Name: in vitro 3d cell-cultured arterial models for studying vascular drug targeting under flow
Uploaded: 2021-03-14T14:30:00
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इस काम को इजरायल साइंस फाउंडेशन (आईएसएफ ग्रांट# 902/18) ने सपोर्ट किया। मारिया खैरी की छात्रवृत्ति को बैरोनेस एरियन डी रोथस्चिल्ड वुमन डॉक्टोरल प्रोग्राम द्वारा समर्थित किया गया था।

नोट: यह प्रोटोकॉल कैरोटिड धमनी के 3 डी मॉडल के निर्माण का वर्णन करता है और ज्यामितीय मापदंडों को संशोधित करके ब्याज की किसी भी अन्य धमनी को उत्पन्न करने के लिए लागू किया जा सकता है।
1. मानव कैरोट?...

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	<li>Chiu, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+effect+of+disturbed+flow+on+monocytic+adhesion+to+endothelial+cells.">Analysis of the effect of disturbed flow on monocytic adhesion to endothelial cells.</a> Journal of Biomechanics. 36 (12), 1883-1895 (2003).</li><li>Martorell, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extent+of+flow+recirculation+governs+expression+of+atherosclerotic+and+thrombotic+biomarkers+in+arterial+bifurcations.">Extent of flow recirculation governs expression of atherosclerotic and thrombotic biomarkers in arterial bifurcations.</a> Cardiovascular Research. 103 (1), 37-46 (2014).</li><li>Karino, T., Goldsmith, H. 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P., Peter, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+particle+size,+shape,+density+and+flow+characteristics+on+particle+margination+to+vascular+walls+in+cardiovascular+diseases.">The effects of particle size, shape, density and flow characteristics on particle margination to vascular walls in cardiovascular diseases.</a> Expert Opinion on Drug Delivery. 15 (1), 33-45 (2018).</li><li>Cooley, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+particle+size+and+shape+on+their+margination+and+wall-adhesion:+implications+in+drug+delivery+vehicle+design+across+nano-to-micro+scale.">Influence of particle size and shape on their margination and wall-adhesion: implications in drug delivery vehicle design across nano-to-micro scale.</a> Nanoscale. 10 (32), 15350-15364 (2018).</li><li>Jiang, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantum+dot+interactions+and+flow+effects+in+angiogenic+zebrafish+(Danio+rerio)+vessels+and+human+endothelial+cells.">Quantum dot interactions and flow effects in angiogenic zebrafish (Danio rerio) vessels and human endothelial cells.</a> Nanomedicine: Nanotechnology, Biology, and Medicine. 13 (3), 999-1010 (2017).</li><li>Zarins, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carotid+bifurcation+atherosclerosis.+Quantitative+correlation+of+plaque+localization+with+flow+velocity+profiles+and+wall+shear+stress.">Carotid bifurcation atherosclerosis. Quantitative correlation of plaque localization with flow velocity profiles and wall shear stress.</a> Circulation Research. 53 (4), 502-514 (1983).</li><li>Chien, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+disturbed+flow+on+endothelial+cells.">Effects of disturbed flow on endothelial cells.</a> Annals of Biomedical Engineering. 36 (4), 554-562 (2008).</li><li>Malek, A. M., Alper, S. L., Izumo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodynamic+shear+stress+and+its+role+in+atherosclerosis.">Hemodynamic shear stress and its role in atherosclerosis.</a> JAMA. 282 (21), 2035-2042 (1999).</li><li>Glagov, S., Zarins, C., Giddens, D. P., Ku, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodynamics+and+atherosclerosis.+Insights+and+perspectives+gained+from+studies+of+human+arteries.">Hemodynamics and atherosclerosis. Insights and perspectives gained from studies of human arteries.</a> Archives of Pathology &amp; Laboratory Medicine. 112 (10), 1018-1031 (1988).</li><li>Khoury, M., Epshtein, M., Zidan, H., Zukerman, H., Korin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+deposition+of+particles+in+reconstructed+models+of+human+arteries.">Mapping deposition of particles in reconstructed models of human arteries.</a> Journal of Controlled Release. 318, 78-85 (2020).</li></ol>

कणों के संवहनी लक्ष्यीकरण का अध्ययन करने के लिए वर्तमान दृष्टिकोण मानव शरीर में मौजूद शारीरिक स्थितियों को दोहराने में कम हो जाते हैं। यहां प्रस्तुत एक अनुकूलित परफ्यूजन प्रणाली का उपयोग कर लागू शार...

