Name: preparing irradiated and marked male aedes aegypti mosquitoes for release in an operational sterile insect technique program
Uploaded: 2021-03-12T14:00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program at JoVE.com

نشكر الدكتور R.-D. Xue و C. Bibbs و W. Qualls و V. Aryaprema من منطقة Anastasia لمكافحة البعوض ، سانت أوغسطين ، فلوريدا ، للشراكة في تطوير برنامج SIT ورؤية الخبراء حول الإطلاق التشغيلي الفعال لذكور Aedes aegypti العقيمة. تم دعم هذا البحث من قبل USDA-ARS ووزارة الزراعة وخدمات المستهلك في فلوريدا (FDACS). ذكر الأسماء التجارية أو المنتجات التجارية في هذا المنشور هو فقط لغرض تقديم معلومات محددة ولا يعني توصية أو تأييد من قبل وزارة الزراعة الأمريكية أو FDACS.

<ol>
	<li>Moyes, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contemporary+status+of+insecticide+resistance+in+the+major+Aedes+vectors+of+arboviruses+infecting+humans.">Contemporary status of insecticide resistance in the major Aedes vectors of arboviruses infecting humans.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 11 (7), 0005625 (2017).</li><li>Baldacchino, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+methods+against+invasive+Aedes+mosquitoes+in+Europe:+a+review.">Control methods against invasive Aedes mosquitoes in Europe: a review.</a> Pest Management Science. 71 (11), 1471-1485 (2015).</li><li>Burkett, D. A., Cope, S. E., Strickman, D. A., White, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Deployed+Warfighter+Protection+(DWFP)+Research+Program:+Developing+new+public+health+pesticides,+application+technologies,+and+repellent+systems.">The Deployed Warfighter Protection (DWFP) Research Program: Developing new public health pesticides, application technologies, and repellent systems.</a> Journal of Integrated Pest Management. 4 (2), 1-7 (2013).</li><li>Harwood, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+Aedes+aegypti+in+cryptic+environments+with+manually+carried+ultra-low+volume+and+mist+blower+pesticide+applications.">Controlling Aedes aegypti in cryptic environments with manually carried ultra-low volume and mist blower pesticide applications.</a> Journal of the American Mosquito Control Association. 32 (3), 217-223 (2016).</li><li>Morrison, A. C., Zielinski-Gutierrez, E., Scott, T. W., Rosenberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+challenges+and+proposing+solutions+for+control+of+the+virus+vector+Aedes+aegypti.">Defining challenges and proposing solutions for control of the virus vector Aedes aegypti.</a> PLoS Medicine. 5 (3), 68 (2008).</li><li>Klassen, W., Curtis, C. F., InDyck, V. A., Hendrichs, J., Robinson, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+the+sterile+insect+technique.">History of the sterile insect technique.</a> Sterile insect technique: principles and practice in area-wide integrated pest management. , 3-36 (2005).</li><li>Alphey, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterile-insect+methods+for+control+of+mosquito-borne+diseases:+an+analysis.">Sterile-insect methods for control of mosquito-borne diseases: an analysis.</a> Vector Borne and Zoonotic Diseases. 10 (3), 295-311 (2010).</li><li>Dame, D. A., Curtis, C. F., Benedict, M. Q., Robinson, A. S., Knols, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Historical+applications+of+induced+sterilisation+in+field+populations+of+mosquitoes.">Historical applications of induced sterilisation in field populations of mosquitoes.</a> Malaria Journal. 8, (2009).</li><li>Bond, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+irradiation+dose+to+Aedes+aegypti+and+Ae.+albopictus+in+a+sterile+insect+technique+program.">Optimization of irradiation dose to Aedes aegypti and Ae. albopictus in a sterile insect technique program.</a> PloS One. 14 (2), 0212520 (2019).</li><li>Bourtzis, K., Lees, R. S., Hendrichs, J., Vreysen, M. J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=More+than+one+rabbit+out+of+the+hat:+Radiation,+transgenic+and+symbiont-based+approaches+for+sustainable+management+of+mosquito+and+tsetse+fly+populations.">More than one rabbit out of the hat: Radiation, transgenic and symbiont-based approaches for sustainable management of mosquito and tsetse fly populations.</a> Acta Tropica. 157, 115-130 (2016).</li><li>Carvalho, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+production+of+genetically+modified+Aedes+aegypti+for+field+releases+in+Brazil.">Mass production of genetically modified Aedes aegypti for field releases in Brazil.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. , e3579 (2014).</li><li>Carvalho, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aedes+aegypti+lines+for+combined+sterile+insect+technique+and+incompatible+insect+technique+applications:+the+importance+of+host+genomic+background.">Aedes aegypti lines for combined sterile insect technique and incompatible insect technique applications: the importance of host genomic background.</a> Entomologia experimentalis et applicata. 168 (6-7), 560-572 (2020).</li><li>Mamai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aedes+aegypti+larval+development+and+pupal+production+in+the+FAO/IAEA+mass-rearing+rack+and+factors+influencing+sex+sorting+efficiency.">Aedes aegypti larval development and pupal production in the FAO/IAEA mass-rearing rack and factors influencing sex sorting efficiency.</a> Parasite. 27, 43 (2020).</li><li>Zheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incompatible+and+sterile+insect+techniques+combined+eliminate+mosquitoes.">Incompatible and sterile insect techniques combined eliminate mosquitoes.</a> Nature. 572 (7767), 56-61 (2019).</li><li>. Methods in Aedes Research Available from: <a target="_blank" href="https://www.beiresources.org/Portals/2/VectorResources/Methods%20in%20Aedes%20Research%202016.pdf">https://www.beiresources.org/Portals/2/VectorResources/Methods%20in%20Aedes%20Research%202016.pdf</a> (2016)</li><li>Focks, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+separator+for+the+developmental+stages,+sexes,+and+species+of+mosquitoes+(Diptera:+Culicidae).">An improved separator for the developmental stages, sexes, and species of mosquitoes (Diptera: Culicidae).</a> Journal of Medical Entomology. 17 (6), 567-568 (1980).</li><li>International Atomic Energy Agency. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manual of Dosimetry in Radiotherapy. Technical Reports Series No. 110. , (1970).</li><li>Aldridge, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gamma-irradiation+reduces+survivorship,+feeding+behavior,+and+oviposition+of+female+Aedes+aegypti.">Gamma-irradiation reduces survivorship, feeding behavior, and oviposition of female Aedes aegypti.</a> Journal of the American Mosquito Control Association. 36 (3), 152-160 (2020).</li><li>Cianci, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimating+mosquito+population+size+from+mark-release-recapture+data.">Estimating mosquito population size from mark-release-recapture data.</a> Journal of Medical Entomology. 50 (3), 533-542 (2013).</li><li>Knipling, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The basic principles of insect population suppression and management. , (1979).</li></ol>

أعلن جميع المؤلفين عدم وجود تضارب في المصالح.

