة واحدة يتم الكشف عن الخلايا العصبية afferent ونشاط الخلايا العصبية الحركية على حد سواء، انقر على زر تسجيل على شريط الأدوات في ذروة المشبك 10 لالتقاط التسجيلات الحرة الفجوة في وقت واحد في كل من القنوات. إجراء معالجة مسبقة للبيانات كما هو موضح في المخطوطة النصية.باستخدام بروتوكول التسجيل الخالي من الفجوات هذا ، يمكن قياس النشاط في الوقت الفعلي للخلايا العصبية الأفرنت وVR في وقت واحد. مخصص مكتوبة ، قبل معالجة البرامج النصية توليد المؤامرات للمساعدة في التصور من الكشف عن ارتفاع باستخدام معلمات مثل عتبة ، والحد الأدنى من المدة والحد الأدنى الفاصل الزمني بين البينية. تم الحصول على إشارات معزولة عن طريق ضبط المتغيرات الكشف الحد السفلي والمرتبط العلوي في البرنامج النصي قبل المعالجة.تتبع عملية الكشف عن ارتفاع الجذور البطنية معلمات متطابقة مع مدخلات إضافية. يتم تعريف رشقات نارية داخل قيادة المحرك من قبل ما لا يقل عن اثنين من المسامير في غضون 0.1 مللي ثانية دائم لمدة خمس مللي ثانية على الأقل ورسمها ما لا يقل عن ثلاث رشقات نارية مع فترات فاصلة بين أقل من 200 مللي ثانية قبل المعالجة البرامج النصية سوف تراكب أجزاء من النشاط afferent دخلت في فترة محددة جيدا من الفائدة. في هذه الحالة، يظهر النشاط التلقائي المتوسط تغيرات جذرية استجابة لبداية النشاط الحركي المصور على المحور X كزالوقت المساوي للصفر.تم الكشف عن اختلافات كبيرة في معدلات الارتفاع البؤري بين معدلات الارتفاع قبل السباحة ومعدلات الارتفاع في كل من فترات السباحة وما بعد السباحة. وارتبطت معدلات الارتفاع الحاد سلبا بمدة السباحة. لا يوجد أي ارتباط تم اكتشافه بين معدل الارتفاع النسبي وتواتر السباحة.صحة الحيوان هو أهم شيء عند محاولة هذا الإجراء. من المهم مراقبة تدفق الدم السريع ليس فقط لضمان رفاهية الحيوان ولكن أيضا لزيادة احتمال نجاح التسجيل العصبي. من خلال الاستفادة من الأدوات الوراثية المتاحة في Zebrafish ، يمكن تكملة بروتوكول الفيزيولوجيا الكهربية هذا بخطوط معدلة وراثيا للتحقيق بقوة في اتصال الدائرة التشريحية والوظيفية في أنظمة خلايا الشعر وخارجها.هذا التعديل المبسط لتقنية المشبك التصحيح يسمح لنا لرصد كيفية عمل النظم الحسية في الجسم الحي.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

تشريح والثقافة من الخلايا العصبية من النخاع الشوكي صواري الجنينية

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Lateral Diffusion and Exocytosis of Membrane Proteins in Cultured Neurons Assessed using Fluorescence Recovery and Fluorescence-loss Photobleaching

المقررة الإنتشار الأفقي والإيماس من غشاء بروتينات في الخلايا العصبية مثقف باستخدام الاسترداد الإسفار وPhotobleaching الإسفار الخسارة

Membrane proteins such as receptors and ion channels undergo active trafficking in neurons, which are highly polarised and morphologically complex. This ...

Optogenetic Activation of Zebrafish Somatosensory Neurons using ChEF-tdTomato

Optogenetic تنشيط الخلايا العصبية الحسية الجسدية اسماك الزرد باستخدام الشيف-tdTomato

Larval  zebrafish are emerging as a model for describing the development and function  of simple neural circuits. Due to their  external fertilization, ...

Recording Electrical Activity from Identified Neurons in the Intact Brain of Transgenic Fish

تسجيل النشاط الكهربائي من الخلايا العصبية التي تم تحديدها في الدماغ سليمة من الأسماك المعدلة وراثيا

Understanding the cell physiology of neural circuits that regulate complex behaviors is greatly enhanced by using model systems in which this work can be ...

Dissection and Lateral Mounting of Zebrafish Embryos: Analysis of Spinal Cord Development

تشريح والتركيب الجانبي من اسماك الزرد الأجنة: تحليل التنمية الحبل الشوكي

The zebrafish spinal cord is an effective investigative model for nervous system research for several reasons. First, genetic, transgenic and gene ...

A Large Lateral Craniotomy Procedure for Mesoscale Wide-field Optical Imaging of Brain Activity

إجراء حج القحف الجانبي الكبير ل ميسوسكيل التصوير البصري الميداني واسعة النطاق من نشاط الدماغ

The craniotomy is a commonly performed procedure to expose the brain for in vivo experiments. In mouse research, most labs utilize a small craniotomy, ...

In Vitro Recording of Mesenteric Afferent Nerve Activity in Mouse Jejunal and Colonic Segments

In Vitro Recording of Mesenteric Afferent Nerve Activity in Mouse Jejunal and Colonic Segments

في المختبر تسجيل من مساريقي وارد آخر الأعصاب في ماوس صائمية وقطاعات القولون

Afferent nerves not only convey information concerning normal physiology, but also signal disturbed homeostasis and pathophysiological processes of the ...

In Vitro Characterization of the Electrophysiological Properties of Colonic Afferent Fibers in Rats

In Vitro Characterization of the Electrophysiological Properties of Colonic Afferent Fibers in Rats

في المختبر توصيف الخصائص الكهربية لألياف الزبائ Colonic في الفئران

Dysfunction of the colonic sensory nerves has been implicated in the pathophysiology of several common conditions, including functional and inflammatory ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

في تصوير الكالسيوم فيفو خلايا الشعر الخط الجانبي في الزرد اليرقات

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...

Wireless Electrophysiological Recording of Neurons by Movable Tetrodes in Freely Swimming Fish

لاسلكيه الكهربائية تسجيل الخلايا العصبية من قبل Tetrodes المنقولة في بحريه السباحة الأسماك

The neural mechanisms governing fish behavior remain mostly unknown, although fish constitute the majority of all vertebrates. The ability to record brain ...