Name: activity of posterior lateral line afferent neurons during swimming in zebrafish
Uploaded: 2021-02-10T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Activity of Posterior Lateral Line Afferent Neurons during Swimming in Zebrafish at JoVE.com

국립보건원(DC010809), 국립과학재단(IOS1257150, 1856237), 휘트니 해양생물과학연구소의 지원을 J.C.L에 감사드립니다. 랴오랩의 과거와 현 멤버들에게 토론을 자극해 주신 것에 대해 감사드립니다.

모든 동물 관리 및 실험은 플로리다 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회가 승인 한 프로토콜에 따라 수행되었습니다.
1. 전기 생리적 기록을 위한 재료 준비
<ol><li>실리콘 엘라스토머 바닥 녹음 접시를 만드십시오.<ol>
<li>실리콘 엘라스토머 성분(예: 실가드)을 커버 글래스 바닥 조직 배양 접시에 분배하여 얕은 우물의 테두리와 함께 레벨을 넘습니다. 약 0.5 mL이 충분합니?...

설명된 실험 프로토콜은 척추동물과 동작하는 그대로 모터 거동에 걸쳐 감각 입력의 내인성 변화를 모니터링할 수 있는 잠재력을 제공합니다. 특히, 유충 제브라피시의 측면 선 포성 뉴런과 복부 모터 뿌리의 동시 세포 외 레코딩을 수행하는 생체 내 접근법을 자세히 설명합니다. 자발적인 발포활성은 이전에 잠재적 동시모터활동1,2,<su...

