Name: an easy and flexible inoculation method for accurately assessing powdery mildew-infection phenotypes of arabidopsis and other plants
Uploaded: 2021-03-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Easy and Flexible Inoculation Method for Accurately Assessing Powdery Mildew-Infection Phenotypes of Arabidopsis and Other Plants at JoVE.com

इस काम को राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (आईओएस -1901566) द्वारा एस ज़ियाओ द्वारा समर्थित किया गया था। लेखक पौधे की वृद्धि सुविधा के रखरखाव के लिए एफ कोकर और सी हुक्स को धन्यवाद देना चाहते हैं, और जॉर्ज ज़मोरा को टीकाकरण बॉक्स और कक्ष के निर्माण से जुड़ी तकनीकी सहायता के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं।

1. एक हटाने योग्य शीर्ष ढक्कन के साथ एक मानक टीकाकरण बॉक्स बनाना जो एक जाल के साथ लगाया गया है
<ol><li>दुकानों से 50 μm नायलॉन झिल्ली जाल या 48 μm स्टेनलेस स्टील जाल (अनुशंसित) का रोल खरीदें। घिसे हुए जाल के प्रतिस्?...

<ol>
	<li>Huckelhoven, R., Panstruga, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+bi+ology+of+the+plant-powdery+mildew+interaction.">Cell bi ology of the plant-powdery mildew interaction.</a> Current Opinion in Plant Biology. 14 (6), 738-746 (2011).</li><li>Dean, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+top+10+fungal+pathogens+in+molecular+plant+pathology.">The top 10 fungal pathogens in molecular plant pathology.</a> Molecular Plant Pathology. 13 (4), 414-430 (2012).</li><li>Sakurai, H., Hirata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+observations+on+the+relation+between+the+penetration+hypha+and+haustorium+of+barley+powdery+mildew+and+host+cell.+V.+Influence+of+water+spray+on+the+pathogen+and+host+tissue.">Some observations on the relation between the penetration hypha and haustorium of barley powdery mildew and host cell. V. Influence of water spray on the pathogen and host tissue.</a> Annual Phytopathology Society of Japan. 24, 239-245 (1959).</li><li>Shomari, S. H., Kennedy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+of+Oidium+anacardii+on+cashew+(Anacardium+occidentale)+in+southern+Tanzania.">Survival of Oidium anacardii on cashew (Anacardium occidentale) in southern Tanzania.</a> Plant Pathology. 48 (4), 505-513 (1999).</li><li>Sitterly, W. R., Spencer, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Powdery Mildews. , 369 (1978).</li><li>Reuveni, M., Agapov, V., Reuveni, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+systemic+resistance+to+powdery+mildew+and+growth+increase+in+cucumber+by+phosphates.">Induction of systemic resistance to powdery mildew and growth increase in cucumber by phosphates.</a> Biological Agriculture &amp; Horticulture. 9 (4), 305-315 (1993).</li><li>Reifschneider, F. J. B., Boiteux, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+vacuum-operated+settling+tower+for+inoculation+of+powdery+mildew+fungi.">A vacuum-operated settling tower for inoculation of powdery mildew fungi.</a> Phytopathology. 78 (11), 1463-1465 (1988).</li><li>Chowdhury, A., Bremer, G. B., Salt, D. W., Miller, P., Ford, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+of+delivering+Blumeria+graminis+f.+sp+hordei+spores+for+laboratory+experiments.">A novel method of delivering Blumeria graminis f. sp hordei spores for laboratory experiments.</a> Crop Protection. 22 (7), 917-922 (2003).</li><li>Xiao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Broad-spectrum+mildew+resistance+in+Arabidopsis+thaliana+mediated+by+RPW8.">Broad-spectrum mildew resistance in Arabidopsis thaliana mediated by RPW8.</a> Science. 291 (5501), 118-120 (2001).</li><li>Xiao, S., Ellwood, S., Findlay, K., Oliver, R. P., Turner, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+three+loci+controlling+resistance+of+Arabidopsis+thaliana+accession+Ms-0+to+two+powdery+mildew+diseases.">Characterization of three loci controlling resistance of Arabidopsis thaliana accession Ms-0 to two powdery mildew diseases.</a> The Plant Journal. 12 (4), 757-768 (1997).</li><li>Reuber, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+defense+gene+induction+defects+with+powdery+mildew+susceptibility+in+Arabidopsis+enhanced+disease+susceptibility+mutants.">Correlation of defense gene induction defects with powdery mildew susceptibility in Arabidopsis enhanced disease susceptibility mutants.</a> The Plant Journal. 16 (4), 473-485 (1998).</li><li>Xiao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+atypical+resistance+gene,+RPW8,+recruits+components+of+basal+defence+for+powdery+mildew+resistance+in+Arabidopsis.">The atypical resistance gene, RPW8, recruits components of basal defence for powdery mildew resistance in Arabidopsis.</a> The Plant Journal. 42 (1), 95-110 (2005).</li></ol>

