Name: preparing irradiated and marked male aedes aegypti mosquitoes for release in an operational sterile insect technique program
Uploaded: 2021-03-12T14:00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program at JoVE.com

Dr. R.-D.'ye teşekkür ederiz. Xue, C. Bibbs, W. Qualls ve V. Aryaprema, Anastasia Sivrisinek Kontrol Bölgesi, St. Augustine, Florida, SIT programının geliştirilmesinde ortaklık ve steril erkek Aedes aegypti'nin etkili operasyonel salınımı konusunda uzman görüşü için. Bu araştırma USDA-ARS ve Florida Tarım ve Tüketici Hizmetleri Bakanlığı (FDACS) tarafından desteklenmiştir. Bu yayında ticari adların veya ticari ürünlerin belirtilmesi yalnızca belirli bilgiler sağlamak içindir ve USDA veya FDACS tarafından tavsiye veya onay anlamına gelmez.

<ol>
	<li>Moyes, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contemporary+status+of+insecticide+resistance+in+the+major+Aedes+vectors+of+arboviruses+infecting+humans.">Contemporary status of insecticide resistance in the major Aedes vectors of arboviruses infecting humans.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 11 (7), 0005625 (2017).</li><li>Baldacchino, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+methods+against+invasive+Aedes+mosquitoes+in+Europe:+a+review.">Control methods against invasive Aedes mosquitoes in Europe: a review.</a> Pest Management Science. 71 (11), 1471-1485 (2015).</li><li>Burkett, D. A., Cope, S. E., Strickman, D. A., White, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Deployed+Warfighter+Protection+(DWFP)+Research+Program:+Developing+new+public+health+pesticides,+application+technologies,+and+repellent+systems.">The Deployed Warfighter Protection (DWFP) Research Program: Developing new public health pesticides, application technologies, and repellent systems.</a> Journal of Integrated Pest Management. 4 (2), 1-7 (2013).</li><li>Harwood, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+Aedes+aegypti+in+cryptic+environments+with+manually+carried+ultra-low+volume+and+mist+blower+pesticide+applications.">Controlling Aedes aegypti in cryptic environments with manually carried ultra-low volume and mist blower pesticide applications.</a> Journal of the American Mosquito Control Association. 32 (3), 217-223 (2016).</li><li>Morrison, A. C., Zielinski-Gutierrez, E., Scott, T. W., Rosenberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+challenges+and+proposing+solutions+for+control+of+the+virus+vector+Aedes+aegypti.">Defining challenges and proposing solutions for control of the virus vector Aedes aegypti.</a> PLoS Medicine. 5 (3), 68 (2008).</li><li>Klassen, W., Curtis, C. F., InDyck, V. A., Hendrichs, J., Robinson, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+the+sterile+insect+technique.">History of the sterile insect technique.</a> Sterile insect technique: principles and practice in area-wide integrated pest management. , 3-36 (2005).</li><li>Alphey, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterile-insect+methods+for+control+of+mosquito-borne+diseases:+an+analysis.">Sterile-insect methods for control of mosquito-borne diseases: an analysis.</a> Vector Borne and Zoonotic Diseases. 10 (3), 295-311 (2010).</li><li>Dame, D. A., Curtis, C. F., Benedict, M. Q., Robinson, A. S., Knols, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Historical+applications+of+induced+sterilisation+in+field+populations+of+mosquitoes.">Historical applications of induced sterilisation in field populations of mosquitoes.</a> Malaria Journal. 8, (2009).</li><li>Bond, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+irradiation+dose+to+Aedes+aegypti+and+Ae.+albopictus+in+a+sterile+insect+technique+program.">Optimization of irradiation dose to Aedes aegypti and Ae. albopictus in a sterile insect technique program.</a> PloS One. 14 (2), 0212520 (2019).</li><li>Bourtzis, K., Lees, R. S., Hendrichs, J., Vreysen, M. J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=More+than+one+rabbit+out+of+the+hat:+Radiation,+transgenic+and+symbiont-based+approaches+for+sustainable+management+of+mosquito+and+tsetse+fly+populations.">More than one rabbit out of the hat: Radiation, transgenic and symbiont-based approaches for sustainable management of mosquito and tsetse fly populations.</a> Acta Tropica. 157, 115-130 (2016).</li><li>Carvalho, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+production+of+genetically+modified+Aedes+aegypti+for+field+releases+in+Brazil.">Mass production of genetically modified Aedes aegypti for field releases in Brazil.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. , e3579 (2014).</li><li>Carvalho, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aedes+aegypti+lines+for+combined+sterile+insect+technique+and+incompatible+insect+technique+applications:+the+importance+of+host+genomic+background.">Aedes aegypti lines for combined sterile insect technique and incompatible insect technique applications: the importance of host genomic background.</a> Entomologia experimentalis et applicata. 168 (6-7), 560-572 (2020).</li><li>Mamai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aedes+aegypti+larval+development+and+pupal+production+in+the+FAO/IAEA+mass-rearing+rack+and+factors+influencing+sex+sorting+efficiency.">Aedes aegypti larval development and pupal production in the FAO/IAEA mass-rearing rack and factors influencing sex sorting efficiency.</a> Parasite. 27, 43 (2020).</li><li>Zheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incompatible+and+sterile+insect+techniques+combined+eliminate+mosquitoes.">Incompatible and sterile insect techniques combined eliminate mosquitoes.</a> Nature. 572 (7767), 56-61 (2019).</li><li>. Methods in Aedes Research Available from: <a target="_blank" href="https://www.beiresources.org/Portals/2/VectorResources/Methods%20in%20Aedes%20Research%202016.pdf">https://www.beiresources.org/Portals/2/VectorResources/Methods%20in%20Aedes%20Research%202016.pdf</a> (2016)</li><li>Focks, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+separator+for+the+developmental+stages,+sexes,+and+species+of+mosquitoes+(Diptera:+Culicidae).">An improved separator for the developmental stages, sexes, and species of mosquitoes (Diptera: Culicidae).</a> Journal of Medical Entomology. 17 (6), 567-568 (1980).</li><li>International Atomic Energy Agency. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manual of Dosimetry in Radiotherapy. Technical Reports Series No. 110. , (1970).</li><li>Aldridge, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gamma-irradiation+reduces+survivorship,+feeding+behavior,+and+oviposition+of+female+Aedes+aegypti.">Gamma-irradiation reduces survivorship, feeding behavior, and oviposition of female Aedes aegypti.</a> Journal of the American Mosquito Control Association. 36 (3), 152-160 (2020).</li><li>Cianci, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimating+mosquito+population+size+from+mark-release-recapture+data.">Estimating mosquito population size from mark-release-recapture data.</a> Journal of Medical Entomology. 50 (3), 533-542 (2013).</li><li>Knipling, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The basic principles of insect population suppression and management. , (1979).</li></ol>

Tüm yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan etmişlerdir.