हाल ही में मानव धमनियों के 3डी मॉडल1, 2 , 3 ,4,5का उपयोग करते हुए कई दृष्टिकोण लागू किए गए हैं । ये मॉडल मानव शरीर में विभिन्न धमनियों के शारीरिक शरीर रचना विज्ञान और पर्यावरण को विट्रो मेंदोहराते हैं । हालांकि इनका इस्तेमाल मुख्य रूप से सेल बायोलॉजी स्टडीज में किया गया है। एंडोथेलियम के कणों के संवहनी लक्ष्यीकरण पर वर्तमान अध्ययनों में सिलिको कंप्यूटेशनल सिमुलेशन6,7,8, इन विट्रो माइक्रोफ्लुइडिक मॉडल 9 ,10,11और वीवो पशु मॉडल12में शामिल हैं। उनके द्वारा प्रदान की गई अंतर्दृष्टि के बावजूद, ये प्रायोगिक मॉडल मानव धमनियों में होने वाली लक्ष्यीकरण प्रक्रिया को सटीक रूप से अनुकरण करने में विफल रहे हैं, जिसमें रक्त प्रवाह और हीमोडायनामिक्स प्रमुख कारकों का गठन करते हैं। उदाहरण के लिए, कैरोटिड धमनी विभाजन में एथेरोस्क्लेरोटिक क्षेत्रों को लक्षित करने वाले कणों का अध्ययन, जो उनके जटिल रिसर्चर प्रवाह पैटर्न और दीवार कतरनी तनाव ढाल के लिए जाना जाता है,एंडोथेलियम13, 14,15,16तक पहुंचने से पहले कणों द्वारा ली गई यात्रा को प्रभावित कर सकता है। इसलिए, इन अध्ययनों को ऐसी परिस्थितियों में किया जाना चाहिए जो शारीरिक वातावरण, यानीआकार, आयाम, शरीर रचना और प्रवाह प्रोफ़ाइल को दोहराते हैं।
हाल ही में, इस शोध समूह ने17के कणों के बयान और लक्ष्यीकरण का अध्ययन करने के लिए 3डी-खंगाला मानव धमनी मॉडल गढ़े। मॉडल मानव रक्त वाहिकाओं की ज्यामितीय 3 डी प्रतिकृतियों पर आधारित थे, जिन्हें तब मानव ईसीएस के साथ सुसंस्कृत किया गया था जो बाद में उनकी आंतरिक दीवारों को रेखांकित करते थे। इसके अलावा, जब एक पर्फ्यूजन प्रणाली के अधीन होता है जो शारीरिक प्रवाह पैदा करता है, तो मॉडल ने शारीरिक स्थितियों को सटीक रूप से दोहराया। पर्फ्यूजन सिस्टम को बंद और ओपन-सर्किट कॉन्फ़िगरेशन(चित्रा 1)दोनों में एक परिष्टक पंप का उपयोग करके निरंतर प्रवाह दर पर तरल पदार्थ को दूर करने के लिए डिज़ाइन किया गया था। सिस्टम का उपयोग कण जमाव को मैप करने और कैरोटिड मॉडल के अंदर वरीयता प्राप्त कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए एक क्लोज-सर्किट के रूप में किया जा सकता है। इसके अलावा, प्रयोगों के अंत में गैर-अनुयायी कणों को धोने और सिस्टम को साफ करने और बनाए रखने के लिए इसे एक खुले सर्किट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। यह पेपर मानव कैरोटिड विभाजन के 3 डी मॉडल के निर्माण, परफ्यूजन सिस्टम के डिजाइन और मॉडल के अंदर लक्षित कणों के जमाव की मैपिंग के लिए प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3D printer</td>
			<td>FormLabs</td>
			<td>PKG-F2-REFURB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone, absolute (AR grade)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Connectors</td>
			<td>Nordson Medical</td>
			<td>FTLL013-1</td>
			<td>Female Luer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>FTLL230-1</td>
			<td>Female Luer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>FTLL360-1</td>
			<td>Female Luer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>LP4-1</td>
			<td>Male Luer Integral Lock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Damper</td>
			<td>Thermo-Fisher Scientific</td>
			<td>DS2127-0250</td>
			<td>Nalgene Polycarbonate, Validation Bottle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Damper Cover</td>
			<td>Thermo-Fisher Scientific</td>
			<td>2162-0531</td>
			<td>Nalgene Filling/Venting Closures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elastosil Elastosil RT 601 A</td>
			<td>Wacker</td>
			<td>60003805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elastosil RT 601 B</td>
			<td>Wacker</td>
			<td>60003817</td>
			<td>The crosslinker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endothelial Cell Media</td>
			<td>ScienCell</td>
			<td>1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrontectin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F0895-5mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HUVEC</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-2519</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl alcohol, AR grade 99.5%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Remove plastic dust from the sanded model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lacquer</td>
			<td>Rust-Oleum</td>
			<td></td>
			<td>2X-Ultra cover Gloss Clear</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matlab</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td></td>
			<td>https://www.mathworks.com/products/matlab.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Camera</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>DS-Qi2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic pump</td>
			<td>Watson Marlow</td>
			<td>530U IP31</td>
			<td>With 2 pumpheads: 313D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic tube clamp</td>
			<td>Quickun</td>
			<td>1-2240-stopvalve-2pcs</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene Particles</td>
			<td>&#160;Thermo-Fisher Scientific</td>
			<td>&#160;F8827</td>
			<td>&#160;Diameter = 2 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Printer resin</td>
			<td>FormLabs</td>
			<td>RS-F2-GPCL-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotator</td>
			<td>ELMI Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>Intelli-Mixer RM-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solidworks&#160;</td>
			<td>SolidWorks Corp.,&#160;Dassault Syst&#232;mes</td>
			<td></td>
			<td>https://www.solidworks.com/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing</td>
			<td>Watson Marlow</td>
			<td>933.0064.016</td>
			<td>Tubing for the pump: 6.4 mm ID</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>All the other tubing: Silicon tubing: 4 mm ID</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro 3d cell-cultured arterial models for studying vascular drug targeting under flow

