Name: modeling brain metastasis via tail-vein injection of inflammatory breast cancer cells
Uploaded: 2021-02-04T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells Video at JoVE.com

نشكر كريستين إف ووغان ، MS ، ELS ، من قسم MD Anderson لعلم الأورام الإشعاعي على التحرير العلمي للمخطوطة ، وكارول إم جونستون من قسم الأنسجة الجراحية في MD Anderson للمساعدة في تلطيخ الهيماتوكسيلين ويوزين. نحن ممتنون لمركز الطب البيطري والجراحة في MD Anderson لدعمهم للدراسات على الحيوانات. تم دعم هذا العمل من خلال المنح التالية: منحة Susan G. Komen Career Catalyst Research (CCR16377813 إلى BGD) ، ومنحة باحث أبحاث جمعية السرطان الأمريكية (RSG-19-126-01 إلى BGD) ، وبرنامج أبحاث سرطان الثدي النادر والعدواني في ولاية تكساس. مدعوم أيضا جزئيا من قبل دعم مركز السرطان (Core) Grant P30 CA016672 من المعهد الوطني للسرطان ، المعاهد الوطنية للصحة ، إلى مركز إم دي أندرسون للسرطان بجامعة تكساس.

تمت الموافقة على الطريقة الموضحة هنا من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات (IACUC) التابعة لمركز إم دي أندرسون للسرطان وتتوافق مع إرشادات المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام المختبر. يتم تقديم سير العمل التخطيطي ، مع تضمين جميع الخطوات ، في الشكل 1.
<p class="jove_titl...