يتطلب بدء برنامج مراقبة يتميز بتقنية الحشرة العقيمة التي تستخدم الإشعاع إنشاء سلالة محلية من الزاعجة المصرية. هذه الخطوة حاسمة ويمكن أن تسمح لتقنية الحشرة العقيمة بتمييز نفسها حقا عن تقنيات التحكم المماثلة. من خلال تطوير المشروع من سلالة محلية من البعوض ، من المحتمل أن يكون للذكور المتولدة سلوكيات تسمح لها بالتكيف مع التغيرات والإشارات البيئية وتحديد موقع الإناث البرية والتزاوج معها في المنطقة المجاورة. وعلاوة على ذلك، فإن إطلاق الذكور المحليين المشععين قد لا يولد رأيا عاما سلبيا مقارنة بإطلاق سلالة غير محلية من البعوض المعدل وراثيا يمكن، على سبيل المثال، إدخال أليلات جديدة في أسراب البعوض المحلية.
إن إنفاق موارد كبيرة لتربية كميات هائلة من البعوض فقط لتكون قادرة على استخدام حوالي نصفها لأغراض المكافحة هو أحد قيود برنامج الزاعجة المصرية . يجب إجراء تحسينات على بروتوكول التربية لتكثيف نضوج اليرقات في أطر زمنية أكثر تحديدا عندما تكون الشرانق جاهزة. هذا من شأنه أن يسمح بجمع المزيد من الشرانق في الوقت الأمثل للفصل. ومع ذلك ، فإن الشرانق الإضافية للمعالجة تزيد من خطر تشرنق المزيد من الإناث عند جمع الشرانق وبالتالي زيادة احتمالية أن ينتهي الأمر بالإناث في أطباق بتري مع الذكور وربما يتم إطلاقها. على الرغم من انخفاض العمر الافتراضي وسلوك التغذية بالدم وسلوك وضع البيض في إناث Aedes aegypti الشرانق المشععة عند البالغين ، إلا أنه ليس من الجيد إطلاق الإناث بالمصادفة جنبا إلى جنب مع الذكور المشععين22. لذلك ، يجب أن تظل الأولوية لتقليل عدد الإناث المنفصلات عن غير قصد ، والإشعاع ، ووضع العلامات ، وإطلاق سراحهن مع الذكور.
يعتمد نجاح برنامج تقنية الحشرة العقيمة في نهاية المطاف على المنافسة الناجحة بين الذكور الذين يتم تربيتهم في المستعمرات ويتعرضون للإشعاع. يعتمد الحفاظ على القدرة التنافسية للذكور على الاختيار الشامل المشتق تجريبيا للجرعة وتعظيم النسبة المقدرة للذكور العقيمة: البرية في السكان. يتم تحديد اختيار الجرعة من خلال عدة عوامل رئيسية تشمل طول العمر والخصوبة والخصوبة ووفيات العذراء. وقد لوحظ أن ذكور البعوض ستظهر منحنى خصوبة مقارب يقترب من الصفر مع زيادة الإشعاع (KJL ، RLA ، SCB بيانات غير منشورة). في الوقت نفسه ، يتناقص طول عمر البعوض الذكور ومستويات النشاط بشكل كبير مع زيادة جرعة الإشعاع (KJL ، RLA ، SCB البيانات غير المنشورة). لذلك ، بدلا من تحديد جرعة تنتج عقما بنسبة 99.9٪ عند الذكور ، يفضل التركيز على نسبة عقم أقل مع دعم البقاء على قيد الحياة. وبمجرد تحديد نطاق جرعة لا يفرق بين طول العمر أو وفيات العذراء للذكور المشععين والذكور غير المشععين، ينبغي إجراء تقييمات إضافية للخصوبة لتحديد الجرعة التي تجعل الذكور عقيمة بشكل كبير، ولكنها تنافسية.
وفي الوقت نفسه، من الأهمية بمكان مقارنة عدد ذكور البعوض في السكان بعدد الذكور المشععة التي تم إطلاقها. يمكن تحقيق ذلك عن طريق جمع الذكور من مواقع مختلفة في منطقة الإطلاق المستهدفة وحولها بشكل متكرر من نفس الموقع وقبل وأثناء وبعد بدء برنامج تقنية الحشرة العقيمة. يجب إجراء دراسة العلامة والإطلاق والاستعادة لتقييم نسبة ذكور البعوض البري إلى البعوض الذي تم إطلاقه. تعتمد دراسة العلامات والإطلاق وإعادة الالتقاط على إطلاق عدد معروف من البعوض المميز من نقطة معينة وإعادة التقاطها لاحقا في نقاط قريبة تحيط بنقطة الإطلاق الأولية. من خلال مقارنة عدد الذكور المعاد أسرها والذكور البرية على مسافات من نقطة الإطلاق ، من الممكن تقدير السكان البرية العامة للذكور في المنطقة بحيث يمكن إطلاق نسب تنافسية من الذكور العقيمة23. تعظيم نسبة العقيمة: يمكن تحقيق الذكور البرية عن طريق إطلاق المزيد من الذكور العقيمة و / أو عن طريق تقليل عدد السكان البرية عن طريق وسائل التحكم الكلاسيكية مثل تقليل المصدر أو التحكم غير الناضج أو علاجات مبيدات البالغين.
لقياس فعالية إطلاقات الذكور العقيمة ، يمكن مقارنة مجموعات البالغين زمنيا مع منطقة عدم التدخل. مع إطلاق الذكور العقيمة وتناقص عدد الذكور والإناث التي تم جمعها في منطقة ما فيما يتعلق بمنطقة مماثلة غير تدخلية ، فقد يفترض أن ذلك يرجع إلى أن الذكور العقيمة التي تم إطلاقها تفوقت بنجاح على الذكور الخصبة المحلية. يمكن ملاحظة هذا التأثير أيضا في أكواب مصيدة وضع البيض المنتشرة في كل من مواقع التدخل وعدم التدخل. قد لا يزال يتم إنتاج البيض في موقع التدخل ، ولكن إذا كان عدد الفقس أقل من تلك الموجودة في موقع عدم التدخل ، فقد يفترض أنه لم يتم تخصيبه بسبب تزاوج الإناث مع الذكور العقيمة. يمكن أن يؤدي المزيد والمزيد من وضع البيض للبويضات غير المخصبة في النهاية إلى تقليل وضع البيض بسبب عدم استبدال الإناث في موقع التدخل 8,24.
تتوسع الاتجاهات المستقبلية لتكنولوجيا وبرامج تقنية الحشرة العقيمة بشكل طبيعي إلى أنواع إضافية من البعوض مهمة طبيا. على سبيل المثال ، يمكن تكييف هذه التكنولوجيا بسهولة للتحكم في الزاعجة المرقطة ، بالنظر إلى علم الأحياء المتشابه جدا ل Aedes aegypti و Aedes albopictus. تشمل أنواع البعوض الأخرى الناقل للأمراض ذات الأهمية Culex quinquefasciatus و Culex tarsalis وأنواع Anopheles المختلفة. يعتمد تحسين فعالية هذه التكنولوجيا على زيادة قدرة الشرانق الذكور المنتجة في وقت معين ، والتي يمكن تحقيقها من خلال التلاعب الجيني أو الانتقاء الاصطناعي ، وتحسين القدرة التنافسية للذكور ، والتي يمكن تحقيقها عن طريق زيادة الفحولة أو الخصوبة أو طول العمر.
في نهاية المطاف ، برامج SIT ليست رصاصة فضية للسيطرة على البعوض. إنها بدلا من ذلك أداة في مجموعة من تقنيات التحكم الأخرى ، مثل برامج IVM ، التي تعوض عن نقاط الضعف بين التقنيات. فعلى سبيل المثال، في حين أن المكافحة الكيميائية توفر مراقبة سريعة ورخيصة، فإنها تعزز أيضا تطور المقاومة والوفيات غير المستهدفة؛ وعلى الرغم من أن تقنية الحشرة العقيمة خاصة بالأنواع ومن غير المحتمل أن تولد مقاومة، يجب إنتاج ذكور تقنية الحشرة العقيمة وإطلاقها إلى الأبد للسيطرة على المجموعات المهاجرة من خارج منطقة مكافحة النواقل.

