Name: modeling brain metastasis via tail-vein injection of inflammatory breast cancer cells
Uploaded: 2021-02-04T15:00:00
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원고의 과학적 편집을 위해 MD Anderson 방사선 종양학 부서의 Christine F. Wogan, MS, ELS와 헤마톡실린 및 에오신 염색에 도움을 준 MD Anderson 외과 조직학 코어 부서의 Carol M. Johnston에게 감사드립니다. 동물 연구에 대한 지원에 대해 MD Anderson의 수의학 및 외과 핵심에 감사드립니다. 이 작업은 Susan G. Komen Career Catalyst Research 보조금(BGD에 CCR16377813), American Cancer Society Research Scholar 보조금(RSG-19–126–01 to BGD) 및 텍사스 주 희귀 및 공격적인 유방암 연구 프로그램에 의해 지원되었습니다. 또한 국립 암 연구소 (National Cancer Institute), 국립 보건원 (National Institutes of Health)의 암 센터 지원 (Core) 보조금 P30 CA016672에서 텍사스 대학교 MD 앤더슨 암 센터까지 부분적으로 지원됩니다.

여기에 설명된 방법은 MD Anderson Cancer Center의 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee)의 승인을 받았으며 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 국립 보건원 지침을 준수합니다. 모든 단계가 포함된 회로도 워크플로는 그림 1과 같이 표시됩니다.
1. 세포 준비
참고: Woodward 박사의 실험실24에서 생성된 MDA-IBC3(ER-/PR-/H...

<ol>
	<li>Achrol, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+metastases.">Brain metastases.</a> Nature Reviews Disease Primers. 5 (1), 5 (2019).</li><li>Nayak, L., Lee, E. Q., Wen, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+brain+metastases.">Epidemiology of brain metastases.</a> Current Oncology Report. 14 (1), 48-54 (2012).</li><li>Lowery, F. J., Yu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+metastasis:+Unique+challenges+and+open+opportunities.">Brain metastasis: Unique challenges and open opportunities.</a> Biochimica et Biophysica Acta Review Cancer. 1867 (1), 49-57 (2017).</li><li>Brufsky, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+nervous+system+metastases+in+patients+with+HER2-positive+metastatic+breast+cancer:+incidence,+treatment,+and+survival+in+patients+from+registHER.">Central nervous system metastases in patients with HER2-positive metastatic breast cancer: incidence, treatment, and survival in patients from registHER.</a> Clinical Cancer Research. 17 (14), 4834-4843 (2011).</li><li>Valiente, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolving+landscape+of+brain+metastasis.">The evolving landscape of brain metastasis.</a> Trends in Cancer. 4 (3), 176-196 (2018).</li><li>Bos, P. 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G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-141-mediated+regulation+of+brain+metastasis+from+breast+cancer.">miR-141-mediated regulation of brain metastasis from breast cancer.</a> Journal of the National Cancer Institute. 108 (8), (2016).</li><li>Chang, S., Parker, S. L., Pham, T., Buzdar, A. U., Hursting, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+breast+carcinoma+incidence+and+survival:+the+surveillance,+epidemiology,+and+end+results+program+of+the+National+Cancer+Institute,+1975-1992.">Inflammatory breast carcinoma incidence and survival: the surveillance, epidemiology, and end results program of the National Cancer Institute, 1975-1992.</a> Cancer. 82 (12), 2366-2372 (1998).</li><li>Hance, K. W., Anderson, W. F., Devesa, S. S., Young, H. A., Levine, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trends+in+inflammatory+breast+carcinoma+incidence+and+survival:+the+surveillance,+epidemiology,+and+end+results+program+at+the+National+Cancer+Institute.">Trends in inflammatory breast carcinoma incidence and survival: the surveillance, epidemiology, and end results program at the National Cancer Institute.</a> Journal of National Cancer Institute. 97 (13), 966-975 (2005).</li><li>Dirix, L. Y., Van Dam, P., Prove, A., Vermeulen, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+breast+cancer:+Current+understanding.">Inflammatory breast cancer: Current understanding.</a> Current Opinion in Oncology. 18 (6), 563-571 (2006).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+of+distant+metastases+in+inflammatory+breast+cancer+-+A+large-cohort+retrospective+study.">Pattern of distant metastases in inflammatory breast cancer - A large-cohort retrospective study.</a> Journal of Cancer. 11 (2), 292-300 (2020).</li><li>Uemura, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+CNS+metastases+and+survival+in+patients+with+inflammatory+breast+cancer.">Development of CNS metastases and survival in patients with inflammatory breast cancer.</a> Cancer. 124 (11), 2299-2305 (2018).</li><li>Smith, D. L., Debeb, B. G., Thames, H. D., Woodward, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+modeling+of+micrometastatic+breast+cancer+radiation+dose+response.">Computational modeling of micrometastatic breast cancer radiation dose response.</a> International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics. 96 (1), 179-187 (2016).</li><li>Fukumura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-omic+molecular+profiling+reveals+potentially+targetable+abnormalities+shared+across+multiple+histologies+of+brain+metastasis.">Multi-omic molecular profiling reveals potentially targetable abnormalities shared across multiple histologies of brain metastasis.</a> Acta Neuropathol. , (2021).</li><li>Klopp, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+promote+mammosphere+formation+and+decrease+E-cadherin+in+normal+and+malignant+breast+cells.">Mesenchymal stem cells promote mammosphere formation and decrease E-cadherin in normal and malignant breast cells.</a> PLoS One. 5 (8), 12180 (2010).</li><li>Villodre, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abstract+P3-01-10:+Ndrg1-egfr+axis+in+inflammatory+breast+cancer+tumorigenesis+and+brain+metastasis.">Abstract P3-01-10: Ndrg1-egfr axis in inflammatory breast cancer tumorigenesis and brain metastasis.</a> Cancer Research. 80 (4), 10 (2020).</li></ol>