हमारी जाल-बॉक्स-आधारित टीकाकरण विधि में अन्य टीकाकरण विधियों की तुलना में कई फायदे हैं। सबसे पहले, यह ठीक से संचालित होने पर बीजाणुओं के वितरण को भी प्राप्त कर सकता है, जैसा कि चित्र 5 में दिख?...

पाउडर फफूंदी कई खाद्य फसलों और सजावटीपौधों के सबसे आम और महत्वपूर्ण रोगों में से एक है। पाउडर फफूंदी रोगों का अध्ययन बहुत लोकप्रिय रहा है, जैसा कि 10,500 से अधिक प्रकाशनों द्वारा स्पष्ट है कि वेब ऑफ साइंस (नवंबर 2020 तक) में प्रमुख शब्द के रूप में "पाउडर फफूंदी" के साथ खोज परिणाम है। दरअसल, पाउडर फफूंदी (ब्लूमेरिया ग्रामिनिस द्वारा दर्शाया गया) को आणविक संयंत्र पैथोलॉजी2 की पत्रिका द्वारा शीर्ष 10 फंगल रोगजनकों में से एक माना जाता है। रोग संवेदनशीलता का परिमाणीकरण रोग प्रतिरोध या संवेदनशीलता में योगदान देने वाले पौधों के जीन के लक्षण वर्णन में एक आवश्यक कदम है, या पाउडर फफूंदी में उम्मीदवार प्रभावक जीन की कार्यात्मक पहचान। हालांकि, विश्वसनीय रोग फेनोटाइपिंग अधिकांश अन्य फंगल रोगजनकों की तुलना में पाउडर फफूंदी के साथ कहीं अधिक चुनौतीपूर्ण है, आंशिक रूप से क्योंकि, बाद के बीजाणुओं के विपरीत, पाउडर फफूंदी प्रजातियों के बीजाणु (जैसे कि हमारे प्रयोगशाला अनुभव के आधार पर गोलोविनोमिस सिकोरेसरम यूसीएससी 1) पानी-निलंबन प्रक्रिया से गुजरने के बाद कम व्यवहार्यता दिखाते हैं 3,4 . एक विशेष पाउडर फफूंदी रोगज़नक़ के साथ परीक्षण पौधों के अपर्याप्त और / या असमान टीकाकरण से गलत फेनोटाइपिंग परिणाम हो सकते हैं।
पाउडर फफूंदी अध्ययन के लिए कई टीकाकरण विधियों की सूचना दी गई थी। इनमें शामिल हैं (i) पौधों का परीक्षण करने के लिए संक्रमित पत्तियों से सीधे बीजाणुओं को ब्रश करना5, (ii) पौधों का परीक्षण करने के लिए बीजाणु निलंबन का छिड़काव करना6, (iii) टॉवर7 के तल पर पौधों के लिए वैक्यूम संचालित निपटान टॉवर का उपयोग करके बीजाणुओं को उड़ाना, और (iv) नायलॉन जाल झिल्ली और ध्वनि-आधारित कंपन के मिश्रित उपयोग द्वारा बीजाणु वितरण8 . बीजाणु-ब्रशिंग (या डस्टिंग) विधि प्रदर्शन करना आसान है लेकिन प्रकृति में असमान है, इस प्रकार यह मात्रात्मक मूल्यांकन के लिए सटीक नहीं हो सकता है। बीजाणु-छिड़काव सुविधाजनक और यहां तक कि है, लेकिन जैसा कि ऊपर कहा गया है, इसके परिणामस्वरूप खराब बीजाणु अंकुरण हो सकताहै। बाद के दो (यानी, iii-iv) बहुत बेहतर तरीके हैं जो टीकाकरण को प्राप्त करने में सक्षम हैं; हालांकि, दोनों एक ही घटना में टीका लगाए जाने वाले पौधों की संख्या के संदर्भ में अपनी टीकाकरण क्षमता को समायोजित करने में लचीले नहीं हैं, जिससे या तो उपकरण तुच्छ नहीं है, और उनका संचालन प्रयोगशाला क्षेत्रों तक सीमित है जहां वैक्यूम और / या बिजली स्रोत है।
हमारी प्रयोगशाला 20 से अधिक वर्षों 9,10 के लिए प्लांट-पाउडर फफूंदी बातचीत के साथ काम कर रही है। पिछले एक दशक में, हमने कई टीकाकरण विधियों का परीक्षण किया और हाल ही में एक सरल और अभी तक प्रभावी पाउडर फफूंदी टीकाकरण विधि विकसित की। यह जाल-आधारित बीजाणु-ब्रशिंग विधि भी टीकाकरण सुनिश्चित कर सकती है, और सरल और स्केलेबल है, इस प्रकार पाउडर फफूंदी के साथ काम करने वाली किसी भी प्रयोगशाला द्वारा आसानी से अपनाया जाना चाहिए।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >&#160;48 &#181;m stainless steel grid mesh screen; Size: 24&#34; X 48&#34;&#160;</td>
			<td >Amazon</td>
			<td >NA</td>
			<td >For making the lid of an inoculation box</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >#6-32 x &#190;&#34; machine screws, flat washers and nuts&#160;</td>
			<td >Home Depot</td>
			<td >NA</td>
			<td>For making an inoculation chamber</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >#6-32 zinc plated nylon lock nut (4-Pack)</td>
			<td >Home Depot</td>
			<td >NA</td>