يتسبب انتقال مسببات الأمراض التي ينقلها البعوض إلى البشر في ملايين حالات المرض والوفيات كل عام في جميع أنحاء العالم. وفي غياب لقاحات فعالة ومعتمدة للأمراض التي ينقلها البعوض، مثل زيكا أو حمى الضنك، فإن إحدى أكثر الطرق فعالية للحد من انتقال العدوى هي الحد من أسراب البعوض الناقل للأمراض. ومن المثير للقلق أن عددا متزايدا من أنواع البعوض، التي تستهدفها تقليديا مبيدات الآفات، تظهر مستويات متزايدة من مقاومة مبيدات الآفات1. في الوقت نفسه ، قامت الوكالات الحكومية بإلغاء تسجيل أو حظر مبيدات الآفات المعتمدة سابقا ، ويتم تطوير عدد قليل من تدابير المكافحة الكيميائية الجديدة والفعالة 2,3. وقد حفزت هذه المجموعة من العقبات التي تعترض مكافحة البعوض على استكشاف تقنيات غير كيميائية بديلة للحد من أعداد البعوض.
تمثل بعض أنواع البعوض تحديات لمكافحة قضايا المقاومة وتسجيل مبيدات الآفات. Aedes aegypti (L.) هو بعوضة بارزة ناقلة للأمراض يصعب للغاية مكافحتها من خلال الإدارة التقليدية المتكاملة للناقلات بسبب الموائل المحيطة بالمنزل الغامضة التي يستغلها هذا النوع للنمو غير الناضج والراحة البالغة 4,5. وتشمل التحديات المتعلقة باستغلال الموائل الخفية حول المساكن صعوبة الوصول إلى هذه المواقع باستخدام تقنيات رش مبيدات الآفات، فضلا عن احتمال عدم قبول الجمهور للوصول المتكرر إلى الممتلكات الخاصة لوكالات مكافحة ناقلات الأمراض في مجال الصحة العامة لإجراء أنشطة المراقبة والمكافحة المكثفة الحاسمة للإدارة المتكاملة الفعالة للنواقل لهذا النوع.
لحسن الحظ ، يتم تطبيق SIT ، وهو نهج أثبت نجاحه في السيطرة الدائمة على أنواع الحشرات الأخرى الصعبةللغاية 6 ، على مشكلة Aedes aegypti في سلسلة رائدة من التجارب والتجارب التشغيلية في سانت أوغسطين ، فلوريدا (KJL ، RLA ، SCB بيانات غير منشورة). تم تطبيق تقنية الحشرة العقيمة على مجموعة من أنواع الحشرات ، بما في ذلك البعوض ، وتم استعراضها بعمق 7,8. تستفيد تقنية الحشرة العقيمة من الإطلاق الجماعي للذكور التي تربى في مستعمرات والتي يتم تعقيمها ، على سبيل المثال ، عن طريق التعرض للإشعاع المؤين أو المواد الكيميائية للتغلب على اختيار الشريك للسكان الطبيعيين للإناث. الذكور المعقمة التي تتزاوج مع الإناث البرية تجعل البيض عقيما بسبب الأضرار التي لحقت بالأمشاج الذكور ، وإذا كانت موجودة بأعداد كافية ، يمكن نظريا تحطم الزاعجة المصرية الطبيعية.
بدأ برنامج تقنية الحشرة العقيمة لمحاولة الحد من أعداد الزاعجة المصرية في منطقة حضرية في ساحل المحيط الأطلسي في فلوريدا حيث أعيد استعمار هذا النوع مؤخرا ويتوسع ويشكل خطرا على الصحة العامة لانتقال فيروسات مثل زيكا أو حمى الضنك أو الشيكونغونيا. لتعظيم إمكانية التوافق مع الإناث البرية ، تم إنشاء مستعمرة جديدة باستخدام الزاعجة المصرية التي يتم صيدها من السكان المستهدفين لإنتاج الذكور للبرنامج9. استند هذا إلى فرضية أن الذكور المشتقة محليا والتي يتم تربيتها في المستعمرات ستكون أكثر عرضة للتنافس مع الذكور البرية المحلية للتزاوج مع الإناث البرية المحلية. ولكي تكون تقنية الحشرة العقيمة فعالة، لا يلزم فقط وجود أعداد هائلة من الذكور العقيمة في المنطقة المستهدفة، ولكن يجب أن تكون أيضا قادرة على مغازلة إناث البعوض البرية المحلية والتزاوج معها بشكل فعال.
تم إجراء سلسلة من التجارب لتحديد العدد الأمثل للذكور العقيمة التي يجب إطلاقها (KJL ، RLA ، SCB البيانات غير المنشورة) بالإضافة إلى الجرعات المثلى من الإشعاع التي من شأنها أن تجعل الذكور عقيما دون التدخل في البقاء على قيد الحياة أو السلوك أو القبول من قبل الإناث البرية (KJL ، RLA ، SCB البيانات غير المنشورة). هذه البيانات قادمة في منشورات الحلفاء من هذه المجموعة ، ولكن يتم التقاط بعض هذه النتائج في هذا البروتوكول أيضا ويمكن استخدامها كنقطة انطلاق لبرامج مكافحة SIT Aedes aegypti الجديدة في أماكن أخرى. تعمل هذه الأنواع باستمرار على توسيع نطاقها ، وتظهر برامج SIT وعدا كبيرا بأن تكون حلولا فعالة من حيث التكلفة وطويلة الأجل للسيطرة على هذه المجموعة. الهدف من هذا البروتوكول هو إنتاج بعوضة الزاعجة المصرية المعقمة والذكور والمرباة في المستعمرات لإطلاقها بشكل منهجي في المناطق الخارجية لتعطيل دورات التكاثر الطبيعية لمجموعات الزاعجة المصرية المحلية في برنامج تشغيلي لمكافحة ناقلات الصحة العامة.
في حين تم نشر بروتوكولات وتدفقات عمل مماثلة لإنتاج ذكور Aedes aegypti المعدلة وراثيا وسير عمل الإنتاج ل Aedes SIT ، أو تم نشر برامج عدم التوافق القائمة على Wolbachia في مكان آخر ، يوضح هذا البروتوكول كيف تم تكييف البروتوكولات الحالية لإنتاج Aedes aegypti ، وفصل وتشعيع الشرانق الذكور ، ووضع علامات على الذكور البالغين وتعبئتها ، وشحنها إلى موقع الإصدار لهذا البرنامج 9 ، 10،11،12،13،14،15،16،17،18. قد لا يكون عنصر الوسم في هذا البروتوكول مطلوبا في برنامج SIT التشغيلي الناضج ؛ ومع ذلك ، فقد تم تضمينه هنا لأنه طريقة واحدة لمراقبة فعالية ومراقبة جودة العملية برمتها في السنوات الأولى من إنشاء برنامج SIT. عادة ما يتم تشغيل برامج مكافحة البعوض من قبل السلطات المحلية ، لذلك يمكن أن تختلف اختلافا كبيرا في العديد من جوانب تنظيمها من الحجم وقاعدة التمويل إلى ضبط تكتيكات المكافحة لتحقيق أقصى قدر من النجاح المحلي. وبالتالي ، ينبغي تقييم البروتوكول الموصوف هنا للتأكد من توافقه مع الموارد المتاحة.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1-1/8&#34; wrench (1&#34; (1 inch) = 2.54 cm)</td>
			<td>Craftsman</td>
			<td>CMMT44707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/2 pint cardstock cup (1/2 pint = 236.5 mL)</td>
			<td>Science Supplies WLE corp</td>
			<td>1/2 pint</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4&#34; tubing - tygon</td>
			<td>Hudson Extrusions</td>
			<td>LLDPE1/8 X 1/4 BLK</td>
			<td>to attach to CO2 gas regulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/8&#34; brass barb w/ MIP connection</td>
			<td>B&#38;K</td>
			<td>BHB-85NLB</td>
			<td>to attach to CO2 gas regulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 mL graduated plastic beakers with handle</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1223-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3000 mL graduated plastic beakers with handle</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1223-3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adult large cage</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>1450D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator vials</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>2809V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine liver powder</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>290039601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brewers yeast</td>