Radyasyon kullanan SİT içeren bir kontrol programının başlatılması, yerel bir Aedes aegypti suşunun kurulmasını gerektirir. Bu adım kritiktir ve SIT'in kendisini benzer kontrol teknolojilerinden gerçekten ayırt etmesini sağlayabilir. Projeyi yerel bir sivrisinek türünden geliştirerek, üretilen erkekler muhtemelen çevresel değişikliklere ve ipuçlarına uyum sağlamalarına ve çevredeki vahşi dişileri bulmalarına ve onlarla çiftleşmelerine izin veren davranışlara sahip olacaklardır. Dahası, ışınlanmış yerel erkeklerin serbest bırakılması, örneğin, yerel sivrisinek popülasyonuna yeni aleller sokabilecek genetiği değiştirilmiş sivrisineklerin yerel olmayan bir suşunun salınmasıyla karşılaştırıldığında olumsuz kamuoyu oluşturmayabilir.
Sadece yaklaşık yarısını kontrol amacıyla kullanabilmek için çok miktarda sivrisinek yetiştirmek için önemli kaynaklar harcamak, Aedes aegypti SIT programının bir sınırlamasıdır. Larvaların olgunlaşmasını pupaların hazır olacağı daha tanımlanmış zaman dilimlerine yoğunlaştırmak için yetiştirme protokolünde iyileştirmeler yapılmalıdır. Bu, en uygun ayrılma zamanında daha fazla pupanın toplanmasına izin verecektir. Bununla birlikte, işlenecek ek pupalar, pupalar toplandığında daha fazla dişinin yavrulanma riskini arttırır ve bu nedenle dişilerin erkeklerle Petri yemeklerine girme ve muhtemelen serbest bırakılma olasılığını arttırır. Işınlanmış dişi Aedes aegypti pupalarında yaşam süresi, kan besleme davranışı ve yumurtlama davranışı yetişkinlerde azalmış olsa da, ışınlanmış erkeklerin yanında kadınları tesadüfen serbest bırakmak iyi bir strateji değildir22. Bu nedenle, yanlışlıkla erkeklerle ayrılan, ışınlanan, işaretlenen ve serbest bırakılan kadın sayısını en aza indirmek bir öncelik olarak kalmalıdır.
Bir SIT programının başarısı nihayetinde koloni tarafından yetiştirilen, ışınlanmış erkeklerin başarılı eş rekabetine dayanır. Erkek rekabet gücünün korunması, dozun deneysel olarak türetilmiş kapsamlı seçimine ve popülasyondaki steril: vahşi erkeklerin tahmini oranının en üst düzeye çıkarılmasına dayanır. Doz seçimi, uzun ömürlülük, doğurganlık, doğurganlık ve pupa mortalitesini içeren birkaç anahtar faktör tarafından belirlenir. Erkek sivrisineklerin radyasyon arttıkça sıfıra yaklaşan asimptotik bir doğurganlık eğrisi sergileyeceği gözlemlenmiştir (KJL, RLA, SCB yayınlanmamış veriler). Aynı zamanda, radyasyon dozu arttıkça erkek sivrisinek ömrü ve aktivite seviyeleri katlanarak azalır (KJL, RLA, SCB yayınlanmamış veriler). Bu nedenle, erkeklerde% 99.9 sterilite veren bir doz tanımlamak yerine, hayatta kalmayı desteklerken daha düşük bir sterilite yüzdesine odaklanmak tercih edilir. Işınlanmış erkeklerin uzun ömürlülüğünü veya pupa mortalitesini ışınlanmamış erkeklerinkinden ayırt etmeyen bir doz aralığı belirlendikten sonra, erkekleri ezici bir şekilde steril, ancak rekabetçi kılan bir dozu tanımlamak için doğurganlık üzerine ek değerlendirmeler yapılmalıdır.
Aynı zamanda, popülasyondaki erkek sivrisineklerin sayısını, salınan ışınlanmış erkeklerinkiyle karşılaştırmak çok önemlidir. Bu, hedef salınım alanının içindeki ve çevresindeki çeşitli konumlardan erkekleri aynı yerden tekrar tekrar ve SIT programının başlatılmasından önce, sırasında ve sonrasında toplayarak gerçekleştirilebilir. Yabani erkek sivrisineklerin salınan sivrisineklere oranını değerlendirmek için bir işaret, salınım, yeniden yakalama çalışması yapılmalıdır. Bir işaret, salınım, yeniden yakalama çalışması, bilinen sayıda işaretli sivrisineğin belirli bir noktadan salınmasına ve daha sonra ilk salınım noktasını çevreleyen yakın noktalarda yeniden yakalanmalarına dayanır. Salınım noktasından uzakta yeniden yakalanan erkeklerin ve vahşi erkeklerin sayısını karşılaştırarak, bölgedeki erkeklerin genel vahşi popülasyonunu tahmin etmek mümkündür, böylece steril erkeklerin rekabetçi oranları23 serbest bırakılabilir. Steril: vahşi erkeklerin oranını en üst düzeye çıkarmak, daha steril erkeklerin serbest bırakılmasıyla ve / veya kaynak azaltma, olgunlaşmamış kontrol veya yetişkin öldürme tedavileri gibi klasik kontrol araçlarıyla vahşi popülasyonun azaltılmasıyla sağlanabilir.
Steril erkek salınımlarının etkinliğini ölçmek için, yetişkin koleksiyonları kronolojik olarak müdahale edilmeyen bir alanla karşılaştırılabilir. Steril erkekler serbest bırakıldıkça ve bir alanda toplanan erkek ve dişilerin sayısı, karşılaştırılabilir bir müdahale dışı alana göre azaldıkça, serbest bırakılan steril erkeklerin yerel verimli erkekleri başarılı bir şekilde geride bırakmasından kaynaklandığı varsayılabilir. Bu etki, hem müdahale hem de müdahale edilmeyen bölgelerde konuşlandırılan yumurtlama tuzağı kaplarında da gözlenebilir. Müdahale bölgesinde hala yumurta üretilebilir, ancak müdahale edilmeyen bölgeden daha az yumurtadan çıkarsa, steril erkeklerle çiftleşen dişiler nedeniyle döllenmedikleri varsayılabilir. Döllenmemiş yumurtaların giderek daha fazla yumurtlaması, müdahale bölgesindeki dişilerin değiştirilmemesi nedeniyle yumurtlamanın azalmasına neden olabilir 8,24.
SIT teknolojisinin ve programlarının gelecekteki yönleri doğal olarak tıbbi olarak önemli ek sivrisinek türlerine genişlemektedir. Örneğin, bu teknoloji, Aedes aegypti ve Aedes albopictus'un çok benzer biyonomiği göz önüne alındığında, Aedes albopictus'u kontrol etmek için kolayca uyarlanabilir. İlgilenilen diğer hastalık vektör sivrisinek türleri arasında Culex quinquefasciatus, Culex tarsalis ve çeşitli Anopheles türleri bulunmaktadır. Bu teknolojinin etkinliğini artırmak, belirli bir zamanda üretilen erkek pupaların kapasitesinin arttırılmasına, genetik manipülasyon veya yapay seleksiyon yoluyla elde edilebilmesine ve erkekliğin, doğurganlığın veya uzun ömürlülüğün arttırılmasıyla elde edilebilecek erkek rekabet gücünün geliştirilmesine bağlıdır.
Sonuçta, SIT programları sivrisinekleri kontrol etmek için gümüş bir mermi değildir. Bunun yerine, IVM programları gibi teknikler arasındaki zayıflıkları çapraz telafi eden bir dizi diğer kontrol tekniğinde bir araçtır. Örneğin, kimyasal kontrol hızlı ve ucuz kontrol sunarken, aynı zamanda direncin ve hedef dışı mortalitenin gelişimini de teşvik eder; ve SIT türe özgü ve direnç üretmesi muhtemel olmasa da, SIT erkekleri vektör kontrol bölgesi dışından göç eden popülasyonları kontrol etmek için sürekli olarak üretilmeli ve serbest bırakılmalıdır.