메카노 감각 시스템의 발포성 뉴런은 청력과 균형 동안 모발 세포에서 뇌로 정보를 전송합니다. 전기 생리학은 직접 기록을 통해 포성 뉴런의 감도를 나타낼 수 있습니다. 모발 세포에서 전체 세포 패치는 어려울 수 있지만, 다운스트림 포성 뉴런에서 기록하는 것은 더 쉬우며 제어 자극1,2,3에대한 응답으로 작용 잠재력의 평가를 할 수 있습니다. 자극하는 모발 세포는 메카노감각 구조를 수정하는 편향으로 이어지므로 포근성 뉴런4,5,6에서작용 잠재력(스파이크)의 증가를 유발한다. 외부 자극이 없는 경우, 발포성 뉴런은 모발 세포로부터 발구성 시냅스 후 단자7,8로글루타민트 누출로 인해 자발적으로 스파이크하고, 감도9,10을유지하는 데 기여하는 것으로 나타났다. 포어런트 활성의 패치 클램프 레코딩을 사용하면 미세포닉스11,12 또는 기능성 칼슘 이미징13,14,15와같이 낮은 측두해상도기술을 사용하여 사용할 수 없는 모발 세포 민감도 및 신호 역학을 관찰할 수 있다. 다음 프로토콜은 모터 명령과 동시 적으로 발포성 활동의 기록을 통해 모발 세포 민감도의 즉각적인 변화를 나타낼 수 있게 합니다.
Zebrafish(Danio rerio)는항비16,17,18,육식 동물 회피, 먹이 포착19,20및 학교21에필수적인 신경 신호로 변환되는 신체에 비해 물 움직임을 감지하기 위해 측면 라인 시스템을 구성하는 신경 종에 함유 된 모발 세포를 사용합니다. 또한수영22,23,24,호흡22,25,26,및수유(27)의 움직임에 의해 수유를 자체 생성할 수 있다. 이러한 동작은 모발 세포를 피로하고 감지를 손상시킬 수 있는 반복적인 움직임을 포함합니다. 따라서 측면 선 시스템은 외부(exafferent)와 자체 생성(reafferent) 흐름 자극을 구별하는 것이 중요합니다. 모조부에서 운동하는 동안 자체 생성 된 흐름 신호를 감쇠하는 계수 방전. 이러한 억제 예측 모터 신호는 내림내뉴런을 통해 감각 수용체로 중계되어 입력을 수정하거나 재흡수피드백(28,29)의처리를 방해한다. 이 이송형 시스템의 초기 이해에 기여하는 정액 작업은 신경 회로의 연결및 내인성 활동이 유지되지 않은 시험관 내 제제에 의존하여28,30,31,32,33,34, 35. 이 프로토콜은 내인성 피드백 역학이 유지되므로 생체 내 의 계수 방전을 더 잘 이해할 수 있도록 유지되는 온전한 신경 회로를 보존하는 방법을 설명합니다.
여기에 설명 된 프로토콜은 후반면 라인 발포성 뉴런과 운동 신경 활동을 동시에 애벌레 얼룩말피에서 모니터링하는 방법을 설명합니다. 운동 명령 전, 도중 및 운동 후 발포성 신호 역학을 특성화하면 운동 중에 모발 세포 민감도를 조절하는 중추 신경계의 실시간 내인성 피드백에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다. 이 프로토콜은 실험 전에 준비해야 할 물질을 설명하고 제브라피시 애벌레를 마비시키고 준비하는 방법을 설명합니다. 프로토콜은 운동 뉴런의 포근 과 세포 외 복부 루트 (VR) 기록의 안정적인 느슨한 패치 기록을 설정하는 방법을 설명합니다. 이 프로토콜을 사용하여 얻을 수 있는 대표적인 데이터는 모범적인 개인으로부터 제시되고 실험 프로토콜의 여러 복제에 대한 분석이 수행되었다. 데이터의 사전 처리는 MATLAB의 사용자 지정 서면 스크립트를 사용하여 수행됩니다. 전반적으로, 생체 내 실험 패러다임은 모델 척추동물 모발 세포 시스템에서 운동 중 감각 피드백에 대한 더 나은 이해를 제공할 태세입니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mL beaker</td>
			<td>PYREX</td>
			<td>1000</td>
			<td>resceptacle for etchant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x water immersion objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>UMPLFLN10xW</td>
			<td>low magnification for positioning larvae and recording electrode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40x water immersion objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>LUMPLFLN40XW</td>
			<td>higher magnification for position electrode tip and establishing patch-clamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>abfload.m</td>
			<td></td>
			<td>supplemental coding file</td>
			<td>custom written MATLAB script for converting raw electrophysiology recordings to .mat files</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AffVR_preprocess.m</td>
			<td></td>
			<td>supplemental coding file</td>
			<td>custom written MATLAB script for preprocessing recording data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNC coaxial cables</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>2249-C-12</td>
			<td>connecting amplifier and digitizer channels; require 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>borosilicate glass capillaries w/ filament</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>G150F-3</td>
			<td>inner diameter: 0.86, outer diameter: 1.50; capillary glass used to form recording electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>burst_detect</td>
			<td></td>
			<td>supplemental coding file</td>
			<td>custom written MATLAB function necessary to run AffVR_preprocess.m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>computer</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>any computer should work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DC Power Supply</td>
			<td>Tenma</td>
			<td>72-420</td>
			<td>used for electrically etching dissection pins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electrophysiology digitizer</td>
			<td>Axon Instruments, Molecular Devices</td>
			<td>Axon DigiData 1440A</td>
			<td>enables acquisition of patch-clamp data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>filament</td>
			<td>Sutter Instrument Company</td>
			<td>FB255B</td>
			<td>2.5 mm box filament used in micropipette puller</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fine forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>Dumont #5 (0.05 x 0.02 mm) Item No. 11295-10</td>
			<td>used to manipulate larvae and insert pins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fixed stage DIC microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51WI</td>
			<td>microscope used to visualize and establish patch-clamp recordings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flexible, tapered pipette tip</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-707-169</td>
			<td>flexible tips enable insertion into recording electrode to dispense extracellular solution at the tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FluoroDish</td>
			<td>World Precision Instruments Inc.</td>
			<td>FD3510-100</td>
			<td>cover glass bottomed dish recording dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KimWipe</td>
			<td>KimTech</td>
			<td>34155</td>
			<td>task wipe used for wicking away excess fluid from larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kwik-Gard</td>
			<td>World Precision Instruments Inc.</td>
			<td>710172</td>
			<td>self-mixing sylgard elastomer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB</td>
			<td>MathWorks</td>
			<td>R2020b</td>