			<td>MP Biomericals</td>
			<td>02903312-CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 regulator</td>
			<td>Randor</td>
			<td>64003038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 tank (20# canister)</td>
			<td>Praxair</td>
			<td>CDBEVCARB20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection basin</td>
			<td>Treasure Gurus</td>
			<td>KI-ENAMELBOWL</td>
			<td>for separator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton balls - large</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-456-883</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deli cups w/lids - 470 mL</td>
			<td>Pactiv DELItainer</td>
			<td>PCTYSD2516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deli cups w/lids - 1900 mL</td>
			<td>Berry Global</td>
			<td>T60764</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DoseReader 4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>ND0.5 and ND1.0 QA Filter Set standards</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dosimetry film</td>
			<td colspan="2">Far West Technology, Inc.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AP10045S0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flashlight aspirator</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>2809D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - fine featherweight</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>4748 or 4750</td>
			<td>featherweight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GAFchromic</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>radiochromic film</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gammator M</td>
			<td>Radiation Machinery Corporation, Parsippany, NJ</td>
			<td></td>
			<td>Cesium-137 irradiator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hand held mechanical aspirator</td>
			<td>Clarke Mosquito</td>
			<td>13500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lambskin condoms</td>
			<td>Trojan</td>
			<td>Naturalamb</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large CO2 chamber</td>
			<td>Sterilite</td>
			<td colspan="2">Walmart #&#160;568789514</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Larval rearing pans</td>
			<td>Blue Ridge Thermoforming</td>
			<td>&#160;01-FG-400-3N-ABS</td>
			<td>Dimensions: 22.375 x 17.5 x 3 (inches)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnets - 20# pull</td>
			<td>Master magnetics</td>
			<td>MHHH20BX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marking dye</td>
			<td>Dayglo</td>
			<td>ECO-11</td>
			<td>Aurora Pink</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marking dye</td>
			<td>Dayglo</td>
			<td>ECO-17</td>
			<td>Saturn Yellow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh</td>
			<td>Falk</td>
			<td></td>
			<td>T301</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasture pipettes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>02-708-006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes - large</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>25384-090 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes - small (60 mm x 15 mm)</td>
			<td>Fisher Brand</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pupa separator</td>
			<td>J.W. Hock</td>
			<td>1512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red rubber hose</td>
			<td>Welch</td>
			<td>331040-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Release containers</td>
			<td>Science Supplies WLE corp</td>
			<td>1 gallon</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber bands - cross #19</td>
			<td>Alliance</td>
			<td>ALL37196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber bands - latitude #64</td>
			<td>Skillcraft</td>
			<td>NSN0589974</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>H-4737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seed germination paper - Heavy stock 76#</td>
			<td>Anchor Paper</td>
			<td>#76</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shipping coolers- 16 x 13 x 12.5&#34;</td>
			<td>MrBoxonline.com</td>
			<td colspan="2">Husky Foam Cooler kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sieve #20</td>
			<td>Advantech</td>
			<td>20BS8F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sieve #30</td>
			<td>Advantech</td>
			<td>30BS8F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small cage - Bug Dorm</td>
			<td>MegaView</td>
			<td>Bug Dorm-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small CO2 chamber</td>
			<td>Mainstays</td>
			<td colspan="2">Walmart #&#160;562922221</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Souffle cup lid</td>
			<td>SOLO</td>
			<td>41165277456</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Souffle cups - 4 oz (1 oz = 29.6 mL)</td>
			<td>SOLO</td>
			<td>41165024104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sponge</td>
			<td>ocelo</td>
			<td>MMM7274FD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Squeeze bottle</td>
			<td>Dynalon</td>
			<td>3UUP6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereoscope</td>
			<td>Meiji Techno</td>
			<td>EMZ-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stockinette</td>
			<td>BSN Medical</td>
			<td>30-1006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>extruded polystyrene foam</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropical fish flake food</td>
			<td>Tetra</td>
			<td>4.52 pound</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaccum chamber - desiccator</td>
			<td>BelArt</td>
			<td>T9FB892757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh boats</td>
			<td>Globe Scientific</td>
			<td>3621</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparing irradiated and marked male aedes aegypti mosquitoes for release in an operational sterile insect technique program

