Name: modeling brain metastasis via tail-vein injection of inflammatory breast cancer cells
Uploaded: 2021-02-04T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells Video at JoVE.com

Makalenin bilimsel düzenlemesi için MD Anderson'ın Radyasyon Onkolojisi Bölümü'nden Christine F. Wogan'a ve hematoksilen ve eozin boyama konusunda yardım için MD Anderson'ın Cerrahi Histoloji Çekirdeği Bölümü'nden Carol M. Johnston'a teşekkür ederiz. MD Anderson'daki Veterinerlik ve Cerrahi Merkezine hayvan çalışmalarına verdikleri destek için müteşekkiriz. Bu çalışma aşağıdaki hibelerle desteklenmiştir: Susan G. Komen Kariyer Katalizörü Araştırma hibesi (BGD'ye CCR16377813), Amerikan Kanser Derneği Araştırma Bursu hibesi (RSG-19-126-01'den BGD'ye) ve Teksas Eyaleti Nadir ve Agresif Meme Kanseri Araştırma Programı. Ayrıca, Ulusal Kanser Enstitüsü, Ulusal Sağlık Enstitüleri'nden Teksas Üniversitesi MD Anderson Kanser Merkezi'ne CA016672 Kanser Merkezi Destek (Çekirdek) Hibe P30 tarafından kısmen desteklenmektedir.

Burada açıklanan yöntem, MD Anderson Kanser Merkezi'nin Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır ve Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Ulusal Sağlık Enstitüleri Kılavuzları ile uyumludur. Şematik iş akışı, tüm adımlarla birlikte Şekil 1'de sunulmuştur.
1. Hücre hazırlığı
NOT: Dr. Woodward'ın laboratuvarında24'te üretilen MD...

