Name: preparing irradiated and marked male aedes aegypti mosquitoes for release in an operational sterile insect technique program
Uploaded: 2021-03-12T14:00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program at JoVE.com

אנו מודים לד"ר ר.-ד. Xue, C. Bibbs, W. Qualls, ו- V. Aryaprema ממחוז בקרת היתושים אנסטסיה, סנט אוגוסטין, פלורידה, לשותפות בפיתוח תוכנית SIT ותובנות מומחים על שחרור מבצעי יעיל של Aedes aegypti זכר סטרילי. מחקר זה נתמך על ידי USDA-ARS ומשרד החקלאות והשירותים לצרכן של פלורידה (FDACS). אזכור שמות מסחריים או מוצרים מסחריים בפרסום זה נועד אך ורק לצורך מתן מידע ספציפי ואינו מרמז על המלצה או אישור של USDA או FDACS.

<ol>
	<li>Moyes, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contemporary+status+of+insecticide+resistance+in+the+major+Aedes+vectors+of+arboviruses+infecting+humans.">Contemporary status of insecticide resistance in the major Aedes vectors of arboviruses infecting humans.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 11 (7), 0005625 (2017).</li><li>Baldacchino, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+methods+against+invasive+Aedes+mosquitoes+in+Europe:+a+review.">Control methods against invasive Aedes mosquitoes in Europe: a review.</a> Pest Management Science. 71 (11), 1471-1485 (2015).</li><li>Burkett, D. A., Cope, S. E., Strickman, D. A., White, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Deployed+Warfighter+Protection+(DWFP)+Research+Program:+Developing+new+public+health+pesticides,+application+technologies,+and+repellent+systems.">The Deployed Warfighter Protection (DWFP) Research Program: Developing new public health pesticides, application technologies, and repellent systems.</a> Journal of Integrated Pest Management. 4 (2), 1-7 (2013).</li><li>Harwood, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+Aedes+aegypti+in+cryptic+environments+with+manually+carried+ultra-low+volume+and+mist+blower+pesticide+applications.">Controlling Aedes aegypti in cryptic environments with manually carried ultra-low volume and mist blower pesticide applications.</a> Journal of the American Mosquito Control Association. 32 (3), 217-223 (2016).</li><li>Morrison, A. C., Zielinski-Gutierrez, E., Scott, T. W., Rosenberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+challenges+and+proposing+solutions+for+control+of+the+virus+vector+Aedes+aegypti.">Defining challenges and proposing solutions for control of the virus vector Aedes aegypti.</a> PLoS Medicine. 5 (3), 68 (2008).</li><li>Klassen, W., Curtis, C. F., InDyck, V. A., Hendrichs, J., Robinson, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+the+sterile+insect+technique.">History of the sterile insect technique.</a> Sterile insect technique: principles and practice in area-wide integrated pest management. , 3-36 (2005).</li><li>Alphey, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterile-insect+methods+for+control+of+mosquito-borne+diseases:+an+analysis.">Sterile-insect methods for control of mosquito-borne diseases: an analysis.</a> Vector Borne and Zoonotic Diseases. 10 (3), 295-311 (2010).</li><li>Dame, D. A., Curtis, C. F., Benedict, M. Q., Robinson, A. S., Knols, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Historical+applications+of+induced+sterilisation+in+field+populations+of+mosquitoes.">Historical applications of induced sterilisation in field populations of mosquitoes.</a> Malaria Journal. 8, (2009).</li><li>Bond, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+irradiation+dose+to+Aedes+aegypti+and+Ae.+albopictus+in+a+sterile+insect+technique+program.">Optimization of irradiation dose to Aedes aegypti and Ae. albopictus in a sterile insect technique program.</a> PloS One. 14 (2), 0212520 (2019).</li><li>Bourtzis, K., Lees, R. S., Hendrichs, J., Vreysen, M. J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=More+than+one+rabbit+out+of+the+hat:+Radiation,+transgenic+and+symbiont-based+approaches+for+sustainable+management+of+mosquito+and+tsetse+fly+populations.">More than one rabbit out of the hat: Radiation, transgenic and symbiont-based approaches for sustainable management of mosquito and tsetse fly populations.</a> Acta Tropica. 157, 115-130 (2016).</li><li>Carvalho, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+production+of+genetically+modified+Aedes+aegypti+for+field+releases+in+Brazil.">Mass production of genetically modified Aedes aegypti for field releases in Brazil.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. , e3579 (2014).</li><li>Carvalho, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aedes+aegypti+lines+for+combined+sterile+insect+technique+and+incompatible+insect+technique+applications:+the+importance+of+host+genomic+background.">Aedes aegypti lines for combined sterile insect technique and incompatible insect technique applications: the importance of host genomic background.</a> Entomologia experimentalis et applicata. 168 (6-7), 560-572 (2020).</li><li>Mamai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aedes+aegypti+larval+development+and+pupal+production+in+the+FAO/IAEA+mass-rearing+rack+and+factors+influencing+sex+sorting+efficiency.">Aedes aegypti larval development and pupal production in the FAO/IAEA mass-rearing rack and factors influencing sex sorting efficiency.</a> Parasite. 27, 43 (2020).</li><li>Zheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incompatible+and+sterile+insect+techniques+combined+eliminate+mosquitoes.">Incompatible and sterile insect techniques combined eliminate mosquitoes.</a> Nature. 572 (7767), 56-61 (2019).</li><li>. Methods in Aedes Research Available from: <a target="_blank" href="https://www.beiresources.org/Portals/2/VectorResources/Methods%20in%20Aedes%20Research%202016.pdf">https://www.beiresources.org/Portals/2/VectorResources/Methods%20in%20Aedes%20Research%202016.pdf</a> (2016)</li><li>Focks, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+separator+for+the+developmental+stages,+sexes,+and+species+of+mosquitoes+(Diptera:+Culicidae).">An improved separator for the developmental stages, sexes, and species of mosquitoes (Diptera: Culicidae).</a> Journal of Medical Entomology. 17 (6), 567-568 (1980).</li><li>International Atomic Energy Agency. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manual of Dosimetry in Radiotherapy. Technical Reports Series No. 110. , (1970).</li><li>Aldridge, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gamma-irradiation+reduces+survivorship,+feeding+behavior,+and+oviposition+of+female+Aedes+aegypti.">Gamma-irradiation reduces survivorship, feeding behavior, and oviposition of female Aedes aegypti.</a> Journal of the American Mosquito Control Association. 36 (3), 152-160 (2020).</li><li>Cianci, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimating+mosquito+population+size+from+mark-release-recapture+data.">Estimating mosquito population size from mark-release-recapture data.</a> Journal of Medical Entomology. 50 (3), 533-542 (2013).</li><li>Knipling, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The basic principles of insect population suppression and management. , (1979).</li></ol>

כל המחברים הצהירו על היעדר ניגוד עניינים.