			<td>For making an inoculation chamber</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >#6-32x3/8&#8221; Phillips flat head machine screws, flat washers and nuts&#160;</td>
			<td >Home Depot</td>
			<td >NA</td>
			<td>For securing&#160; magnet door catch plates</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >#8-32x1/2&#34; machine screws, flat washers and nuts</td>
			<td >Home Depot</td>
			<td >NA</td>
			<td>For securing corner braces and door hinge</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >0.250 thick clear extruded acrylic film-masked sheet;&#160; Size: 17 &#189;&#34; X 20&#34;</td>
			<td >Professional Plastics</td>
			<td >SACR.250CEF</td>
			<td>For making an inoculation chamber</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >0.250 thick clear extruded acrylic film-masked sheet; Size: 18&#34; X 20&#34;&#160;&#160;</td>
			<td >Professional Plastics</td>
			<td >&#160;SACR.250CEF</td>
			<td>For making an inoculation chamber</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >0.250 thick clear extruded acrylic film-masked sheet; Size: 18&#34; X 30&#34;&#160;</td>
			<td >Professional Plastics</td>
			<td >SACR.250CEF</td>
			<td>For making an inoculation chamber</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >0.250 thick clear extruded acrylic film-masked sheet; Size: 20&#34; X 29 &#189; &#34;</td>
			<td >Professional Plastics</td>
			<td >SACR.250CEF</td>
			<td>For making an inoculation chamber</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1-5/8&#34; cabinet door magnetic catch white</td>
			<td >Home Depot</td>
			<td >Model #P110-W</td>
			<td>For making an inoculation chamber</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >2&#34; steel zinc-plated corner brace (8-Pack)&#160;</td>
			<td >Home Depot</td>
			<td >&#160;Model #13611&#160;</td>
			<td>For making an inoculation box &#38; chamber</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3&#34; Corner Clamp</td>
			<td>Harbor Freight Tools</td>
			<td>SKU 63653, 1852, 60589</td>
			<td>For making inoculation chamber</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3/4&#34;&#160; steel zinc plated corner brace (4-Pack)</td>
			<td >Home Depot</td>
			<td >Model #13542</td>
			<td>For making an inoculation box &#38; chamber</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >4-7/8&#34; zinc-plated light duty door pull handles</td>
			<td >Home Depot</td>
			<td >Model #15184</td>
			<td>For making an inoculation box</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fine fan-blender brushes</td>
			<td>Michaels Store</td>
			<td>M10472846&#160;</td>
			<td>For inoculation</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Kelleher 3/4&#34; x 3/4&#34; x 36&#34; wood square dowel&#160;</td>
			<td >Home Depot</td>
			<td >NA</td>
			<td>For making the lid of an inoculation box</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Medium density fiberboard (1/4&#34; x 2&#39; x 4&#39;);&#160;</td>
			<td >Home Depot</td>
			<td >Model# 1508104</td>
			<td>For making an inoculation box</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Round glass coverslips with a 500 &#181;m grid</td>
			<td >ibidi USA Inc.</td>
			<td >10816</td>
			<td>For determining&#160; spore density</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an easy and flexible inoculation method for accurately assessing powdery mildew-infection phenotypes of arabidopsis and other plants