<ol>
	<li>Achrol, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+metastases.">Brain metastases.</a> Nature Reviews Disease Primers. 5 (1), 5 (2019).</li><li>Nayak, L., Lee, E. Q., Wen, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+brain+metastases.">Epidemiology of brain metastases.</a> Current Oncology Report. 14 (1), 48-54 (2012).</li><li>Lowery, F. J., Yu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+metastasis:+Unique+challenges+and+open+opportunities.">Brain metastasis: Unique challenges and open opportunities.</a> Biochimica et Biophysica Acta Review Cancer. 1867 (1), 49-57 (2017).</li><li>Brufsky, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+nervous+system+metastases+in+patients+with+HER2-positive+metastatic+breast+cancer:+incidence,+treatment,+and+survival+in+patients+from+registHER.">Central nervous system metastases in patients with HER2-positive metastatic breast cancer: incidence, treatment, and survival in patients from registHER.</a> Clinical Cancer Research. 17 (14), 4834-4843 (2011).</li><li>Valiente, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolving+landscape+of+brain+metastasis.">The evolving landscape of brain metastasis.</a> Trends in Cancer. 4 (3), 176-196 (2018).</li><li>Bos, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+that+mediate+breast+cancer+metastasis+to+the+brain.">Genes that mediate breast cancer metastasis to the brain.</a> Nature. 459 (7249), 1005-1009 (2009).</li><li>Woditschka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+double-strand+break+repair+genes+and+oxidative+damage+in+brain+metastasis+of+breast+cancer.">DNA double-strand break repair genes and oxidative damage in brain metastasis of breast cancer.</a> Journal of the National Cancer Institute. 106 (7), (2014).</li><li>Palmieri, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vorinostat+inhibits+brain+metastatic+colonization+in+a+model+of+triple-negative+breast+cancer+and+induces+DNA+double-strand+breaks.">Vorinostat inhibits brain metastatic colonization in a model of triple-negative breast cancer and induces DNA double-strand breaks.</a> Clinical Cancer Research. 15 (19), 6148-6157 (2009).</li><li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+upregulate+survival+genes+in+tumor+cells+and+induce+protection+from+chemotherapy.">Astrocytes upregulate survival genes in tumor cells and induce protection from chemotherapy.</a> Neoplasia. 13 (3), 286-298 (2011).</li><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SRC+family+kinases+as+novel+therapeutic+targets+to+treat+breast+cancer+brain+metastases.">SRC family kinases as novel therapeutic targets to treat breast cancer brain metastases.</a> Cancer Research. 73 (18), 5764-5774 (2013).</li><li>Valiente, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serpins+promote+cancer+cell+survival+and+vascular+co-option+in+brain+metastasis.">Serpins promote cancer cell survival and vascular co-option in brain metastasis.</a> Cell. 156 (5), 1002-1016 (2014).</li><li>Gril, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+lapatinib+on+the+outgrowth+of+metastatic+breast+cancer+cells+to+the+brain.">Effect of lapatinib on the outgrowth of metastatic breast cancer cells to the brain.</a> Journal of the National Cancer Institute. 100 (15), 1092-1103 (2008).</li><li>Gril, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pazopanib+reveals+a+role+for+tumor+cell+B-Raf+in+the+prevention+of+HER2++breast+cancer+brain+metastasis.">Pazopanib reveals a role for tumor cell B-Raf in the prevention of HER2+ breast cancer brain metastasis.</a> Clinical Cancer Research. 17 (1), 142-153 (2011).</li><li>Palmieri, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+prevention+of+experimental+brain+metastases+of+breast+cancer+by+temozolomide+in+an+MGMT-dependent+manner.">Profound prevention of experimental brain metastases of breast cancer by temozolomide in an MGMT-dependent manner.</a> Clinical Cancer Research. 20 (10), 2727-2739 (2014).</li><li>Priego, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STAT3+labels+a+subpopulation+of+reactive+astrocytes+required+for+brain+metastasis.">STAT3 labels a subpopulation of reactive astrocytes required for brain metastasis.</a> Nature Medicine. 24 (7), 1024-1035 (2018).</li><li>Debeb, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-141-mediated+regulation+of+brain+metastasis+from+breast+cancer.">miR-141-mediated regulation of brain metastasis from breast cancer.</a> Journal of the National Cancer Institute. 108 (8), (2016).</li><li>Chang, S., Parker, S. L., Pham, T., Buzdar, A. U., Hursting, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+breast+carcinoma+incidence+and+survival:+the+surveillance,+epidemiology,+and+end+results+program+of+the+National+Cancer+Institute,+1975-1992.">Inflammatory breast carcinoma incidence and survival: the surveillance, epidemiology, and end results program of the National Cancer Institute, 1975-1992.</a> Cancer. 82 (12), 2366-2372 (1998).</li><li>Hance, K. W., Anderson, W. F., Devesa, S. S., Young, H. A., Levine, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trends+in+inflammatory+breast+carcinoma+incidence+and+survival:+the+surveillance,+epidemiology,+and+end+results+program+at+the+National+Cancer+Institute.">Trends in inflammatory breast carcinoma incidence and survival: the surveillance, epidemiology, and end results program at the National Cancer Institute.</a> Journal of National Cancer Institute. 97 (13), 966-975 (2005).</li><li>Dirix, L. Y., Van Dam, P., Prove, A., Vermeulen, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+breast+cancer:+Current+understanding.">Inflammatory breast cancer: Current understanding.</a> Current Opinion in Oncology. 18 (6), 563-571 (2006).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+of+distant+metastases+in+inflammatory+breast+cancer+-+A+large-cohort+retrospective+study.">Pattern of distant metastases in inflammatory breast cancer - A large-cohort retrospective study.</a> Journal of Cancer. 11 (2), 292-300 (2020).</li><li>Uemura, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+CNS+metastases+and+survival+in+patients+with+inflammatory+breast+cancer.">Development of CNS metastases and survival in patients with inflammatory breast cancer.</a> Cancer. 124 (11), 2299-2305 (2018).</li><li>Smith, D. L., Debeb, B. G., Thames, H. D., Woodward, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+modeling+of+micrometastatic+breast+cancer+radiation+dose+response.">Computational modeling of micrometastatic breast cancer radiation dose response.</a> International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics. 96 (1), 179-187 (2016).</li><li>Fukumura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-omic+molecular+profiling+reveals+potentially+targetable+abnormalities+shared+across+multiple+histologies+of+brain+metastasis.">Multi-omic molecular profiling reveals potentially targetable abnormalities shared across multiple histologies of brain metastasis.</a> Acta Neuropathol. , (2021).</li><li>Klopp, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+promote+mammosphere+formation+and+decrease+E-cadherin+in+normal+and+malignant+breast+cells.">Mesenchymal stem cells promote mammosphere formation and decrease E-cadherin in normal and malignant breast cells.</a> PLoS One. 5 (8), 12180 (2010).</li><li>Villodre, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abstract+P3-01-10:+Ndrg1-egfr+axis+in+inflammatory+breast+cancer+tumorigenesis+and+brain+metastasis.">Abstract P3-01-10: Ndrg1-egfr axis in inflammatory breast cancer tumorigenesis and brain metastasis.</a> Cancer Research. 80 (4), 10 (2020).</li></ol>