تعتمد مكافحة الأمراض البشرية مثل حمى الضنك وزيكا والشيكونغونيا على مكافحة نواقل الأمراض ، بعوضة الزاعجة المصرية ، لأنه لا توجد وقاية. ويمكن أن تعتمد مكافحة البعوض الناقل على المواد الكيميائية المطبقة على المراحل غير الناضجة ومرحلة البلوغ، والتي يمكن أن تسهم في وفيات غير المستهدفين، والأهم من ذلك، أن تؤدي إلى مقاومة المبيدات الحشرية في النواقل. تقنية الحشرة العقيمة (SIT) هي طريقة للسيطرة على مجموعات الآفات من خلال إطلاق الذكور البالغين المعقمة التي تتزاوج مع الإناث البرية لإنتاج ذرية غير قابلة للحياة. تصف هذه الورقة عملية إنتاج ذكور عقيمة لاستخدامها في برنامج تشغيلي لمكافحة بعوض الزاعجة المصرية . فيما يلي الخطوات المستخدمة في البرنامج بما في ذلك تربية مستعمرة والحفاظ عليها ، وفصل الشرانق من الذكور والإناث ، وتشعيع الذكور البالغين ووضع علامات عليها ، وشحن ذكور الزاعجة المصرية إلى موقع الإطلاق. كما تمت مناقشة المحاذير الإجرائية وقيود البرنامج والأهداف المستقبلية.

