Name: activity of posterior lateral line afferent neurons during swimming in zebrafish
Uploaded: 2021-02-10T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Activity of Posterior Lateral Line Afferent Neurons during Swimming in Zebrafish at JoVE.com

Vi erkänner tacksamt stöd från National Institute of Health (DC010809), National Science Foundation (IOS1257150, 1856237) och Whitney Laboratory for Marine Biosciences till J.C.L. Vi vill tacka tidigare och nuvarande medlemmar i Liao Lab för att de stimulerat till diskussioner.

All djurvård och alla experiment utfördes i enlighet med protokoll som godkänts av University of Floridas institutional animal care and use committee.
1. Beredning av material för elektrofysiologiska registreringar
<ol><li>Gör en silikon elastomerbottnad inspelningsfat.<ol>
<li>Dela ut ett tunt lager av självblandande silikon elastomerkomponenter (t.ex. Sylgard) i en täckglasbottnad vävnadskulturrätt tills den jämnar med kanten av grunt brunn. Cirka 0,5 ml räcker.</li>
		<li>Täck...

Det experimentella protokollet som beskrivs ger potential att övervaka endogena förändringar i sensorisk ingång över motoriska beteenden i ett intakt, beter sig ryggradsdjur. Specifikt beskriver det en in vivo-metod för att utföra samtidiga extracellulära inspelningar av laterala linje afferenta nervceller och ventrala motoriska rötter i larv zebrafisk. Spontan afferent aktivitet har tidigare karakteriserats i zebrafisk utan hänsyn till potentiell samtidig motoriskaktivitet 1,...