يتضمن البروتوكول عدة خطوات حاسمة. يجب أن تبقى الخلايا على الجليد لمدة لا تزيد عن 1 ساعة للحفاظ على البقاء. يجب استخدام ضمادات قطنية كحولية لمسح ذيول الفئران قبل الحقن ، مع الحرص على عدم المسح بشدة أو في كثير من الأحيان لتجنب إتلاف جلد الذيل. تأكد من عدم وجود فقاعات هواء في تعليق الخلية ، لمنع...

ورم خبيث في الدماغ هو أحد المضاعفات الشائعة والمميتة للأورام الخبيثة الجهازية. تنشأ معظم نقائل الدماغ من الأورام الأولية في الرئة أو الثدي أو الجلد ، والتي تمثل مجتمعة 67-80٪ من الحالات 1,2. تتراوح تقديرات حدوث ورم خبيث في الدماغ بين 100,000 إلى 240,000 حالة ، وقد تكون هذه الأرقام أقل من الواقع لأن تشريح الجثة نادر الحدوث للمرضى الذين ماتوا بسبب السرطان النقيلي3. المرضى الذين يعانون من النقائل الدماغية لديهم تشخيص أسوأ وانخفاض البقاء على قيد الحياة بشكل عام بالنسبة للمرضى الذين لا يعانون من النقائل الدماغية4. خيارات العلاج الحالية لنقائل الدماغ ملطفة إلى حد كبير وتفشل في تحسين نتائج البقاء على قيد الحياة لمعظم المرضى5. وبالتالي ، لا يزال ورم خبيث في الدماغ يمثل تحديا ، ولا تزال الحاجة ملحة لفهم آليات تطور ورم خبيث في الدماغ بشكل أفضل لتطوير علاجات أكثر فعالية.
قدم استخدام النماذج التجريبية رؤى مهمة حول آليات محددة لتطور سرطان الثدي النقيلي إلى الدماغ وسمح بتقييم فعالية الأساليب العلاجية المختلفة6،7،8،9،10،11،12،13،14،15،16. ومع ذلك ، يمكن لعدد قليل جدا من النماذج تلخيص تعقيدات تطور ورم خبيث في الدماغ بدقة وبشكل كامل. تم إنشاء العديد من النماذج التجريبية في الجسم الحي عن طريق تلقيح الخلايا السرطانية في الفئران بطرق مختلفة للإعطاء ، بما في ذلك تقويم العظام ، والوريد الذيلي ، داخل القلب ، والشرايين السباتية ، والحقن داخل المخ. كل تقنية لها مزايا وعيوب ، كما تمت مراجعته في مكان آخر3. ومع ذلك ، لا يمكن لأي من نماذج الفئران هذه تكرار التقدم السريري لورم خبيث في الدماغ بشكل كامل.
النقائل الدماغية شائعة بشكل خاص في المرضى الذين يعانون من سرطان الثدي الالتهابي (IBC) ، وهو نوع نادر ولكنه عدواني من سرطان الثدي الأولي. تمثل IBC 1٪ إلى 4٪ من حالات سرطان الثدي ، لكنها مسؤولة عن 10٪ غير متناسبة من الوفيات المرتبطة بسرطان الثدي في الولايات المتحدة17,18. من المعروف أن IBC ينتشر بسرعة. في الواقع ، يعاني ثلث مرضى IBC من ورم خبيث بعيد في وقت التشخيص19,20. خاصة بورم خبيث في الدماغ ، فإن المرضى الذين يعانون من IBC لديهم نسبة أعلى من ورم خبيث في الدماغ مقارنة بالمرضى الذين يعانون من غير IBC21. في الآونة الأخيرة ، أثبتنا أن خط خلايا MDA-IBC3 ، المشتق من سائل الانصباب الجنبي الخبيث لمريض مصاب ب ER / PR - / HER2 + IBC الذي يلخص خصائص IBC في الطعوم الخارجية للفئران ، لديه ميل محسن لتطوير نقائل الدماغ بدلا من نقائل الرئة في الفئران عند حقنها عن طريق الوريد الذيل ، مما يجعل خط الخلية هذا نموذجا جيدا لدراسة تطور ورم خبيث في الدماغ16.
هنا نصف إجراءات توليد ورم خبيث في الدماغ عن طريق حقن الوريد الخلفي لخلايا MDA-IBC3 وتقييم العبء النقيلي عن طريق الفحص المجهري الفلوري المجسم وتصوير لوسيفيراز. تم استخدام هذه الطريقة لاكتشاف الوسطاء الرئيسيين لورم خبيث لسرطان الثدي إلى الدماغ واختبار فعالية التدخلات العلاجية16،22،23. عيب هذه التقنية هو أنها لا تلخص جميع الخطوات في عملية النقيلي في الدماغ. ومع ذلك ، فإن مزاياه الرئيسية تشمل المتانة والتكاثر ، وإشراك بيولوجيا ورم خبيث ذات صلة من intravasation ، وعبور الرئتين وتسرب إلى الدماغ ، وبساطته النسبية من حيث التقنية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell Culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L pipette tip filtered</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>23430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Serological Pipets</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>12-112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-antimycotic&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15240062</td>
			<td>1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes 15 mL bulk</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>28103&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160; 500 mL Hams F-12 Medium [+] L-glutamine</td>
			<td>GIBICO Inc. USA</td>
			<td>MT10080CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess II Automated Cell Counter (Invitrogen)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AMQAX1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x DPBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf centufuge 5810R</td>
			<td>Eppendorf&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>GIBICO Inc. USA</td>