تتكون تربية البعوض اليقظة والكافية من توافر متوازن للذكور والإناث في أقفاص المستعمرات ، والحفاظ على محلول السكروز الطازج والعسل ، وتغذية الدم عالية الجودة باستمرار. ستوفر هذه الظروف صفائح بيض معبأة بكثافة مثالية للاستخدام في أحواض تربية اليرقات SIT. التخزين والاستخدام المناسبان لأوراق البيض المجففة ، مثل وضع العلامات المنهجية لتسهيل الاستخدام من الأقدم إلى الأحدث ، سيدعم الفقس الموحد في جميع المقالي. يمكن أن يؤدي ملء جميع أحواض تربية اليرقات بالماء قبل الفقس إلى تقليل الوقت الذي تكون فيه صفائح البيض في حاويات الفقس وتعزيز النمو الصحي. تتطلب صيانة أحواض اليرقات من الفقس إلى التشرنق مشاركة دقيقة من قبل أفراد المستعمرة حيث قد تحتاج بعض المقالي إلى طعام أكثر أو أقل أو مياه إضافية اعتمادا على مراحل التطور والمتغيرات البيئية. إذا كانت هناك مشكلات في مرحلة التطور بحلول اليوم المحدد لفصل جنس العذراء ، فيجب إجراء التعديلات في وقت مبكر من العملية مثل الفقس مبكرا أو لاحقا ، أو تعديل الطعام ، أو تغيير درجة حرارة الحاضنة.
لا تجعل عملية التربية في هذا البروتوكول جميع البيض يفقس في الوقت المناسب ليتطور إلى خادرة يمكن تشعيعها واستخدامها لأغراض المكافحة. ما بين 20 و 50٪ من البعوض الذي يتم تربيته في المستعمرة سيظل يرقات بحلول الوقت الذي تحتاج فيه الشرانق إلى الانفصال. ومع ذلك ، لا يتم تبديد هذه اليرقات ، ولكن يسمح لها بالنضوج لمدة 24 ساعة لتقديم الشرانق الإضافية التي يمكن دمجها مع الشرانق الإناث من فصل اليوم السابق وإعادة تدويرها مرة أخرى في أقفاص المستعمرات. في أقفاص المستعمرة ، سيسمح للعذارى بالنضوج لتصبح بالغين ، والتزاوج ، وتغذية الدم ، وإنتاج البيض الذي يدعم مشروع SIT.
يجب أن يحدث فصل الشرانق ، وصب الشرانق في أطباق بتري ، والإشعاع ، ووضعها في أقفاص احتجاز البالغين بعد التشعيع في يوم واحد ؛ وبالتالي ، ينبغي تخصيص وقت كاف لمعالجة جميع الخطوات بشكل مريح. يجب أن يتم تجميع وإعداد حاويات الإطلاق قبل عملية وضع العلامات. عند إرجاع صناديق الشحن من موقع الإطلاق ، يجب فحص حاويات الإطلاق وإعدادها لاستخدامها التالي. سيؤدي التخلص من كرات القطن المبللة ، وتهوية حاويات الإطلاق الرطبة ، وتنظيف أطباق بتري ، واستبدال الشبكة ، وإزالة الأربطة المرنة من الحاوية ، أثناء عدم استخدامها ، إلى إطالة عمر حاويات الإطلاق بشكل كبير.
نظرا للواقع العالمي لوباء COVID-19 الفيروسي ، تم تعديل هذا البروتوكول الذي عادة ما يكون عملية متعددة الأشخاص ليكون قابلا للتنفيذ بواسطة شخص واحد يعمل بمفرده في المختبر لكل خطوة. الخطوات في العملية التي يعوقها سيناريو شخص واحد هي خطوات صيانة الجنس ووضع العلامات والوزن وتربية المستعمرات. يجب أن يكون فصل الشرانق حسب الجنس من قبل شخص واحد كافيا إذا كانت هناك فواصل متعددة تعمل في وقت واحد في غرف مختلفة. في حالة الوباء حيث يحدث التباعد الاجتماعي في مكان العمل ، يلزم تجهيز محطات متعددة لإكمال الخطوات من الجنس إلى التعبئة. اعتمادا على سرعة المشغل ، يستغرق شخص واحد ~ 4 ساعات لممارسة الجنس 15000 بعوضة ثم 1-2 ساعة أخرى لوضع علامة عليها ووزنها وتعبئتها. يقلل سيناريو شخصين من الوقت الذي يتم فيه تخدير البعوض لوضع العلامات ويقلل من وقت العمل الإجمالي. ومع ذلك ، حتى في سيناريو شخصين ، فإن تخصيص 2.0 غرام كاملة من البعوض لكل قفص إطلاق يمكن أن يكون صعبا بسبب وقت العمل المحدود أثناء تخدير البعوض. على الرغم من أن عملية تنظيف وإعداد مواد تربية اليرقات والبالغين تستغرق وقتا طويلا للغاية وتتطلب عمالة مكثفة ، إلا أنه يمكن تقسيمها بحيث يمكن للمشغلين الفرديين العمل بشكل مستقل وآمن أثناء الوباء.
إن إطلاق سراح ذكور الزاعجة المصرية البالغة والمعلمة والمشععة يقع خارج نطاق هذا البروتوكول ولكنه معروض هنا باختصار. وتبدأ عملية إطلاق ذكور البعوض الموسومة والمشععة بتحديد توزيع موحد لإطلاق حاويات الإطلاق استنادا إلى الأوزان (وبالتالي الأعداد المستنبطة من الذكور العقيمة)، كما ورد في الجدول 3. بعد تسليم الشحنات إلى منطقة مكافحة النواقل ، يتم فتح الصناديق وتقييم حاويات الإطلاق بحثا عن أي مشاكل تتعلق بالوفيات أو حالة حاويات الإطلاق. ثم يسمح للبعوض الموجود في حاويات الإطلاق بالتأقلم مع درجة الحرارة والرطوبة المحيطة لمدة 1-2 ساعة قبل نقله إلى منطقة المعالجة. يتم تحديد مواقع الإطلاق في منطقة المعالجة بعد الترصد المكثف للبؤر الساخنة للمجموعات البرية من الزاعجة المصرية. ويوازن توقيت الإطلاقات وتواترها وكثافتها من خلال الخصائص الحيوية للأنواع فضلا عن الأرصاد الجوية والدعم العام وقدرات التربية المختبرية.
نظرا لمطابقة حاويات الإطلاق المحددة مع مواقع إطلاق معينة ، يجب فحص الملصق قبل فتح حاوية الإطلاق عن طريق قطع الشبكة الموجودة في الأعلى ، مما يسمح للمشغل بتشويه الشبكة بحيث يمكن لجزء من الذكور الهروب. تتكرر طريقة الإطلاق الجزئي هذه في كل نقطة إطلاق مخصصة للحاوية حتى يتم إطلاق جميع الذكور التي تطير بحرية. ثم تتكرر هذه العملية لكل حاوية إطلاق في موقع الإطلاق المخصص لها حتى تتم معالجة جميع الحاويات. اختياريا ، بعد إطلاق البعوض ، يمكن جمع أي بعوض ميت أو معاق لم يغادر بحرية في أطباق بتري ووضع علامات عليها ليتم عدها يدويا أو وزنها لتصحيح العدد المقدر الذي تم إطلاقه. ويجرى ترصد مستمر وواسع النطاق للمراحل البالغة والبيضية وغير الناضجة من الزاعجة المصرية البرية في المنطقة المستهدفة، وربما في مواقع المراقبة غير التدخلية، لتقييم فعالية عملية تقنية الحشرة العقيمة.