ייזום תוכנית בקרה הכוללת SIT המשתמשת בקרינה דורש הקמת זן מקומי של Aedes aegypti. שלב זה הוא קריטי ויכול לאפשר ל-SIT לבדל את עצמה באמת מטכנולוגיות בקרה דומות. על ידי פיתוח הפרויקט מזן מקומי של יתושים, סביר להניח שלזכרים שנוצרו יהיו התנהגויות המאפשרות להם להסתגל לשינויים ולרמזים סביבתיים ולאתר ולהזדווג עם נקבות בר בסביבה. יתר על כן, שחרורם של זכרים מקומיים מוקרנים עשוי שלא לעורר דעת קהל שלילית בהשוואה, למשל, לשחרור זן לא מקומי של יתושים מהונדסים גנטית שעלול, למשל, להחדיר אללים חדשים לאוכלוסיית היתושים המקומית.
השקעת משאבים משמעותיים לגידול כמויות עצומות של יתושים רק כדי להיות מסוגלים להשתמש בכמחציתם למטרות הדברה היא מגבלה של תוכנית Aedes aegypti SIT. יש לבצע חידודים לפרוטוקול הגידול כדי לדחוס את הבשלת הזחלים לפרקי זמן מוגדרים יותר שבהם הגלמים יהיו מוכנים. זה יאפשר לאסוף יותר גלמים בזמן האופטימלי של ההפרדה. עם זאת, גלמים נוספים לעיבוד מגבירים את הסיכון של יותר נקבות לגור כאשר הגלמים נאספים ולכן מגדילים את הסבירות שהנקבות יגיעו לצלחות פטרי עם זכרים ואולי ישוחררו. אף על פי שתוחלת החיים, התנהגות ההזנה בדם והתנהגות ההנעה בנקבות המוקרנות Aedes aegypti pupae מופחתות בבוגרים, אין זו אסטרטגיה טובה לשחרר נקבות אגב לצד זכרים מוקרנים22. לכן, זה צריך להישאר בראש סדר העדיפויות כדי למזער את מספר הנקבות מופרדות בשוגג, מוקרנות, מסומנות ומשוחררות עם זכרים.
הצלחתה של תוכנית SIT מסתמכת בסופו של דבר על תחרות מוצלחת של בני זוג על ידי זכרים מקרינים שגודלו במושבה. שימור התחרותיות של הזכרים מסתמך על בחירה ממצה של המינון שמקורה בניסויים ומקסום היחס המשוער של זכרים סטריליים:פראיים באוכלוסייה. בחירת המינון נקבעת על ידי מספר גורמי מפתח הכוללים אריכות ימים, פוריות, נקבות ותמותת גורים. נצפה כי יתושים זכרים יפגינו עקומת פוריות אסימפטוטית המתקרבת לאפס ככל שהקרינה עולה (KJL, RLA, SCB נתונים שלא פורסמו). במקביל, תוחלת החיים והפעילות של יתושים זכרים פוחתת באופן אקספוננציאלי ככל שמינון הקרינה עולה (KJL, RLA, SCB נתונים שלא פורסמו). לכן, במקום לזהות מינון שמניב 99.9% סטריליות אצל גברים, עדיף להתמקד באחוז סטריליות נמוך יותר תוך תמיכה בניצולים. לאחר שזוהה טווח מינון שאינו מבדיל בין אריכות ימים או תמותת גורים של זכרים מוקרנים לזה של זכרים שאינם מוקרנים, יש לבצע הערכות נוספות על פוריות כדי לזהות מינון שהופך את הזכרים לסטריליים באופן גורף, אך תחרותיים.
במקביל, חשוב להשוות את מספר היתושים הזכרים באוכלוסייה לזה של הזכרים המוקרנים המשוחררים. ניתן להשיג זאת על ידי איסוף זכרים ממקומות שונים באזור שחרור היעד ובסביבתו שוב ושוב מאותו מיקום ולפני, במהלך ואחרי תחילת תוכנית ה-SIT. יש לערוך מחקר סימן, שחרור, לכידה מחדש כדי להעריך את היחס בין יתושים זכרים פראיים ליתושים ששוחררו. מחקר סימן, שחרור, לכידה מחדש מסתמך על שחרור מספר ידוע של יתושים מסומנים מנקודה מסוימת ועל לכידתם מחדש מאוחר יותר בנקודות בסמיכות סביב נקודת השחרור הראשונית. על ידי השוואת מספר הזכרים שנלכדו מחדש וזכרי הבר במרחקים מנקודת השחרור, ניתן להעריך את אוכלוסיית הבר הכללית של הזכרים באזור כך שניתן יהיה לשחרר יחסים תחרותיים של זכרים סטריליים23. מקסום היחס בין זכרי בר סטריליים יכול להיות מושג על ידי שחרור זכרים סטריליים יותר ו/או על ידי צמצום אוכלוסיית הבר באמצעי בקרה קלאסיים כגון הפחתת מקור, שליטה לא בוגרת או טיפולים ברצח מבוגרים.
כדי לאמוד את היעילות של שחרורים זכריים סטריליים, ניתן להשוות אוספים למבוגרים באופן כרונולוגי מול אזור ללא התערבות. כאשר זכרים סטריליים משתחררים ומספר הזכרים והנקבות שנאספו באזור מסוים פוחת ביחס לאזור דומה ללא התערבות, אז ניתן לשער שזה נובע מכך שהזכרים הסטריליים המשתחררים מצליחים לגבור על הזכרים הפוריים המקומיים. ניתן לראות השפעה זו גם בכוסות מלכודת oviposition הפרוסות הן באתרי ההתערבות והן באתרי אי-ההתערבות. ניתן עדיין לייצר ביצים באתר ההתערבות, אך אם פחות בוקעות מאלו מהאתר ללא התערבות, ניתן לשער שהן אינן מופרות בגלל נקבות המזדווגות עם זכרים סטריליים. יותר ויותר oviposition של ביציות לא מופרות יכול בסופו של דבר להוביל להפחתה oviposition עקב אי החלפה של נקבות באתר ההתערבות 8,24.
כיוונים עתידיים של טכנולוגיית SIT ותוכניות מתרחבים באופן טבעי למיני יתושים חשובים נוספים מבחינה רפואית. לדוגמה, טכנולוגיה זו עשויה להיות מותאמת בקלות כדי לשלוט Aedes albopictus, בהתחשב בביונומיקה דומה מאוד של Aedes aegypti ו Aedes albopictus. מינים אחרים של יתושי וקטור מחלה מעניינים כוללים את Culex quinquefasciatus, Culex tarsalis, ומיני אנופלס שונים. שיפור היעילות של טכנולוגיה זו תלוי בהגדלת היכולת של גלמים זכרים המיוצרים בזמן נתון, אשר ניתן להשיג באמצעות מניפולציה גנטית או ברירה מלאכותית, ושיפור התחרותיות הגברית, אשר ניתן להשיג על ידי הגדלת הגבריות, פוריות, או אריכות ימים.
בסופו של דבר, תוכניות SIT אינן כדור כסף להדברת יתושים. במקום זאת, הם כלי בחבילה של טכניקות בקרה אחרות, כגון תוכניות IVM, המפצות על חולשות בין טכניקות. לדוגמה, בעוד שהדברה כימית מציעה שליטה מהירה וזולה, היא גם מעודדת פיתוח עמידות ותמותה שאינה מטרה; ובעוד ש-SIT הוא ספציפי למינים ואינו צפוי ליצור עמידות, זכרי SIT חייבים להיות מיוצרים ומשוחררים לנצח כדי לשלוט באוכלוסיות המהגרות מחוץ למחוז הבקרה הווקטורי.