프로토콜에는 몇 가지 중요한 단계가 포함됩니다. 세포는 생존력을 유지하기 위해 1시간 이상 얼음 위에 보관하지 않아야 합니다. 알코올 면봉은 주사하기 전에 생쥐의 꼬리를 닦는 데 사용해야하며 꼬리 피부가 손상되지 않도록 너무 세게 또는 너무 자주 닦지 않도록주의해야합니다. 쥐가 혈관색전증으로 죽는 것을 방지하기 위해 세포 현탁액에 기포가 없는지 확인하십시오. 꼬리의 혈관이 뚫리...

뇌 전이는 전신 악성 종양의 흔하고 치명적인 합병증입니다. 대부분의 뇌 전이는 폐, 유방 또는 피부의 원발성 종양에서 발생하며, 이는 총체적으로 사례의 67-80 %를 차지합니다 1,2. 뇌 전이 발생률은 100,000건에서 240,000건까지 다양하며, 전이성 암으로 사망한 환자의 경우 부검이 드물기 때문에 이 수치는 과소평가될 수 있다3. 뇌 전이가 있는 환자는 뇌 전이가 없는 환자에 비해 예후가 더 나쁘고 전체 생존율이 낮다4. 뇌 전이에 대한 현재의 치료 옵션은 대체로 완화적이며 대부분의 환자에서 생존 결과를 개선하지 못한다5. 따라서 뇌 전이는 여전히 도전 과제로 남아 있으며 보다 효과적인 치료법을 개발하기 위해 뇌 전이 진행 메커니즘을 더 잘 이해해야 할 필요성이 여전히 시급합니다.
실험 모델의 사용은 뇌로의 유방암 전이성 진행의 특정 메커니즘에 대한 중요한 통찰력을 제공하고 다양한 치료 접근법의 효능을 평가할 수 있게 했습니다 6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16 . 그러나 뇌 전이 발달의 복잡성을 정확하고 완전하게 요약할 수 있는 모델은 거의 없습니다. 여러 실험 생체 내 모델이 동소, 꼬리 정맥, 심장 내, 경동맥 내 및 뇌내 주사를 포함한 다양한 투여 경로에 의해 암세포를 마우스에 접종하여 생성되었습니다. 각 기술에는 다른 곳에서 검토한 바와 같이 장점과 단점이 있습니다3. 그러나 이러한 마우스 모델 중 어느 것도 뇌 전이의 임상 진행을 완전히 복제할 수 없습니다.
뇌 전이는 드물지만 공격적인 원발성 유방암 변종인 염증성 유방암(IBC) 환자에게 특히 흔합니다. IBC는 유방암 사례의 1 %에서 4 %를 차지하지만 미국에서 유방암 관련 사망의 10 %를 차지합니다17,18. IBC는 빠르게 전이되는 것으로 알려져 있습니다. 실제로, IBC 환자의 3 분의 1은 진단 당시 원격 전이가 있습니다19,20. 뇌 전이와 관련하여, IBC 환자는 비 IBC 환자보다 뇌 전이 발생률이 더 높습니다21. 최근에, 우리는 생쥐 이종이식편에서 IBC 특성을 요약하는 ER-/PR-/HER2+ IBC 환자의 악성 흉막삼출액에서 유래한 MDA-IBC3 세포주가 꼬리 정맥에 의해 주사될 때 생쥐에서 폐 전이보다는 뇌 전이가 발생하는 경향이 향상되어 이 세포주가 뇌 전이의 발달을 연구하는 데 좋은 모델이 됨을 입증했다16.
여기에서 우리는 MDA-IBC3 세포의 꼬리 정맥 주입을 통해 뇌 전이를 생성하고 입체 형광 현미경 및 루시페라아제 이미징을 통해 전이 부담을 평가하는 절차를 설명합니다. 이 방법은 유방암의 뇌 전이의 주요 매개체를 발견하고 치료 적 개입의 효능을 테스트하는 데 사용되었습니다 16,22,23. 이 기술의 단점은 뇌 전이 과정의 모든 단계를 요약하지 않는다는 것입니다. 그럼에도 불구하고 주요 이점으로는 견고성과 재현성, 혈관 내 관련 전이 생물학의 참여, 폐 통과 및 뇌로의 유출, 기술 측면에서 상대적 단순성 등이 있습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell Culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L pipette tip filtered</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>23430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Serological Pipets</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>12-112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-antimycotic&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15240062</td>
			<td>1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes 15 mL bulk</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>28103&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160; 500 mL Hams F-12 Medium [+] L-glutamine</td>
			<td>GIBICO Inc. USA</td>
			<td>MT10080CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess II Automated Cell Counter (Invitrogen)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AMQAX1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x DPBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf centufuge 5810R</td>
			<td>Eppendorf&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>GIBICO Inc. USA</td>
			<td>16000044</td>
			<td>10%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand &#160;Sterile Cell Strainers (40 &#956;m)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H0888</td>
			<td>1 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12585014</td>
			<td>5 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen&#160;Countess Cell Counting Chamber Slides</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C10228&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-IBC3 cell lines</td>
			<td>MD Anderson Cancer Center</td>
			<td></td>
			<td>Generated by Dr. Woodward&#39;s lab24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luciferase&#8211;green fluorescent protein (Luc&#8211;GFP) plasmid</td>