फंगल रोगों के कारण फसल के नुकसान को कम करने के लिए पौधों की प्रतिरक्षा और फंगल रोगजनन को नियंत्रित करने वाले तंत्र की बेहतर समझ की आवश्यकता होती है, जिसके बदले में किसी विशेष फंगल रोगज़नक़ के संक्रमण पर पौधों के रोग फेनोटाइप के सटीक निर्धारण की आवश्यकता होती है। हालांकि, पाउडर फफूंदी जैसे अविचलित बायोट्रोफिक फंगल रोगजनकों के साथ सटीक रोग फेनोटाइपिंग प्राप्त करना आसान नहीं है और यह एक शोध परियोजना का दर-सीमित कदम हो सकता है। यहां, हमने एक उदाहरण के रूप में एराबिडोप्सिस-पाउडर फफूंदी बातचीत का उपयोग करके एक सुरक्षित, कुशल और आसानी से संचालित रोग फेनोटाइपिंग प्रणाली विकसित की है। इस प्रणाली में मुख्य रूप से तीन घटक होते हैं: (i) फंगल बीजाणुओं वाले पौधों के एक फ्लैट को टीका लगाने के लिए ~ 50 μm के स्टेनलेस स्टील या नायलॉन छिद्रों के साथ एक हटाने योग्य ढक्कन से सुसज्जित लकड़ी का टीकाकरण बॉक्स, (ii) अंदर टीकाकरण करते समय बीजाणु पलायन को कम करने के लिए एक छोटे से सामने के उद्घाटन के साथ एक पारदर्शी प्लास्टिक कक्ष, और (iii) सम और प्रभावी टीकाकरण के लिए बीजाणु-विघटन और वितरण विधि। यहां वर्णित प्रोटोकॉल में कम लागत पर टीकाकरण बॉक्स और प्लास्टिक चैंबर बनाने के लिए चरण और पैरामीटर शामिल हैं, और पाउडर फफूंदी बीजाणुओं के साथ टीकाकरण को सक्षम करने के लिए सिस्टम का उपयोग कैसे किया जाए, जिससे रोग फेनोटाइपिंग की सटीकता और प्रजनन क्षमता में सुधार होता है।

यहां, हम एक नई पाउडर फफूंदी बीजाणु टीकाकरण विधि प्रस्तुत करते हैं जो तैयार करना, संचालित करना और समायोजित करना आसान है। चित्र 1 मानक टीकाकरण बॉक्स की असेंबली को दर्शाता है जिसमें 50 μm झिल्ली ज?...

Watch this Scientific Journal Video about An Easy and Flexible Inoculation Method for Accurately Assessing Powdery Mildew-Infection Phenotypes of Arabidopsis and Other Plants at JoVE.com

An Easy and Flexible Inoculation Method for Accurately Assessing Powdery Mildew-Infection Phenotypes of Arabidopsis and Other Plants

हम एक साधारण बीजाणु-वितरण प्रणाली के निर्माण के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं जिसमें ~ 50 μm जाल और एक पारदर्शी प्लास्टिक कक्ष के साथ एक टीकाकरण बॉक्स शामिल है। इसका उपयोग पाउडर फफूंदी बीजाणुओं के साथ पौधों को समान रूप से टीका लगाने के लिए किया जा सकता है, जिससे अध्ययन के तहत पौधों के रोग फेनोटाइप के सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मूल्यांकन को सक्षम किया जा सकता है।

एराबिडोप्सिस और अन्य पौधों के पाउडर फफूंदी-संक्रमण फेनोटाइप का सटीक आकलन करने के लिए एक आसान और लचीली टीकाकरण विधि

Reducing crop losses due to fungal diseases requires improved understanding of the mechanisms governing plant immunity and fungal pathogenesis, which in ...

