Name: particle templated emulsification enables microfluidic-free droplet assays
Uploaded: 2021-03-09T13:30:00
Duration: 11 min 3 s
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इस प्रोटोकॉल को विकसित करने वाले इस काम को राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (R01-EB019453-02), राष्ट्रीय खुफिया के निदेशक के कार्यालय, Raytheon BBN Technologies Corp (N66001-18-C-4507) के माध्यम से इंटेलिजेंस एडवांस्ड रिसर्च प्रोजेक्ट्स एक्टिविटी, चैन-जुकरबर्ग बायोहब इन्वेस्टिगेटर प्रोग्राम, टेक्सास ए एंड एम यूनिवर्सिटी (W911NF1920013) के माध्यम से रक्षा उन्नत अनुसंधान परियोजनाएं एजेंसी, और जॉन्स हॉपकिन्स विश्वविद्यालय के माध्यम से रोग नियंत्रण और रोकथाम के लिए केंद्र द्वारा समर्थित किया गया था। भौतिकी प्रयोगशाला (75D30-11-9C-06818 (CDC3))। यहां निहित विचार और निष्कर्ष लेखकों के हैं और उन्हें आवश्यक रूप से उपरोक्त संगठनों या अमेरिकी सरकार की आधिकारिक नीतियों, या तो व्यक्त या निहित, का प्रतिनिधित्व करने के रूप में व्याख्या नहीं की जानी चाहिए। अमेरिकी सरकार किसी भी कॉपीराइट एनोटेशन के बावजूद सरकारी उद्देश्यों के लिए पुनर्मुद्रण को पुन: पेश करने और वितरित करने के लिए अधिकृत है।

<ol>
	<li>Mashaghi, S., Abbaspourrad, A., Weitz, D. A., van Oijen, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Droplet+microfluidics:+A+tool+for+biology,+chemistry,+and+nanotechnology.">Droplet microfluidics: A tool for biology, chemistry, and nanotechnology.</a> Trends in Analytical Chemistry. 82, 118-125 (2016).</li><li>Gielen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrahigh-throughput-directed+enzyme+evolution+by+absorbance-activated+droplet+sorting+(AADS).">Ultrahigh-throughput-directed enzyme evolution by absorbance-activated droplet sorting (AADS).</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of USA. 113 (47), 7383-7389 (2016).</li><li>Mai, S., Murphy, T. W., Lu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidics+for+genome-wide+studies+involving+next+generation+sequencing.">Microfluidics for genome-wide studies involving next generation sequencing.</a> Biomicrofluidics. 11 (2), 021501 (2017).</li><li>Olmedillas-L&#243;pez, S., Garc&#237;a-Arranz, M., Garc&#237;a-Olmo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+and+emerging+Applications+of+Droplet+Digital+PCR+in+Oncology.">Current and emerging Applications of Droplet Digital PCR in Oncology.</a> Molecular Diagnosis and Therapy. 21 (5), 493-510 (2017).</li><li>Tong, Y., Shen, S., Jiang, H., Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+Digital+PCR+in+Detecting+Human+Diseases+Associated+Gene+Mutation.">Application of Digital PCR in Detecting Human Diseases Associated Gene Mutation.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 43 (3), 1718-1730 (2017).</li><li>Yan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+droplet+digital+PCR+for+non-invasive+prenatal+diagnosis+of+phenylketonuria.">Evaluation of droplet digital PCR for non-invasive prenatal diagnosis of phenylketonuria.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 411 (27), 7115-7126 (2019).</li><li>Shang, L., Cheng, Y., Zhao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+Droplet+Microfluidics.">Emerging Droplet Microfluidics.</a> Chemical Reviews. 117 (12), 7964-8040 (2017).</li><li>The, S., Lin, R., Hung, L., Lee, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Droplet+Microfluidics.">Droplet Microfluidics.</a> Lab Chip. 8 (2), 198-220 (2008).</li><li>Baker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+PCR+hits+its+stride.">Digital PCR hits its stride.</a> Nature Methods. 9, 541-544 (2012).</li><li>Kolodziejczyk, A. A., Kim, J. K., Svensson, V., Marioni, J. C., Teichmann, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Technology+and+Biology+of+Single-Cell+RNA+Sequencing.">The Technology and Biology of Single-Cell RNA Sequencing.</a> Molecular Cell. 58 (4), 610-620 (2015).</li><li>Hatori, M. N., Kim, S. C., Abate, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particle-Templated+Emulsification+for+Microfluidics-Free+Digital+Biology.">Particle-Templated Emulsification for Microfluidics-Free Digital Biology.</a> Analytical Chemistry. 90 (16), 9813-9820 (2018).</li><li>Panda, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stop-flow+lithography+to+generate+cell-laden+microgel+particles.">Stop-flow lithography to generate cell-laden microgel particles.</a> Lab Chip. 8 (7), 1056-1061 (2008).</li><li>Yozwiak, C. E., Hirschhorn, T., Stockwell, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+a+microparticle-based+system+for+pooled+assays+of+small+molecules+in+cellular+contexts.">Towards a microparticle-based system for pooled assays of small molecules in cellular contexts.</a> ACS Chemical Biology. 13 (3), 761-771 (2018).</li></ol>