			<td>command line software for preprocessing data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microelectrode amplifier</td>
			<td>Axon Instruments, Molecular Devices</td>
			<td>MultiClamp 700B</td>
			<td>patch clamp amplifier for dual channel recordings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microforge</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>MF-830 microforge</td>
			<td>to polish recording electrode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micromanipulator control unit</td>
			<td>Siskiyou</td>
			<td>MC1000-eR/T</td>
			<td>4-axis dial coordinator for controlling micromanipulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instrument Company</td>
			<td>Flaming/Brown P-97</td>
			<td>for pulling capillary glass into recording electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope control unit</td>
			<td>Siskiyou</td>
			<td>MC1000e</td>
			<td>positions the microscope around the fixed stage and preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>motorized micromanipulator</td>
			<td>Siskiyou</td>
			<td>MX7600</td>
			<td>positions the headstage and attached recording electrode for patch-clamp recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiClamp Commander</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>2.2.2</td>
			<td>downloadable from Axon MultiClamp 700B Commander download page</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>optical air table</td>
			<td>Newport Corporation</td>
			<td>VH3036W-OPT</td>
			<td>breadboard isolation table to float microscope and minimize vibrations during recordings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCLAMP</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>10.7.0</td>
			<td>downloadable from Axon pCLAMP 10 Electrophysiology Data Acquisition &#38; Analysis Software Download page</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>permanent ink marker</td>
			<td>Sharpie</td>
			<td>order from amazon.com</td>
			<td>for marking the leading edge side of the VR electrode to ensure proper orientation when inserting into pipette holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>petri-dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>35-3001</td>
			<td>used to immerse larvae in paralytic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pipette holder</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>1-HL-U</td>
			<td>hold recording electrode and connect to the headstage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pneumatic transducer</td>
			<td>Fluke Biomedical Instruments</td>
			<td>DPM1B</td>
			<td>for controlling recording electrode internal pressure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>potassium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>221473-25G</td>
			<td>etchant for etching dissection pins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>silicone tubing</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>14-169-1A</td>
			<td>tubing to connect pneumatic transducer to pipette holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>spike_detect</td>
			<td></td>
			<td>supplemental coding file</td>
			<td>custom written MATLAB function necessary to run AffVR_preprocess.m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stereomicroscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>Stemi 2000-C</td>
			<td>used to visualize pin tips and during preparation of larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>straight edge razor blade</td>
			<td>Canopus</td>
			<td>order from amazon.com</td>
			<td>cuts the tungsten wire while making dissection pins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>swimbout_detect</td>
			<td></td>
			<td>supplemental coding file</td>
			<td>custom written MATLAB function necessary to run AffVR_preprocess.m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>syringe</td>
			<td>Becton Dickinson Compoany</td>
			<td>309602</td>
			<td>filled with extracellular solution to inject into recording electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>transfer pipette</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z135003-500EA</td>
			<td>single use, non-sterile pipette for transfering larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tricaine methanesulfonate</td>
			<td>Syndel</td>
			<td>12854</td>
			<td>pharmaceutical aneasthetic used to euthanize larvae with high dosage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tungsten wire</td>
			<td>World Precision Instruments Inc.</td>
			<td>715500</td>
			<td>0.002 inch, 50.8 &#956;m diameter; used to make dissection pins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vacuum filtration unit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SCGVU11RE</td>
			<td>single use, sterile, vacuum filtration units used to sterilize extracellular solution used for electrophysiology electrode ringer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>voltage-clamp current-clamp headstage</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>CV-7B</td>
			<td>supplied with MultiClamp 700B amplifier used as left and right headstages</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-bungarotoxin</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>B1601</td>
			<td>for immobilizing the larvae prior to recording</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