Afferenta nervceller av mekanosensoriska system överför information från hårceller till hjärnan under hörsel och balans. Elektrofysiologi kan avslöja känsligheten hos afferenta nervceller genom direkta inspelningar. Medan hela cell patchning från hårceller kan vara utmanande, inspelning från nedströms afferenta nervceller är lättare och möjliggör bedömning av åtgärder potentialer som svar på kontrollerade stimuleringar1,2,3. Stimulerande hårceller leder till deras avböjning, vilket ändrar mekanosensoriska strukturer, vilket utlöser en ökning av åtgärdspotentialer (spikar) i afferenta nervceller4,5,6. I avsaknad av yttre stimuli spikar afferenta nervceller också spontant på grund av glutamatläckage från hårcellerna på till afferenta postsynaptiska terminaler7,8, och har visat sig bidra till att upprätthållakänslighet 9,10. Patchklämma inspelning av afferent aktivitet möjliggör observation av hårcellskänslighet och signaldynamik som inte är möjliga med hjälp av tekniker med lägre temporal upplösning, såsom i mikrofonik11,12 eller funktionell kalciumavbildning13,14,15. Följande protokoll gör det möjligt att registrera afferent aktivitet samtidigt med motorkommandon för att avslöja omedelbara förändringar i hårcellskänsligheten.
Zebrafisk (Danio rerio) använder hårceller som finns i neuromaster som komponerar sidolinjesystemet för att upptäcka vattenrörelser i förhållande till kroppen, vilket översätts till neurala signaler som är väsentliga förnavigering 16,17,18,rovdjursundvikande, bytefångst19,20ochskolgång 21. Vattenflödet kan också vara självgenererat av rörelserna i simning22,23,24,andning22,25,26och utfodring27. Dessa beteenden omfattar repetitiva rörelser som kan trötta ut hårceller och försämra avkänningen. Därför är det viktigt att sidolinjesystemet skiljer mellan yttre (exafferent) och självgenererade (reafferent) flödesstimulanser. En corollary urladdning dämpar självgenererade flöde signaler under rörelse i zebrafisk. Denna hämmande prediktiva motorsignal vidarebefordras via fallande nervceller till de sensoriska receptorerna för att modifiera ingången eller avbryta behandlingen av den återafferenta återkopplingen28,29. Seminalt arbete som bidrar till vår tidiga förståelse av detta feedforward-system förlitade sig på in vitro-preparat där anslutningen och endogen aktivitet hos neuralkretsen inte bibehölls28,30,31,32,33,34,35. Detta protokoll beskriver en metod för att bevara en intakt neural krets där endogen feedback dynamik upprätthålls, vilket möjliggör bättre förståelse för den corollary ansvarsfrihet in vivo.
Protokollet som beskrivs här beskriver hur man övervakar bakre laterala linjen afferent neuron och motor neuron verksamhet samtidigt i larv zebrafish. Karakteriserande afferent signaldynamik före, under och efter motoriska kommandon ger insikter i realtid, endogen feedback från centrala nervsystemet som modulerar hårcellskänslighet under rörelse. Detta protokoll beskriver vilka material som kommer att behöva förberedas före experiment och beskriver sedan hur man förlamar och förbereder zebrafisklarver. Protokollet kommer att beskriva hur man upprättar en stabil lös patch inspelning av afferenta nervceller och extracellulära ventrala rot (VR) inspelningar av motoriska nervceller. Representativa data som kan erhållas med hjälp av detta protokoll presenteras från en exemplarisk individ och analys utfördes på flera replikat av det experimentella protokollet. Förbehandling av data utförs med hjälp av anpassade skriftliga skript i MATLAB. Sammantaget är detta experimentella paradigm in vivo redo att ge en bättre förståelse för sensorisk feedback under rörelse i ett modell ryggradsdjur hårcellssystem.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mL beaker</td>
			<td>PYREX</td>
			<td>1000</td>
			<td>resceptacle for etchant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x water immersion objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>UMPLFLN10xW</td>
			<td>low magnification for positioning larvae and recording electrode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40x water immersion objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>LUMPLFLN40XW</td>
			<td>higher magnification for position electrode tip and establishing patch-clamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>abfload.m</td>
			<td></td>
			<td>supplemental coding file</td>
			<td>custom written MATLAB script for converting raw electrophysiology recordings to .mat files</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AffVR_preprocess.m</td>
			<td></td>
			<td>supplemental coding file</td>
			<td>custom written MATLAB script for preprocessing recording data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNC coaxial cables</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>2249-C-12</td>
			<td>connecting amplifier and digitizer channels; require 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>borosilicate glass capillaries w/ filament</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>G150F-3</td>
			<td>inner diameter: 0.86, outer diameter: 1.50; capillary glass used to form recording electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>burst_detect</td>
			<td></td>
			<td>supplemental coding file</td>
			<td>custom written MATLAB function necessary to run AffVR_preprocess.m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>computer</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>any computer should work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DC Power Supply</td>
			<td>Tenma</td>
			<td>72-420</td>
			<td>used for electrically etching dissection pins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electrophysiology digitizer</td>
			<td>Axon Instruments, Molecular Devices</td>
			<td>Axon DigiData 1440A</td>
			<td>enables acquisition of patch-clamp data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>filament</td>
			<td>Sutter Instrument Company</td>
			<td>FB255B</td>
			<td>2.5 mm box filament used in micropipette puller</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fine forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>Dumont #5 (0.05 x 0.02 mm) Item No. 11295-10</td>
			<td>used to manipulate larvae and insert pins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fixed stage DIC microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51WI</td>