मानव धमनियों के त्रि-आयामी (3 डी) मॉडल का उपयोग, जो सही आयामों और शरीर रचना विज्ञान के साथ डिजाइन किए गए हैं, हृदय प्रणाली में विभिन्न महत्वपूर्ण प्रक्रियाओं के उचित मॉडलिंग को सक्षम बनाता है। हाल ही में, यद्यपि मानव धमनियों के ऐसे 3 डी मॉडलों का उपयोग करके कई जैविक अध्ययन किए गए हैं, लेकिन उन्हें संवहनी लक्ष्यीकरण का अध्ययन करने के लिए लागू नहीं किया गया है। यह पेपर 3 डी प्रिंटिंग तकनीक का उपयोग करके वास्तविक आकार, पुनर्निर्मित मानव धमनी मॉडल बनाने के लिए एक नई विधि प्रस्तुत करता है, उन्हें मानव एंडोथेलियल कोशिकाओं (ईसीएस) के साथ लाइन करता है, और शारीरिक प्रवाह के तहत कण को लक्षित करता है। इन मॉडलों को कम लागत वाले घटकों का उपयोग करके मानव शरीर में रक्त वाहिकाओं के शारीरिक आकार और स्थितियों को दोहराने का लाभ होता है। यह तकनीक हृदय प्रणाली में दवा लक्ष्यीकरण का अध्ययन और समझने के लिए एक नए मंच के रूप में काम कर सकती है और नए इंजेक्शन नैनोमेडिसिनों के डिजाइन में सुधार कर सकती है। इसके अलावा, प्रस्तुत दृष्टिकोण रोगी-विशिष्ट प्रवाह और शारीरिक स्थितियों के तहत हृदय रोगों के लिए विभिन्न एजेंटों के लक्षित वितरण के अध्ययन के लिए महत्वपूर्ण उपकरण प्रदान कर सकता है।

यह पेपर वास्तविक आकार के 3 डी मानव धमनी मॉडल के अंदर कणों के जमाव को मैप करने के लिए एक नया प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है, जो दवा वितरण अनुसंधान के लिए एक नया मंच प्रदान कर सकता है। 3डी प्रिंटिंग तकनीक का उपयो...