Sivrisinek kaynaklı patojenlerin insanlara bulaşması, dünya çapında her yıl milyonlarca hastalık ve ölüm vakasına neden olmaktadır. Zika veya dang humması gibi sivrisinek kaynaklı hastalıklar için etkili, onaylanmış aşıların yokluğunda, bulaşmayı azaltmanın en etkili yollarından biri, hastalık vektörü sivrisinek popülasyonlarını azaltmaktır. Geleneksel olarak pestisitler tarafından hedeflenen artan sayıda sivrisinek türü, artan düzeyde pestisit direnci sergilemektedir1. Aynı zamanda, devlet kurumları daha önce onaylanmış pestisitlerin kayıtlarını agresif bir şekilde sildi veya yasakladı ve birkaç yeni, etkili kimyasal kontrol önlemi geliştiriliyor 2,3. Sivrisinek kontrolünün önündeki engellerin bu takımyıldızı, sivrisinek popülasyonlarını azaltmak için alternatif kimyasal olmayan tekniklerin araştırılmasını motive etmiştir.
Bazı sivrisinek türleri, direnç ve pestisit kaydı konularını kontrol etmek için zorluklar ortaya koymaktadır. Aedes aegypti (L.), bu türün olgunlaşmamış gelişim ve yetişkin istirahati için yararlandığı şifreli peri-yerli habitat nedeniyle geleneksel entegre vektör yönetimi ile kontrol edilmesi son derece zor olan belirgin bir hastalık-vektör sivrisineksidir 4,5. Konutların etrafındaki şifreli habitatın sömürülmesiyle ilgili zorluklar arasında, pestisit püskürtme teknikleriyle bu yerlere ulaşmanın zorluğunun yanı sıra, halk sağlığı vektör kontrol kurumlarının bu tür için etkili entegre vektör yönetimi (IVM) için çok önemli olan yoğun gözetim ve kontrol faaliyetlerini yürütmeleri için özel mülkiyete tekrar tekrar erişim için halk tarafından potansiyel olarak kabul edilmemesi yer almaktadır.
Neyse ki, diğer son derece zorlu böcek türlerinin6'nın kalıcı kontrolü için başarılı olduğu kanıtlanmış bir yaklaşım olan SIT, Florida, St. Augustine'de (KJL, RLA, SCB yayınlanmamış veriler) bulunan çığır açan bir dizi deney ve operasyonel denemede Aedes aegypti problemine uygulanmaktadır. SIT, sivrisinekler de dahil olmak üzere bir dizi böcek türüne uygulanmış ve 7,8 derinlemesine gözden geçirilmiştir. SIT, sterilize edilmiş koloni tarafından yetiştirilen erkeklerin kitlesel salınımından yararlanır, örneğin, iyonlaştırıcı radyasyona veya kimyasallara maruz kalarak, kadınların doğal popülasyonlarının eş seçimini ezmek için. Vahşi dişilerle çiftleşen sterilize erkekler, erkek gametlerin uğradığı hasar nedeniyle yumurtaları kısır hale getirir ve yeterli sayıda mevcutsa, teorik olarak doğal Aedes aegypti popülasyonunu çökertebilir.
Atlantik kıyısı Florida'daki bir kentsel alanda Aedes aegypti popülasyonlarını azaltmaya çalışmak için bir SIT programı başlatıldı ve bu türün yakın zamanda yeniden kolonileştiği ve Zika, dang humması veya chikungunya gibi virüslerin bulaşması için halk sağlığı riski oluşturduğu ve genişlediği ve sunduğu görülüyor. Vahşi dişilerle uyumluluk potansiyelini en üst düzeye çıkarmak için,9 programı için erkek üretmek üzere hedef popülasyondan vahşi yakalanmış Aedes aegypti kullanılarak yeni bir koloni kuruldu. Bu, yerel olarak türetilmiş, koloni tarafından yetiştirilen erkeklerin, yerel vahşi dişilerle çiftleşmek için yerel vahşi erkeklerle rekabet etme olasılığının daha yüksek olacağı hipotezine dayanıyordu. SIT'in etkili olması için, hedef bölgede sadece çok sayıda steril erkeğin bulunması gerekmez, aynı zamanda yerel vahşi dişi sivrisineklerle etkili bir şekilde kur yapma ve çiftleşme yeteneğine sahip olmaları gerekir.
Serbest bırakılacak en uygun steril erkek sayısını (KJL, RLA, SCB yayınlanmamış veriler) ve ayrıca vahşi dişilerin hayatta kalmasına, davranışına veya kabulüne müdahale etmeden erkekleri kısır hale getirecek optimal radyasyon dozlarını belirlemek için bir dizi deney yapılmıştır (KJL, RLA, SCB yayınlanmamış veriler). Bu veriler bu grubun müttefik yayınlarında ortaya çıkıyor, ancak bu bulguların bazıları bu protokolde de yakalanıyor ve başka yerlerde yeni SIT Aedes aegypti kontrol programları için bir başlangıç noktası olarak kullanılabilir. Bu tür sürekli olarak yelpazesini genişletiyor ve SIT programları bu popülasyonu kontrol etmek için uygun maliyetli, uzun vadeli çözümler olma konusunda büyük umut vaat ediyor. Bu protokolün amacı, operasyonel bir halk sağlığı vektör kontrol programında yerel Aedes aegypti popülasyonlarının doğal üreme döngülerini bozmak için dış alanlara sistematik olarak salınmak üzere sterilize edilmiş, erkek, koloni tarafından yetiştirilen Aedes aegypti sivrisinekleri üretmektir.
Transgenik Aedes aegypti erkeklerinin üretimi için benzer protokoller ve iş akışları ve Aedes SIT veya Wolbachia tabanlı uyumsuzluk programları için üretim iş akışları başka yerlerde yayınlanmış olsa da, bu protokol mevcut protokollerin Aedes aegypti üretimi, erkek pupalarının ayrılması ve ışınlanması, yetişkin erkeklerin işaretlenmesi ve paketlenmesi ve bu program için yayın alanına gönderilmesi için nasıl uyarlandığını göstermektedir 9, 10,11,12,13,14,15,16,17,18. Bu protokolün işaretleme bileşeni, olgun bir operasyonel SIT programında gerekli olmayabilir; ancak, SIT programının kurulmasının ilk yıllarında tüm sürecin etkinliğini izlemenin ve kalitesini kontrol etmenin bir yolu olduğu için buraya dahil edilmiştir. Sivrisinek kontrol programları tipik olarak yerel yetkililer tarafından yürütülür, bu nedenle yerel başarıyı en üst düzeye çıkarmak için kuruluşlarının büyüklüğü ve finansman tabanından kontrol taktiklerini ayarlamaya kadar birçok yönüyle geniş ölçüde değişebilirler. Bu nedenle, burada açıklanan protokol mevcut kaynaklarla uyumluluk açısından değerlendirilmelidir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1-1/8&#34; wrench (1&#34; (1 inch) = 2.54 cm)</td>
			<td>Craftsman</td>
			<td>CMMT44707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/2 pint cardstock cup (1/2 pint = 236.5 mL)</td>
			<td>Science Supplies WLE corp</td>
			<td>1/2 pint</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4&#34; tubing - tygon</td>
			<td>Hudson Extrusions</td>
			<td>LLDPE1/8 X 1/4 BLK</td>
			<td>to attach to CO2 gas regulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/8&#34; brass barb w/ MIP connection</td>
			<td>B&#38;K</td>
			<td>BHB-85NLB</td>