<ol>
	<li>Achrol, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+metastases.">Brain metastases.</a> Nature Reviews Disease Primers. 5 (1), 5 (2019).</li><li>Nayak, L., Lee, E. Q., Wen, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+brain+metastases.">Epidemiology of brain metastases.</a> Current Oncology Report. 14 (1), 48-54 (2012).</li><li>Lowery, F. J., Yu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+metastasis:+Unique+challenges+and+open+opportunities.">Brain metastasis: Unique challenges and open opportunities.</a> Biochimica et Biophysica Acta Review Cancer. 1867 (1), 49-57 (2017).</li><li>Brufsky, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+nervous+system+metastases+in+patients+with+HER2-positive+metastatic+breast+cancer:+incidence,+treatment,+and+survival+in+patients+from+registHER.">Central nervous system metastases in patients with HER2-positive metastatic breast cancer: incidence, treatment, and survival in patients from registHER.</a> Clinical Cancer Research. 17 (14), 4834-4843 (2011).</li><li>Valiente, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolving+landscape+of+brain+metastasis.">The evolving landscape of brain metastasis.</a> Trends in Cancer. 4 (3), 176-196 (2018).</li><li>Bos, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+that+mediate+breast+cancer+metastasis+to+the+brain.">Genes that mediate breast cancer metastasis to the brain.</a> Nature. 459 (7249), 1005-1009 (2009).</li><li>Woditschka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+double-strand+break+repair+genes+and+oxidative+damage+in+brain+metastasis+of+breast+cancer.">DNA double-strand break repair genes and oxidative damage in brain metastasis of breast cancer.</a> Journal of the National Cancer Institute. 106 (7), (2014).</li><li>Palmieri, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vorinostat+inhibits+brain+metastatic+colonization+in+a+model+of+triple-negative+breast+cancer+and+induces+DNA+double-strand+breaks.">Vorinostat inhibits brain metastatic colonization in a model of triple-negative breast cancer and induces DNA double-strand breaks.</a> Clinical Cancer Research. 15 (19), 6148-6157 (2009).</li><li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+upregulate+survival+genes+in+tumor+cells+and+induce+protection+from+chemotherapy.">Astrocytes upregulate survival genes in tumor cells and induce protection from chemotherapy.</a> Neoplasia. 13 (3), 286-298 (2011).</li><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SRC+family+kinases+as+novel+therapeutic+targets+to+treat+breast+cancer+brain+metastases.">SRC family kinases as novel therapeutic targets to treat breast cancer brain metastases.</a> Cancer Research. 73 (18), 5764-5774 (2013).</li><li>Valiente, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serpins+promote+cancer+cell+survival+and+vascular+co-option+in+brain+metastasis.">Serpins promote cancer cell survival and vascular co-option in brain metastasis.</a> Cell. 156 (5), 1002-1016 (2014).</li><li>Gril, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+lapatinib+on+the+outgrowth+of+metastatic+breast+cancer+cells+to+the+brain.">Effect of lapatinib on the outgrowth of metastatic breast cancer cells to the brain.</a> Journal of the National Cancer Institute. 100 (15), 1092-1103 (2008).</li><li>Gril, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pazopanib+reveals+a+role+for+tumor+cell+B-Raf+in+the+prevention+of+HER2++breast+cancer+brain+metastasis.">Pazopanib reveals a role for tumor cell B-Raf in the prevention of HER2+ breast cancer brain metastasis.</a> Clinical Cancer Research. 17 (1), 142-153 (2011).</li><li>Palmieri, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+prevention+of+experimental+brain+metastases+of+breast+cancer+by+temozolomide+in+an+MGMT-dependent+manner.">Profound prevention of experimental brain metastases of breast cancer by temozolomide in an MGMT-dependent manner.</a> Clinical Cancer Research. 20 (10), 2727-2739 (2014).</li><li>Priego, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STAT3+labels+a+subpopulation+of+reactive+astrocytes+required+for+brain+metastasis.">STAT3 labels a subpopulation of reactive astrocytes required for brain metastasis.</a> Nature Medicine. 24 (7), 1024-1035 (2018).</li><li>Debeb, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-141-mediated+regulation+of+brain+metastasis+from+breast+cancer.">miR-141-mediated regulation of brain metastasis from breast cancer.</a> Journal of the National Cancer Institute. 108 (8), (2016).</li><li>Chang, S., Parker, S. L., Pham, T., Buzdar, A. U., Hursting, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+breast+carcinoma+incidence+and+survival:+the+surveillance,+epidemiology,+and+end+results+program+of+the+National+Cancer+Institute,+1975-1992.">Inflammatory breast carcinoma incidence and survival: the surveillance, epidemiology, and end results program of the National Cancer Institute, 1975-1992.</a> Cancer. 82 (12), 2366-2372 (1998).</li><li>Hance, K. W., Anderson, W. F., Devesa, S. S., Young, H. A., Levine, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trends+in+inflammatory+breast+carcinoma+incidence+and+survival:+the+surveillance,+epidemiology,+and+end+results+program+at+the+National+Cancer+Institute.">Trends in inflammatory breast carcinoma incidence and survival: the surveillance, epidemiology, and end results program at the National Cancer Institute.</a> Journal of National Cancer Institute. 97 (13), 966-975 (2005).</li><li>Dirix, L. Y., Van Dam, P., Prove, A., Vermeulen, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+breast+cancer:+Current+understanding.">Inflammatory breast cancer: Current understanding.</a> Current Opinion in Oncology. 18 (6), 563-571 (2006).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+of+distant+metastases+in+inflammatory+breast+cancer+-+A+large-cohort+retrospective+study.">Pattern of distant metastases in inflammatory breast cancer - A large-cohort retrospective study.</a> Journal of Cancer. 11 (2), 292-300 (2020).</li><li>Uemura, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+CNS+metastases+and+survival+in+patients+with+inflammatory+breast+cancer.">Development of CNS metastases and survival in patients with inflammatory breast cancer.</a> Cancer. 124 (11), 2299-2305 (2018).</li><li>Smith, D. L., Debeb, B. G., Thames, H. D., Woodward, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+modeling+of+micrometastatic+breast+cancer+radiation+dose+response.">Computational modeling of micrometastatic breast cancer radiation dose response.</a> International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics. 96 (1), 179-187 (2016).</li><li>Fukumura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-omic+molecular+profiling+reveals+potentially+targetable+abnormalities+shared+across+multiple+histologies+of+brain+metastasis.">Multi-omic molecular profiling reveals potentially targetable abnormalities shared across multiple histologies of brain metastasis.</a> Acta Neuropathol. , (2021).</li><li>Klopp, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+promote+mammosphere+formation+and+decrease+E-cadherin+in+normal+and+malignant+breast+cells.">Mesenchymal stem cells promote mammosphere formation and decrease E-cadherin in normal and malignant breast cells.</a> PLoS One. 5 (8), 12180 (2010).</li><li>Villodre, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abstract+P3-01-10:+Ndrg1-egfr+axis+in+inflammatory+breast+cancer+tumorigenesis+and+brain+metastasis.">Abstract P3-01-10: Ndrg1-egfr axis in inflammatory breast cancer tumorigenesis and brain metastasis.</a> Cancer Research. 80 (4), 10 (2020).</li></ol>