Watch this Scientific Journal Video about Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program at JoVE.com

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

تستخدم تقنية الحشرة العقيمة (SIT) للسيطرة على مجموعات محددة ومهمة طبيا من البعوض قد تكون مقاومة للمكافحة الكيميائية. هنا ، نصف طريقة للتربية الجماعية وإعداد ذكور البعوض العقيمة للإفراج عنها في برنامج تشغيلي لتقنية الحشرة العقيمة يستهدف بعوضة الزاعجة المصرية .

تحضير ذكور بعوضة الزاعجة المصرية المشععة والموسومة للإفراج عنها في برنامج تقنية الحشرة العقيمة التشغيلية

The control of such human diseases as dengue, Zika, and chikungunya relies on the control of their vector, the Aedes aegypti mosquito, because there is no ...

القيمة الفريدة لهذا البروتوكول هي أن اثنين من الموظفين الذين يستخدمون معدات متاحة بسهولة في مساحات المختبر الصغيرة يمكنهم إنتاج ما يكفي من البعوض المعقم لدعم برنامج SIT التشغيلي الذي تبلغ مساحته 50 فدانا. إن كفاءة هذه التقنية وتكلفتها المنخفضة يجعلانها سهلة المنال ومستعصية حتى بالنسبة لمناطق مكافحة البعوض الصغيرة لزيادة برنامجها المتكامل لمكافحة النواقل. سيوضح الإجراء أنا وباربرا باير ، فنيي مختبرات العلوم البيولوجية من وحدة الأبحاث.لتربية Aedes aegypti البالغة من الشرانق ، قم بإعداد أقفاص تربية من الألومنيوم قابلة للطي مقاس 60 × 60 سم مع غربلة شبكية من الألياف الزجاجية بحجم ثقب 0.84 × 0.84 ملم ، وكم مخزون يمكن الوصول إليه على جدار عمودي واحد لكل قفص. ضع كوبا بلاستيكيا سعة 1،900 ملليلتر مع عذارى الزاعجة المصرية بنسبة جنس واحد إلى واحد في كل قفص تربية واربط الكم مغلقا ، واترك الأكواب في أقفاص للإغلاق لمدة أربعة أيام تقريبا عند 28 إلى 30 درجة مئوية أكبر من 50٪ رطوبة نسبية في دورة 12:12 أو 14:10 ضوء: مظلمة حتى لا يظهر المزيد من البالغين. بعد 24 ساعة من وضع الشرانق في أقفاص التربية ، ضع وعاءا يحتوي على محلول سكروز بنسبة 10٪ مع فتيل إسفنجي في كل قفص وقم بتعليق إسفنجة 10 × 2 سم منقوعة في العسل من خطاف سلكي لتوفير الترطيب والتغذية على التوالي للبعوض البالغ.بعد 48 إلى 72 ساعة من ظهور معظم البالغين كل يومين إلى ثلاثة أيام خلال الأسابيع الثلاثة إلى الأربعة التالية بعد ذلك ، املأ الواقي الذكري من جلد الخروف ب 50 إلى 100 ملليلتر من دم البقر المنقص لكل قفص ، وقم بتدفئة الواقي الذكري إلى حوالي 37 درجة مئوية في حمام الماء الساخن. بعد التربيت بعناية على الواقي الذكري بالمنشفة ، ضع الواقي الذكري المجفف جزئيا في أطباق بتري مبطنة بالورق داخل الأقفاص لمدة 30 إلى 60 دقيقة. بعد 48 إلى 72 ساعة من كل تغذية دموية ، ضع كوبا من وضع البيض سعة 1،900 ملليلتر يحتوي على 800 مل من ماء العذراء المصفى ومزود بورقة من 8 إلى 10 × 30 سم من ورق إنبات البذور المجهز على طول المحيط الداخلي للكوب في كل قفص.لتربية يرقات Aedes aegypti من البيض ، استخدم ورقة وضع البيض مع 5،000 إلى 10،000 بيضة موجودة وقطع مقطع من ثلاثة إلى سبعة سنتيمترات عموديا على خط وضع البيض. ضع القطعة في وعاء جديد سعة 460 ملليلتر نصف مملوء بماء الصنبور ورشة من رقائق طعام السمك المسحوق. قم بتغطية الحاوية وتحريكها بقوة لمدة دقيقة واحدة على الأقل قبل صب المحتويات بالكامل في مقلاة لتربية اليرقات تحتوي على ثلاثة لترات من ماء الصنبور و 50 ملليلتر من الملاط البني.ضع علامة على المقلاة بتاريخ البدء ومعلومات السلالة وجدول التغذية. بمجرد الوصول إلى نسبة العتبة التقريبية لليرقات في أحواض اليرقات ، صب محتويات كل مقلاة من خلال غربال بحجم 20 إلى 40 واستخدم زجاجة ضغط من ماء الصنبور لغسل الشرانق واليرقات من الغربال إلى دورق بلاستيكي متدرج سعة ثلاثة لترات. لفصل الشرانق الذكور عن اليرقات والشرانق الأنثوية ، قسم محتويات كل كأس زجاجية بين حاويات بلاستيكية متعددة سعة 1.9 لتر وضع حاوية تجميع ضحلة صلبة سعة أربعة لترات أسفل السد عند قاعدة فاصل العذراء.املأ كأسين بلاستيكيتين مدرجتين سعة ثلاثة لترات بحوالي ثلاثة أرباع مملوءة بماء الصنبور واسكب الماء عبر الفراغ بين الألواح الزجاجية للفاصل أثناء ضبط المقابض العلوية والسفلية للسماح للماء بالتدفق باستمرار عبر الفاصل. بمجرد تجمع المياه الراكدة بالتساوي على ارتفاع 1.25 سم تقريبا من قاعدة الألواح ، حدد مواضع البداية عند المقابض السفلية للفاصل بشريط لاصق ، وابدأ في صب حاويات الشرانق واليرقات في الفاصل مع تدوير المقابض السفلية باستمرار بطريقة عكس اتجاه عقارب الساعة من سنتيمتر إلى سنتيمترين من مواضع البداية. عندما تغسل معظم اليرقات أو جميعها عبر السد إلى حاوية التجميع ، أوقف تدفق المياه مؤقتا واستخدم غربالا رقم 30 لتنظيف حاوية تجميع اليرقات.عندما تتم إزالة جميع اليرقات ، صب الماء واضبط المقابض مرة أخرى للسماح بتدفق الشرانق الذكور في حاوية التجميع. ثم صب الشرانق الذكور من الحاوية في غربال رقم 20 واستخدم زجاجة ضغط لتر واحد من ماء الصنبور لغسل الشرانق من الغربال في حاوية منفصلة سعة 1.9 لتر. عندما يتم جمع كل الشرانق الذكور ، صب الماء واضبط المقابض للسماح بجمع الشرانق الأنثوية.استخدام الغربال رقم 20 لنقل الشرانق الأنثوية إلى حاوية جديدة سعة 1.9 لتر كما هو موضح للتو. ثم صب الماء واضبط المقابض مرة أخرى حتى يتم طرد جميع البعوض غير الناضج من الفاصل. صفي الشرانق الذكور المجمعة بغربال واغسل البراز في دورق متدرج سعة لتر واحد بأقل قدر ممكن من الماء.صب الشرانق بعناية في أطباق بتري مبطنة بورق ترشيح رطب في طبقة واحدة. قم بإزالة الماء الراكد من قاع طبق بتري باستخدام ماصة مرعى طازجة سعة ثلاثة ملليلتر لمنع حركة العذراء أثناء العمل. قم بتجميع أطباق وأكوام بتري قبل إغلاقها داخل كيس قابل لإعادة الإغلاق سعة 3.8 لتر ليناسب غرفة التشعيع.لتحديد الدفعات الكمية من ذكور البعوض البالغة المشععة ، قم بإزالة أي مصادر تغذية من قفص التربية ووضع قفصا واحدا في غرفة كبيرة لثاني أكسيد الكربون لمدة خمس إلى سبع دقائق ، مما يؤدي إلى طرق جوانب الحاوية لإزاحة أي بعوض يتشبث بالجدران. في نهاية فترة التعرض ، انقل البعوض إلى قنينة شفاط وقم بتخدير البعوض مرة أخرى قبل هز البعوض في سطح عمل مغطى بورق أبيض. قم بشفط جميع الذكور بعناية من سطح العمل إلى قنينة جديدة وكرر التعرض والجمع حتى يتم جمع جميع الذكور البالغين من جميع أقفاص التربية.في مرحلة ما أثناء عملية فرز الجنس ، قم بإنشاء قارورة تحتوي على 25 بعوضة ذكر بالغ فقط. عندما يتم جمع جميع الذكور ، قم بوزن كل حقير من البعوض في قارب وزن قطراني على ميزان ، واسكب البعوض المسحوق بسرعة في حاوية بطاقات سعة 240 ملليلتر تحتوي على 50 ملليغرام صبغة وسم. قم بإمالة الحاوية وتدويرها مرة واحدة كاملة في اتجاه عقارب الساعة وعكس اتجاه عقارب الساعة حتى يتم تغطية جميع البعوض برفق وصب البعوض في قارب وزن جديد ، ثم قم بطي قارب الوزن إلى النصف للسماح بتوجيه البعوض عبر غلاف المخزون إلى حاوية الإطلاق.عندما تتم إضافة ما يقرب من جرامين من ذكور البعوض إلى حاوية الإطلاق ، قم بربط غلاف المخزون مغلقا ووضع علامة على شريط الملصقات على إطار حاوية الإطلاق بلون الصبغة ورقم الحاوية والوزن الإجمالي للبعوض. في هذه التجربة التمثيلية لتربية البعوض والإشعاع والتسويق من الذكور Aedes aegypti ، تم جمع جرامين من ذكور البعوض البالغ من ثلاثة أقفاص تربية جنبا إلى جنب مع قارورتين من 25 ذكرا من قفصين للسماح بحساب متوسط الوزن لكل بعوضة. تم التخلص من 25 أنثى في المجموع من اثنتين من الدفعات.وتعد التغذية في الوقت المناسب والقائمة على الملاحظة خلال أسبوع تربية اليرقات أمرا بالغ الأهمية لتوليد الشرانق المتطورة جيدا للفصل. هذا يولد تمييزا واضحا بين الذكور والإناث مما يؤدي إلى انخفاض حدوث الإناث في خطوات الوسم. إلى جانب استخدامها في برامج تقنية الحشرة العقيمة التشغيلية ، يمكن أيضا استخدام هذه الذكور العقيمة على نطاق واسع في التجارب التي تبحث في منافسة التزاوج ، والبقاء على قيد الحياة ، وتشتت الأشعة مقارنة بالذكور البرية غير المشععة.يسمح لنا تعديل التقنية لتشمل إناث البعوض بالتحقيق في تأثير الإطلاق غير المقصود للإناث المشععة فيما يتعلق بالخصوبة وكفاءة النواقل.