activity of posterior lateral line afferent neurons during swimming in zebrafish

감각 시스템은 행동을 지시하는 데 필수적인 단서를 수집하지만 동물은 생물학적으로 관련된 정보를 해독해야합니다. 운동운동은 동물이 주변 환경의 관련 감각 단서에서 벗어나야 한다는 재흡수성 단서를 생성합니다. 예를 들어, 물고기가 수영할 때, 신체 기복으로부터 생성된 흐름은 모발 세포를 포함하는 기계광 신경종에 의해 검출되어 측면 선 시스템을 구성한다. 모발 세포는 감각 발포성 뉴런을 통해 센서에서 뇌로 유체 운동 정보를 전송합니다. 동시에, 모터 명령의 동시 방전은 감각 과부하를 방지하기 위해 모발 세포에 릴레이된다. 운동 중 예측 모터 신호의 억제 효과를 고려하므로 측면 선 시스템의 감도를 평가할 때 매우 중요합니다. 우리는 몇 시간 동안 지속될 수 있는 제브라피시 애벌레(4-7일 후 수정)에서 후방 측면선 발포성 뉴런 및 복부 모터 루트 활성을 동시에 모니터링하는 생체 내 전기생리학적 접근법을 개발했습니다. 포이발성 뉴런의 세포외 기록은 단일 또는 다중 뉴런에서 활동을 감지할 수 있는 느슨한 패치 클램프 기술을 사용하여 달성됩니다. 복부 뿌리 기록은 모터 뉴런 활동을 검출하기 위해 유리 전극으로 피부를 통해 수행됩니다. 당사의 실험 프로토콜은 척추동물과 동작하는 그대로 모터 동작에 걸쳐 내인성 또는 유발된 감각 입력의 변화를 모니터링할 수 있는 잠재력을 제공합니다.

제브라피시 애벌레가 제대로 고정되고 후방 측면선 포렌트 신경절및 VR 레코딩이 달성된 후, 포퍼런트 및 모터 뉴런 모두에서의 활동을 동시에 측정할 수 있다. 녹화 채널은 비응성 및 VR 활동을 지속적으로 모니터링하기 위해 간격이 없는 레코딩 프로토콜(단계 1.4)을 사용하여 표시됩니다. 실시간으로, 자발적인 포성 스파이크 속도의 감소는 가상의 수영 시합을 나타내는 VR 활동과 동시 관찰될 수...

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Activity of Posterior Lateral Line Afferent Neurons during Swimming in Zebrafish

우리는 모델 척추 동물 머리 세포 시스템에서 모터 명령 중 발포성 뉴런 활동의 변화를 모니터링하는 프로토콜을 설명합니다.

얼룩말피에서 수영하는 동안 후방 측면 라인 발신 신경의 활동

Sensory systems gather cues essential for directing behavior, but animals must decipher what information is biologically relevant. Locomotion generates ...