			<td>System Biosciences</td>
			<td>BLIV713PA-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microtubes clear sterile 1.7 mL</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>24282S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus 10 &#181;L Reach Barrier Tip, Low Binding, Racked, Sterile</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>23-401C&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC Treated Flasks (T75), 250mL, Vent</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain (0.4%) for use with the Countess Automated Cell Counter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>T10282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>25200114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tail vein injection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C.B-17/IcrHsd-Prkdc scid Lyst bg-J - SCID/Beige</td>
			<td>Envigo</td>
			<td>SCID/beige mice</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Insulin Syringe with the BD Ultra-Fine Needle 0.5mL 30Gx1/2&#34; (12.7mm)</td>
			<td>BD</td>
			<td>328466</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plas Labs &#160;Broome-Style Rodent Restrainers</td>
			<td>Plas Labs 551BSRR</td>
			<td>01-288-32A</td>
			<td>Order fromThermo Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volu SolSupplier Diversity Partner Ethanol 95% SDA (190 Proof)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>50420872</td>
			<td>70 % used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Lo-Dose&#160; U-100 Insulin Syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>329461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable PES Filter Units 0.45 &#181;m</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>FB12566501</td>
			<td>filter system to sterilize the D-luciferin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin</td>
			<td>Biosynth</td>
			<td>L8220-1g</td>
			<td>stock concentration = 47.6 mM (15.15 mg/mL); use concentration = 1.515 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.7 mL microtube amber</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>24-282AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>NDC-14043-704-06</td>
			<td>Liquid anesthetic for use in anesthetic vaporizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS 200&#160;</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td>machine for luciferase imaging, up to 5 mice imaging at the same time, with anesthesia machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Containers with Lids&#160;</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>02-544-127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Cassettes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1000957</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Webcol Alcohol Prep&#160;</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope AZ100&#160;</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>model AZ-STGE</td>
			<td>software NIS-ELEMENT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin 10%</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>SF100-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC treated dishes 100x20 mm</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25202</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling brain metastasis via tail-vein injection of inflammatory breast cancer cells