			<td>to attach to CO2 gas regulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 mL graduated plastic beakers with handle</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1223-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3000 mL graduated plastic beakers with handle</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1223-3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adult large cage</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>1450D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator vials</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>2809V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine liver powder</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>290039601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brewers yeast</td>
			<td>MP Biomericals</td>
			<td>02903312-CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 regulator</td>
			<td>Randor</td>
			<td>64003038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 tank (20# canister)</td>
			<td>Praxair</td>
			<td>CDBEVCARB20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection basin</td>
			<td>Treasure Gurus</td>
			<td>KI-ENAMELBOWL</td>
			<td>for separator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton balls - large</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-456-883</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deli cups w/lids - 470 mL</td>
			<td>Pactiv DELItainer</td>
			<td>PCTYSD2516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deli cups w/lids - 1900 mL</td>
			<td>Berry Global</td>
			<td>T60764</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DoseReader 4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>ND0.5 and ND1.0 QA Filter Set standards</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dosimetry film</td>
			<td colspan="2">Far West Technology, Inc.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AP10045S0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flashlight aspirator</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>2809D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps - fine featherweight</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>4748 or 4750</td>
			<td>featherweight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GAFchromic</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>radiochromic film</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gammator M</td>
			<td>Radiation Machinery Corporation, Parsippany, NJ</td>
			<td></td>
			<td>Cesium-137 irradiator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hand held mechanical aspirator</td>
			<td>Clarke Mosquito</td>
			<td>13500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lambskin condoms</td>
			<td>Trojan</td>
			<td>Naturalamb</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large CO2 chamber</td>
			<td>Sterilite</td>
			<td colspan="2">Walmart #&#160;568789514</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Larval rearing pans</td>
			<td>Blue Ridge Thermoforming</td>
			<td>&#160;01-FG-400-3N-ABS</td>
			<td>Dimensions: 22.375 x 17.5 x 3 (inches)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnets - 20# pull</td>
			<td>Master magnetics</td>
			<td>MHHH20BX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marking dye</td>
			<td>Dayglo</td>
			<td>ECO-11</td>
			<td>Aurora Pink</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marking dye</td>
			<td>Dayglo</td>
			<td>ECO-17</td>
			<td>Saturn Yellow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh</td>
			<td>Falk</td>
			<td></td>
			<td>T301</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasture pipettes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>02-708-006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes - large</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>25384-090 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes - small (60 mm x 15 mm)</td>
			<td>Fisher Brand</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pupa separator</td>
			<td>J.W. Hock</td>
			<td>1512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red rubber hose</td>
			<td>Welch</td>
			<td>331040-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Release containers</td>
			<td>Science Supplies WLE corp</td>
			<td>1 gallon</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber bands - cross #19</td>
			<td>Alliance</td>
			<td>ALL37196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber bands - latitude #64</td>
			<td>Skillcraft</td>
			<td>NSN0589974</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>H-4737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seed germination paper - Heavy stock 76#</td>
			<td>Anchor Paper</td>
			<td>#76</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shipping coolers- 16 x 13 x 12.5&#34;</td>
			<td>MrBoxonline.com</td>
			<td colspan="2">Husky Foam Cooler kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sieve #20</td>
			<td>Advantech</td>
			<td>20BS8F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sieve #30</td>
			<td>Advantech</td>
			<td>30BS8F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small cage - Bug Dorm</td>
			<td>MegaView</td>
			<td>Bug Dorm-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small CO2 chamber</td>
			<td>Mainstays</td>
			<td colspan="2">Walmart #&#160;562922221</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Souffle cup lid</td>
			<td>SOLO</td>
			<td>41165277456</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Souffle cups - 4 oz (1 oz = 29.6 mL)</td>
			<td>SOLO</td>
			<td>41165024104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sponge</td>
			<td>ocelo</td>
			<td>MMM7274FD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Squeeze bottle</td>
			<td>Dynalon</td>
			<td>3UUP6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereoscope</td>
			<td>Meiji Techno</td>
			<td>EMZ-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stockinette</td>
			<td>BSN Medical</td>
			<td>30-1006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>extruded polystyrene foam</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropical fish flake food</td>
			<td>Tetra</td>
			<td>4.52 pound</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaccum chamber - desiccator</td>
			<td>BelArt</td>
			<td>T9FB892757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh boats</td>
			<td>Globe Scientific</td>
			<td>3621</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparing irradiated and marked male aedes aegypti mosquitoes for release in an operational sterile insect technique program