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।

पीटीई भंवर द्वारा monodispersed बूंदों में नमूनों encapsulate करने के लिए कणों का उपयोग करता है। इसकी सादगी और पहुंच के अलावा, पीटीई कई अतिरिक्त लाभ प्रदान करता है, जिसमें बड़ी मात्रा में बूंदों को तात्कालिक रूप से उत्पन्न करने की अनुमति देना शामिल है। इसके अलावा, प्रक्रिया को एक अलग ट्यूब में आयोजित किया जा सकता है, जो माइक्रोफ्लुइडिक उपकरणों में नमूनों को स्थानांतरित करने, समग्र वर्कफ़्लो को सुव्यवस्थित करने और नमूना संदूषण या हानि के अवसरों को सीमित करने की आवश्यकता को कम करता है। टेम्प्लेटिंग कण भी एक साधन प्रदान करते हैं जिसके द्वारा परिणामी बूंद प्रतिक्रियाओं की सामग्री को इंजीनियर किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, कण आकार, रसायन विज्ञान, और नम्रता को लक्षित बायोमोलेक्यूल या सेल कैप्चर के लिए इंजीनियर किया जा सकता है, जबकि एंजाइम, एक्टिव्स, या न्यूक्लिक एसिड जैसे कार्यात्मक moieties, प्रतिक्रियाओं को सुविधाजनक बनाने के लिए कण पर प्रदर्शित किया जा सकता है, जैसे कि एकल सेल अनुक्रमण या कार्यात्मक लक्षण वर्णन के लिए। जबकि दृष्टिकोण लचीला है, फिर भी इसके उपयोग के लिए महत्वपूर्ण बाधाएं हैं। उदाहरण के लिए, वर्तमान में ड्रॉपलेट परिवर्धन करना संभव नहीं है जैसा कि अक्सर माइक्रोफ्लुइडिक्स के साथ आयोजित किया जाता है, जिसके लिए आवश्यक है कि सभी प्रतिक्रिया घटकों को एनकैप्सुलेशन से पहले पेश किया जाए; इसके लिए आवश्यक है कि अभिकर्मकों को तब तक संगत और स्थिर किया जा सकता है जब तक कि बूंदों को उत्पन्न नहीं किया जा सकता है और, परेशानी वाले संयोजनों के मामले में, अक्सर बर्फ पर नमूने को जल्दी से मिश्रण और emulsifying द्वारा संबोधित किया जा सकता है। वैकल्पिक रूप से, प्रतिक्रियाशील घटक जिन्हें प्रकाश या गर्मी के साथ बाहरी रूप से ट्रिगर किया जा सकता है, उनका उपयोग किया जा सकता है13। पीटीई इस प्रकार गैर-विशेषज्ञों के लिए सुलभ ड्रॉपलेट एसेस के संचालन के लिए एक लचीला और स्केलेबल तरीका प्रदान करता है। यह, अपनी जन्मजात सादगी और लचीलेपन के साथ युग्मित, पीटीई को कई बूंद अनुप्रयोगों के निष्पादन और विकास के लिए आदर्श बनाता है।

