Name: generation and culture of lingual organoids derived from adult mouse taste stem cells
Uploaded: 2021-04-05T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation and Culture of Lingual Organoids Derived from Adult Mouse Taste Stem Cells at JoVE.com

Forfatterne vil takke Dr. Peter Dempsey og Monica Brown (University of Colorado Anschutz Medical Campus Organoid and Tissue Modeling Shared Resource) for å gi WNR betingede medier og verdifulle diskusjoner. Vi takker også University of Colorado Cancer Center Cell Technologies og Flow Cytometry Shared Resources, spesielt Dmitry Baturin, for cellesorteringsekspertise. Dette arbeidet ble finansiert av: NIH/NIDCD R01 DC012383, DC012383-S1, DC012383-S2 og NIH/NCI R21 CA236480 til LAB, og R21DC016131 og R21DC016131-02S1 til DG, og F32 DC015958 til EJG.

Alle dyreprosedyrene ble utført i et AAALAC-akkreditert anlegg i samsvar med Guide for care and use of Laboratory Animals, Animal Welfare Act og Public Health Service Policy, og ble godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ved University of Colorado Anschutz Medical Campus. Lgr5EGFP-IRES-CreERT2 mus som brukes i denne protokollen er fra The Jackson Laboratory, Stock No. 008875.
MERK: Følgende trinn bør fullføres før du begynner å sikre jevn og rettidig p...