पाउडर फफूंदी एक महत्वपूर्ण पौधे की बीमारी है। रोग फेनोटाइप के सटीक निर्धारण के लिए रोगज़नक़ के टीकाकरण की भी आवश्यकता होती है। चूंकि मौजूदा तरीके अक्षम हैं, इसलिए हमने इस प्रोटोकॉल को विकसित किया है।हमारे बीजाणु टीकाकरण विधि आसानी से टीकाकरण भी प्राप्त कर सकती है, और यह सरल और स्केलेबल है। इसलिए, पाउडर फफूंदी के साथ काम करने वाली कोई भी प्रयोगशाला आसानी से इस विधि का उपयोग कर सकती है। शोधकर्ता एक कार्डबोर्ड बॉक्स पर जाल भी लगा सकते हैं और बीजाणु टीकाकरण के लिए इसका उपयोग कर सकते हैं।बीजाणुओं को कैसे हटाया जाए और जाल के माध्यम से उन्हें ब्रश किया जाए, यह एक महत्वपूर्ण कदम है। इसलिए वीडियो पर इसका प्रदर्शन करना बहुत उपयोगी हो सकता है। इस प्रोटोकॉल के लिए, 50 माइक्रोमीटर नायलॉन झिल्ली जाल या 48 माइक्रोमीटर स्टेनलेस स्टील जाल का रोल प्राप्त करें।एक टीकाकरण बॉक्स बनाने के लिए बड़े आकार, मध्यम घनत्व वाले प्लाईवुड को 24.5x10 इंच और 12X10 इंच के टुकड़ों में काटें। एक जाल के साथ हटाने योग्य शीर्ष ढक्कन बनाने के लिए, लंबे लकड़ी के चौकोर डोवल को 26 इंच और 12.75 इंच के दो सेटों में काटें। बॉक्स के चारों ओर फिट होने के लिए चार टुकड़ों को गोंद और नाखून दें।ऐक्रेलिक शीट लें और आठ कोने के क्लैंप का उपयोग करके सभी ऐक्रेलिक शीट्स को एक बॉक्स में इकट्ठा करें। बॉक्स की ऐक्रेलिक शीट के सामने की ओर एक 7X2 इंच खोलने वाली खिड़की काटें। इनोकुला के रूप में ताजा पाउडर फफूंदी बीजाणु तैयार करने के लिए, छह से आठ सप्ताह के लिए 22 डिग्री सेल्सियस और 65% सापेक्ष आर्द्रता पर विकास कक्ष में स्वच्छ एराबिडोप्सिस प्रतिरक्षा-समझौता पैड 4-1 उत्परिवर्ती पौधों को उगाएं।मानक फ्लैटों में संक्रमण फेनोटाइप निर्धारित करने के लिए पौधों को उगाएं। पर्याप्त ताजा पाउडर फफूंदी बीजाणु बनाने के लिए पैड 4-1 पौधों में से एक या आधे को टीका लगाएं। जब संक्रमित पौधों से ताजा बीजाणु उपलब्ध हों, तो संक्रमण परीक्षण के लिए टीकाकरण कक्ष के अंदर टीकाकरण बॉक्स में पौधों के एक फ्लैट को स्थानांतरित करें।एराबिडोप्सिस के 15 से 20 पत्तों को काट लें, और यदि गाढ़ा पानी हो तो उन्हें सूखने दें। एक हाथ में लंबे बल की एक जोड़ी के साथ एक से दो पत्तियों को उल्टा पकड़ें। फिर दोनों हाथों को कक्ष के उद्घाटन के माध्यम से रखें और धीरे-धीरे कैंची की एक जोड़ी के साथ बल की बांह पर प्रहार करें, जबकि धीरे-धीरे टीकाकरण बॉक्स पर लगे जाल के ऊपर पत्तियों को स्थानांतरित करें।पौधों पर बीजाणुओं के समान वितरण को अधिकतम करने के लिए विभिन्न दिशाओं में पूरी जाल सतह के माध्यम से ठीक फैन ब्लेंडर ब्रश के साथ बीजाणुओं को ब्रश करें। जाल में फंसे बीजाणुओं को दूर करने के लिए ब्रश के साथ धीरे से जाल को कुछ बार थपथपाएं। एक बार बीजाणु के शांत हो जाने के बाद, टीकाकरण बॉक्स से टीका लगाए गए पौधों वाले फ्लैट को बाहर निकालें।