Protokol birkaç kritik adım içerir. Canlılığı korumak için hücreler 1 saatten fazla buz üzerinde tutulmamalıdır. Enjeksiyondan önce farelerin kuyruklarını silmek için alkollü pamuklu pedler kullanılmalı, kuyruk derisine zarar vermemek için çok sert veya çok sık silmemeye özen gösterilmelidir. Farelerin kan damarı embolisinden ölmesini önlemek için hücre süspansiyonunda hava kabarcığı bulunmadığından emin olun. Kuyruklardaki kan damarının delinmesini önlemek için enjeksiyon açıs?...

Beyin metastazı, sistemik malignitelerin sık görülen ve ölümcül bir komplikasyonudur. Beyin metastazlarının çoğu, toplu olarak vakaların% 67-80'ini oluşturan akciğer, meme veya cildin primer tümörlerinden kaynaklanır 1,2. Beyin metastazı insidansı tahminleri 100.000 ila 240.000 vaka arasında değişmektedir ve bu sayılar metastatik kanserden ölen hastalar için otopsi nadir olduğu için hafife alınabilir3. Beyin metastazı olan hastalar, beyin metastazı olmayan hastalara göre daha kötü prognoza ve daha düşük genel sağkalıma sahiptir4. Beyin metastazları için mevcut tedavi seçenekleri büyük ölçüde palyatiftir ve çoğu hasta için sağkalım sonuçlarını iyileştirmede başarısızolur 5. Bu nedenle, beyin metastazı bir zorluk olmaya devam etmektedir ve daha etkili tedaviler geliştirmek için beyin metastazı ilerleme mekanizmalarını daha iyi anlama ihtiyacı devam etmektedir.
Deneysel modellerin kullanımı, meme kanserinin beyne metastatik ilerlemesinin spesifik mekanizmaları hakkında önemli bilgiler sağlamış ve çeşitli terapötik yaklaşımların etkinliğinin değerlendirilmesine izin vermiştir 6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16 . Bununla birlikte, çok az sayıda model beyin metastazı gelişiminin inceliklerini doğru ve tam olarak özetleyebilir. Ortotopik, kuyruk damarı, intrakardiyak, intrakarotis arteriyel ve intraserebral enjeksiyonlar dahil olmak üzere farklı uygulama yollarıyla kanser hücrelerinin farelere aşılanması yoluyla birkaç deneysel in vivo model oluşturulmuştur. Her tekniğin avantajları ve dezavantajları vardır, başka bir yerde gözden geçirildiği gibi3. Bununla birlikte, bu fare modellerinin hiçbiri beyin metastazının klinik ilerlemesini tam olarak kopyalayamaz.
Beyin metastazları, primer meme kanserinin nadir fakat agresif bir varyantı olan inflamatuar meme kanseri (IBC) hastalarında özellikle yaygındır. IBC, meme kanseri vakalarının %1 ila %4'ünü oluşturur, ancak Amerika Birleşik Devletleri'nde meme kanserine bağlı ölümlerin orantısız bir şekilde %10'undan sorumludur17,18. IBC'nin hızla metastaz yaptığı bilinmektedir; Gerçekten de, IBC hastalarının üçte birinde tanı anında uzak metastaz vardır19,20. Beyin metastazı spesifik olarak, IBC'li hastalarda beyin metastazı insidansı, IBC olmayan hastalara göre daha yüksektir21. Son zamanlarda, fare ksenogreftlerinde IBC özelliklerini özetleyen ER-/PR-/HER2+ IBC'li bir hastanın malign plevral efüzyon sıvısından türetilen MDA-IBC3 hücre hattının, kuyruk damarı ile enjekte edildiğinde farelerde akciğer metastazlarından ziyade beyin metastazı geliştirme eğiliminin arttığını gösterdik, bu da bu hücre hattını beyin metastazının gelişimini incelemek için iyi bir model haline getirdi16.
Burada, MDA-IBC3 hücrelerinin kuyruk-ven enjeksiyonu ile beyin metastazı oluşturma ve stereofloresan mikroskopi ve lusiferaz görüntüleme ile metastatik yükü değerlendirme prosedürleri açıklanmaktadır. Bu yöntem, meme kanseri metastazının beyne anahtar aracılarını keşfetmek ve terapötik müdahalelerin etkinliğini test etmek için kullanılmıştır 16,22,23. Bu tekniğin dezavantajı, beyin metastatik sürecindeki tüm adımları özetlememesidir. Bununla birlikte, başlıca avantajları arasında sağlamlık ve tekrarlanabilirlik, intravazasyonun ilgili metastaz biyolojisinin katılımı, akciğerleri geçme ve beyne ekstravazasyon ve teknik açıdan göreceli basitliği sayılabilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell Culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L pipette tip filtered</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>23430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Serological Pipets</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>12-112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-antimycotic&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15240062</td>
			<td>1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes 15 mL bulk</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>28103&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160; 500 mL Hams F-12 Medium [+] L-glutamine</td>