ड्रॉपलेट माइक्रोफ्लुइडिक्स थोक प्रतिक्रियाओं की तुलना में एसेस की संवेदनशीलता और सटीकता को बढ़ाने के लिए पिकोलिटर बूंदों में कंपार्टमेंटलाइजेशन का लाभ उठाता है, और रासायनिक स्क्रीनिंग, प्रोटीन इंजीनियरिंग और अगली पीढ़ी के अनुक्रमण 1,2,3 में कई अनुप्रयोग हैं। उदाहरण के लिए, डिजिटल ड्रॉपलेट पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (ddPCR) थोक मात्रात्मक पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (qPCR) की तुलना में बढ़ी हुई सटीकता प्रदान करता है, जिसमें कैंसर में आनुवंशिक भिन्नता के लिए अनुप्रयोग, उत्परिवर्तन पैदा करने वाली बीमारी का पता लगाने और प्रसवपूर्व निदान 4,5,6 के लिए अनुप्रयोग होते हैं। ड्रॉपलेट माइक्रोफ्लुइडिक्स की एक चुनौती, हालांकि, विभाजन के नमूनों के लिए माइक्रोफ्लुइडिक उपकरणों की आवश्यकता है; जबकि माइक्रोफ्लुइडिक्स ड्रॉपलेट गुणों पर उत्कृष्ट नियंत्रण प्रदान करते हैं, उन्हें 7,8 बनाने और संचालित करने के लिए विशेष विशेषज्ञता की आवश्यकता होती है। नतीजतन, ड्रॉपलेट-आधारित तरीके काफी हद तक विशेषज्ञ प्रयोगशालाओं तक सीमित हैं या, दुर्लभ उदाहरणों में, ऐसे अनुप्रयोग जिनमें एक वाणिज्यिक उपकरण उपलब्ध है9,10। ड्रॉपलेट एसेस के उपयोग को व्यापक बनाने के लिए, विशेष माइक्रोफ्लुइडिक इंस्ट्रूमेंटेशन की आवश्यकता एक बाधा है जिसे दूर किया जाना चाहिए।
इस लेख में, हम कण टेम्पलेटेड एमल्सिफिकेशन (पीटीई) का वर्णन करते हैं, जो मोनोडिस्पर्स्ड बूंदों में प्रतिक्रियाओं को करने के लिए एक माइक्रोफ्लुइडिक-मुक्त विधि है। पीटीई में, टेम्प्लेटिंग कण नमूने को वाहक तेल में बूंदों में सरल भंवर (चित्रा 1) द्वारा घेर लेते हैं। जैसा कि सिस्टम मिश्रण करता है, जलीय भाग के टुकड़े आकार को कम करने की बूंदों में तब तक होते हैं जब तक कि बूंदों में एकल कण नहीं होते हैं, जिस बिंदु पर आगे विखंडन संभव नहीं है क्योंकि इसके लिए कणों को तोड़ने की आवश्यकता होती है। घिरा हुआ नमूना कणों को बूंदों में एक खोल के रूप में घेरता है, जिससे किसी भी छितरी हुई कोशिकाओं, अभिकर्मकों, या कार्यात्मक moieties (चित्रा 1 डी) को encapsulating। इस प्रकार, पीटीई को एक सामान्य भंवर से परे बूंद प्रतिक्रियाओं को करने के लिए किसी उपकरण या विशेषज्ञता की आवश्यकता नहीं होती है। इसके अतिरिक्त, माइक्रोफ्लुइडिक्स के साथ मिनट या घंटों की तुलना में ड्रॉपलेट पीढ़ी में सेकंड लगते हैं, और उत्पादित राशि कंटेनर की मात्रा के लिए आनुपातिक होती है, न कि डिवाइस ऑपरेशन समय, जिससे यह अत्यधिक स्केलेबल हो जाता है। ये लाभ पीटीई को विभिन्न परिस्थितियों में बूंद assays के संचालन के लिए आदर्श बनाते हैं जिसमें माइक्रोफ्लुइडिक्स अव्यावहारिक होते हैं। यहां, हम पीटीई का प्रदर्शन करते हैं और इसका उपयोग ddPCR का संचालन करने के लिए करते हैं।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62248/62248fig01.jpg"> चित्र 1. कण टेम्पलेट emulsification प्रक्रिया का अवलोकन. (ए) टेम्प्लेटिंग कणों को अभिकर्मकों के साथ मिलाया जाता है। (बी) अतिरिक्त अभिकर्मकों को सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद हटा दिया जाता है। (C) टेम्पलेट अणुओं का जोड़ तेल के अतिरिक्त होने से पहले होता है। (डी) भंवर एक एकल टेम्पलेट अणु युक्त बूंदों का उत्पादन करता है। (ई) बाद में थर्मोसाइक्लिंग और इमेजिंग लक्ष्य टेम्पलेट के डिजिटल ड्रॉपलेट विश्लेषण के लिए अनुमति देता है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62248/62248fig01large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 um syringe filter</td>
			<td>Milipore Sigma</td>
			<td>SLGP033RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5M EDTA, pH 8.0</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>15575020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.75 mm biopsy punch</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504529</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>309628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1H,1H,2H-Perfluoro-1-Octanol (PFO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>370533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1M Tris-HCI, pH 8.0</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>15568025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27 gauge needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3&#34; silicon wafers, P type, virgin test grade</td>
			<td>University Wafers</td>
			<td>447</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D-printed centrifuge syringe holder</td>
			<td>(custom)</td>
			<td>(custom)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrylamide solution,40%, for electrophoresis, sterile-filtered</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4058-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium persulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A3678-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquapel (fluorinated surface treatment)</td>
			<td>Pittsburgh Glass Works</td>
			<td>47100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>139386</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FC-40 fluorinated oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F9755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>109827</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N&#8242;-Methylenebis(acrylamide)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>146072-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novec-7500 Engineering Fluid (HFE oil)</td>
			<td>3M</td>
			<td colspan="2">98-0212-2928-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polyethylene tubing</td>
			<td>Scientific Commodities</td>
			<td>B31695-PE/2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorosurfactant</td>
			<td>Ran Biotechnologies</td>
			<td colspan="2">008-FluoroSurfactant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PGMEA developer</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>484431</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photomasks</td>
			<td>CadArt Servcies</td>
			<td>(custom)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum Multiplex PCR Master Mix (Taq Master Mix)</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4464263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spin coater</td>
			<td>Specialty Coating Systems</td>
			<td>G3P-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Span 80 (sorbitane monooleate)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>s6760</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SU-8 3025 photoresist</td>
			<td>Kayaku</td>
			<td>17030192</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100 (octylphenol ethoxylate)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>t8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20 (polysorbate 20)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>p2287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum Multiplex PCR Master Mix (Taq Master Mix)</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4464263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast FWD</td>
			<td>IDT</td>
			<td colspan="2">5&#8242;-GCAGACCAGACCAGAACAAA-3&#8242;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast REV</td>
			<td>IDT</td>
			<td colspan="2">5&#8242;-ACACGTATGTATCTAGCCGAATA 
			AC-3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Probe</td>
			<td>IDT</td>
			<td colspan="2">5&#8242;-/56-FAM/ATATGTTGT/ZEN/TCACTCGCGCCTGGG/3IABk 
			FQ/-3&#8242;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVOS FL AUTO</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVOS LED Cube, GFP</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>&#160;AMEP4651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYLGARD 184 KIT 1.1 LB (PDMS base and curing reagents)</td>
			<td>&#160;Dow Corning</td>
			<td>DC4019862</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEMED</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>17919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saccharomyces cerevisiae genomic DNA</td>
			<td>Milipore</td>
			<td>69240-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Expanded plasma cleaner (plasma bonder)</td>
			<td>Harrick Plasma</td>
			<td colspan="2">PDC-002 (230V)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