			<td>microscope used to visualize and establish patch-clamp recordings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flexible, tapered pipette tip</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-707-169</td>
			<td>flexible tips enable insertion into recording electrode to dispense extracellular solution at the tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FluoroDish</td>
			<td>World Precision Instruments Inc.</td>
			<td>FD3510-100</td>
			<td>cover glass bottomed dish recording dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KimWipe</td>
			<td>KimTech</td>
			<td>34155</td>
			<td>task wipe used for wicking away excess fluid from larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kwik-Gard</td>
			<td>World Precision Instruments Inc.</td>
			<td>710172</td>
			<td>self-mixing sylgard elastomer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB</td>
			<td>MathWorks</td>
			<td>R2020b</td>
			<td>command line software for preprocessing data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microelectrode amplifier</td>
			<td>Axon Instruments, Molecular Devices</td>
			<td>MultiClamp 700B</td>
			<td>patch clamp amplifier for dual channel recordings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microforge</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>MF-830 microforge</td>
			<td>to polish recording electrode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micromanipulator control unit</td>
			<td>Siskiyou</td>
			<td>MC1000-eR/T</td>
			<td>4-axis dial coordinator for controlling micromanipulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instrument Company</td>
			<td>Flaming/Brown P-97</td>
			<td>for pulling capillary glass into recording electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope control unit</td>
			<td>Siskiyou</td>
			<td>MC1000e</td>
			<td>positions the microscope around the fixed stage and preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>motorized micromanipulator</td>
			<td>Siskiyou</td>
			<td>MX7600</td>
			<td>positions the headstage and attached recording electrode for patch-clamp recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiClamp Commander</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>2.2.2</td>
			<td>downloadable from Axon MultiClamp 700B Commander download page</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>optical air table</td>
			<td>Newport Corporation</td>
			<td>VH3036W-OPT</td>
			<td>breadboard isolation table to float microscope and minimize vibrations during recordings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCLAMP</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>10.7.0</td>
			<td>downloadable from Axon pCLAMP 10 Electrophysiology Data Acquisition &#38; Analysis Software Download page</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>permanent ink marker</td>
			<td>Sharpie</td>
			<td>order from amazon.com</td>
			<td>for marking the leading edge side of the VR electrode to ensure proper orientation when inserting into pipette holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>petri-dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>35-3001</td>
			<td>used to immerse larvae in paralytic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pipette holder</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>1-HL-U</td>
			<td>hold recording electrode and connect to the headstage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pneumatic transducer</td>
			<td>Fluke Biomedical Instruments</td>
			<td>DPM1B</td>
			<td>for controlling recording electrode internal pressure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>potassium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>221473-25G</td>
			<td>etchant for etching dissection pins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>silicone tubing</td>
			<td>Tygon</td>
			<td>14-169-1A</td>
			<td>tubing to connect pneumatic transducer to pipette holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>spike_detect</td>
			<td></td>
			<td>supplemental coding file</td>
			<td>custom written MATLAB function necessary to run AffVR_preprocess.m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stereomicroscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>Stemi 2000-C</td>
			<td>used to visualize pin tips and during preparation of larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>straight edge razor blade</td>
			<td>Canopus</td>
			<td>order from amazon.com</td>
			<td>cuts the tungsten wire while making dissection pins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>swimbout_detect</td>
			<td></td>
			<td>supplemental coding file</td>
			<td>custom written MATLAB function necessary to run AffVR_preprocess.m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>syringe</td>
			<td>Becton Dickinson Compoany</td>
			<td>309602</td>
			<td>filled with extracellular solution to inject into recording electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>transfer pipette</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z135003-500EA</td>
			<td>single use, non-sterile pipette for transfering larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tricaine methanesulfonate</td>
			<td>Syndel</td>
			<td>12854</td>
			<td>pharmaceutical aneasthetic used to euthanize larvae with high dosage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tungsten wire</td>
			<td>World Precision Instruments Inc.</td>
			<td>715500</td>
			<td>0.002 inch, 50.8 &#956;m diameter; used to make dissection pins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vacuum filtration unit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SCGVU11RE</td>
			<td>single use, sterile, vacuum filtration units used to sterilize extracellular solution used for electrophysiology electrode ringer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>voltage-clamp current-clamp headstage</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>CV-7B</td>
			<td>supplied with MultiClamp 700B amplifier used as left and right headstages</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-bungarotoxin</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>B1601</td>
			<td>for immobilizing the larvae prior to recording</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