			<td>GIBICO Inc. USA</td>
			<td>MT10080CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess II Automated Cell Counter (Invitrogen)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AMQAX1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x DPBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf centufuge 5810R</td>
			<td>Eppendorf&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>GIBICO Inc. USA</td>
			<td>16000044</td>
			<td>10%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand &#160;Sterile Cell Strainers (40 &#956;m)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H0888</td>
			<td>1 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12585014</td>
			<td>5 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen&#160;Countess Cell Counting Chamber Slides</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C10228&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-IBC3 cell lines</td>
			<td>MD Anderson Cancer Center</td>
			<td></td>
			<td>Generated by Dr. Woodward&#39;s lab24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luciferase&#8211;green fluorescent protein (Luc&#8211;GFP) plasmid</td>
			<td>System Biosciences</td>
			<td>BLIV713PA-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microtubes clear sterile 1.7 mL</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>24282S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus 10 &#181;L Reach Barrier Tip, Low Binding, Racked, Sterile</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>23-401C&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC Treated Flasks (T75), 250mL, Vent</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain (0.4%) for use with the Countess Automated Cell Counter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>T10282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>25200114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tail vein injection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C.B-17/IcrHsd-Prkdc scid Lyst bg-J - SCID/Beige</td>
			<td>Envigo</td>
			<td>SCID/beige mice</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Insulin Syringe with the BD Ultra-Fine Needle 0.5mL 30Gx1/2&#34; (12.7mm)</td>
			<td>BD</td>
			<td>328466</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plas Labs &#160;Broome-Style Rodent Restrainers</td>
			<td>Plas Labs 551BSRR</td>
			<td>01-288-32A</td>
			<td>Order fromThermo Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volu SolSupplier Diversity Partner Ethanol 95% SDA (190 Proof)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>50420872</td>
			<td>70 % used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Lo-Dose&#160; U-100 Insulin Syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>329461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable PES Filter Units 0.45 &#181;m</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>FB12566501</td>
			<td>filter system to sterilize the D-luciferin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin</td>
			<td>Biosynth</td>
			<td>L8220-1g</td>
			<td>stock concentration = 47.6 mM (15.15 mg/mL); use concentration = 1.515 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.7 mL microtube amber</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>24-282AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>NDC-14043-704-06</td>
			<td>Liquid anesthetic for use in anesthetic vaporizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS 200&#160;</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td>machine for luciferase imaging, up to 5 mice imaging at the same time, with anesthesia machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Containers with Lids&#160;</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>02-544-127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Cassettes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1000957</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Webcol Alcohol Prep&#160;</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope AZ100&#160;</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>model AZ-STGE</td>
			<td>software NIS-ELEMENT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin 10%</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>SF100-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC treated dishes 100x20 mm</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25202</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling brain metastasis via tail-vein injection of inflammatory breast cancer cells