이 프로토콜은 연구원이 척추를 손상시키지 않는 통제된 자극에 단 하나 감각 뉴런의 활동 그리고 반응을 감시하는 가능하게 합니다. 이 패치 전기 생리학은 실시간으로 개별 뉴런의 급증 활동에서 기록하는 빠르고 직접적인 방법입니다. 또한 대부분의 광학 이미징 기술보다 저렴한 비용으로 더 나은 시간 해상도와 감도를 제공합니다.측면 선 헤어 셀은 인간의 내이에 동종입니다. 그래서이 기술은 인간의 청각 장애와 청각 장애에 적용되는 헤어 셀 회로의 특성을 공개 할 태세입니다. 전기 생리학은 볼 수 있고 물리적으로 모방해야 하는 미세 한 운동 기술을 사용하는 공예품입니다.텍스트만 지침으로 해석할 여지가 너무 많습니다. 먼저 실가드와 같은 실리콘 엘라스토머를 얇은 층으로 분배하여 실리콘 엘라스토머 바닥 녹음 접시를 만듭니다. 해부 핀을 만들려면 DC 전원 공급 장치를 사용하여 Etchant의 100 밀리리터 비커에 5 볼트의 음전하를 제공하고 양전하 출력에 텅스텐 와이어를 부착하십시오.팁이 날카로운 지점으로 좁힐 때까지 와이어 끝을 Etchant 욕조에 반복적으로 담급합니다. 스테레오 현미경으로, 직선 가장자리 면도날로 끝에서 약 1 밀리미터 와이어를 잘라. 이 세 번 반복한 다음 미세 한 집게를 사용하여 경화 된 녹음 접시에 핀을 삽입합니다.전극 을 준비하려면 상자 필라멘트가있는 마이크로 피펫 풀러를 사용하여 보로실리케이트 유리 모세관 튜브를 당깁니다. 전극은 후방 측삭선에서 포퍼런트 뉴런을 기록하는 데 사용되는 테이퍼가 있는 30 마이크로미터 직경 의 팁이 있어야 합니다. 1~5마이크로미터 팁 직경이 작은 전극에 추가보로실리케이트 유리 모세관 튜브를 넣습니다.각 손에 하나의 전극을 들고, 부드럽게 팁을 깰 서로 에 걸쳐 팁을 실행합니다. 마이크로 포지를 사용하여 베벨팁을 부드러워질 때까지 닦습니다. 최종 팁 직경은 30~50마이크로미터 사이여야 합니다.제브라피시 애벌레를 고정하고 파이펫을 옮기기 위해 큰 팁을 사용하여 35mm 페트리 접시로 옮습니다. 주변 용액을 최대한 많이 제거합니다. 약 5 분 동안 0.1 % 알파 - 분가로톡신의 10 마이크로 리터에 유충을 침수.마비된 애벌레를 세포외 용액으로 10분간 씻으시다. 그런 다음, 이송 파이펫을 사용하여 애벌레를 세포외 용액 욕조에서 실리콘 바닥 레코딩 접시로 이동시한다. 스테레오 현미경으로, 부드럽게이 실리콘 매트의 중앙 위에 미세 팁 집게와 애벌레를 배치, 신체의 전방과 후방 끝왼쪽에서 오른쪽으로 실행.미세 한 팁 집게를 사용하여, 항문에 직접 등쪽 의 등쪽 노토 코드를 통해 실리콘에 가장자리 핀을 직교로 삽입합니다. 꼬리 끝 부근의 노토코드를 통해 두 번째 핀을 삽입하고 가스 방광의 노토코드 등쪽을 통해 세 번째 핀을 삽입합니다. 네 번째 핀을 오틱 소포를 통해 삽입하면서 핀이 캡슐화에 삽입될 때 약간의 회전을 제공합니다.약간의 회전이 적용됨에 따라, 자극성 소마타의 클러스터를 드러내기 위해 클리트럼과 오정 소포 사이의 조직을 조심하십시오. PIN 애벌레를 DIC 현미경의 고정 된 단계에 10 배 목표 아래에 놓고 왼쪽 헤드 스테이지 벡터와 평행하게 근육 블록의 미오셉탈 갈라진 부분을 방향을 지정합니다. 접지 와이어를 목욕 용액에 넣고 왼쪽 헤드 스테이지에 연결되어 있는지 확인합니다.유연한 젤 로딩 파이펫 팁을 사용하여 세포 외 용액의 30 마이크로 리터로 VR 기록 전극을 채우고 왼쪽 헤드 스테이지 파이펫 홀더에 삽입하십시오. 배율을 40배로 늘리고 공압 트랜스듀서에 의해 생성된 양압을 가하면서 녹음 파이펫을 접시 용액으로 낮춥니다. 