העברת פתוגנים המועברים על ידי יתושים לבני אדם גורמת למיליוני מקרים של מחלות ומקרי מוות מדי שנה ברחבי העולם. בהיעדר חיסונים יעילים ומאושרים למחלות המועברות על ידי יתושים, כגון זיקה או קדחת דנגי, אחת הדרכים היעילות ביותר להפחית את ההדבקה היא להפחית את אוכלוסיות היתושים הווקטוריים למחלות. באופן מוזר, מספר גדל והולך של מיני יתושים, שבאופן מסורתי ממוקדים על ידי חומרי הדברה, מפגינים רמות הולכות וגדלות של עמידות לחומרי הדברה1. במקביל, סוכנויות ממשלתיות ביטלו באגרסיביות או אסרו על שימוש בחומרי הדברה שאושרו בעבר, ומעט אמצעי הדברה כימיים חדשים ויעילים מפותחים 2,3. קבוצת כוכבים זו של מכשולים להדברת יתושים הניעה את החיפוש אחר טכניקות חלופיות לא כימיות להפחתת אוכלוסיות היתושים.
מיני יתושים מסוימים מציבים אתגרים לשליטה בבעיות של עמידות ורישום חומרי הדברה. Aedes aegypti (L.) הוא יתוש בולט-וקטור מחלה שקשה מאוד לשלוט בו באמצעות ניהול וקטורים משולב מסורתי בשל בית הגידול הפרה-ביתי הקריפטי המנוצל על ידי מין זה להתפתחות לא בשלה ומנוחה בוגרת 4,5. אתגרים הקשורים לניצול בית הגידול הסמוי סביב בתי מגורים כוללים את הקושי להגיע למקומות אלה באמצעות טכניקות ריסוס חומרי הדברה, כמו גם את חוסר הקבלה הפוטנציאלי של הציבור לגישה חוזרת ונשנית לרכוש פרטי עבור סוכנויות בקרת וקטורים לבריאות הציבור כדי לנהל את פעילויות המעקב והבקרה האינטנסיביות החיוניות לניהול וקטורים משולב יעיל (IVM) עבור מין זה.
למרבה המזל, SIT, גישה שהוכחה כמוצלחת להדברה מתמשכת של מיני חרקיםמאתגרים אחרים 6, מיושמת על בעיית Aedes aegypti בסדרה פורצת דרך של ניסויים וניסויים מבצעיים המבוססים בסנט אוגוסטין, פלורידה (KJL, RLA, SCB נתונים שלא פורסמו). SIT יושם על מגוון מיני חרקים, כולל יתושים, ונבדק לעומק 7,8. SIT ממנף את השחרור ההמוני של זכרים שגודלו במושבה ומעוקרים, למשל, על ידי חשיפה לקרינה מייננת או לכימיקלים כדי להכריע את בחירת ההזדווגות של אוכלוסיות טבעיות של נקבות. זכרים מעוקרים המזדווגים עם נקבות בר הופכים את הביצים לעקרות עקב נזק שנגרם על ידי גמטות זכרים, ואם הן קיימות במספרים מספיקים, יכולות תיאורטית לרסק את אוכלוסיית Aedes aegypti הטבעית.
תוכנית SIT יזמה כדי לנסות לצמצם אוכלוסיות של Aedes aegypti באזור עירוני בחוף האטלנטי של פלורידה שבו מין זה התיישב מחדש לאחרונה והוא מתרחב ומהווה סיכון לבריאות הציבור להעברת וירוסים כמו זיקה, דנגי או צ'יקונגוניה. כדי למקסם את פוטנציאל ההתאמה עם נקבות הבר, הוקמה מושבה חדשה באמצעות Aedes aegypti שנלכדו בטבע מאוכלוסיית היעד כדי לייצר זכרים לתוכנית9. זה התבסס על ההשערה שזכרים מקומיים, שגודלו במושבה, יהיו בעלי סבירות גבוהה יותר להיות תחרותיים עם זכרי בר מקומיים להזדווגות עם נקבות בר מקומיות. כדי שה-SIT יהיה יעיל, לא רק שמספר עצום של זכרים סטריליים צריכים להיות נוכחים באזור היעד, אלא שהם גם צריכים להיות מסוגלים לחזר ולהזדווג ביעילות עם יתושי בר מקומיים.
סדרה של ניסויים נערכה כדי לקבוע את המספר האופטימלי של זכרים סטריליים לשחרור (KJL, RLA, SCB נתונים שלא פורסמו) כמו גם מינונים אופטימליים של קרינה שיהפכו את הזכרים לעקרים מבלי להפריע להישרדות, התנהגות או קבלה על ידי נקבות בר (KJL, RLA, SCB נתונים שלא פורסמו). נתונים אלה מופיעים בפרסומים של בעלות הברית מקבוצה זו, אך חלק מהממצאים הללו נלכדים גם בפרוטוקול זה ויכולים לשמש כנקודת מוצא לתוכניות בקרה חדשות של SIT Aedes aegypti במקומות אחרים. מין זה מרחיב ללא הרף את הטווח שלו, ותוכניות SIT מראות הבטחה גדולה להיות פתרונות חסכוניים וארוכי טווח לשליטה באוכלוסייה זו. מטרת פרוטוקול זה היא לייצר יתושי Aedes aegypti מעוקרים, זכריים, שגודלו במושבה, לשחרור שיטתי לאזורים חיצוניים כדי לשבש את מחזורי הרבייה הטבעיים של אוכלוסיות Aedes aegypti מקומיות בתוכנית בקרת וקטורים תפעולית לבריאות הציבור.
בעוד שפרוטוקולים וזרימות עבודה דומים פורסמו לייצור זכרי Aedes aegypti מהונדסים וזרימות עבודה של ייצור עבור Aedes SIT, או תוכניות אי-תאימות מבוססות וולבצ'יה פורסמו במקומות אחרים, פרוטוקול זה ממחיש כיצד הפרוטוקולים הקיימים הותאמו לייצור Aedes aegypti, הפרדה והקרנה של גלמים זכרים, סימון ואריזה של זכרים בוגרים, ומשלוח לאתר השחרור של תוכנית זו 9, 10,11,12,13,14,15,16,17,18. ייתכן שרכיב הסימון של פרוטוקול זה לא יידרש בתוכנית SIT תפעולית בוגרת; עם זאת, היא נכללה כאן מכיוון שהיא אחת הדרכים לפקח על היעילות ולשלוט באיכות התהליך כולו בשנים הראשונות של הקמת תוכנית SIT. תוכניות הדברת יתושים מנוהלות בדרך כלל על ידי הרשויות המקומיות, כך שהן יכולות להשתנות במידה רבה בהיבטים רבים של הארגון שלהן, החל מגודל ובסיס מימון ועד לכוונון טקטיקות הדברה כדי למקסם את ההצלחה המקומית. לפיכך, הפרוטוקול המתואר כאן צריך להיות מוערך עבור תאימות עם המשאבים הזמינים.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1-1/8&#34; wrench (1&#34; (1 inch) = 2.54 cm)</td>
			<td>Craftsman</td>
			<td>CMMT44707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/2 pint cardstock cup (1/2 pint = 236.5 mL)</td>
			<td>Science Supplies WLE corp</td>
			<td>1/2 pint</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4&#34; tubing - tygon</td>
			<td>Hudson Extrusions</td>
			<td>LLDPE1/8 X 1/4 BLK</td>
			<td>to attach to CO2 gas regulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/8&#34; brass barb w/ MIP connection</td>
			<td>B&#38;K</td>
			<td>BHB-85NLB</td>
			<td>to attach to CO2 gas regulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 mL graduated plastic beakers with handle</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1223-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3000 mL graduated plastic beakers with handle</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1223-3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adult large cage</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>1450D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator vials</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>2809V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine liver powder</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>290039601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brewers yeast</td>
			<td>MP Biomericals</td>
			<td>02903312-CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 regulator</td>