Beyne metastatik yayılım, birçok kanser türünün yaygın ve yıkıcı bir tezahürüdür. Sadece Amerika Birleşik Devletleri'nde her yıl yaklaşık 200.000 hastaya beyin metastazı teşhisi konmaktadır. Primer meme kanseri ve sistemik maligniteleri olan hastalar için sağkalım sonuçlarının iyileştirilmesinde önemli ilerleme kaydedilmiştir; Bununla birlikte, klinik beyin metastazı olan hastalar için kasvetli prognoz, bu ölümcül hastalığa karşı yeni terapötik ajanlar ve stratejiler geliştirmeye acil ihtiyaç olduğunu vurgulamaktadır. Uygun deneysel modellerin olmaması, beyin metastazı biyolojisi ve tedavisi konusundaki anlayışımızın ilerlemesini engelleyen en büyük engellerden biri olmuştur. Burada, nadir ve agresif bir meme kanseri formu olan inflamatuar meme kanserinden (IBC) türetilen endojen olarak HER2 ile amplifiye edilmiş bir hücre hattının kuyruk veni enjeksiyonu yoluyla üretilen bir ksenogreft fare beyin metastazı modelini açıklıyoruz. Hücreler, beyin metastazını izlemek için ateşböceği lusiferaz ve yeşil floresan proteini ile etiketlendi ve biyolüminesans görüntüleme, floresan stereomikroskopi ve histolojik değerlendirme ile metastatik yükü ölçtü. Fareler sağlam ve tutarlı bir şekilde beyin metastazları geliştirir, bu da metastatik süreçteki anahtar aracıların araştırılmasına ve yeni tedavi stratejilerinin klinik öncesi testlerinin geliştirilmesine olanak tanır.

Etiketli hücrelerin klinik öncesi fare modellerinde beyin metastazının izlenmesini ve görselleştirilmesini kolaylaştırdığı gerekçesiyle, biyolüminesans görüntüleme ve floresan stereomikroskopi kullanarak beyin metastazlarını izlemek ve metastatik yükü ölçmek için MDA-IBC3 hücrelerini Luc ve GFP ile etiketledik. Etiketli MDA-IBC3 hücrelerinin bağışıklığı baskılanmış SCID/Bej farelerin kuyruk damarlarına enjeksiyonu, yüksek oranda beyin metastazı gelişen farelerle sonuçlandı (yani, ...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells Video at JoVE.com

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells Video (Video) | JoVE

Endojen olarak HER2 ile amplifiye edilmiş inflamatuar meme kanseri hücre hattının kuyruk damarı enjeksiyonu yoluyla üretilen meme kanseri beyin metastazının bir ksenogreft fare modelini tanımladık.

İnflamatuar Meme Kanseri Hücrelerinin Kuyruk-Ven Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...