फ्लैट को प्लास्टिक गुंबद से कवर करें और इसे 22 डिग्री सेल्सियस और 65% सापेक्ष आर्द्रता पर विकास कक्ष में रखें। रोग फेनोटाइपिंग टीकाकरण के बाद 5 या 8 से 12 दिनों में किया जा सकता है। कार्डबोर्ड बॉक्स को बॉक्स के शीर्ष और निचले किनारों को हटाकर, इसे मजबूत करने के लिए कोने पर टैप करके और गोंद के साथ शीर्ष पर 50 माइक्रोमीटर जाल लगाकर एक टीकाकरण बॉक्स में परिवर्तित करें।टीकाकरण कक्ष के अंदर पौधों वाले फ्लैट को स्थानांतरित करें, और पौधों को कवर करने के लिए फ्लैट के शीर्ष पर छोटे टीकाकरण बॉक्स रखें। फिर बीजाणुओं को हटा दें और ब्रश करें। पेट्री डिश की तुलना में थोड़ा बड़ा मिनी टीकाकरण बॉक्स बनाएं।उपयोग होने तक प्लेटों को फ्रिज में चार डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। परीक्षण किए जाने वाले प्रत्येक पौधे के लिए पेटीओल के आधार से एक या दो पूरी तरह से विस्तारित पत्तियों को काटें। अलग किए गए पत्तों के पेटिओल को 30 डिग्री के कोण पर आगर माध्यम में डालें।टीकाकरण कक्ष के अंदर पत्तियों को टीका लगाएं, और ढक्कन के साथ प्लेट को विकास कक्ष में ले जाएं। संक्रमण फेनोटाइप का आकलन करने के लिए, टीकाकरण के चार या पांच दिनों के बाद पत्तियों को एक ताजा सड़न रोकनेवाला एमएस एगर प्लेट में स्थानांतरित करें। पत्तियों को ताजा आगर माध्यम में डालने से पहले पेटीओल के आधार को काट लें।टीकाकरण के आठ या नौ दिनों के बाद रोग फेनोटाइप का आकलन करें। सूक्ष्म विश्लेषण ने फ्लैट के तल पर सूक्ष्म स्लाइडों पर बीजाणुओं के वितरण को भी प्रदर्शित किया। हल्के टीकाकरण के बाद छह अलग-अलग स्थानों में वितरित बीजाणुओं के गणना घनत्व ने कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं दिखाया।बीजाणुओं के साथ भारी टीकाकरण के बाद इसी तरह के परिणाम प्राप्त किए गए थे। भारी टीकाकरण के 12 दिनों बाद विभिन्न पौधों के जीनोटाइप के बीच टीकाकरण समानता की जांच की गई। पैड 4-1 पौधों ने कोलंबिया 0, जंगली प्रकार के पौधों की तुलना में रोग संवेदनशीलता में वृद्धि दिखाई।अतिसंवेदनशील पौधों पर टीकाकरण के लगभग 10 दिनों बाद उत्पादित पर्याप्त ताजे बीजाणुओं का उपयोग करना महत्वपूर्ण है, क्योंकि ताजा बीजाणुओं को हटाना आसान है और उपनिवेश स्थापित करने की अधिक संभावना है। पाउडर फफूंदी केवल पौधे एपिडर्मल कोशिकाओं को उपनिवेशित करती है। एपिडर्मिस, या लेजर माइक्रो विच्छेदन को छीलकर पाउडर फफूंदी संक्रमित कोशिकाओं का अलगाव, मेजबान प्रतिक्रियाओं के अधिक लक्षित ट्रांसक्रिप्टोमिक और प्रोटिओमिक अध्ययन को सक्षम करेगा।यह विधि शोधकर्ताओं को पाउडर फफूंदी संक्रमण फेनोटाइप को अधिक कुशलता से निर्धारित करने में मदद करेगी, और इसलिए पौधे पाउडर फफूंदी इंटरैक्शन पर अधिक प्रभावी कार्यात्मक अध्ययन की सुविधा प्रदान करनी चाहिए।