			<td>16000044</td>
			<td>10%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand &#160;Sterile Cell Strainers (40 &#956;m)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H0888</td>
			<td>1 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12585014</td>
			<td>5 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen&#160;Countess Cell Counting Chamber Slides</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C10228&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-IBC3 cell lines</td>
			<td>MD Anderson Cancer Center</td>
			<td></td>
			<td>Generated by Dr. Woodward&#39;s lab24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luciferase&#8211;green fluorescent protein (Luc&#8211;GFP) plasmid</td>
			<td>System Biosciences</td>
			<td>BLIV713PA-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microtubes clear sterile 1.7 mL</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>24282S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus 10 &#181;L Reach Barrier Tip, Low Binding, Racked, Sterile</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>23-401C&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC Treated Flasks (T75), 250mL, Vent</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain (0.4%) for use with the Countess Automated Cell Counter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>T10282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>25200114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tail vein injection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C.B-17/IcrHsd-Prkdc scid Lyst bg-J - SCID/Beige</td>
			<td>Envigo</td>
			<td>SCID/beige mice</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Insulin Syringe with the BD Ultra-Fine Needle 0.5mL 30Gx1/2&#34; (12.7mm)</td>
			<td>BD</td>
			<td>328466</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plas Labs &#160;Broome-Style Rodent Restrainers</td>
			<td>Plas Labs 551BSRR</td>
			<td>01-288-32A</td>
			<td>Order fromThermo Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volu SolSupplier Diversity Partner Ethanol 95% SDA (190 Proof)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>50420872</td>
			<td>70 % used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Lo-Dose&#160; U-100 Insulin Syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>329461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable PES Filter Units 0.45 &#181;m</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>FB12566501</td>
			<td>filter system to sterilize the D-luciferin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin</td>
			<td>Biosynth</td>
			<td>L8220-1g</td>
			<td>stock concentration = 47.6 mM (15.15 mg/mL); use concentration = 1.515 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.7 mL microtube amber</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>24-282AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>NDC-14043-704-06</td>
			<td>Liquid anesthetic for use in anesthetic vaporizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS 200&#160;</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td>machine for luciferase imaging, up to 5 mice imaging at the same time, with anesthesia machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Containers with Lids&#160;</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>02-544-127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Cassettes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1000957</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Webcol Alcohol Prep&#160;</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope AZ100&#160;</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>model AZ-STGE</td>
			<td>software NIS-ELEMENT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin 10%</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>SF100-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC treated dishes 100x20 mm</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25202</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling brain metastasis via tail-vein injection of inflammatory breast cancer cells