Dang humması, Zika ve chikungunya gibi insan hastalıklarının kontrolü, vektörleri Aedes aegypti sivrisineğinin kontrolüne dayanır, çünkü önleme yoktur. Sivrisinek vektörlerinin kontrolü, olgunlaşmamış ve yetişkin aşamalara uygulanan kimyasallara güvenebilir, bu da hedef olmayanların mortalitesine katkıda bulunabilir ve daha da önemlisi, vektörde böcek ilacı direncine yol açabilir. Steril böcek tekniği (SIT), canlı olmayan yavrular üretmek için vahşi dişilerle çiftleşen sterilize yetişkin erkeklerin salınması yoluyla haşere popülasyonlarını kontrol etmenin bir yöntemidir. Bu makalede, Aedes aegypti sivrisineklerinin kontrolü için operasyonel bir SIT programında kullanılmak üzere steril erkeklerin üretilmesi süreci açıklanmaktadır. Burada özetlenenler, bir koloninin yetiştirilmesi ve sürdürülmesi, erkek ve dişi pupaların ayrılması, yetişkin erkeklerin ışınlanması ve işaretlenmesi ve Aedes aegypti erkeklerinin salınım bölgesine gönderilmesi dahil olmak üzere programda kullanılan adımlardır. Ayrıca prosedürel uyarılar, program sınırlamaları ve gelecekteki hedefler de tartışılmaktadır.