particle templated emulsification enables microfluidic-free droplet assays

मोनोडिस्पर्स्ड ड्रॉपलेट्स में की गई प्रतिक्रियाएं थोक में किए गए समकक्ष लोगों की तुलना में बढ़ी हुई सटीकता और संवेदनशीलता प्रदान करती हैं। हालांकि, नियंत्रित बूंदों को बनाने के लिए माइक्रोफ्लुइडिक्स की आवश्यकता गैर-विशेषज्ञों के लिए एक बाधा लगाती है, जिससे उनके उपयोग को सीमित किया जाता है। यहां, हम कण टेम्पलेट किए गए पायसीकरण का वर्णन करते हैं, जो माइक्रोफ्लुइडिक्स के बिना मोनोडिस्पर्स ड्रॉपलेट्स उत्पन्न करने के लिए एक दृष्टिकोण है। टेम्प्लेटिंग हाइड्रोजेल क्षेत्रों का उपयोग करते हुए, हम सरल भंवर द्वारा मोनोडिस्पर्स्ड बूंदों में नमूनों को समाहित करते हैं। हम माइक्रोफ्लुइडिक-मुक्त डिजिटल पीसीआर करने के लिए इसका उपयोग करके दृष्टिकोण का प्रदर्शन करते हैं।

<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62248/62248fig02.jpg"> चित्र 2. कण टेम्पलेट emulsification का उपयोग कर बूंदों में नमूने का encapsulation. (ए) कण टेमप्लेटिंग इमल्सीफिकेशन के लिए उपयोग किए जाने वाले कणों को टेम्प्लेटिंग करना। (बी) सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद supernatant से templating कण गोली का पृथक्करण। (सी) (डी) पहचान योग्य जलीय खोल के साथ कण टेम्पलेट किए गए इमल्सीफिकेशन के परिणामस्वरूप होने वाली बूंदें। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62248/62248fig02large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
पीटीई में, इमल्शन की मोनोडिस्पर्सिटी को टेम्प्लेटिंग कणों द्वारा निर्धारित किया जाता है, क्योंकि बूंदों का व्यास कणों की तुलना में थोड़ा बड़ा होता है। इस प्रकार, समान कण ों को नियंत्रित PTE encapsulation11 के लिए केंद्रीय हैं। रासायनिक (सोल-जेल, इमल्शन पोलीमराइजेशन), हाइड्रोडायनामिक (झिल्ली इमल्सीफिकेशन, होमोजेनाइजेशन), और निस्पंदन विधियों सहित समान टेम्प्लेटिंग कणों को उत्पन्न करने के लिए विभिन्न प्रकार के तरीके मौजूद हैं। विशेष रूप से माइक्रोफ्लुइडिक दृष्टिकोण, शानदार monodispersity (चित्रा 2A) को बर्दाश्त करते हैं और PTE12 में अपनी कार्यक्षमता को बढ़ाने के लिए अतिरिक्त कण इंजीनियरिंग की अनुमति देते हैं। वैकल्पिक रूप से, टेम्प्लेटिंग कणों को खरीदा जा सकता है, हालांकि उनकी एकरूपता, जबकि पर्याप्त है, आमतौर पर माइक्रोफ्लुइडिक पीढ़ी 11 की तुलना में कम है।
पीटीई करने के लिए, कणों को नमूने के साथ मिश्रित किया जाता है (चित्रा 1 ए), और अतिरिक्त supernatant centrifugation और pipetting (चित्रा 1 B) द्वारा हटा दिया जाता है, जैसा कि पीसीआर ट्यूब (चित्रा 2 बी) के तल पर एक कण गोली की तस्वीर द्वारा सचित्र है। एक स्थिर surfactant युक्त encapsulating तेल तो जोड़ा जाता है (चित्रा 1C), और नमूना धीरे से 30 सेकंड (चित्रा 1 डी) के लिए भंवर से पहले pipetted, इमल्शन (चित्रा 2C) उत्पन्न करने के लिए. परिणामी बूंदों में एक कण कोर और जलीय खोल होता है जिसमें प्रारंभिक नमूना होता है, जिसके भीतर अभिकर्मकों, लक्ष्य अणुओं और प्रतिक्रिया के लिए आवश्यक कोशिकाएं रहती हैं (चित्रा 2 डी)। ड्रॉपलेट माइक्रोफ्लुइडिक एनकैप्सुलेशन की तरह, छोटे मोतियों या कोशिकाओं जैसी असतत संस्थाओं को बेतरतीब ढंग से और पॉइसन वितरण के अनुसार समझाया जाता है, हालांकि लगभग सभी बूंदों में पीटीई भौतिकी की प्रकृति के कारण एक टेम्प्लेटिंग कण होता है।
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62248/62248fig03.jpg"> चित्र 3. पहचान और कण टेम्पलेट emulsification बूंदों की सफाई. (ए) अपर्याप्त भंवर से प्रति बूंद कई कणों के साथ गैर-समान बूंद पीढ़ी का उदाहरण। (बी) कण टेम्पलेट किए गए इमल्सीफिकेशन और (सी) पानी में तेल फ्रैक्शनेशन के बाद उपग्रहों और बूंदों की अपेक्षित उपस्थिति। (डी) तेल धोने के बाद परिणामी इमल्शन। (ई) अत्यधिक उपग्रह उत्पादन कण टेम्पलेट किए गए इमल्सीफिकेशन के दौरान अवशिष्ट supernatant के परिणामस्वरूप। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62248/62248fig03large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