İnflamatuar meme kanseri veya IBC'li hastalardan elde edilen hücre dizilerini kullanarak fare modellerinde beyin metastazı oluşturmak için kuyruk damarı yöntemini kullandık. Fare modellerinde beyin metastazı oluşumu tipik olarak intrakardiyak veya intrakarotis arteriyel enjeksiyonları içerir. Bununla birlikte, kuyruk damarı yöntemi, beyin metastazı kolonizasyon adımlarını daha iyi taklit ettiği ve gerçekleştirilmesi nispeten basit olduğu için bu tekniklere göre avantaj sunar.Her ikisi de laboratuvarımda eğitmen olan doktorlar Xiaoding Hu ve Emilly Villodre prosedürü gösterecek. Tümör hücresi enjeksiyonundan sekiz ila 10 hafta sonra GFP görüntüleme ile beyin metastazlarını tespit etmek için, fareyi% 70 etanol ile dezenfekte edin ve kürkü baş ve kulaklardan çıkarın. Boynun servikal bölgesini kesin.Beynin alınmasına izin vermek için kafatasını çıkarın ve çıkarın. Beyni bir doku kasetine yerleştirin ve kaseti bir saatten fazla olmamak üzere soğuk DPBS kabına yerleştirin. Stereo mikroskopi ile görüntüleme için, beyni UV ışığı ile donatılmış bir stereo mikroskop altında 100 santimetrelik bir doku kabı kapağına aktarın ve tüm beynin görselleştirilmesine izin vermek için 0.5x objektifi seçin.Canlı görüntüye basın ve beyin ventral pozisyondayken görüntüye odaklanın. Hücrelerdeki floresan işaretleyici için yazılımda ve mikroskopta uygun filtreyi seçin ve bir resim çekin. Örneği hareket ettirmeden parlak alan görüntülemeye geçin ve parlak alan filtresini seçin.Bir fotoğraf çekin. Daha sonra beyni daha önce gösterildiği gibi sırt pozisyonunda görüntüleyin. Tüm beyin görüntülerini analiz etmek için, önce görüntü dosyalarını TIFF'den JPEG'e dönüştürün, böylece ilgili yazılıma sahip olmayan herhangi bir bilgisayarla açılabilirler.Ardından, bir çift parlak alan ve floresan görüntü açın ve kanalları dosyala ve birleştir'i seçin. Uygun bileşenleri seçin, Tamam'ı tıklatın ve birleştirilmiş görüntüyü kaydedin. Floresan görüntüdeki beyin tümörü alanını ölçmek için otomatik seçimi seçin.Oku GFP konum alanına taşıyın ve otomatik olarak bir seçim oluşturmak için tıklayın. Ardından seçimi onaylamak için tekrar tıklayın. Tüm ölçümler gösterilecektir.Birden fazla GFP pozitif alanı gözlemlenebiliyorsa, ölçümü sonraki alanla tekrarlayın. Beyin metastatik lezyonları, lusiferaz görüntüleme ve stereo floresan mikroskobu ile enjeksiyondan sekiz hafta sonra tespit edilebilir. Görüntülemeden sonra, beyin metastazlarının bölümleri, beyin metastazı lezyonlarının varlığını doğrulamak için hematoksilen ve eozin boyaması ve ilgilenilen spesifik protein belirteçlerini saptamak için immünohistokimyasal boyama için formalin ile sabitlenebilir ve işlenebilir.Bu protokolü denerken, hücreleri bir saatten fazla buz üzerinde tutmayarak hücre canlılığını korumak ve emboli oluşumunu ve fare ölümünü önlemek için hücre süspansiyonunda hava kabarcıklarını önlemek önemlidir. Kuyruk veni enjeksiyonunu takiben, lusiferaz görüntüleme ile beyin metastazı büyümelerini ve ilerlemesini izliyoruz. Ötenazi sonrası stereo floresan mikroskopi ve histoloji metastaz lezyonlarını doğruladı.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis Video (Video) | JoVE

Mikroskopik Kemik Metastazı Verimli ve Seçici Modelleme için intra-iliak arter Enjeksiyon

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells Video (Video) | JoVE

Orijinal Tümör Geliştirme Murin Deneysel Modeli ve Periton Metastaz<em&gt; yoluyla</emYumurtalık Kanseri Hücreleri ile&gt; Ortotopik aşılama

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer Video (Video) | JoVE

Bir Portal Ven Enjeksiyon Modeli Karaciğer Metastazı Meme Kanseri Eğitim için

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis Video (Video) | JoVE

Intracarotid Kanser Hücre Enjeksiyon Beyin metastaz Fare modelleri üretmek için

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad Video (Video) | JoVE

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video (Video) | JoVE

CRE-ifade Adenovirus fare mammary bezi içine bir Intraductal enjeksiyon yoluyla meme kanseri modelleme

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment Video (Video) | JoVE

Akım moleküler Analizi ve metastatik potansiyel değerlendirme için sirkülasyon tümör hücrelerinin mikromanipülasyon

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs Video (Video) | JoVE

Kuyruk Ven Metastaz Tahlilleri ve Gerçek Zamanlı Vivo Görüntüleme Kombine Kullanımı Meme Kanseri Metastatik Kolonizasyon ve Yük Akciğerlerde Quantify için

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells Video (Video) | JoVE

Tümör Hücrelerinin Lateral Kuyruk-Damar Enjeksiyonu Sonrasında Akciğer Metastazının Patolojik Analizi

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging Video (Video) | JoVE

İntrakraniyal Enjeksiyon ve Manyetik Rezonans Görüntüleme Ile Beyin Metastazlarının Modellenmesi

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...