			<td>Randor</td>
			<td>64003038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 tank (20# canister)</td>
			<td>Praxair</td>
			<td>CDBEVCARB20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection basin</td>
			<td>Treasure Gurus</td>
			<td>KI-ENAMELBOWL</td>
			<td>for separator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton balls - large</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-456-883</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deli cups w/lids - 470 mL</td>
			<td>Pactiv DELItainer</td>
			<td>PCTYSD2516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deli cups w/lids - 1900 mL</td>
			<td>Berry Global</td>
			<td>T60764</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DoseReader 4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>ND0.5 and ND1.0 QA Filter Set standards</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dosimetry film</td>
			<td colspan="2">Far West Technology, Inc.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AP10045S0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flashlight aspirator</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>2809D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - fine featherweight</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>4748 or 4750</td>
			<td>featherweight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GAFchromic</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>radiochromic film</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gammator M</td>
			<td>Radiation Machinery Corporation, Parsippany, NJ</td>
			<td></td>
			<td>Cesium-137 irradiator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hand held mechanical aspirator</td>
			<td>Clarke Mosquito</td>
			<td>13500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lambskin condoms</td>
			<td>Trojan</td>
			<td>Naturalamb</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large CO2 chamber</td>
			<td>Sterilite</td>
			<td colspan="2">Walmart #&#160;568789514</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Larval rearing pans</td>
			<td>Blue Ridge Thermoforming</td>
			<td>&#160;01-FG-400-3N-ABS</td>
			<td>Dimensions: 22.375 x 17.5 x 3 (inches)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnets - 20# pull</td>
			<td>Master magnetics</td>
			<td>MHHH20BX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marking dye</td>
			<td>Dayglo</td>
			<td>ECO-11</td>
			<td>Aurora Pink</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marking dye</td>
			<td>Dayglo</td>
			<td>ECO-17</td>
			<td>Saturn Yellow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh</td>
			<td>Falk</td>
			<td></td>
			<td>T301</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasture pipettes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>02-708-006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes - large</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>25384-090 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes - small (60 mm x 15 mm)</td>
			<td>Fisher Brand</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pupa separator</td>
			<td>J.W. Hock</td>
			<td>1512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red rubber hose</td>
			<td>Welch</td>
			<td>331040-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Release containers</td>
			<td>Science Supplies WLE corp</td>
			<td>1 gallon</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber bands - cross #19</td>
			<td>Alliance</td>
			<td>ALL37196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber bands - latitude #64</td>
			<td>Skillcraft</td>
			<td>NSN0589974</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>H-4737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seed germination paper - Heavy stock 76#</td>
			<td>Anchor Paper</td>
			<td>#76</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shipping coolers- 16 x 13 x 12.5&#34;</td>
			<td>MrBoxonline.com</td>
			<td colspan="2">Husky Foam Cooler kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sieve #20</td>
			<td>Advantech</td>
			<td>20BS8F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sieve #30</td>
			<td>Advantech</td>
			<td>30BS8F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small cage - Bug Dorm</td>
			<td>MegaView</td>
			<td>Bug Dorm-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small CO2 chamber</td>
			<td>Mainstays</td>
			<td colspan="2">Walmart #&#160;562922221</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Souffle cup lid</td>
			<td>SOLO</td>
			<td>41165277456</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Souffle cups - 4 oz (1 oz = 29.6 mL)</td>
			<td>SOLO</td>
			<td>41165024104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sponge</td>
			<td>ocelo</td>
			<td>MMM7274FD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Squeeze bottle</td>
			<td>Dynalon</td>
			<td>3UUP6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereoscope</td>
			<td>Meiji Techno</td>
			<td>EMZ-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stockinette</td>
			<td>BSN Medical</td>
			<td>30-1006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>extruded polystyrene foam</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropical fish flake food</td>
			<td>Tetra</td>
			<td>4.52 pound</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaccum chamber - desiccator</td>
			<td>BelArt</td>
			<td>T9FB892757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh boats</td>
			<td>Globe Scientific</td>
			<td>3621</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparing irradiated and marked male aedes aegypti mosquitoes for release in an operational sterile insect technique program