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In Vitro 3D Cell-Cultured Arterial Models for Studying Vascular Drug Targeting Under Flow

यहां, हम शारीरिक प्रवाह के तहत निर्मित, वास्तविक आकार, त्रि-आयामी मानव धमनी मॉडल में एंडोथेलियल कोशिकाओं के लिए दवा वाहकों के लक्षित जमाव का अध्ययन और मानचित्रण करने के लिए एक नया प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। प्रस्तुत विधि संवहनी प्रणाली के भीतर दवा वाहकों को लक्षित करने के लिए एक नए मंच के रूप में काम कर सकती है।

इन विट्रो 3 डी सेल-सुसंस्कृत धमनी मॉडल प्रवाह के तहत लक्ष्यीकरण संवहनी दवा का अध्ययन करने के लिए

The use of three-dimensional (3D) models of human arteries, which are designed with the correct dimensions and anatomy, enables the proper modeling of ...

वर्तमान प्रोटोकॉल मानव संवहनी प्रणाली के भीतर रोग स्थलों को लक्षित करने के लिए दवा वाहकों के अध्ययन और विकास के लिए एक नए मंच के रूप में काम कर सकता है । हमारी तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह मानव-दोहराए गए 3 डी धमनी मॉडल के अंदर दवा वाहकों के संचय के अध्ययन की अनुमति देता है। यह रक्त प्रवाह सहित शारीरिक परिस्थितियों में किया जाता है।इस दृष्टिकोण का उपयोग एक एथेरोस्क्लेरोटिक धमनियों सहित संवहनी रोगों की एक विस्तृत श्रृंखला के निदान और उपचार के लिए दवा वाहकों को अनुकूलित करने के लिए किया जा सकता है। रोगियों से छवियों का चयन करके शुरू करें या पहले मानव कैरोटिड धमनी विभाजन की ज्यामिति का अध्ययन किया और मोल्ड के कंप्यूटर-एडेड डिजाइन मॉडल बनाने के लिए छवियों का उपयोग करें। डिजाइन को प्रिंट करने के लिए 3डी प्रिंटर का उपयोग करें, अस्थायी प्रिंटिंग सपोर्ट्स को हटा दें और मोल्डों को पॉलिश और चिकनी करने के लिए सैंडपेपर का उपयोग करने से पहले एसीटोन के साथ मॉडल को कुल्ला करें, विशेष रूप से उन क्षेत्रों में जिनसे समर्थन काटा गया था।सैंडिंग के बाद, किसी भी प्लास्टिक धूल को हटाने के लिए आइसोप्रोपिल अल्कोहल के साथ मॉडल को कुल्लाएं और मॉडल को दो से तीन घंटे तक रासायनिक हुड में सूखने की अनुमति दें। प्लास्टिक के आसान मोहभंग को सुविधाजनक बनाने के लिए, मॉडल को पारदर्शी लाह के साथ तीन बार स्प्रे करें, जिससे लाह को अनुप्रयोगों के बीच एक घंटे के लिए हवा-शुष्क करने की अनुमति मिल सके। अंतिम आवेदन के बाद, फ्रेम के प्रत्येक पक्ष में चिकनी प्लास्टिक की पारदर्शी, आयताकार स्ट्रिप्स गोंद के लिए पेंट ब्रश और लाह का उपयोग करें, जैसे कि मॉडल को नीचे सील कर दिया जाएगा और शीर्ष पर खोला जाएगा।