Research

JoVE Journal

Biology

An Improved Method of RNA Isolation from Loblolly Pine (P. taeda L.) and Other Conifer Species

An Improved Method of RNA Isolation from Loblolly Pine P. taeda L. and Other Conifer Species

विनोदी पाइन से एक शाही सेना के अलगाव की बेहतर विधि ( पी. taeda एल) और अन्य शंकुवृक्ष प्रजाति

Tissues isolated from conifer species, particularly those belonging to the Pinaceae family, such as loblolly pine (Pinus taeda L.), contain high ...

Ice-Cap: A Method for Growing Arabidopsis and Tomato Plants in 96-well Plates for High-Throughput Genotyping

Ice-Cap: A Method for Growing Arabidopsis and Tomato Plants in 96-well Plates for High-Throughput Genotyping

आइस कैप: बढ़ते के लिए एक विधि Arabidopsis और उच्च throughput जीनोटाइपिंग के लिए 96 अच्छी तरह से प्लेट्स में टमाटर संयंत्रों

It is becoming common for plant scientists to develop projects that require the genotyping of large numbers of plants. The first step in any genotyping ...

A Simple Method for Imaging Arabidopsis Leaves Using Perfluorodecalin as an Infiltrative Imaging Medium

A Simple Method for Imaging Arabidopsis Leaves Using Perfluorodecalin as an Infiltrative Imaging Medium

इमेजिंग के लिए एक सरल तरीका Arabidopsis एक Infiltrative इमेजिंग मध्यम के रूप में Perfluorodecalin का उपयोग पत्तियां

The problem of acquiring high-resolution images deep into biological samples is widely acknowledged1. In air-filled tissue such as the spongy mesophyll of ...

Measuring Spatial and Temporal Ca2+ Signals in Arabidopsis Plants

Measuring Spatial and Temporal Ca2+ Signals in Arabidopsis Plants

मापने स्थानिक और लौकिक सीए<sup&gt; 2 +</supArabidopsis संयंत्रों में&gt; सिग्नल

Developmental and environmental cues induce Ca2+ fluctuations in plant cells. Stimulus-specific spatial-temporal Ca2+ patterns are sensed by cellular Ca2+ ...

Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility

एक किफायती और आसान करने के लिए बनाएँ Zebrafish सुविधा के निर्माण

In vivo biomedical research is pivotal to translate in vitro findings into clinical advances. Small academic institutions with limited resources find it ...

An Easy Method for Plant Polysome Profiling

संयंत्र polysome रूपरेखा के लिए एक आसान तरीका

Translation of mRNA to protein is a fundamental and highly regulated biological process. Polysome profiling is considered as a gold standard for the ...

Rapid Analysis of Circadian Phenotypes in Arabidopsis Protoplasts Transfected with a Luminescent Clock Reporter

एक luminescent घड़ी रिपोर्टर के साथ Arabidopsis Protoplasts ट्रांसफ़ेक्ट में circadian phenotypes के तेजी से विश्लेषण

The plant circadian clock allows the anticipation of daily changes to the environment. This anticipation aids the responses to temporally predictable ...

An Efficient and Flexible Cell Aggregation Method for 3D Spheroid Production

3 डी उपगोल उत्पादन के लिए एक कुशल और लचीला सेल एकत्रीकरण विधि

Monolayer cell culture does not adequately model the in vivo behavior of tissues, which involves complex cell-cell and cell-matrix interactions. ...

Standardized Method for High-throughput Sterilization of Arabidopsis Seeds

Arabidopsis बीजों के उच्च प्रवाह नसबंदी के लिए मानकीकृत विधि

Arabidopsis thaliana (Arabidopsis) seedlings often need to be grown on sterile media. This requires prior seed sterilization to prevent the growth of ...