각지의 뒤쳐지는 가장자리가 상피에 부드럽게 닿을 때까지 갈라진 이면이 피펫을 낮추도록 두 근소소엽 사이의 근세동을 측면 선으로 가져옵니다.초기 접촉 후, 파이펫을 대각선으로 기동하여 최첨단이 접촉하고 씰을 생성할 수 있도록 합니다. 공압 변환기와 음압을 적용하고 잡아. 패치 클램프 소프트웨어에서 툴바의 재생 버튼을 클릭하여 VR 신호를 모니터링합니다.웰스 고정 관념 버스트 신호 역학을 가진 모터 뉴런 활동이 관찰되면 VR 레코딩이 달성되고 있는지 확인하십시오. 세포 외 용액의 30 마이크로 리터로 발포형 기록 전극을 채우고 오른쪽 헤드 스테이지 파이펫 홀더에 삽입하십시오. 그런 다음 공압 트랜스듀서에 의해 생성된 양압을 가하면서 접시 용액으로 낮추어 넣습니다.전극을 찾아 시편 위에 전극 끝을 가져옵니다. 마이크로 조작기를 사용하여, 그것은 cleithrum 위의 위치를 보유 할 때까지 발포성 전극 팁을 낮춥다. 배율을 40배로 늘리고 후방 측면선 신경과 클리스럼의 교차를 찾습니다.전극 끝을 포퍼런트 신경절 위에 넣고 팁이 상피에 닿을 때까지 파이펫을 낮춥춥시다. 부드럽게, 전체 팁 둘레가 포운성 신경절에 닿도록 전극을 기동. 공압 변환기와 음압을 적용하고 잡아.패치 클램프 소프트웨어에서 재생을 클릭한 후 스파이크가 100~200밀리초마다 자발적으로 발생할 때 전체 셀의 느슨한 패치 기록이 달성되도록 합니다. 포심뉴런과 운동 신경 활동이 모두 감지되면, 피크 클램프 10의 도구 모음의 레코드 버튼을 클릭하여 두 채널 모두에서 동시 간격 무료 레코딩을 캡처합니다. 텍스트 원고에 설명된 대로 데이터 사전 처리를 수행합니다.이 틈새 기록 프로토콜을 사용하여, 발신 및 VR 뉴런의 실시간 활성을 동시에 측정할 수 있다. 사용자 지정 작성, 사전 처리 스크립트는 임계값, 최소 기간 및 최소 인터스파이크 간격과 같은 매개 변수를 사용하여 스파이크 감지의 시각화를 지원하기 위해 플롯을 생성합니다. 격리된 신호는 사전 처리 스크립트에서 하한 및 상한 검출 변수를 조정하여 얻어졌다.복부 뿌리 스파이크 감지는 추가 입력과 동일한 매개 변수를 따릅니다. 모터 커맨드 내의 버스트는 최소 5밀리초 동안 지속되는 0.1밀리초 이내에 최소 2개의 스파이크로 정의되며, 200밀리초 미만의 인터버스트 간격으로 최소 3개의 버스트로 정의되며, 사전 처리 스크립트는 잘 정의된 관심 기간에 입력된 afferent 활동의 섹션을 오버레이합니다. 이 경우, 즉 자발적 활동은 X축에 묘사된 모터 활동의 개시에 대한 응답으로 0과 동일한 시간으로 극적인 변화를 나타낸다.수영 전 스파이크 비율과 수영 및 수영 후 기간의 스파이크 비율 사이의 포이퍼트 스파이크 비율에서 상당한 차이가 발견되었습니다. 포렌트 스파이크 비율은 수영 기간과 부정적으로 상관관계가 있었습니다. 상대 스파이크 속도와 수영 빈도 사이에는 상관 관계가 감지되지 않습니다.동물 건강은이 절차를 시도 하려고 할 때 가장 중요 한 것은. 빠른 혈류를 모니터링하여 동물의 복지를 보장할 뿐만 아니라 신경 기록성공 가능성을 높이는 것이 중요합니다. Zebrafish에서 사용할 수 있는 유전 도구를 활용함으로써, 이 전기 생리학 프로토콜은 모발 세포 시스템 및 그 너머의 해부학적 및 기능성 회로 연결을 강력하게 조사하기 위해 형질전환선에 의해 칭찬될 수 있습니다.패치 클램프 기법을 단순화하여 감각 시스템이 생체 내에서 어떻게 작동하는지 모니터링할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