यहां तक कि सफल पीटीई में, डबल या ट्रिपल कोर ड्रॉपलेट्स मौजूद हैं, हालांकि वे आम तौर पर प्रतिक्रिया में नगण्य रूप से योगदान देते हैं, बशर्ते वे दुर्लभ हों। पर्याप्त गोले को बनाए रखते हुए मल्टीकोर बूंदों की कम आवृत्ति प्राप्त करने के लिए प्रक्रिया मापदंडों के अनुकूलन की आवश्यकता होती है, जिसमें सतह तनाव, अंतर-कण आसंजन बल, नमूना चिपचिपाहट, कंटेनर आकार, और भंवर शक्ति और समय शामिल हैं। उदाहरण के लिए, एक खराब अनुकूलित emulsification में कई templating कणों (चित्रा 3A) के साथ polydispersed बूंदें हो सकती हैं, यह दर्शाता है कि भंवर पूरी तरह से नमूने को emulsify करने के लिए अपर्याप्त था। ऐसे उदाहरणों में, डिटर्जेंट को अंतर-कण आसंजन और निचले सतह तनाव को कम करने के लिए जोड़ा जा सकता है, या भंवर शक्ति या समय बढ़ाया जा सकता है। एक और आम मुद्दा अत्यधिक उपग्रहों की पीढ़ी है, जो छोटी खाली बूंदें हैं (चित्रा 3 बी)। उपग्रहों PTE इमल्शन में अपरिहार्य हो सकता है नमूना और वाहक तेल के इंटरफेसियल तनाव और rheological गुणों पर निर्भर करता है. हालांकि, वे अक्सर emulsification (चित्रा 2 B) से पहले अतिरिक्त नमूने को पर्याप्त रूप से हटाने या बहुत अधिक शक्ति के साथ भंवर, बूंदों से गोले को अलग करने से नहीं होते हैं। एक सफल PTE emulsification में, उपग्रहों को कुल encapsulated नमूना मात्रा (चित्रा 3C) 11 के ~ 10% से अधिक शामिल नहीं होना चाहिए। इस स्तर पर, वे आमतौर पर प्रतिक्रिया में नगण्य योगदान देते हैं और उन्हें अनदेखा किया जा सकता है। सौंदर्य प्रयोजनों के लिए, उन्हें ताजे तेल (चित्रा 3 डी) के साथ धोकर इमल्शन से साफ किया जा सकता है।
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62248/62248fig04.jpg"> चित्र 4. कण टेम्पलेट emulsification डिजिटल ड्रॉपलेट पीसीआर का मूल्यांकन. (ए) बूंदों की फ्लोरोसेंट इमेजिंग सकारात्मक फ्लोरोसेंट बूंदों और नकारात्मक गैर-फ्लोरोसेंट बूंदों की पहचान करती है। (बी) डिजिटल ड्रॉपलेट पीसीआर के साथ दुर्लभ टेम्पलेट या टेम्पलेट की कम सांद्रता की पहचान। (C) प्रचुर मात्रा में टेम्पलेट encapsulation पर जिसके परिणामस्वरूप प्रति बूंद टेम्पलेट अणुओं की एक चर संख्या होती है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62248/62248fig04large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
पीटीई की उपयोगिता को प्रदर्शित करने के लिए, हमने इसका उपयोग माइक्रोफ्लुइडिक-मुक्त डिजिटल पीसीआर 11 करने के लिए किया। इस प्रक्रिया का उपयोग करते हुए, हमने एस सेरेविसिया जीनोमिक डीएनए सहित एक नमूना समझाया, और इसे थर्मोसाइकिल किया। डिजिटल पीसीआर में, प्रवर्धित लक्ष्यों वाली बूंदें फ्लोरोसेंट हो जाती हैं, जबकि बिना मंद रहती हैं। इस प्रकार, एक फ्लोरोसेंट ड्रॉपलेट एक लक्ष्य को इंगित करता है, जो सकारात्मक बूंदों की गिनती करके लक्ष्यों की सीधी मात्रा की अनुमति देता है (चित्रा 4 ए)। फ्लोरोसेंट बूंदों की संख्या इस प्रकार लक्ष्य अणुओं के साथ तराजू, कुछ सकारात्मक उपज जब लक्ष्य दुर्लभ है (चित्रा 4 बी) और कई जब यह प्रचुर मात्रा में है (चित्रा 4 सी). अन्य असतत घटकों के encapsulation के साथ के रूप में, लक्ष्य encapsulation एक Poisson वितरण का पालन करता है, सकारात्मक बूंद अंश को लक्ष्य एकाग्रता (चित्रा 4 डी) में परिवर्तित करने की अनुमति देता है, जिससे PTE11 के साथ डिजिटल पीसीआर करने की क्षमता का प्रदर्शन होता है।
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62248/62248fig5v2.jpg"> चित्र 5. व्यावसायिक रूप से उपलब्ध पीएए का उपयोग करके डिजिटल ड्रॉपलेट पीसीआर का प्रदर्शन। (ए) बूंदों की फ्लोरोसेंट इमेजिंग नकारात्मक गैर-फ्लोरोसेंट बूंदों की पहचान करती है। (बी) डिजिटल ड्रॉपलेट पीसीआर के साथ टेम्पलेट की कम सांद्रता की पहचान। (c) डिजिटल ड्रॉपलेट पीसीआर के साथ टेम्पलेट की उच्च सांद्रता की पहचान। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62248/62248fig5v2large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
ये परिणाम व्यावसायिक रूप से उपलब्ध पॉलीएक्रिलामाइड कणों (चित्रा 5) का उपयोग करके दोहराए जा सकते हैं और व्यावसायिक रूप से उपलब्ध पॉलीएक्रिलामाइड कणों के साथ मानक डिजिटल पीसीआर करने के लिए पीटीई की क्षमता का प्रदर्शन करते हैं, एक ही सीमा पर सटीक माप प्राप्त करते हैं।
पूरक फ़ाइल. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62248/S1.tif" target="_blank">इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए कृपया यहाँ क्लिक करें.</a>