Research

JoVE Journal

Biology

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes

Microinjection الجنين بعوض ألف الحصول على البعوض المعدلة وراثيا

In this video, Nijole Jasinskiene demonstrates the methodology employed to generate transgenic Aedes aegypti mosquitoes, which are vectors for dengue ...

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes (A. aegypti) and Infection Phenotype Determination

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes A. aegypti and Infection Phenotype Determination

بروتوكول للعدوى حمى الضنك في البعوض (بعوض ألف) ، وتحديد النمط الظاهري العدوى

The purpose of this procedure is to infect the Aedes mosquito with dengue virus in a laboratory condition and examine the infection level and dynamic of ...

Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes

تشريح الغدد اللعابية والمعي المتوسط ​​من AE. بعوض البعوض

The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for pathogens such as Plasmodium parasites and Dengue viruses. This video protocol ...

Building a Better Mosquito: Identifying the Genes Enabling Malaria and Dengue Fever Resistance in A. gambiae and A. aegypti Mosquitoes

بناء عالم أفضل البعوض : تحديد الجينات تمكين الملاريا وحمى الضنك حمى المقاومة في الغامبية ألف وألف البعوض بعوض

In this interview, George Dimopoulos focuses on the physiological mechanisms used by mosquitoes to combat Plasmodium falciparum and dengue virus ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

رني ضربة قاضية بوساطة الجينات و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; فحص إدرار البول في الإناث البالغات<em&gt; الزاعجة المصرية</em&gt; البعوض

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

An Experimental and Bioinformatics Protocol for RNA-seq Analyses of Photoperiodic Diapause in the Asian Tiger Mosquito, Aedes albopictus

An Experimental and Bioinformatics Protocol for RNA-seq Analyses of Photoperiodic Diapause in the Asian Tiger Mosquito, Aedes albopictus

والتجريبية وبروتوكول المعلوماتية الحيوية لتحليل-RNA وما يليها من دور التعرض للضوء الكمون في النمر الآسيوي البعوض،<em&gt; بحمى الضنك</em

Photoperiodic diapause is an important adaptation that allows individuals to escape harsh seasonal environments via a series of physiological changes, ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

الفسيولوجية تسجيلات وRNA تسلسل الزوائد ذوقي من البعوض الحمى الصفراء<em&gt; الزاعجة المصرية</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

الجسم الدهون نظام الثقافة الجهاز في بعوض الزاعجة المصرية، ناقل للفيروس Zika

The insect fat body plays a central role in insect metabolism and nutrient storage, mirroring functions of the liver and fat tissue in vertebrates. Insect ...

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

الحفاظ على بعوض الزاعجة المصرية "البعوض مصابة" ولبخيه

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

الإنتاجية المتوسطة فحص فحوصات لتقييم الآثار على Ca2 +-إشارات ورد فعل أكروسومي في الحيوانات المنوية البشرية

Ca2+-signaling is essential to normal sperm cell function and male fertility. Similarly, the acrosome reaction is vital for the ability of a human sperm ...