השליטה במחלות אנושיות כמו דנגי, זיקה וצ'יקונגוניה מסתמכת על השליטה של הווקטור שלהם, יתוש Aedes aegypti , מכיוון שאין מניעה. הדברת וקטורים של יתושים יכולה להסתמך על כימיקלים המופעלים על שלבים לא בוגרים ובוגרים, מה שיכול לתרום לתמותה של אנשים שאינם מטרות וחשוב מכך, להוביל לעמידות לקוטלי חרקים בווקטור. טכניקת החרקים הסטריליים (SIT) היא שיטה להדברת אוכלוסיות של מזיקים באמצעות שחרור זכרים בוגרים מעוקרים המזדווגים עם נקבות בר כדי לייצר צאצאים שאינם בני קיימא. מאמר זה מתאר את התהליך של ייצור זכרים סטריליים לשימוש בתוכנית SIT מבצעית להדברת יתושי Aedes aegypti . להלן השלבים המשמשים בתוכנית, כולל גידול ותחזוקה של מושבה, הפרדת גלמים זכרים ונקבות, הקרנה וסימון של זכרים בוגרים ושליחת זכרים Aedes aegypti לאתר השחרור. כמו כן נדונו אזהרות פרוצדורליות, מגבלות תוכנית ויעדים עתידיים.