Uyanık ve yeterli sivrisinek yetiştiriciliği, koloni kafeslerinde erkek ve dişilerin dengeli mevcudiyeti, taze sakkaroz çözeltisi ve balın bakımı ve tutarlı yüksek kaliteli kan beslenmesinden oluşur. Bu koşullar, SIT larva yetiştirme tavalarında kullanım için en uygun şekilde paketlenmiş yumurta tabakaları sağlayacaktır. En eskisinden en yenisine kullanımı kolaylaştırmak için sistematik etiketleme gibi kurutulmuş yumurta tabakalarının uygun şekilde depolanması ve kullanılması, tüm tavalarda tek tip kuluçkalamayı destekleyecektir. Yumurtadan çıkmadan önce tüm larva yetiştirme tavalarının suyla doldurulması, yumurta tabakalarının kapak kaplarında bulunduğu süreyi azaltabilir ve sağlıklı gelişimi destekleyebilir. Larva tavalarının kapaktan yavruya kadar bakımı, koloni personelinin dikkatli bir şekilde katılımını gerektirir, çünkü bazı tavalar gelişim aşamalarına ve çevresel değişkenlere bağlı olarak az ya da çok yiyeceğe veya ek suya ihtiyaç duyabilir. Pupa cinsiyet ayrımının planlanan gününe kadar gelişim aşaması ile ilgili sorunlar varsa, daha erken veya daha geç kuluçkalama, yiyecekleri ayarlama veya inkübatör sıcaklığını değiştirme gibi süreçte daha erken ayarlamalar yapılmalıdır.
Bu protokoldeki yetiştirme süreci, zamanla yumurtadan çıkan tüm yumurtaların ışınlanabilen ve kontrol amacıyla kullanılabilen pupalara dönüşmesini sağlamaz. Koloni tarafından yetiştirilen sivrisineklerin% 20 ila% 50'si, pupaların ayrılması gerektiğinde hala larva olacaktır. Bununla birlikte, bu larvalar israf edilmez, ancak önceki günün ayrılmasından dişi pupalarla birleştirilebilecek ve koloni kafeslerine geri dönüştürülebilecek ek pupa oluşturmak için 24 saat boyunca olgunlaşmalarına izin verilir. Koloni kafeslerinde, pupaların yetişkinlere dönüşmesine, çiftleşmesine, kan beslemesine ve SIT projesini sürdüren yumurtalar üretmesine izin verilecektir.
Pupaları ayırmak, pupaları Petri kaplarına dökmek, ışınlamak ve ışınlamadan sonra yetişkin tutma kafeslerine yerleştirmek bir gün içinde gerçekleşmelidir; Bu nedenle, tüm adımları rahatça işlemek için yeterli zaman ayrılmalıdır. Serbest bırakma kaplarının montajı ve hazırlanması, işaretleme işleminden önce yapılmalıdır. Nakliye kutuları serbest bırakma alanından iade edildiğinde, serbest bırakma konteynerleri incelenmeli ve bir sonraki kullanımları için hazırlanmalıdır. Islak pamuk toplarını atmak, ıslak serbest bırakma kaplarını havalandırmak, Petri bulaşıklarını temizlemek, ağı değiştirmek ve elastik bantları kaptan çıkarmak, kullanımda değilken, serbest bırakma kaplarının ömrünü büyük ölçüde uzatacaktır.
COVID-19 viral pandemisinin dünya çapındaki gerçekliği göz önüne alındığında, tipik olarak çok kişilik bir operasyon olan bu protokol, her adım için bir laboratuvarda tek başına çalışan bir kişi tarafından çekilebilecek şekilde değiştirilmiştir. Tek kişilik bir senaryo tarafından en çok engellenen süreçteki adımlar, cinsiyetlendirme, işaretleme, tartma ve koloni yetiştirme bakım adımlarıdır. Pupaları cinsiyete göre bir kişi tarafından ayırmak, farklı odalarda aynı anda çalışan birden fazla ayırıcı varsa yeterli olmalıdır. İşyerinde sosyal mesafenin oluştuğu bir pandemi durumunda, cinsel ilişkiden paketlemeye kadar olan adımları tamamlamak için birden fazla istasyonun donatılması gerekir. Operatörün hızına bağlı olarak, 15.000 sivrisinek seks yapmak için bir kişi ~ 4 saat ve daha sonra onları işaretlemek, tartmak ve paketlemek için 1-2 saat daha sürer. İki kişilik bir senaryo, sivrisineklerin işaretleme için uyuşturulduğu süreyi azaltır ve genel çalışma süresini azaltır. Yine de, iki kişilik bir senaryoda bile, salınım kafesi başına tam 2.0 g sivrisinek tahsis etmek, sivrisinekler sakinleştirilirken sınırlı çalışma süresi nedeniyle zor olabilir. Larva ve yetişkin yetiştirme materyallerini temizleme ve hazırlama süreci son derece zaman alıcı ve emek yoğun olmasına rağmen, bireysel operatörlerin bir pandemi sırasında bağımsız ve güvenli bir şekilde çalışabileceği şekilde bölümlendirilebilir.
Erişkin, işaretli, ışınlanmış Aedes aegypti erkeklerinin serbest bırakılması bu protokolün kapsamı dışındadır ancak burada kısaca sunulmuştur. İşaretli, ışınlanmış, erkek sivrisinekleri serbest bırakma süreci, Tablo 3'te bildirildiği gibi, salınım kaplarının ağırlıklara (ve dolayısıyla steril erkeklerin çıkarılan sayılarına) dayalı olarak eşit bir salınım dağılımını belirleyerek başlar. Gönderiler vektör kontrol bölgesine teslim edildikten sonra, kutular açılır ve serbest bırakma konteynerleri, serbest bırakma konteynerlerinin ölüm oranı veya durumu ile ilgili herhangi bir sorun için değerlendirilir. Salınım kaplarındaki sivrisineklerin daha sonra tedavi alanına taşınmadan önce 1-2 saat boyunca ortam sıcaklığına ve neme alışmasına izin verilir. Tedavi alanındaki salınım bölgeleri, Aedes aegypti'nin vahşi popülasyonlarının sıcak noktaları için yoğun gözetimden sonra tespit edilir. Salınımların zamanlaması, sıklığı ve yoğunluğu, türlerin biyonomiklerinin yanı sıra meteoroloji, kamu desteği ve laboratuvar yetiştirme yetenekleri ile dengelenir.
Belirli serbest bırakma kapları belirli serbest bırakma bölgeleriyle eşleştirildiğinden, serbest bırakma kabı açılmadan önce, üstteki ağ kesilerek etiketin çapraz kontrol edilmesi gerekir, böylece operatörün ağın deforme olmasına izin verilir, böylece erkeklerin bir kısmı kaçabilir. Bu kesirli serbest bırakma yöntemi, serbestçe uçan tüm erkekler serbest bırakılana kadar konteyner için atanan her serbest bırakma noktasında tekrarlanır. Bu işlem daha sonra tüm kapsayıcılar işlenene kadar her yayın kapsayıcısı için kendi atanmış yayın konumlarında tekrarlanır. İsteğe bağlı olarak, sivrisinekler serbest bırakıldıktan sonra, serbestçe ayrılmayan ölü veya engelli sivrisinekler Petri kaplarına toplanabilir ve elle sayılmak üzere etiketlenebilir veya salınan tahmini sayıyı düzeltmek için tartılabilir. SIT operasyonunun etkinliğini değerlendirmek için hedef bölgede ve muhtemelen müdahale dışı kontrol bölgelerinde vahşi Aedes aegypti'nin yetişkin, yumurta ve olgunlaşmamış aşamalarının devam eden ve yaygın gözetimi yapılmaktadır.