activity of posterior lateral line afferent neurons during swimming in zebrafish

Sensoriska system samlar ledtrådar som är nödvändiga för att styra beteendet, men djur måste dechiffrera vilken information som är biologiskt relevant. Rörelse genererar återafferenta signaler om att djur måste frigöra sig från relevanta sensoriska signaler i den omgivande miljön. Till exempel, när en fisk simmar, detekteras flöde som genereras från kroppsanfall av de mekanoreceptiva neuromasterna, bestående av hårceller, som komponerar sidolinjesystemet. Hårcellerna överför sedan flytande rörelseinformation från sensorn till hjärnan via de sensoriska afferenta nervcellerna. Samtidigt vidarebefordras corollary urladdning av motorkommandot till hårceller för att förhindra sensorisk överbelastning. Att redovisa den hämmande effekten av prediktiva motoriska signaler under rörelse är därför avgörande vid utvärdering av känsligheten hos sidoledningssystemet. Vi har utvecklat en in vivo elektrofysiologisk strategi för att samtidigt övervaka bakre laterala linjen afferent neuron och ventral motorrot verksamhet i zebrafisk larver (4-7 dagar efter befruktning) som kan pågå i flera timmar. Extracellulära inspelningar av afferenta nervceller uppnås med hjälp av den lösa patchklämman tekniken, som kan upptäcka aktivitet från enstaka eller flera nervceller. Ventrala rotinspelningar utförs genom huden med glaselektroder för att upptäcka motorisk neuronaktivitet. Vårt experimentella protokoll ger potential att övervaka endogena eller framkallade förändringar i sensorisk ingång över motoriska beteenden i ett intakt, beteende ryggradsdjur.