الانتشار النقيلي إلى الدماغ هو مظهر شائع ومدمر للعديد من أنواع السرطان. في الولايات المتحدة وحدها ، يتم تشخيص حوالي 200000 مريض بنقائل الدماغ كل عام. تم إحراز تقدم كبير في تحسين نتائج البقاء على قيد الحياة للمرضى الذين يعانون من سرطان الثدي الأولي والأورام الخبيثة الجهازية. ومع ذلك ، فإن التشخيص الكئيب للمرضى الذين يعانون من النقائل الدماغية السريرية يسلط الضوء على الحاجة الملحة لتطوير عوامل واستراتيجيات علاجية جديدة ضد هذا المرض الفتاك. كان عدم وجود نماذج تجريبية مناسبة أحد العقبات الرئيسية التي تعوق تقدم فهمنا لبيولوجيا ورم خبيث في الدماغ وعلاجه. هنا ، نصف نموذج فأر xenograft لورم خبيث في الدماغ تم إنشاؤه عن طريق حقن الوريد الخلفي لخط خلية مضخم داخليا HER2 مشتق من سرطان الثدي الالتهابي (IBC) ، وهو شكل نادر وعدواني من سرطان الثدي. تم تصنيف الخلايا باستخدام لوسيفيراز اليراع وبروتين مضان أخضر لمراقبة ورم خبيث في الدماغ ، وتقدير العبء النقيلي عن طريق التصوير الحيوي ، والمجهر المجسم الفلوري ، والتقييم النسيجي. تطور الفئران بقوة وثبات نقائل الدماغ ، مما يسمح بالتحقيق في الوسطاء الرئيسيين في العملية النقيلية وتطوير الاختبارات قبل السريرية لاستراتيجيات العلاج الجديدة.

مع الأساس المنطقي القائل بأن الخلايا المصنفة تسهل مراقبة وتصور ورم خبيث في الدماغ في نماذج الفئران قبل السريرية ، قمنا بوضع علامة على خلايا MDA-IBC3 مع Luc ومع GFP لمراقبة نقائل الدماغ وتحديد العبء النقيلي باستخدام التصوير الحيوي والمجهر الفلوري الفراغي. أدى حقن خلايا MDA-IBC3 الموسومة في الأوردة ا...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells Video at JoVE.com

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells Video (Video) | JoVE

نحن نصف نموذج فأر xenograft لورم خبيث في الدماغ لسرطان الثدي الناتج عن حقن الوريد الخلفي لخط خلايا سرطان الثدي الالتهابي المضخم HER2 داخليا.

نمذجة ورم خبيث في الدماغ عن طريق حقن الوريد الخلفي لخلايا سرطان الثدي الالتهابية

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...