뇌로의 전이성 확산은 많은 유형의 암에서 흔하고 파괴적인 징후입니다. 미국에서만 매년 약 200,000명의 환자가 뇌 전이 진단을 받습니다. 원발성 유방암 및 전신 악성 종양 환자의 생존 결과를 개선하는 데 상당한 진전이 있었습니다. 그러나 임상적 뇌 전이 환자의 암울한 예후는 이 치명적인 질병에 대한 새로운 치료제와 전략을 개발해야 할 시급한 필요성을 강조합니다. 적절한 실험 모델의 부족은 뇌 전이, 생물학 및 치료에 대한 우리의 이해를 향상시키는 데 방해가 되는 주요 장애물 중 하나였습니다. 여기에서 우리는 희귀하고 공격적인 형태의 유방암인 염증성 유방암(IBC)에서 유래한 내인성 HER2 증폭 세포주의 꼬리 정맥 주입을 통해 생성된 뇌 전이의 이종이식 마우스 모델을 설명합니다. 반딧불이 루시페라아제와 녹색 형광 단백질로 세포를 표지하여 뇌 전이를 모니터링하고 생물발광 영상, 형광 입체현미경 검사 및 조직학적 평가를 통해 전이성 부담을 정량화했습니다. 마우스는 강력하고 일관되게 뇌 전이를 일으켜 전이 과정에서 주요 매개체를 조사하고 새로운 치료 전략에 대한 전임상 테스트를 개발할 수 있습니다.

표지된 세포가 전임상 마우스 모델에서 뇌 전이의 모니터링 및 시각화를 용이하게 한다는 근거와 함께, 우리는 MDA-IBC3 세포에 Luc 및 GFP로 태그를 지정하여 생물발광 이미징 및 형광 입체현미경을 사용하여 뇌 전이를 모니터링하고 전이 부담을 정량화했습니다. 표지된 MDA-IBC3 세포를 면역저하된 SCID/베이지색 마우스의 꼬리 정맥에 주입한 결과 뇌 전이가 발생하는 마우스의 비율이 높았습니다(즉, 6...

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Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells Video (Video) | JoVE

우리는 내인성 HER2 증폭 염증성 유방암 세포주의 꼬리 정맥 주사를 통해 생성된 유방암 뇌 전이의 이종이식 마우스 모델을 설명합니다.

염증성 유방암 세포의 꼬리 정맥 주입을 통한 뇌 전이 모델링

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...