גידול יתושים ערני והולם כולל זמינות מאוזנת היטב של זכרים ונקבות בכלובי מושבה, תחזוקה של תמיסת סוכרוז טרייה ודבש, והאכלת דם עקבית באיכות גבוהה. תנאים אלה יספקו יריעות ביצים צפופות ואופטימליות לשימוש במחבתות גידול זחלי SIT. אחסון ושימוש נכון ביריעות ביצים מיובשות, כגון תיוג שיטתי כדי להקל על השימוש מהישן ביותר לחדש ביותר, יתמכו בבקיעה אחידה בכל המחבתות. מילוי כל מחבתות גידול הזחלים במים לפני הבקיעה עלול לקצר את משך הזמן שבו יריעות הביצים נמצאות במיכלי הבקיעה ולקדם התפתחות בריאה. תחזוקה של מחבתות הזחלים מהבקיעה ועד הגור דורשת מעורבות זהירה של אנשי המושבה, שכן חלק מהמחבתות עשויות להזדקק ליותר או פחות מזון או מים נוספים, בהתאם לשלבי ההתפתחות ולמשתנים הסביבתיים. אם יש בעיות עם שלב ההתפתחות עד היום המתוכנן של הפרדת מין הגור, יש לבצע התאמות מוקדם יותר בתהליך כגון בקיעה מוקדם יותר או מאוחר יותר, התאמת מזון או שינוי טמפרטורת האינקובטור.
תהליך הגידול בפרוטוקול זה אינו גורם לכל הביצים שבקעו בזמן להתפתח לגלמים שניתן להקרין ולהשתמש בהם למטרות בקרה. בין 20% ל-50% מהיתושים שגודלו במושבה עדיין יהיו זחלים עד שיהיה צורך להפריד בין הגלמים. עם זאת, זחלים אלה אינם מתבזבזים, אך מותר להם להבשיל במשך 24 שעות כדי לעבד גלמים נוספים שניתן לשלב עם גלמים נקבות מההפרדה של היום הקודם ולמחזר בחזרה לכלובים במושבה. בכלובי המושבה, הגלמים יורשו להבשיל לבוגרים, להזדווג, להאכיל בדם ולייצר ביצים המקיימות את פרויקט ה-SIT.
הפרדת הגלמים, מזיגת הגלמים לתוך צלחות פטרי, הקרנה והצבה בכלובי החזקה בוגרים לאחר הקרנה חייבים להתרחש ביום אחד; לפיכך, יש להקצות זמן מספיק כדי לעבד את כל השלבים בנוחות. הרכבה והכנה של מיכלי שחרור צריך להיעשות לפני תהליך הסימון. כאשר תיבות משלוח מוחזרות מאתר השחרור, יש לבדוק את מכולות השחרור ולהכין אותן לשימושן הבא. השלכת כדורי צמר גפן רטובים, אוורור מיכלי שחרור רטובים, ניקוי צלחות פטרי, החלפת רשת והסרת רצועות אלסטיות מהמיכל, אף שאינן בשימוש, יאריכו מאוד את חיי מיכלי השחרור.
בהתחשב במציאות העולמית של מגפת COVID-19, פרוטוקול זה שהוא בדרך כלל פעולה מרובת אנשים שונה כך שיהיה ניתן למתיחה על ידי אדם אחד העובד לבדו במעבדה עבור כל שלב. השלבים בתהליך שמפריעים ביותר על ידי תרחיש של אדם אחד הם שלבי המין, הסימון, השקילה וגידול המושבה. הפרדת הגלמים לפי מין על ידי אדם אחד אמורה להספיק אם ישנם מספר מפרידים הפועלים בו זמנית בחדרים שונים. במצב מגיפה שבו ריחוק חברתי מתרחש במקום העבודה, נדרשת הצטיידות במספר תחנות כדי להשלים צעדים ממין ועד אריזה. בהתאם למהירות המפעיל, לוקח לאדם אחד ~ 4 שעות למין 15,000 יתושים ואז עוד 1-2 שעות כדי לסמן, לשקול ולארוז אותם. תרחיש של שני אנשים מקטין את הזמן שבו מרדיימים יתושים לצורך סימון ומקצר את זמן העבודה הכולל. עם זאת, אפילו בתרחיש של שני אנשים, הקצאת מלוא 2.0 גרם היתושים לכל כלוב שחרור יכולה להיות מאתגרת בשל זמן עבודה מוגבל בזמן שהיתושים מורדם. למרות שתהליך הניקוי וההכנה של חומרי גידול לזחלים ולבוגרים גוזל זמן רב ודורש עבודה רבה, ניתן לחלק אותו כך שמפעילים בודדים יוכלו לעבוד באופן עצמאי ובטוח במהלך מגיפה.
שחרור זכרי Aedes aegypti בוגרים, מסומנים ומוקרנים הוא מחוץ לתחום של פרוטוקול זה, אך הוא מוצג כאן בקצרה. תהליך שחרור היתושים הזכרים המסומנים, המוקרנים, מתחיל בקביעת התפלגות שחרור אחידה של מיכלי השחרור על בסיס משקלים (ולפיכך, מספרים מוסקים של זכרים סטריליים), כפי שדווח בטבלה 3. לאחר מסירת המשלוחים למחוז הבקרה הווקטורי, התיבות נפתחות, ומכולות השחרור מוערכות לכל בעיה עם תמותה או מצב של מכולות השחרור. יתושים במיכלי השחרור מורשים לאחר מכן להתאקלם לטמפרטורת הסביבה וללחות למשך 1-2 שעות לפני ההובלה לאזור הטיפול. אתרי שחרור באזור הטיפול מזוהים לאחר מעקב אינטנסיבי אחר נקודות חמות של אוכלוסיות בר של Aedes aegypti. התזמון, התדירות והצפיפות של השחרורים מאוזנים על ידי הביונומיקה של המין, כמו גם מטאורולוגיה, תמיכה ציבורית ויכולות גידול מעבדה.
מכיוון שמיכלי שחרור ספציפיים מותאמים לאתרי שחרור מסוימים, יש להצליב את התווית לפני פתיחת מיכל השחרור על ידי חיתוך הרשת בחלק העליון, מה שמאפשר למפעיל לעוות את הרשת כך שחלק מהזכרים יוכלו לברוח. שיטת שחרור חלקית זו חוזרת על עצמה בכל נקודת שחרור שהוקצתה למיכל עד לשחרור כל הזכרים המעופפים בחופשיות. לאחר מכן תהליך זה חוזר על עצמו עבור כל גורם מכיל של שחרור במיקום השחרור שהוקצה לו בהתאמה עד לעיבוד כל המכולות. לחלופין, לאחר שחרור היתושים, ניתן לאסוף יתושים מתים או נכים שלא עזבו בחופשיות לתוך צלחות פטרי ולתייג אותם ידנית או לשקול אותם כדי לתקן את המספר המשוער ששוחרר. מעקב מתמשך ונרחב אחר שלבים בוגרים, ביצים ושלבים לא בשלים של Aedes aegypti פראי באזור היעד, ואולי גם באתרי בקרה ללא התערבות, נערך כדי להעריך את היעילות של פעולת ה- SIT.