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Particle Templated Emulsification enables Microfluidic-Free Droplet Assays

पानी में तेल की बूंद assays विश्लेषणात्मक रसायन विज्ञान, एंजाइम विकास, और एकल सेल विश्लेषण के लिए उपयोगी हैं, लेकिन आमतौर पर बूंदों को बनाने के लिए माइक्रोफ्लुइडिक्स की आवश्यकता होती है। यहां, हम कण टेम्पलेट किए गए इमल्सिफिकेशन का वर्णन करते हैं, जो ड्रॉपलेट एसेस करने के लिए एक माइक्रोफ्लुइडिक-मुक्त दृष्टिकोण है।

कण टेम्पलेट Emulsification Microfluidic-मुक्त ड्रॉपलेट Assays सक्षम बनाता है

Reactions performed in monodispersed droplets afford enhanced accuracy and sensitivity compared to equivalent ones performed in bulk. However, the ...

डिजिटल ड्रॉपलेट पीसीआर मात्रात्मक पीसीआर की तुलना में बढ़ी हुई सटीकता और संवेदनशीलता प्रदान करता है। यह डिजिटल ड्रॉपलेट पीसीआर के लिए एक सरल विधि है जिसमें न्यूनतम उपकरण और कोई विशेषज्ञता की आवश्यकता नहीं होती है। कण टेम्पलेट emulsification emulsification की एक microfluidic मुक्त विधि है कि किसी भी विशेष उपकरण की आवश्यकता नहीं है.इसके अतिरिक्त, emulsification सेकंड की अवधि में होता है और कंटेनर मात्रा के लिए तराजू। वाणिज्यिक मोतियों के लिए, कण टेम्पलेट emulsification, या PTE के साथ संगत सूखे polyacrylamide कणों के 0.5 ग्राम जोड़ें, एक 50-milliliter शंक्वाकार ट्यूब में बाँझ पानी के 30 milliters करने के लिए, और अच्छी तरह से मिश्रण। 30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करें।मोतियों के माइक्रोफ्लुइडिक निर्माण के लिए, तीन इंच सिलिकॉन वेफर के केंद्र पर फोटोरेसिस्ट का एक मिलीलीटर डालें, और फिर इसे 30 सेकंड के लिए 500 आरपीएम पर स्पिन करें, इसके बाद 30 सेकंड के लिए 1250 आरपीएम। विलायक को वाष्पित करने के लिए वेफर को 15 मिनट के लिए 95 डिग्री सेल्सियस पर सेट किए गए हॉटप्लेट पर रखें। एक कवर ग्लास स्लाइड के साथ सिलिकॉन वेफर पर फोटोमास्क को सुरक्षित करें, और 2.5 मिनट के लिए एक कॉलिमेटेड यूवी एलईडी के तहत वेफर को बेनकाब करें।पोस्ट एक्सपोज़र बेकिंग के लिए वेफर को पांच मिनट के लिए 95 डिग्री सेल्सियस पर सेट किए गए हॉटप्लेट पर रखें। 15 मिनट तक के लिए 100% PGMEA के स्नान में विसर्जित करके photoresist सिलिकॉन वेफर विकसित करें। ताजा 100% PGMEA के साथ वेफर कुल्ला, 100% isopropanol के बाद।वेफर को एयर-ड्राई करें, फिर इसे एक मिनट के लिए 95 डिग्री सेल्सियस पर सेट किए गए हॉटप्लेट पर सुखाएं, और इसे एक साफ तीन इंच के पेट्री डिश में रखें। पीडीएमएस सिलिकॉन बेस को मिलाएं और 10: 1 अनुपात में अभिकर्मक का इलाज करें, फिर वैक्यूम के तहत एक डेसिकेटर का उपयोग करके मिश्रित पीडीएमएस को तब तक डीगैस करें जब तक कि कोई हवा के बुलबुले अवलोकन योग्य न हों। पेट्री डिश में degassed PDMS डालें, यह सुनिश्चित करते हुए कि सिलिकॉन वेफर पूरी तरह से जलमग्न है।सिलिकॉन वेफर और पीडीएमएस को डीगैस करता है, और फिर सिलिकॉन वेफर को कम से कम 60 मिनट के लिए 65 डिग्री सेल्सियस पर सेट ओवन में रखकर पीडीएमएस का इलाज करता है। पीडीएमएस का एक ब्लॉक एक्साइज करें जिसमें पेट्री डिश से माइक्रोफ्लुइडिक विशेषताएं होती हैं, एक स्केलपेल का उपयोग करके। एक 0.75 मिलीमीटर बायोप्सी पंच का उपयोग कर PDMS ब्लॉक में inlets और आउटलेट्स पंच.फिर दोहराए जाने वाले आवेदन और ब्लॉक सतह पर पैकेजिंग टेप को हटाने के साथ किसी भी धूल और कणों को हटा दें। 100% आइसोप्रोपेनॉल के साथ इसे धोकर एक ग्लास स्लाइड को साफ करें, और बाद में सतह को हवा से सुखाएं। प्लाज्मा एक प्लाज्मा बॉन्डर का उपयोग करके एक मिनट के लिए एक मिलीबार ऑक्सीजन प्लाज्मा के साथ ग्लास स्लाइड और पीडीएमएस दोनों का इलाज करता है।प्लाज्मा-उपचारित पीडीएमएस को ग्लास स्लाइड पर नीचे की ओर सामना करने वाली सुविधाओं के साथ रखकर पीडीएमएस को ग्लास स्लाइड पर चिपकाएं, प्लाज्मा-उपचारित पक्ष का सामना करना पड़ रहा है। बॉन्डिंग को पूरा करने के लिए स्लाइड को कम से कम 30 मिनट के लिए 65 डिग्री सेल्सियस पर सेट किए गए ओवन में रखें। सतह हाइड्रोफोबिकिटी सुनिश्चित करने के लिए फ्लोरिनेटेड सतह उपचार के साथ सभी माइक्रोफ्लुइडिक चैनलों का इलाज करें, फिर डिवाइस को कम से कम 10 मिनट के लिए 65 डिग्री सेल्सियस पर बेक करें।