우리는 매우 공격적인 형태의 원발성 유방암인 염증성 유방암 환자에서 추출한 세포주(IBC)를 사용하여 마우스 모델에서 뇌 전이를 생성하기 위해 꼬리 정맥 방법을 활용했습니다. 마우스 모델에서 뇌 전이의 생성은 전형적으로 심장 내 또는 경동맥 내 주사를 포함한다. 그러나 꼬리 정맥 방법은 뇌 전이 집락 단계를 더 잘 모방하고 수행하기가 비교적 간단하기 때문에 이러한 기술에 비해 이점을 제공합니다.내 실험실의 강사 인 Xiaoding Hu와 Emilly Villodre 박사가 절차를 시연 할 것입니다. 종양 세포 주입 후 8-10 주 후에 GFP 영상으로 뇌 전이를 감지하려면 마우스를 70 % 에탄올로 소독하고 머리와 귀에서 털을 제거하십시오. 목의 자궁 경부를 자릅니다.뇌를 채취 할 수 있도록 두개골을 절제하고 제거하십시오. 뇌를 조직 카세트에 넣고 카세트를 차가운 DPBS 용기에 1시간 이상 넣지 마십시오. 입체 현미경으로 이미징하려면 자외선이 장착된 실체 현미경으로 뇌를 100cm 조직 접시 뚜껑에 옮기고 0.5x 대물렌즈를 선택하여 전체 뇌를 시각화할 수 있습니다.라이브 뷰를 누르고 초점을 맞춥니다 view 뇌가 복부 위치에 있는 동안. 소프트웨어와 현미경에서 세포의 형광 마커에 적합한 필터를 선택하고 사진을 찍습니다. 샘플을 이동하지 않고 명시야 영상으로 전환하고 명시야 필터를 선택합니다.사진을 찍습니다. 그런 다음 앞에서 설명한 것처럼 등쪽 위치에 있는 뇌를 이미지화합니다. 전체 뇌 이미지를 분석하려면 먼저 이미지 파일을 TIFF에서 JPEG로 변환하여 관련 소프트웨어가 없는 컴퓨터에서 열 수 있도록 합니다.그런 다음 한 쌍의 명시야 및 형광 이미지를 열고 파일 및 병합 채널을 선택합니다. 적절한 구성 요소를 선택하고 확인을 클릭한 다음 병합된 이미지를 저장합니다. 형광 이미지에서 뇌종양 영역을 정량화하려면 자동 선택을 선택합니다.화살표를 GFP 위치 영역으로 이동하고 클릭하면 선택 항목이 자동으로 생성됩니다. 그런 다음 다시 클릭하여 선택을 확인합니다. 모든 측정값이 표시됩니다.하나 이상의 GFP 양성 영역이 관찰될 수 있는 경우, 다음 영역과 측정을 반복한다. 뇌 전이성 병변은 루시페라아제 이미징 및 입체 형광 현미경으로 주사 후 빠르면 8주 이내에 감지할 수 있습니다. 이미징 후, 뇌 전이의 일부를 포르말린으로 고정하고 헤마톡실린 및 에오신 염색을 위해 처리하여 뇌 전이 병변의 존재를 검증하고 면역조직화학적 염색을 통해 관심 있는 특정 단백질 마커를 검출할 수 있습니다.이 프로토콜을 시도할 때, 세포를 1시간 이상 얼음 위에 유지하지 않음으로써 세포 생존율을 유지하고, 색전 형성 및 마우스 사망을 방지하기 위해 세포 현탁액에서 기포를 피하는 것이 중요합니다. 꼬리 정맥 주사 후 루시페라아제 이미징으로 뇌 전이 성장과 진행을 모니터링합니다. 안락사 후 입체 형광 현미경 검사와 조직학적으로 전이 병변이 확인되었습니다.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis Video (Video) | JoVE

현미경 뼈 전이의 효율적이고 선택적 모델링을위한 내부 장골 동맥 주입

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

연구

암 연구학

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells Video (Video) | JoVE

원래 종양 개발의 쥐 실험 모델 및 복막 전이<em&gt;를 통해</em난소 암 세포에&gt; 동소 이식 접종

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer Video (Video) | JoVE

포탈 정맥 주입 모델 간 전이 유방암의 공부를

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis Video (Video) | JoVE

Intracarotid 암 세포 주입 뇌 전이의 마우스 모델을 제작하기

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad Video (Video) | JoVE

Orthotopic 쥐 유 방 지방 패드 유방암 세포의 주입

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video (Video) | JoVE

마우스 유방 동맥에 Cre 발현 아데노 바이러스의 경막 주사를 통해 유방암 모델링

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment Video (Video) | JoVE

하류 분자 분석 및 전이성 전위 평가를 위한 순환 종양 세포의 미세 조작

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs Video (Video) | JoVE

꼬리 정맥 전이 검사의 결합된 사용 및 생체 내 실시간 생체 내 이미징을 결합하여 폐암 전이성 식민지화 및 폐의 부담을 정량화

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells Video (Video) | JoVE

종양 세포의 측면 꼬리 정맥 주입 다음 폐 전이의 병리학 적 분석

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging Video (Video) | JoVE

두개 내 주입 및 자기 공명 이미징을 통해 뇌 전이를 모델링

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...