सूखने के बाद, मोल्ड को एक डिसिकेटर में रखें और धीरे-धीरे खराब हौसले से तैयार सिलिकॉन रबर समाधान को खोलने में रखें। जब तक मिश्रण स्पष्ट न हो जाए तब तक हवा के बुलबुले निकालें और मोल्ड को रात भर डिसेटर के अंदर छोड़ दें। जब मिश्रण पूरी तरह से सूखा हो, तो पारदर्शी स्लाइड को हटा दें और मॉडल को रासायनिक हुड में 48 घंटे के लिए पूर्ण एसीटोन में विसर्जित करें जब तक कि प्लास्टिक पूरी तरह से भंग न हो जाए।सेल सीडिंग से पहले फंसे एसीटोन को वाष्पित करने के लिए, मॉडल को कम से चार दिनों के लिए ६० डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें । कोशिकाओं के साथ मॉडल बीज करने के लिए, पहले पराबैंगनी प्रकाश या विकिरण द्वारा मॉडल और दो इनलेट और आउटलेट कनेक्टर बंध्याकरण । 20 मिनट के बाद, एक सिरिंज का उपयोग करने के लिए १०० माइक्रोग्राम प्रति मिलीलीटर फाइब्रोनेक्टिन के चार मिलीलीटर के साथ मॉडल कोट करने के लिए दो घंटे के लिए ३७ डिग्री सेल्सियस पर ।इनक्यूबेशन के अंत में, आउटलेट के माध्यम से फाइब्रोनेक्टिन समाधान को हटा दें और एंडोथेलियल सेल माध्यम से मॉडल को धो लें। एंडोथेलियल सेल मीडियम सेल सस्पेंशन के मिलीलीटर के प्रति छठे एंडोथेलियल कोशिकाओं को 2.5 गुना 10 के चार मिलीलीटर के साथ कुल्ला मॉडल को भरने के लिए एक सिरिंज का उपयोग करें और कोशिकाओं के समरूप वितरण को सुनिश्चित करने के लिए प्रति मिनट एक क्रांति पर 48 घंटे सेल संस्कृति इनक्यूबेटर के अंदर एक रोटेटर के लिए मॉडल को सुरक्षित करें। इनक्यूबेशन के अंत में, पीबीएस के साथ मॉडल को धोने के लिए 10 मिलीलीटर प्लास्टिक सिरिंज का उपयोग करें।15 मिनट के लिए कोशिकाओं को ठीक करें, 4% पैराफॉर्मलडिहाइड के चार मिलीलीटर के साथ, फिर ताजा पीबीएस के चार मिलीलीटर में चार डिग्री सेल्सियस पर मॉडल को संग्रहीत करने से पहले मॉडल को प्रदर्शित करने के रूप में पीबीएस के साथ तीन बार मॉडल को धोएं। एक प्रयोग शुरू करने से पहले, एक दोलन स्पंज को सुसंस्कृत कैरोटिड मॉडल के इनलेट से जोड़ने के लिए आउटलेट ट्यूबिंग का उपयोग करें और दो आउटलेट को मर्ज करने के लिए ट्यूबिंग के एक टुकड़े का उपयोग करें। फिर आउटलेट ट्यूबिंग को दो आउटलेट ट्यूबों में विभाजित करें और प्रत्येक ट्यूब में एक प्लास्टिक क्लैंप जोड़ें।