दोनों polyacrylamide, या PAA, और hydrofluoroether, या HFE, समाधान युक्त सिरिंज सिरिंज पंपों में लोड करें। पॉलीथीन टयूबिंग का उपयोग करके माइक्रोफ्लुइडिक डिवाइस से दोनों सिरिंज को कनेक्ट करें। ड्रॉप जनरेशन डिवाइस चलाएं और 15-मिलीलीटर संग्रह ट्यूब में बूंदों का एक मिलीलीटर एकत्र करें, फिर पोलीमराइजेशन के लिए कमरे के तापमान पर तीन घंटे के लिए इनक्यूबेट करें।इनक्यूबेशन के बाद, पिपेटिंग द्वारा तेल की निचली परत को हटा दें। एक रासायनिक demulsifier के रूप में 15-milliliter संग्रह ट्यूब के लिए HFE तेल में 20% PFO का एक मिलीलीटर जोड़ें। मिश्रण के बाद, दो मिनट के लिए 2000 x g पर 15-मिलीलीटर संग्रह ट्यूब को नीचे स्पिन करें।pipetting द्वारा नीचे की परत को निकालें, और प्रक्रिया को एक और बार दोहराएं। हेक्सेन में 2% सोर्बिटन मोनोओलेट के दो मिलीलीटर को 15-मिलीलीटर संग्रह ट्यूब में जोड़ें और इसे भंवर करें। तीन मिनट के लिए 3000 x g पर ट्यूब स्पिन, और surfactant समाधान को हटाने के लिए pipetting द्वारा supernatant को हटाने के लिए।इसे दो बार दोहराएं। TEBST बफर के पांच milliters जोड़ें और अच्छी तरह से मिश्रण, तो तीन मिनट के लिए 3000 x जी पर नीचे स्पिन और pipetting द्वारा supernatant को हटाने. इसे तीन बार दोहराएं, फिर TEBST के पांच मिलीलीटर में पुन: निलंबित करें।कणों को गोली मारने के लिए एक मिनट के लिए 6000 x g पर centrifuging द्वारा कण टेम्पलेट emulsification के लिए polyacrylamide कणों तैयार करें। फिर पिपेटिंग द्वारा supernatant को हटा दें, और बाँझ पानी में गोली को फिर से निलंबित करें। किसी भी अवशिष्ट TEBST को हटाने के लिए सुनिश्चित करने के लिए तीन बार दोहराएँ।एक पीसीआर मास्टर मिश्रण, उपयुक्त प्राइमर, और एक फ्लोरोसीन हाइड्रोलिसिस जांच का उपयोग करके एक ताजा 15-मिलीलीटर सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में फैलाव चरण तैयार करें, जैसा कि पाठ पांडुलिपि में वर्णित है। एक ट्यूब रोटेटर का उपयोग करके, कोमल आंदोलन के तहत पांच मिनट के लिए कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करें। एक मिनट के लिए 6000 x g पर तितर-बितर चरण centrifuge और supernatant को हटाने.गोली के लिए Saccharomyces cerevisiae जीनोमिक डीएनए के एक माइक्रोलीटर जोड़ें, और pipetting या जोरदार दोहन द्वारा अच्छी तरह से मिश्रण। Emulsification के लिए ट्यूब के लिए HFE तेल में 2% fluorosurfactant के 200 microliters जोड़ें। pipetting या ट्यूब दोहन द्वारा गोली dislodge, और फिर 30 सेकंड के लिए 3000 RPM पर भंवर.इमल्शन को एक मिनट के लिए व्यवस्थित करने की अनुमति दें, फिर नीचे के तेल चरण के 100 माइक्रोलीटर को हटा दें, और इस मात्रा को एचएफई तेल में ताजा 2% फ्लोरोसर्फेक्टेंट के साथ बदलें। धीरे से मिश्रण करने के लिए कई बार ट्यूब उलटें। इसे तीन बार या उससे अधिक बार दोहराएं, जब तक कि छोटी उपग्रह बूंदों को हटा नहीं दिया जाता है।बसने के दो से पांच मिनट के बाद, नीचे के तेल चरण को हटा दें। फ्लोरोकार्बन तेल में 5% फ्लोरोसर्फेक्टेंट के साथ इस मात्रा को बदलें। पिपेट 200-माइक्रोलीटर पीसीआर ट्यूबों में नमूने के 100 माइक्रोलीटर, और पीसीआर ट्यूबों को थर्मोसाइकिलर में रखें।फ्लोरोसेंट इमेजिंग के लिए एक गिनती स्लाइड पर नमूना pipette, और नमूना छवि. कण टेम्पलेट emulsification शानदार monodispersity affordsity. के रूप में अतिरिक्त supernatant surfactant स्थिर हटा दिया जाता है, और नमूना पायस उत्पन्न करने के लिए vortexed है।परिणामी बूंदों में कण कोर और जलीय नमूना होता है जिसमें अभिकर्मक और नमूना अणु या प्रतिक्रिया के लिए आवश्यक कोशिकाएं होती हैं। templating कणों के साथ polydispersed बूंदों अपर्याप्त भंवर का संकेत देते हैं। एक और मुद्दा अत्यधिक उपग्रहों की पीढ़ी है, जो एनकैप्सुलेशन दक्षता को कम करता है।उपग्रहों में कुल encapsulated नमूना मात्रा का 10% से अधिक शामिल नहीं होना चाहिए। उन्हें ताजे तेल से धोकर इमल्शन से साफ किया जा सकता है। पीटीई की उपयोगिता को डिजिटल पीसीआर में प्रदर्शित किया जा सकता है जब प्रवर्धित लक्ष्यों वाली बूंदें फ्लोरोसेंट हो जाती हैं, जिससे लक्ष्यों की सीधी मात्रा होती है।फ्लोरोसेंट बूंदें कुछ सकारात्मक उपज जब लक्ष्य दुर्लभ है, और कई जब यह प्रचुर मात्रा में है. ये परिणाम व्यावसायिक रूप से उपलब्ध पॉलीएक्रिलामाइड कणों का उपयोग करके दोहराए जाने योग्य हैं, एक ही सीमा पर सटीक माप प्राप्त करते हैं। तितर-बितर चरण से supernatant को हटाने नमूना encapsulation के लिए महत्वपूर्ण है.गोली और supernatant की मात्रा जानने से दोनों के बीच इंटरफ़ेस की पहचान करने में मदद मिल सकती है। जब संदेह में, supernatant को हटाने के पक्ष में गलती.