Watch this Scientific Journal Video about Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program at JoVE.com

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

Steril böcek tekniği (SIT), kimyasal kontrollere dirençli olabilecek spesifik, tıbbi açıdan önemli sivrisinek popülasyonlarını kontrol etmek için kullanılır. Burada, Aedes aegypti sivrisineğini hedef alan operasyonel bir SIT programında salınmak üzere steril erkek sivrisineklerin kitlesel olarak yetiştirilmesi ve hazırlanması yöntemini açıklıyoruz.

Işınlanmış ve İşaretlenmiş Erkek Aedes aegypti Sivrisineklerinin Operasyonel Steril Böcek Tekniği Programında Salınıma Hazırlanması

The control of such human diseases as dengue, Zika, and chikungunya relies on the control of their vector, the Aedes aegypti mosquito, because there is no ...

Bu protokolün benzersiz değeri, küçük laboratuvar alanlarında hazır ekipman kullanan iki personelin, 50 dönümlük bir operasyonel SIT programını desteklemek için yeterli steril mal sivrisinek üretebilmesidir. Bu tekniğin verimliliği ve düşük maliyeti, küçük sivrisinek kontrol bölgelerinin bile entegre vektör kontrol programlarını büyütmek için erişilebilir, zorlu hale getirir. Prosedürü gösteren, ben ve araştırma biriminden biyolojik bilim laboratuvarı teknisyenleri Barbara Bayer olacak.Yetişkin Aedes aegypti'yi pupalardan korumak için, 0,84 x 0,84 milimetre delik boyutunda fiberglas örgü elemeli 60 x 60 x 60 santimetre katlanabilir alüminyum yetiştirme kafesleri ve her kafesin bir dikey duvarında bir erişim stoğu kılıfı hazırlayın. Her yetiştirme kafesinde Aedes aegypti pupa ile 1.900 mililitrelik bir plastik fincanı bire bir cinsiyet oranına yerleştirin ve manşonu kapalı tutun, bardakları yaklaşık dört gün boyunca 28 ila 30 santigrat derecede% 50'den fazla bağıl nemde% 50'den fazla bağıl nemde kafeslerde bırakın. Pupaları yetiştirme kafeslerine yerleştirdikten 24 saat sonra, her kafese bir sünger fitil ile% 10 sakkaroz çözeltisinden oluşan bir kap yerleştirin ve yetişkin sivrisineklere sırasıyla hidrasyon ve beslenme sağlamak için bir tel kancadan bala batırılmış 10 x 2 santimetrelik bir süngeri askıya alın.Çoğu yetişkinin önümüzdeki üç ila dört hafta boyunca her iki ila üç günde bir ortaya çıkmasından 48 ila 72 saat sonra, bir kuzu derisi prezervatifini kafes başına 50 ila 100 mililitre defibrinlenmiş sığır kanı ile doldurun ve prezervatifleri sıcak su banyosunda yaklaşık 37 santigrat dereceye kadar ısıtın. Prezervatifleri havluyla dikkatlice okşadıktan sonra, kısmen kurutulmuş prezervatifleri 30 ila 60 dakika boyunca kafeslerin içindeki tek tek kağıt kaplı Petri kaplarına yerleştirin. Her kan beslemesinden 48 ila 72 saat sonra, 800 mililitre filtrelenmiş pupa suyu içeren ve bardağın iç çevresi boyunca hizalanmış 8 ila 10 x 30 santimetrelik bir tohum çimlenme kağıdı ile donatılmış 1.900 mililitrelik bir yumurtlama kabını her kafese yerleştirin.Aedes aegypti larvalarını yumurtalardan korumak için, 5.000 ila 10.000 yumurta bulunan bir yumurtlama kağıdı kullanın ve yumurtlama çizgisine dik üç ila yedi santimetrelik bir bölüm kesin. Parçayı, yarısı musluk suyu ve bir tutam toz haline getirilmiş balık yemi gevreği ile doldurulmuş 460 mililitrelik yeni bir kaba yerleştirin. Tüm içeriği üç litre musluk suyu ve 50 mililitre kahverengi bulamaç içeren bir larva yetiştirme tavasına dökmeden önce kabı en az bir dakika boyunca kuvvetlice örtün ve çalkalayın.Tavayı başlangıç tarihi, gerinim bilgileri ve besleme programı ile işaretleyin. Larva tavalarındaki larvaların yaklaşık eşik oranına ulaşıldıktan sonra, her bir tencerenin içeriğini 20 ila 40 elek büyüklüğünde bir elek boyunca dökün ve pupaları ve larvaları elek dışında üç litrelik dereceli bir plastik beherin içine yıkamak için bir şişe musluk suyu sıkın. Erkek pupaları larvalardan ve dişi pupalardan ayırmak için, her bir kabın içeriğini birden fazla 1.9 litrelik plastik kaplar arasında bölün ve bir pupa ayırıcının tabanındaki savağın altına sert sığ dört litrelik bir toplama kabı yerleştirin.Musluk suyuyla yaklaşık dörtte üç dolu iki adet üç litrelik dereceli plastik kabı doldurun ve suyun separatörden sürekli akmasını sağlamak için üst ve alt düğmeleri ayarlarken suyu ayırıcının cam plakaları arasındaki boşluktan dökün. Duran su, plakaların tabanından yaklaşık 1,25 santimetre yükseklikte eşit bir şekilde toplandıktan sonra, ayırıcının alt düğmelerindeki başlangıç konumlarını bantla işaretleyin ve alt düğmeleri başlangıç konumlarından bir ila iki santimetre arasında saat yönünün tersine sürekli döndürürken pupa ve larva kaplarını ayırıcıya dökmeye başlayın. Larvaların çoğu veya tamamı savaklardan toplama kabına yıkandığında, su akışını duraklatın ve larvaların toplama kabını temizlemek için 30 numaralı elek kullanın.Tüm larvalar çıkarıldığında, suyu dökün ve erkek pupaların toplama kabına yıkanmasına izin vermek için düğmeleri tekrar ayarlayın. Daha sonra erkek pupaları kaptan 20 numaralı bir elek içine dökün ve pupaları elek içinden ayrı bir 1.9 litrelik kaba yıkamak için bir litrelik sıkma şişesi musluk suyu kullanın. Tüm erkek pupalar toplandığında, suyu dökün ve dişi pupaların toplanmasına izin vermek için düğmeleri ayarlayın.Dişi pupaları az önce gösterildiği gibi 1.9 litrelik yeni bir kaba aktarmak için 20 numaralı elek kullanmak. Sonra suyu dökün ve olgunlaşmamış sivrisineklerin tümü ayırıcıdan temizlenene kadar düğmeleri tekrar ayarlayın. Toplanan erkek pupaları bir elek ile süzün ve kakayı mümkün olduğunca az suyla bir litrelik dereceli bir beherde yıkayın.Pupaları dikkatlice tek bir tabaka halinde nemli filtre kağıdı ile kaplı Petri kaplarına dökün. Çalışma sırasında pupa hareketini önlemek için taze üç mililitrelik mera pipeti kullanarak Petri kabının tabanından durgun suyu çıkarın. Petri tabaklarını ve istiflerini, ışınlama odasına sığacak şekilde etiketli 3,8 litrelik yeniden kapatılabilir bir torbanın içine kapatmadan önce paketleyin.Yetişkin ışınlanmış erkek sivrisineklerin niceliklendirilmiş gruplarını işaretlemek için, yetiştirme kafesinden herhangi bir besin kaynağını çıkarın ve bir kafesi beş ila yedi dakika boyunca büyük bir karbondioksit odasına yerleştirin, duvarlara yapışan sivrisinekleri yerinden çıkarmak için kabın kenarlarını vurun. Maruz kalma süresinin sonunda, sivrisinekleri bir aspiratör şişesine aktarın ve sivrisinekleri beyaz kağıt kaplı bir çalışma yüzeyine sallamadan önce sivrisinekleri tekrar uyuşturun. Tüm erkekleri çalışma yüzeyinden yeni bir şişeye dikkatlice aspire edin ve tüm yetişkin erkekler tüm yetiştirme kafeslerinden toplanana kadar maruziyetleri ve toplamayı tekrarlayın.Cinsiyet sıralama işlemi sırasında bir noktada, sadece 25 yetişkin erkek sivrisinek içeren bir şişe oluşturun. Tüm erkekler toplandığında, her bir sivrisinek aşağılığını bir terazide katranlı bir tartım teknesinde tartın ve tartılan sivrisinekleri hızlı bir şekilde 50 miligram bir işaretleme boyası içeren 240 mililitrelik bir karton kaba dökün. Tüm sivrisinekler hafifçe kaplanana kadar kabı saat yönünde ve saat yönünün tersine bir tam rotasyonla eğin ve döndürün ve sivrisinekleri yeni bir tartım teknesine dökün, ardından sivrisineklerin şarampole manşondan serbest bırakma kabına kanalize edilmesine izin vermek için tartım teknesini ikiye katlayın.Serbest bırakma kabına yaklaşık iki gram erkek sivrisinek eklendiğinde, stockinette manşonu kapattı ve serbest bırakma kabının çerçevesindeki etiketleme bandını boya rengi, kap numarası ve sivrisineklerin toplam ağırlığı ile işaretleyin. Bu temsili erkek yetişkin Aedes aegypti sivrisinek yetiştirme, ışınlama ve pazarlama deneyinde, iki gram erkek yetişkin sivrisinek üç yetiştirme kafesinden ve sivrisinek başına ortalama ağırlığın hesaplanmasına izin vermek için iki kafesten 25 erkeklik iki şişe ile birlikte toplanabildi. Partilerin ikisinden toplam 25 dişi atıldı.Larva yetiştirme haftası boyunca zamanında ve gözlemsel beslenme, ayrılma için iyi gelişmiş pupalar üretmek için kritik öneme sahiptir. Bu, erkekler ve dişiler arasında net bir ayrım yaparak, işaretleme adımlarında kadınların düşük oranda ortaya çıkmasına neden olur. Bunları operasyonel SIT programlarında kullanmanın yanı sıra, bu steril erkekler, yabani ışınlanmamış erkeklere kıyasla ışınlanmış çiftleşme rekabetini, hayatta kalmayı ve ışınlanmayı araştıran deneylerde de yaygın olarak kullanılabilir.Tekniği dişi sivrisinekleri içerecek şekilde değiştirmek, ışınlanmış dişilerin kasıtsız salınımının doğurganlık ve vektör yeterliliği açısından etkisini araştırmamızı sağlar.