Efter zebrafisk larver är ordentligt immobiliserade och den bakre laterala linjen afferent ganglion och VR inspelning uppnås, aktivitet i både afferent och motoriska nervceller kan mätas samtidigt. Inspelningskanaler visas med hjälp av gapfria inspelningsprotokoll (steg 1.4) för kontinuerlig övervakning av afferent- och VR-aktivitet. I realtid kan minskningar av spontan afferent spikhastighet observeras samtidigt med VR-aktivitet som tyder på fictive simmatcher (Figur 1E). Vi fann at...

Watch this Scientific Journal Video about Activity of Posterior Lateral Line Afferent Neurons during Swimming in Zebrafish at JoVE.com

Activity of Posterior Lateral Line Afferent Neurons during Swimming in Zebrafish

Vi beskriver ett protokoll för att övervaka förändringar i den afferenta neuron aktiviteten under motoriska kommandon i en modell ryggradsdjur hår cell system.

Aktivitet av bakre laterala linjen Afferent nervceller under simning i zebrafisk

Sensory systems gather cues essential for directing behavior, but animals must decipher what information is biologically relevant. Locomotion generates ...

Detta protokoll gör det möjligt för forskaren att övervaka aktiviteten och svaret hos enstaka sensoriska nervceller till en kontrollerad stimulering i en intakt beter sig ryggkotor. Denna patchelektrofysiologi är ett snabbt och direkt sätt att spela in från spikaktiviteten hos enskilda nervceller i realtid. Och det ger bättre tidsupplösning och känslighet till en lägre kostnad än de flesta optiska bildtekniker.De laterala linjehårcellerna är homologa mot det mänskliga innerörat. Så denna teknik är redo att avslöja egenskaperna hos hårcellskretsar som gäller för mänsklig dövhet och hörselstörningar. Elektrofysiologi är ett hantverk med hjälp av finmotoriska färdigheter som måste ses och imiteras fysiskt.Textinstruktioner lämnar bara för mycket utrymme för feltolkning. Till att börja med, dispensera ett tunt lager av självblandning silikon elastomer som Sylgard i en täckglasbottnad vävnadskulturrätt för att göra en silikon elastomer botteninspelningsrätt. För att göra dissektionsstift, ge en negativ laddning på fem volt till en 100 milliliter bägare Etchant med hjälp av en likströmsströmförsörjning och fäst en volframtråd på den positivt laddade utgången.Doppa trådspetsen upprepade gånger i Etchant-badet tills spetsen smalnar av till en skarp punkt. Skär tråden ungefär en millimeter från spetsen under ett stereomikroskop med ett rakblad med rakblad med rakblad med rakkant. Upprepa detta tre gånger och sätt sedan in stift i den härdade inspelningsskålen med fina tångar.För att förbereda inspelningselektroder, dra borosilikatglas kapillärrör med hjälp av en mikropipette puller med lådfilament. Elektroden ska ha en spets med diametern 30 mikrometer med en avsmalning som kommer att användas för att spela in afferenta nervceller från den bakre sidolinjen. Dra in ett extra kapillärrör i borosilikatglas i ett par elektroder med mindre en till fem mikrometer spetsdiametrar.Håll en elektrod i varje hand, kör försiktigt spetsarna över varandra för att bryta spetsarna. Polera den fasade spetsen med hjälp av en mikroforge tills den är slät. Den slutliga spetsdiametern ska vara mellan 30 och 50 mikrometer.Immobilisera zebrafisklarver och överför dem till en 35 millimeters petriskål med en stor spets för att överföra pipett. Ta bort så mycket av den omgivande lösningen som möjligt. Fördjupa larverna i 10 mikroliter på 0,1% alfa-Bungarotoxin i cirka fem minuter.Tvätta den förlamade larven med extracellulär lösning i 10 minuter. Använd sedan en överföringspipett för att flytta larven från det extracellulära lösningsbadet till den silikonbottnade inspelningsfatet. Placera larverna försiktigt med finspetsade tångar ovanför mitten av denna silikonmatta under ett stereomikroskop, sidosidan upp med kroppens främre och bakre ändar som löper från vänster till höger.Använd finspetsade tångar, sätt in kantstiftet orthogonally till silikonet genom larvernas dorsala notokonaord direkt dorsala mot anusen. För in den andra stiftet genom notokordet nära svansens ände och för in den tredje stiftet genom gasblåsans notochorddror. För in den fjärde stiftet genom otic-vesikeln samtidigt som den ger liten rotation när stiftet sätts in i inkapslingen.Som en liten rotation appliceras, titta på vävnaden mellan cleithrum och otic vesikel för att avslöja klustret av afferent somata. Placera stift larven under det 10 gånger målet på ett fast stadium av DIC mikroskopet och orientera de mioceptala klyvningar av muskelblocken parallellt med vänster huvud steg vektor. Placera jordkabeln i badlösningen och se till att den är ansluten till vänster huvudsteg.Fyll VR-inspelningselektroden med 30 mikroliter extracellulär lösning med en flexibel pipettspets med gelbelastning och sätt in den i den vänstra pipetthållaren i huvudsteget. Öka förstoringen till 40 gånger och sänk inspelningspipetten i disklösningen samtidigt som du applicerar positivt tryck som produceras av en pneumatisk givare. För elektrodspetsen över ett myoseptum mellan de två myomerventilatorerna till sidolinjen tills klyvningen är centrerad i VR-elektrodspetsöppningen Sänk pipetten tills spetsens kovlande kant försiktigt kommer i kontakt med epitelet.Efter första kontakten manövrerar du pipetten diagonalt för att säkerställa att framkanten kommer i kontakt och kan generera en tätning. Applicera undertryck med den pneumatiska givaren och håll den. I patchklämman klickar du på knappen Spela upp i verktygsfältet för att övervaka VR-signalen.Se till att VR-inspelningen uppnås när motorisk neuronaktivitet med Wells stereotypa burst signaldynamik observeras. Fyll den afferenta inspelningselektroden med 30 mikroliter extracellulär lösning och sätt in den i rätt pipetthållare i huvudstadiet. Sänk sedan ner den i disklösningen samtidigt som du applicerar positivt tryck som produceras av en pneumatisk givare.Lokalisera elektroden och för elektrodspetsen över provet. Använd en mikromanipulator och sänk den afferenta elektrodspetsen tills den håller positionen ovanför cleithrum. Öka förstoringen till 40 gånger nedsänkning och lokalisera skärningspunkten mellan den bakre laterala linjen nerv och cleithrum.För elektrodspetsen över den afferenta ganglionen och sänk pipetten tills spetsen kommer i kontakt med epitelet. Manövrera försiktigt elektroden så att hela spetsens omkrets kommer i kontakt med den afferenta ganglionen. Applicera undertryck med den pneumatiska givaren och håll den.Efter att ha klickat på Spela in patch clamp programvara, se till att hela cell lösa patch inspelning av afferent nervceller uppnås när spikar sker spontant ungefär var 100 till 200 millisekunder. När afferent neuron och motorisk neuron aktivitet upptäcks, klicka på inspelningsknappen på verktygsfältet i toppklämma 10 för att fånga samtidiga gapfria inspelningar i båda kanalerna. Utför dataförbehandling enligt beskrivningen i textmanuskriptet.Med hjälp av detta gapfria inspelningsprotokoll kan realtidsaktiviteten hos afferent- och VR-nervceller mätas samtidigt. Anpassade skrivna, förbearbetnings skript genererar diagram för att hjälpa till att visualisera spik identifiering med hjälp av parametrar som tröskelvärde, minsta varaktighet och minsta interspike intervall. Isolerade signaler erhölls genom att justera de nedre bunden och övre bunden detekteringsvariablerna i förbearbetningsskriptet.Ventrala rötter spike detektering följer identiska parametrar med ytterligare ingångar. Bursts inom ett motorkommando definieras av minst två spikar inom 0,1 millisekunder som varar i minst fem millisekunder och avgränsas med minst tre sprängningar med sammanflätade intervall på mindre än 200 millisekunder Förbehandlingsskript kommer att lägga över delar av en viss aktivitet som anges under en väldefinierad period av intresse. I det här fallet visar genomsnittlig spontan aktivitet dramatiska förändringar som svar på uppkomsten av motorisk aktivitet som avbildas på X-axeln som tid lika med noll.Betydande skillnader upptäcktes i afferent spike priser mellan pre-swim spike priser och spik priser för både simning och post-swim perioder. Afferent spike priser var negativt korrelerade med simning varaktighet. Det finns inget samband mellan relativ spikhastighet och simfrekvens.Djurhälsa är det viktigaste när man försöker prova detta förfarande. Det är viktigt att övervaka snabbt blodflöde för att inte bara säkerställa djurens välbefinnande utan också öka sannolikheten för neural inspelningsframgång. Genom att utnyttja genetiska verktyg som finns tillgängliga i Zebrafish, Detta elektrofysiologiska protokoll kan kompletteras av transgena linjer för att kraftfullt undersöka anatomiska och funktionella kretsanslutningar i hårcellssystem och därefter.Denna förenklade modifiering av patchklämman gör att vi kan övervaka hur sensoriska system fungerar in vivo.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Dissektion och kultur commissural neuroner från embryonala ryggmärg