Research

JoVE Journal

Biology

High Speed Droplet-based Delivery System for Passive Pumping in Microfluidic Devices

हाई स्पीड छोटी बूंद आधारित microfluidic उपकरणों में निष्क्रिय पंप करने के लिए वितरण प्रणाली

A novel microfluidic system has been developed that uses the phenomenon of passive pumping along with a user controlled droplet based fluid delivery ...

Analysis of Schwann-astrocyte Interactions Using In Vitro Assays

Analysis of Schwann-astrocyte Interactions Using In Vitro Assays

श्वान - astrocyte का उपयोग सहभागिता के विश्लेषण इन विट्रो में Assays

Schwann cells are one of the commonly used cells in repair strategies following spinal cord injuries. Schwann cells are capable of supporting axonal ...

Two Types of Assays for Detecting Frog Sperm Chemoattraction

पता लगाने मेंढक शुक्राणु Chemoattraction के लिए दो Assays के प्रकार

Sperm chemoattraction in invertebrates can be sufficiently robust that one can place a pipette containing the attractive peptide into a sperm suspension ...

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

में निगरानी प्रोटीन refolding के लिए युग्मित Assays<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Proteostasis, defined as the combined processes of protein folding/biogenesis, refolding/repair, and degradation, is a delicate cellular balance that must ...

Viability Assays for Cells in Culture

संस्कृति में कोशिकाओं के लिए व्यवहार्यता Assays

Manual cell counts on a microscope are a sensitive means of assessing cellular viability but are time-consuming and therefore expensive. Computerized ...

In vitro Cell Migration and Invasion Assays

In vitro Cell Migration and Invasion Assays

इन विट्रो सेल प्रवास और आक्रमण assays में

Migration is a key property of live cells and critical for normal development, immune response, and disease processes such as cancer metastasis and ...

Isolation and Fluorescence Imaging for Single-particle Reconstruction of Chlamydomonas Centrioles

Isolation and Fluorescence Imaging for Single-particle Reconstruction of Chlamydomonas Centrioles

अलगाव और Chlamydomonas Centrioles के एकल कण पुनर्निर्माण के लिए प्रतिदीप्ति इमेजिंग

Centrioles are large macromolecular assemblies important for the proper execution of fundamental cell biological processes such as cell division, cell ...

Droplet Barcoding-Based Single Cell Transcriptomics of Adult Mammalian Tissues

छोटी बूंद Barcoding-आधारित एकल कोशिका Transcriptomics वयस्क स्तनधारी ऊतकों

The analysis of single cell gene expression across thousands of individual cells within a tissue or microenvironment is a valuable tool for identifying ...

Rapid Lipid Droplet Isolation Protocol Using a Well-established Organelle Isolation Kit

एक अच्छी तरह से स्थापित Organelle अलगाव किट का उपयोग रैपिड लिपिड छोटी बूंद आइसोलेशन प्रोटोकॉल

Lipid droplets (LDs) are bioactive organelles found within the cytosol of the most eukaryotic and some prokaryotic cells. LDs are composed of neutral ...

Dissection and Lipid Droplet Staining of Oenocytes in Drosophila Larvae

Dissection and Lipid Droplet Staining of Oenocytes in Drosophila Larvae

ड्रोसोफिला लार्वा में ओएनोसाइट्स का विच्छेदन और लिपिड ड्रॉपलेट धुंधला

Lipids are essential for animal development and physiological homeostasis. Dysregulation of lipid metabolism results in various developmental defects and ...