배아 척수에서 뉴런의 Commissural 해부와 문화

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

연구

신경과학

Lateral Diffusion and Exocytosis of Membrane Proteins in Cultured Neurons Assessed using Fluorescence Recovery and Fluorescence-loss Photobleaching

교양 뉴런의 막 단백질의 측면 보급과 Exocytosis은 형광 복구 및 형광 손실 Photobleaching를 사용하여 평가

Membrane proteins such as receptors and ion channels undergo active trafficking in neurons, which are highly polarised and morphologically complex. This ...

Optogenetic Activation of Zebrafish Somatosensory Neurons using ChEF-tdTomato

요리사 tdTomato를 사용하여 Zebrafish Somatosensory의 뉴런의 Optogenetic 활성화

Larval  zebrafish are emerging as a model for describing the development and function  of simple neural circuits. Due to their  external fertilization, ...

Recording Electrical Activity from Identified Neurons in the Intact Brain of Transgenic Fish

형질 전환 생선의 본래 뇌에서 발견 뉴런의 전기적 활동을 기록

Understanding the cell physiology of neural circuits that regulate complex behaviors is greatly enhanced by using model systems in which this work can be ...

Dissection and Lateral Mounting of Zebrafish Embryos: Analysis of Spinal Cord Development

해부 및 제브라 피쉬 배아의 측면 장착 : 척수 개발의 분석

The zebrafish spinal cord is an effective investigative model for nervous system research for several reasons. First, genetic, transgenic and gene ...

A Large Lateral Craniotomy Procedure for Mesoscale Wide-field Optical Imaging of Brain Activity

두뇌 활동의 중규모 넓은 필드 광학 이미징에 대한 큰 측면 개두술 절차

The craniotomy is a commonly performed procedure to expose the brain for in vivo experiments. In mouse research, most labs utilize a small craniotomy, ...

In Vitro Recording of Mesenteric Afferent Nerve Activity in Mouse Jejunal and Colonic Segments

In Vitro Recording of Mesenteric Afferent Nerve Activity in Mouse Jejunal and Colonic Segments

마우스 Jejunal과 대장 세그먼트에서 장간막 구 심성 신경 활동의 생체 외 녹음에서

Afferent nerves not only convey information concerning normal physiology, but also signal disturbed homeostasis and pathophysiological processes of the ...

In Vitro Characterization of the Electrophysiological Properties of Colonic Afferent Fibers in Rats

In Vitro Characterization of the Electrophysiological Properties of Colonic Afferent Fibers in Rats

생체 외에서 쥐에 있는 저 승 구심 성 섬유의 Electrophysiological 속성의 특성

Dysfunction of the colonic sensory nerves has been implicated in the pathophysiology of several common conditions, including functional and inflammatory ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

애벌레 Zebrafish의 측면 라인 세포의 생체 내 칼슘 이미징

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...

Wireless Electrophysiological Recording of Neurons by Movable Tetrodes in Freely Swimming Fish

자유롭게 수영 물고기에서 이동 식 Tetrodes에 의해 뉴런의 무선 전기 생리적 기록

The neural mechanisms governing fish behavior remain mostly unknown, although fish constitute the majority of all vertebrates. The ability to record brain ...