एक बंद सर्किट विन्यास स्थापित करने के लिए, एक बंद सर्किट कंटेनर में पीबीएस के ३०० मिलीलीटर जोड़ें और बी और सी क्लैंप से भरे कंटेनर के अंदर एक इनलेट और एक आउटलेट ट्यूब को क्रमशः खोल दें, फिर अन्य इनलेट ट्यूब को आसुत पानी से भरे एक लीटर धोने वाले कंटेनर में रखें, और अन्य आउटलेट ट्यूब को ए और डी क्लैंप के साथ एक खाली एक लीटर अपशिष्ट कंटेनर में बंद कर दिया गया, क्रमशः। एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप के तहत कैरोटिड मॉडल प्लेस, प्रति मिनट 10 क्रांतियों की एक प्रारंभिक प्रवाह दर के लिए पंप सेट, प्रति मिनट वेतन वृद्धि पांच क्रांति के साथ हर चार से पांच मिनट बढ़ जाती है । जब प्रवाह दर प्रति मिनट 100 क्रांतियों तक पहुंच जाती है, तो बंद सर्किट कंटेनर में पीबीएस के मिलीलीटर प्रति फ्लोरोसेंट कार्बोक्सिलेटेड पॉलीस्टीरिन कणों के 1.6 माइक्रोग्राम जोड़ें और डेढ़ घंटे के लिए हर 10 सेकंड में ब्याज के क्षेत्र की छवि करें।ओपन सर्किट कॉन्फ़िगरेशन स्थापित करने के लिए, ए और डी क्लैंप खोलें और बी और सी क्लैंप को तुरंत बंद करें। धोने के कंटेनर से अपशिष्ट कंटेनर में 100 क्रांतियों प्रति मिनट पर अधिकांश पानी का प्रवाह होने दें। इससे पहले कि पानी पूरी तरह से स्थानांतरित हो गया है, पंप बंद करो और इनलेट से पहले ट्यूब क्लैंप बंद करो और कैरोटिड मॉडल के आउटलेट के बाद ।उपयुक्त फ़िल्टर का उपयोग करके, कोशिकाओं को कणों के जमाव और आसंजन को दिखाने के लिए ब्याज के क्षेत्र में मॉडल की छवियों को कैप्चर करें। प्रयोग पूरा होने पर, ब्याज के क्षेत्र में कैप्चर की गई छवियों का विश्लेषण करने के लिए एक अनुकूलित सॉफ्टवेयर कोड का उपयोग करें, छवि का नाम दर्ज करें और अनुमानित सीमा निर्धारित करें। इसके बाद कोड चलाएं।परिणामस्वरूप छवि और छवि में कणों की गिनती संख्या का निरीक्षण करें। इस प्रतिनिधि विश्लेषण में, 3डी कैरोटिड धमनी मॉडल में वरीयता प्राप्त सुसंस्कृत एंडोथेलियल कोशिकाओं के फोटो माइक्रोग्राफ को ब्राइटफील्ड और फ्लोरेसेंस कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपिक इमेजिंग द्वारा देखा जा सकता है। फ्लोरोसेंट 10 माइक्रोन व्यास ग्लास मोतियों, 3 डी मॉडल में वरीयता प्राप्त एक रिसर्चर पैटर्न का प्रदर्शन किया, मॉडल के भीतर शारीरिक स्थितियों की एक सफल नकल उतार का सुझाव ।कण जमाव की इमेजिंग से पता चला है कि कोशिकाओं के लिए कणों के आसंजन का एक उच्च स्तर रिसर्चर क्षेत्र के बाहर देखा गया था जहां दीवार कतरनी तनाव अधिक था । इस प्रोटोकॉल के बाद, मॉडल में सुधार और विशिष्ट योगों का अध्ययन करने के लिए विशिष्ट बाध्यकारी गतिज और विभिन्न मानव धमनी मॉडल के भीतर कोशिकाओं की एक कोर संस्कृति के साथ कार्यात्मक कणों का पता लगाया जा सकता है। यह तकनीक दवा वाहकों के संवहनी लक्ष्यीकरण का अध्ययन करने के लिए एक नया मंच प्रदान करती है।हमने हाल ही में इसका इस्तेमाल यह दिखाने के लिए किया है कि विभिन्न रोगग्रस्त पोत क्षेत्रों को लक्षित करने के लिए कणों की अडिटिविटी को कैसे सिलवाया जा सकता है ।