Research

JoVE Journal

Biology

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes

Transgenik Sivrisinekler Edinme A. aegypti Embriyolar Mikroenjeksiyon

In this video, Nijole Jasinskiene demonstrates the methodology employed to generate transgenic Aedes aegypti mosquitoes, which are vectors for dengue ...

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes (A. aegypti) and Infection Phenotype Determination

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes A. aegypti and Infection Phenotype Determination

Dang Enfeksiyonlar Sivrisinekler (A. aegypti) ve Enfeksiyon Fenotip belirlenmesi için protokol

The purpose of this procedure is to infect the Aedes mosquito with dengue virus in a laboratory condition and examine the infection level and dynamic of ...

Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes

Ae midgut ve Tükürük Bezlerinin Diseksiyon. aegypti Sivrisinekler

The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for pathogens such as Plasmodium parasites and Dengue viruses. This video protocol ...

Building a Better Mosquito: Identifying the Genes Enabling Malaria and Dengue Fever Resistance in A. gambiae and A. aegypti Mosquitoes

Bina daha iyi Sivrisinek: Sıtma ve Dang Ateşi Direnç A. gambiae ve A. aegypti Sivrisinekler etkinleştirilmesi Genler belirlenmesi

In this interview, George Dimopoulos focuses on the physiological mechanisms used by mosquitoes to combat Plasmodium falciparum and dengue virus ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-aracılı Gene Nakavt ve<em&gt; In Vivo</emYetişkin Kadınlar&gt; diürez Testi<em&gt; Aedes aegypti</em&gt; Sivrisinekler

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

An Experimental and Bioinformatics Protocol for RNA-seq Analyses of Photoperiodic Diapause in the Asian Tiger Mosquito, Aedes albopictus

An Experimental and Bioinformatics Protocol for RNA-seq Analyses of Photoperiodic Diapause in the Asian Tiger Mosquito, Aedes albopictus

Asya Tiger Sivrisinek içinde Photoperiodic Diapause RNA-seq Analizler Deneysel ve Biyoinformatik Protokolü,<em&gt; Aedes albopictus</em

Photoperiodic diapause is an important adaptation that allows individuals to escape harsh seasonal environments via a series of physiological changes, ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Fizyolojik Kayıtlar ve Sarı-ateş Sivrisinek Tat Çıkıntılara RNA Sıralama<em&gt; Aedes aegypti</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Yağ vücut Organ kültür sistemi içinde Aedes Aegypti, bir vektör Zika virüs

The insect fat body plays a central role in insect metabolism and nutrient storage, mirroring functions of the liver and fat tissue in vertebrates. Insect ...

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Aedes aegypti sivrisinek enfekte Wolbachia ile bakımını yapma

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Orta-den geçerek deneyleri Ca2 +etkileri değerlendirilmesi için eleme-sinyal ve insan Sperm Acrosome reaksiyon

Ca2+-signaling is essential to normal sperm cell function and male fertility. Similarly, the acrosome reaction is vital for the ability of a human sperm ...