Watch this Scientific Journal Video about Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program at JoVE.com

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

טכניקת החרקים הסטריליים (SIT) משמשת להדברת אוכלוסיות יתושים ספציפיות וחשובות מבחינה רפואית שעשויות להיות עמידות בפני הדברות כימיות. כאן אנו מתארים שיטה לגידול המוני והכנה של יתושים זכרים סטריליים לשחרור בתוכנית SIT מבצעית המכוונת ליתוש Aedes aegypti .

הכנת יתושי Aedes aegypti זכרים מוקרנים ומסומנים לשחרור בתוכנית טכניקת חרקים סטרילית מבצעית

The control of such human diseases as dengue, Zika, and chikungunya relies on the control of their vector, the Aedes aegypti mosquito, because there is no ...

הערך הייחודי של פרוטוקול זה הוא ששני אנשי צוות המשתמשים בציוד זמין בחללי מעבדה קטנים יכולים לייצר מספיק יתושי מאל סטריליים כדי לתמוך בתוכנית SIT מבצעית של 50 דונם. היעילות והעלות הנמוכה של טכניקה זו הופכת אותה לנגישה, בלתי ניתנת לתיקון אפילו עבור מחוזות הדברת יתושים קטנים כדי להגדיל את תוכנית ההדברה הווקטורית המשולבת שלהם. מדגימים את הנוהל יהיו אני וברברה באייר, טכנאי מעבדה למדעי הביולוגיה מיחידת המחקר.כדי לגדל Aedes aegypti בוגרים מגלמים, הכינו כלובי גידול אלומיניום מתקפלים בגודל 60 על 60 על 60 ס"מ עם הקרנת רשת פיברגלס בגודל 0.84 על 0.84 מ"מ, ושרוול סטוקינט על קיר אנכי אחד של כל כלוב. מניחים פלסטיק של 1, 900 מיליליטר עם גלמים Aedes aegypti ביחס של אחד לאחד לכל כלוב גידול וקושרים את השרוול סגור, ומשאירים את הכוסות בכלובים לאקלוזיה למשך כארבעה ימים בטמפרטורה של 28 עד 30 מעלות צלזיוס יותר מ-50% לחות יחסית במחזור אור של 12:12 או 14:10 עד שלא יוצאים עוד בוגרים. 24 שעות לאחר הנחת הגלמים בכלובי הגידול, הכניסו לכל כלוב מיכל של תמיסת 10% סוכרוז עם פתיל ספוג ותלו ספוג בגודל 10 על 2 ס"מ ספוג בדבש מתוך וו תיל כדי לספק לחות ותזונה בהתאמה ליתושים הבוגרים.48 עד 72 שעות לאחר שרוב המבוגרים הגיחו בכל יומיים עד שלושה במשך שלושת עד ארבעת השבועות הבאים, מלאו את הקונדום מעור כבש אחד ב-50 עד 100 מיליליטר של דם בקר דהוי לכל כלוב, וחממו את הקונדומים לכ-37 מעלות צלזיוס באמבט מים חמים. לאחר טפיחה קפדנית על הקונדומים עם המגבת, הניחו את הקונדומים המיובשים חלקית בכלי פטרי מרופדים בנייר בתוך הכלובים למשך 30 עד 60 דקות. 48 עד 72 שעות לאחר כל האכלה בדם, יש להניח אובפוזיציה של 1, 900 מיליליטר המכילה 800 מיליליטר של מי פופל מסוננים ומרוהטת עם יריעה בגודל 8 עד 10 על 30 ס"מ של נייר נביטת זרעים המותאם להדחה לאורך ההיקף הפנימי של הכוס לתוך כל כלוב.כדי לגדל את זחלי Aedes aegypti מביצים, השתמש בנייר oviposition עם 5, 000 עד 10, 000 ביצים נוכחים לחתוך קטע של שלושה עד שבעה סנטימטרים בניצב לקו oviposition. הכניסו את החתיכה למיכל חדש של 460 מיליליטר, מלא למחצה במי ברז וקמצוץ של פתיתי מזון דגים. מכסים ומתסיסים את המיכל במרץ במשך דקה אחת לפחות לפני ששופכים את כל התכולה למחבת גידול זחלים המכילה שלושה ליטרים של מי ברז ו -50 מיליליטר של תבשיל חום.סמנו את המחבת עם תאריך ההתחלה, פרטי הזן ולוח הזמנים להאכלה. לאחר שהגיע לשיעור הסף המשוער של הזחלים במחבתות הזחלים, שפכו את תכולת כל מחבת דרך מסננת בגודל 20 עד 40 והשתמשו בבקבוק לחיץ של מי ברז כדי לשטוף את הגלמים והזחלים מהמסננת לתוך פלסטיק מדורגת של שלושה ליטר. כדי להפריד בין הגלמים הזכרים לבין הזחלים והגלמים הנקביים, חלקו את תכולת כל בין מספר מכלי פלסטיק בנפח 1.9 ליטר והניחו מיכל איסוף קשיח של ארבעה ליטרים מתחת לגלמים בבסיס מפריד הפופלים.ממלאים שתי כוסות פלסטיק בעלות שלושה ליטרים כשלושת רבעי מי ברז ושופכים את המים דרך החלל שבין לוחות הזכוכית של המפריד תוך התאמת הידיות העליונות והתחתונות כדי לאפשר למים לזרום ברציפות דרך המפריד. לאחר שהמים העומדים נאספים באופן שווה בגובה של כ-1.25 ס"מ מבסיס הלוחות, מסמנים את מיקומי ההתחלה בידיות התחתונות של המפריד בנייר דבק, ומתחילים לשפוך את מיכלי הגלמים והזחלים לתוך המפריד תוך סיבוב רציף של הידיות התחתונות נגד כיוון השעון במרחק של סנטימטר עד שני סנטימטרים מעמדות ההתחלה. כאשר רוב הזחלים או כולם שטפו את הזחל לתוך מיכל האיסוף, השהו את זרימת המים והשתמשו במסננת מספר 30 כדי לפנות את מיכל האיסוף של הזחלים.לאחר שכל הזחלים הוסרו, שפכו את המים והתאימו שוב את הידיות כדי לאפשר את שטיפת הגלמים הזכרים לתוך מיכל האיסוף. לאחר מכן שפכו את הגלמים הזכרים מהמיכל לתוך מסננת מספר 20 והשתמשו בבקבוק לחיץ של ליטר אחד של מי ברז כדי לשטוף את הגלמים מהמסננת למיכל נפרד של 1.9 ליטר. לאחר שכל הגלמים הזכרים נאספו, שפכו את המים והתאימו את הידיות כדי לאפשר את איסוף הגלמים הנקביים.שימוש במסננת מספר 20 כדי להעביר את הגלמים הנקביים למיכל חדש של 1.9 ליטר כפי שהוכח זה עתה. לאחר מכן שפכו את המים והתאימו שוב את הידיות עד שכל היתושים הלא בוגרים נשטפו מהמפריד. מסננים את הגלמים הזכרים שנאספו במסננת ושוטפים את הקקי לכוס מדורגת של ליטר אחד עם כמה שפחות מים.מוזגים בזהירות את הגלמים לתוך צלחות פטרי מרופדות בנייר סינון לח בשכבה אחת. הסר מים עומדים מתחתית צלחת פטרי באמצעות פיפטה מרעה טרייה של שלושה מיליליטר כדי למנוע תזוזה של הפופל במהלך העבודה. צרפו צלחות וערימות של פטרי לפני האיטום בתוך שקית 3.8 ליטר הניתנת לסגירה חוזרת כדי להתאים לתא ההקרנה.כדי לסמן קבוצות מכמתות של יתושים זכרים בוגרים מוקרנים, הסר את כל מקורות ההזנה מכלוב הגידול והנח כלוב אחד לתוך תא פחמן דו חמצני גדול למשך חמש עד שבע דקות, תוך דפיקת דפנות המיכל כדי לעקור את כל היתושים הנצמדים לקירות. בתום תקופת החשיפה, מעבירים את היתושים לבקבוקון שואב והרדימו שוב את היתושים לפני שהם מנענעים את היתושים למשטח עבודה מכוסה נייר לבן. שאפו בזהירות את כל הזכרים משטח העבודה לבקבוקון חדש וחזרו על החשיפות והאיסוף עד שכל הזכרים הבוגרים נאספו מכל כלובי הגידול.בשלב מסוים במהלך תהליך מיון המין, ליצור בקבוקון המכיל רק 25 יתושים זכרים בוגרים. כאשר כל הזכרים נאספו, שקלו כל יתוש מרושע בסירת שקילה זפת על איזון, ושפכו במהירות את היתושים השקולים לתוך מיכל קרטון של 240 מיליליטר המכיל 50 מיליגרם צבע סימון. הטה וסובב את המיכל בסיבוב אחד מלא בכיוון השעון ונגד כיוון השעון עד שכל היתושים מצופים קלות ושופכים את היתושים לסירת שקילה חדשה, ואז מקפלים את סירת המשקל לשניים כדי לאפשר ליתושים להיות מתועלים דרך שרוול הסטוקינט לתוך מיכל השחרור.כאשר נוספו למיכל השחרור כשני גרם של יתושים זכרים, קשרו את שרוול הסטוקינט סגור וסמנו את סרט הסימון על מסגרת מיכל השחרור בצבע הצבע, מספר המיכל והמשקל הכולל של היתושים. בניסוי ייצוגי זה של גידול, הקרנה ושיווק יתושים בוגרים Aedes aegypti, ניתן היה לאסוף שני גרם של יתושים בוגרים זכרים משלושה כלובי גידול ויחד עם שני בקבוקונים של 25 זכרים משני כלובים כדי לאפשר חישוב המשקל הממוצע ליתוש. 25 נקבות הושלכו בסך הכל משתיים מהקבוצות.האכלה בזמן ותצפית במהלך שבוע גידול הזחלים היא קריטית ליצירת גלמים מפותחים היטב להפרדה. זה יוצר הבחנה ברורה בין זכרים לנקבות המובילה להופעה נמוכה של נקבות בשלבי הסימון. מלבד השימוש בהם בתוכניות SIT מבצעיות, זכרים סטריליים אלה יכולים לשמש באופן נרחב גם בניסויים החוקרים תחרות הזדווגות, הישרדות ופיזור של זכרים מוקרנים בהשוואה לזכרים פראיים שאינם מוקרנים.שינוי הטכניקה כך שתכלול נקבות יתושים מאפשר לנו לחקור את ההשפעה של שחרור לא מכוון של נקבות מוקרנות ביחס ליכולת הנקבה והווקטורית.