Research

JoVE Journal

Bioengineering

In Vitro 3D Cell-Cultured Arterial Models for Studying Vascular Drug Targeting Under Flow

A Novel Three-dimensional Flow Chamber Device to Study Chemokine-directed Extravasation of Cells Circulating under Physiological Flow Conditions

शारीरिक प्रवाह शर्तों के तहत घूम प्रकोष्ठों की प्रतिलिपि का निर्देश परिस्त्राव अध्ययन करने के लिए एक उपन्यास तीन आयामी फ्लो चैंबर डिवाइस

Extravasation of circulating cells from the bloodstream plays a central role in many physiological and pathophysiological processes, including stem cell ...

Engineering 3D Cellularized Collagen Gels for Vascular Tissue Regeneration

संवहनी ऊतक उत्थान के लिए इंजीनियरिंग 3 डी Cellularized कोलेजन जैल

Synthetic materials are known to initiate clinical complications such as inflammation, stenosis, and infections when implanted as vascular substitutes. ...

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

खंगाला मानव कॉर्निया की तरह उपकला (RHCE) ऊतक मॉडल का उपयोग नेत्र परेशान रसायन का खतरा पहचान के लिए आंखों में जलन टेस्ट (ईआईटी)

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

In Vitro Model of Physiological and Pathological Blood Flow with Application to Investigations of Vascular Cell Remodeling

In Vitro Model of Physiological and Pathological Blood Flow with Application to Investigations of Vascular Cell Remodeling

संवहनी सेल remodeling के जांच के लिए शारीरिक के इन विट्रो मॉडल और आवेदन के साथ रोग रक्त के प्रवाह में

Vascular disease is a common cause of death within the United States. Herein, we present a method to examine the contribution of flow dynamics towards ...

A Rapid and Quantitative Fluorimetric Method for Protein-Targeting Small Molecule Drug Screening

प्रोटीन को टारगेट कर छोटे अणु दवा स्क्रीनिंग के लिए एक तेजी से और मात्रात्मक fluorimetric विधि

We demonstrate a new drug screening method for determining the binding affinity of small drug molecules to a target protein by forming fluorescent gold ...

Improving 2D and 3D Skin In Vitro Models Using Macromolecular Crowding

Improving 2D and 3D Skin In Vitro Models Using Macromolecular Crowding

सुधार के 2 डी और 3 डी त्वचा<em&gt; इन विट्रो</em&gt; Macromolecular भीड़ का प्रयोग मॉडल

The glycoprotein family of collagens represents the main structural proteins in the human body, and are key components of biomaterials used in modern ...

A Combined 3D Tissue Engineered In Vitro/In Silico Lung Tumor Model for Predicting Drug Effectiveness in Specific Mutational Backgrounds

A Combined 3D Tissue Engineered In Vitro/In Silico Lung Tumor Model for Predicting Drug Effectiveness in Specific Mutational Backgrounds

एक संयुक्त 3 डी ऊतक इंजीनियर<em&gt; इन विट्रो</em&gt; /<em&gt; सिलिको</emविशिष्ट mutational पृष्ठभूमि में ड्रग प्रभावशीलता की भविष्यवाणी के लिए&gt; फेफड़े ट्यूमर मॉडल

In the present study, we combined an in vitro 3D lung tumor model with an in silico model to optimize predictions of drug response based on a specific ...

Improved 3D Hydrogel Cultures of Primary Glial Cells for In Vitro Modelling of Neuroinflammation

Improved 3D Hydrogel Cultures of Primary Glial Cells for In Vitro Modelling of Neuroinflammation

सुधार 3 डी Hydrogel के लिए प्राथमिक Glial कोशिकाओं की संस्कृतियों में इन विट्रो Neuroinflammation के मॉडलिंग

In the central nervous system, numerous acute injuries and neurodegenerative disorders, as well as implanted devices or biomaterials engineered to enhance ...

Targeting Neuronal Fiber Tracts for Deep Brain Stimulation Therapy Using Interactive, Patient-Specific Models

डीप ब्रेन उत्तेजना थेरेपी इंटरैक्टिव, रोगी विशेष मॉडल का उपयोग करने के लिए न्यूरॉन फाइबर इलाकों लक्ष्यीकरण

Deep brain stimulation (DBS), which involves insertion of an electrode to deliver stimulation to a localized brain region, is an established therapy for ...

Standardized and Scalable Assay to Study Perfused 3D Angiogenic Sprouting of iPSC-derived Endothelial Cells In Vitro

मानकीकृत और स्केलेबल परख का अध्ययन करने के लिए 3 डी एंजियोजेनिक अंकुरण iPSC-व्युत्पन्न एंडोथेलियल कोशिकाओं के विट्रो में

Pre-clinical drug research of vascular diseases requires in vitro models of vasculature that are amendable to high-throughput screening. However, current ...