استخدمنا طريقة الوريد الذيل لتوليد ورم خبيث في الدماغ في نماذج الفئران باستخدام خطوط الخلايا المشتقة من المرضى الذين يعانون من سرطان الثدي الالتهابي ، أو IBC ، وهو شكل شديد العدوانية من سرطان الثدي الأولي. عادة ما يتضمن توليد ورم خبيث في الدماغ في نماذج الفئران حقن الشرايين داخل القلب أو داخل الشريان السباتي. ومع ذلك ، فإن طريقة الوريد الذيل توفر ميزة على هذه التقنيات لأنها تحاكي بشكل أفضل خطوات استعمار ورم خبيث في الدماغ ، وهي سهلة الأداء نسبيا.سيقوم الطبيبان شياودينغ هو وإميلي فيلودري ، وكلاهما مدربان في مختبري ، بشرح الإجراء. للكشف عن نقائل الدماغ عن طريق تصوير هيئة أجيال السلام بعد ثمانية إلى 10 أسابيع من حقن الخلايا السرطانية ، قم بتطهير الماوس بنسبة 70٪ من الإيثانول وإزالة الفراء من الرأس والأذنين. قطع منطقة عنق الرحم من الرقبة.استئصال وإزالة الجمجمة للسماح بحصاد الدماغ. ضع الدماغ في كاسيت الأنسجة وضع الكاسيت في وعاء من DPBS البارد لمدة لا تزيد عن ساعة واحدة. للتصوير بواسطة المجهر الاستريو ، انقل الدماغ إلى غطاء طبق الأنسجة 100 سم تحت مجهر ستيريو مجهز بضوء الأشعة فوق البنفسجية وحدد هدف 0.5x للسماح بتصور الدماغ بأكمله.اضغط على العرض المباشر وركز العرض بينما يكون الدماغ في الوضع البطني. حدد المرشح المناسب في البرنامج والمجهر لعلامة الفلورسنت في الخلايا ، والتقط صورة. بدون تحريك العينة ، قم بالتبديل إلى تصوير برايت فيلد وحدد مرشح برايتفيلد.التقط صورة. ثم تخيل الدماغ في الوضع الظهري كما هو موضح سابقا. لتحليل صور الدماغ بالكامل ، قم أولا بتحويل ملفات الصور من TIFF إلى JPEG حتى يمكن فتحها باستخدام أي جهاز كمبيوتر لا يحتوي على البرامج المرتبطة به.بعد ذلك ، افتح زوجا من صور brightfield و fluorescent وحدد قنوات الملف والدمج. حدد المكونات المناسبة ، وانقر فوق موافق ، واحفظ الصورة المدمجة. لتحديد منطقة ورم الدماغ في صورة الفلورسنت ، حدد التحديد التلقائي.حرك السهم إلى منطقة موضع GFP وانقر لإنشاء تحديد تلقائيا. ثم انقر مرة أخرى لتأكيد التحديد. سيتم عرض جميع القياسات.إذا كان من الممكن ملاحظة أكثر من منطقة إيجابية GFP ، كرر القياس مع المنطقة التالية. يمكن اكتشاف الآفات النقيلية في الدماغ في وقت مبكر بعد ثمانية أسابيع من الحقن عن طريق تصوير لوسيفيراز والمجهر الفلوري الاستريو. بعد التصوير ، يمكن تثبيت أجزاء من نقائل الدماغ ومعالجتها من أجل تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوزين للتحقق من وجود آفات ورم خبيث في الدماغ ، وللتلطيخ المناعي الكيميائي للكشف عن علامات بروتينية معينة ذات أهمية.عند محاولة هذا البروتوكول ، من المهم الحفاظ على صلاحية الخلية عن طريق إبقاء الخلايا على الجليد لمدة لا تزيد عن ساعة واحدة ، وتجنب فقاعات الهواء في تعليق الخلية لمنع تكوين الصمات وموت الفئران. بعد حقن الوريد الذيلي ، نراقب نمو ورم خبيث في الدماغ وتطوره باستخدام تصوير لوسيفيراز. بعد القتل الرحيم ، أكد المجهر الفلوري المجسم والأنسجة آفات ورم خبيث.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis Video (Video) | JoVE

داخل الحرقفي حقن الشريان للنمذجة فعالة وانتقائية مجهرية العظام الانبثاث

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells Video (Video) | JoVE

فأري موديل التجريبية التنمية الورم الأصلي والبريتوني ورم خبيث<em&gt; عبر</em&gt; مثلي تلقيح مع خلايا المبيض سرطان

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer Video (Video) | JoVE

والوريد البابي حقن نموذج لدراسة الكبد الانبثاث من سرطان الثدي

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis Video (Video) | JoVE

Intracarotid حقن الخلية السرطانية لإنتاج نماذج الماوس من الدماغ الانبثاث

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad Video (Video) | JoVE

حقن أورثوتوبيك من خلايا سرطان الثدي في لوحة الدهون الثديية في الفئران

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video (Video) | JoVE

نمذجة سرطان الثدي عن طريق حقن داخل القناة من فيروس الغدة الدرقية التعبير عن Cre في الغدة الثديية الماوس

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment Video (Video) | JoVE

التحليل الجزئي للخلايا السرطانية المتداولة للتحليل الجزيئي المصب والتقييم المحتمل المنتشر

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs Video (Video) | JoVE

الجمع بين استخدام الذيل الوريد الانبثاث الاختبارات والوقت الحقيقي في التصوير فيفو لقياس سرطان الثدي الاستعمار المنتشر والعبء في الرئتين

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells Video (Video) | JoVE

التحليل المرضي لنقائل الرئة بعد الحقن الجانبي الوريد الذيل من الخلايا السرطانية

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging Video (Video) | JoVE

نمذجة الانبثاث الدماغ من خلال الحقن داخل الجمجمة والتصوير بالرنين المغناطيسي

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...