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Lateral Diffusion and Exocytosis of Membrane Proteins in Cultured Neurons Assessed using Fluorescence Recovery and Fluorescence-loss Photobleaching

Lateral Diffusion och exocytos av membranproteiner i odlade nervceller utvärderas med hjälp av fluorescens återhämtning och fluorescens-förlust fotoblekning

Membrane proteins such as receptors and ion channels undergo active trafficking in neurons, which are highly polarised and morphologically complex. This ...

Optogenetic Activation of Zebrafish Somatosensory Neurons using ChEF-tdTomato

Optogenetic Aktivering av zebrafisk somatosensoriska nervceller med kock-tdTomato

Larval  zebrafish are emerging as a model for describing the development and function  of simple neural circuits. Due to their  external fertilization, ...

Recording Electrical Activity from Identified Neurons in the Intact Brain of Transgenic Fish

Inspelning elektrisk aktivitet från Identifierade nervceller i den intakta hjärnan av transgen fisk

Understanding the cell physiology of neural circuits that regulate complex behaviors is greatly enhanced by using model systems in which this work can be ...

Dissection and Lateral Mounting of Zebrafish Embryos: Analysis of Spinal Cord Development

Dissection och Lateral Montering av Zebrafish embryon: Analys av ryggmärgs Utveckling

The zebrafish spinal cord is an effective investigative model for nervous system research for several reasons. First, genetic, transgenic and gene ...

A Large Lateral Craniotomy Procedure for Mesoscale Wide-field Optical Imaging of Brain Activity

Ett stort Lateral Kraniotomi Förfarande för Mesoskalig Wide-field optisk avbildning av hjärnans aktivitet

The craniotomy is a commonly performed procedure to expose the brain for in vivo experiments. In mouse research, most labs utilize a small craniotomy, ...

In Vitro Recording of Mesenteric Afferent Nerve Activity in Mouse Jejunal and Colonic Segments

In Vitro Recording of Mesenteric Afferent Nerve Activity in Mouse Jejunal and Colonic Segments

I vitro Registrering av Mesenteric Afferent nervaktivitet i mus jejunal och Kolon segment

Afferent nerves not only convey information concerning normal physiology, but also signal disturbed homeostasis and pathophysiological processes of the ...

In Vitro Characterization of the Electrophysiological Properties of Colonic Afferent Fibers in Rats

In Vitro Characterization of the Electrophysiological Properties of Colonic Afferent Fibers in Rats

In Vitro Karakterisering av elektrofysiologiska egenskaper Colonic afferenta fibrer i råttor

Dysfunction of the colonic sensory nerves has been implicated in the pathophysiology of several common conditions, including functional and inflammatory ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

I Vivo kalcium avbildning av sidolinje hårcellerna i Larval zebrafiskar

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...

Wireless Electrophysiological Recording of Neurons by Movable Tetrodes in Freely Swimming Fish

Trådlös Elektrofysiologisk inspelning av neuroner genom rörliga Tetroder i fritt simning fisk

The neural mechanisms governing fish behavior remain mostly unknown, although fish constitute the majority of all vertebrates. The ability to record brain ...