Research

JoVE Journal

Biology

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes

Microinjection עוברים א aegypti לקבל יתושים טראנסגנטי

In this video, Nijole Jasinskiene demonstrates the methodology employed to generate transgenic Aedes aegypti mosquitoes, which are vectors for dengue ...

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes (A. aegypti) and Infection Phenotype Determination

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes A. aegypti and Infection Phenotype Determination

פרוטוקול זיהומים דנגי ב יתושים (א aegypti) ו הפנוטיפ קביעת זיהום

The purpose of this procedure is to infect the Aedes mosquito with dengue virus in a laboratory condition and examine the infection level and dynamic of ...

Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes

Dissection של בלוטות הרוק midgut ו מ AE. aegypti יתושים

The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for pathogens such as Plasmodium parasites and Dengue viruses. This video protocol ...

Building a Better Mosquito: Identifying the Genes Enabling Malaria and Dengue Fever Resistance in A. gambiae and A. aegypti Mosquitoes

בניית יתוש עדיף: זיהוי הגנים הפעלת מלריה קדחת דנגי ההתנגדות ב א gambiae וא aegypti יתושים

In this interview, George Dimopoulos focuses on the physiological mechanisms used by mosquitoes to combat Plasmodium falciparum and dengue virus ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi בתיווך ג&#39;ין מציאה ו<em&gt; In vivo</em&gt; Diuresis Assay ב נקבה בוגרת<em&gt; Aedes aegypti</em&gt; יתושים

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

An Experimental and Bioinformatics Protocol for RNA-seq Analyses of Photoperiodic Diapause in the Asian Tiger Mosquito, Aedes albopictus

An Experimental and Bioinformatics Protocol for RNA-seq Analyses of Photoperiodic Diapause in the Asian Tiger Mosquito, Aedes albopictus

ניסיוני וביואינפורמטיקה פרוטוקול לניתוח RNA-seq של Photoperiodic דיאפאוזה באסיה טייגר נגד יתושים,<em&gt; אדס המפוספס</em

Photoperiodic diapause is an important adaptation that allows individuals to escape harsh seasonal environments via a series of physiological changes, ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

הקלטות פיסיולוגיות וRNA רצף של האיברים התעוררו אצל של יתוש הקדחת הצהובה<em&gt; Aedes aegypti</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

תרבות הגוף השמן איברים במערכת Aedes Aegypti, וקטור של וירוס Zika

The insect fat body plays a central role in insect metabolism and nutrient storage, mirroring functions of the liver and fat tissue in vertebrates. Insect ...

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

שמירה על Aedes aegypti יתושים נגועים Wolbachia

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

הקרנת מבחני עבור הערכה של השפעות על Ca2 +תפוקה בינונית-איתות ותגובה Acrosome זרע אנושי

Ca2+-signaling is essential to normal sperm cell function and male fertility. Similarly, the acrosome reaction is vital for the ability of a human sperm ...