<ol>
	<li>Barlow, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+and+renewal+in+gustation:+new+insights+into+taste+bud+development.">Progress and renewal in gustation: new insights into taste bud development.</a> Development. 142, 3620-3629 (2015).</li><li>Liman, E. R., Zhang, Y. V., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+coding+of+taste.">Peripheral coding of taste.</a> Neuron. 81 (5), 984-1000 (2014).</li><li>Finger, T. E., Silver, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The neurobiology of taste and smell. , 287-314 (2000).</li><li>Barlow, L. A., Klein, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developing+and+regenerating+a+sense+of+taste.">Developing and regenerating a sense of taste.</a> Current Topics in Developmental Biology. 111, 401-419 (2015).</li><li>Yee, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lgr5-EGFP+marks+taste+bud+stem/progenitor+cells+in+posterior+tongue.">Lgr5-EGFP marks taste bud stem/progenitor cells in posterior tongue.</a> Stem Cells. 31 (5), 992-1000 (2013).</li><li>Miura, H., Scott, J. K., Harada, S., Barlow, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog-expressing+basal+cells+are+general+post-mitotic+precursors+of+functional+taste+receptor+cells.">Sonic hedgehog-expressing basal cells are general post-mitotic precursors of functional taste receptor cells.</a> Developmental Dynamics: An Official Publication of the American Association of Anatomists. 243 (10), 1286-1297 (2014).</li><li>Deshpande, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation-related+alterations+of+taste+function+in+patients+with+head+and+neck+cancer:+a+systematic+review.">Radiation-related alterations of taste function in patients with head and neck cancer: a systematic review.</a> Current Treatment Options in Oncology. 19 (12), 12 (2018).</li><li>Nolden, A. A., Hwang, L. D., Boltong, A., Reed, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemosensory+changes+from+cancer+treatment+and+their+effects+on+patients'+food+behavior:+A+scoping+review.">Chemosensory changes from cancer treatment and their effects on patients' food behavior: A scoping review.</a> Nutrients. 11 (10), 2285 (2019).</li><li>Doty, R. L., Shah, M., Bromley, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug-induced+taste+disorders.">Drug-induced taste disorders.</a> Drug Safety. 31 (3), 199-215 (2008).</li><li>Kumari, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+taste+organs+and+sensory+function+after+severe+loss+from+Hedgehog/Smoothened+inhibition+with+cancer+drug+sonidegib.">Recovery of taste organs and sensory function after severe loss from Hedgehog/Smoothened inhibition with cancer drug sonidegib.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (48), 10369-10378 (2017).</li><li>Ermilov, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+taste+organs+is+strictly+dependent+on+epithelial+hedgehog/gli+signaling.">Maintenance of taste organs is strictly dependent on epithelial hedgehog/gli signaling.</a> PLoS Genetics. 12 (11), 1006442 (2016).</li><li>Gaillard, D., Shechtman, L. A., Millar, S. E., Barlow, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fractionated+head+and+neck+irradiation+impacts+taste+progenitors,+differentiated+taste+cells,+and+Wnt/&#946;-catenin+signaling+in+adult+mice.">Fractionated head and neck irradiation impacts taste progenitors, differentiated taste cells, and Wnt/&#946;-catenin signaling in adult mice.</a> Scientific Reports. 9, 17934 (2019).</li><li>Nguyen, H. M., Reyland, M. E., Barlow, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+taste+bud+cell+loss+after+head+and+neck+irradiation.">Mechanisms of taste bud cell loss after head and neck irradiation.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 32 (10), 3474-3484 (2012).</li><li>Ohla, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognizing+taste:+Coding+patterns+along+the+neural+axis+in+mammals.">Recognizing taste: Coding patterns along the neural axis in mammals.</a> Chemical Senses. 44 (4), 237-247 (2019).</li><li>Chaudhari, N., Roper, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+biology+of+taste.">The cell biology of taste.</a> The Journal of Cell Biology. 190, 285-296 (2010).</li><li>Breslin, P. A., Spector, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+taste+perception.">Mammalian taste perception.</a> Current Biology: CB. 18 (4), 148-155 (2008).</li><li>Aihara, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+stem/progenitor+cell+cycle+using+murine+circumvallate+papilla+taste+bud+organoid.">Characterization of stem/progenitor cell cycle using murine circumvallate papilla taste bud organoid.</a> Scientific Reports. 5, 17185 (2015).</li><li>Ren, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5-+or+Lgr6-expressing+taste+stem/progenitor+cells+generate+taste+bud+cells+ex+vivo.">Single Lgr5- or Lgr6-expressing taste stem/progenitor cells generate taste bud cells ex vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (46), 16401-16406 (2014).</li><li>Sato, T., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+mouse+small+intestinal+epithelial+cell+cultures.">Primary mouse small intestinal epithelial cell cultures.</a> Methods in Molecular Biology. 945, 319-328 (2013).</li><li>Ren, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+analyses+of+taste+organoids+reveal+multiple+pathways+involved+in+taste+cell+generation.">Transcriptome analyses of taste organoids reveal multiple pathways involved in taste cell generation.</a> Scientific Reports. 7, 4004 (2017).</li><li>Feng, S., Achoute, L., Margolskee, R. F., Jiang, P., Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide-induced+inflammatory+cytokine+expression+in+taste+organoids.">Lipopolysaccharide-induced inflammatory cytokine expression in taste organoids.</a> Chemical Senses. 45 (3), 187-194 (2020).</li><li>Lin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=R-spondin+substitutes+for+neuronal+input+for+taste+cell+regeneration+in+adult+mice.">R-spondin substitutes for neuronal input for taste cell regeneration in adult mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 118 (2), 2001833118 (2021).</li><li>Miyoshi, H., Stappenbeck, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+expansion+and+genetic+modification+of+gastrointestinal+stem+cells+in+spheroid+culture.">In vitro expansion and genetic modification of gastrointestinal stem cells in spheroid culture.</a> Nature Protocols. 8 (12), 2471-2482 (2013).</li><li>Staats, J., Divekar, A., McCoy, J. P., Maecker, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Immunophenotyping: Methods and Protocols. , 81-104 (2019).</li><li>Perfetto, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amine-reactive+dyes+for+dead+cell+discrimination+in+fixed+samples.">Amine-reactive dyes for dead cell discrimination in fixed samples.</a> Current Protocols in Cytometry. , (2010).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+expansion+of+epithelial+organoids+from+human+colon,+adenoma,+adenocarcinoma,+and+Barrett's+epithelium.">Long-term expansion of epithelial organoids from human colon, adenoma, adenocarcinoma, and Barrett's epithelium.</a> Gastroenterology. 141 (5), 1762-1772 (2011).</li><li>Livak, K. J., Schmittgen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+relative+gene+expression+data+using+real-time+quantitative+PCR+and+the+2(-Delta+Delta+C(T))+method.">Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) method.</a> Methods. 25 (4), 402-408 (2001).</li><li>Morizane, R., Bonventre, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+nephron+progenitor+cells+and+kidney+organoids+from+human+pluripotent+stem+cells.">Generation of nephron progenitor cells and kidney organoids from human pluripotent stem cells.</a> Nature Protocols. 12 (1), 195-207 (2017).</li><li>Ekert, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommended+guidelines+for+developing,+qualifying,+and+implementing+complex+in+vitro+models+(CIVMs)+for+drug+discovery.">Recommended guidelines for developing, qualifying, and implementing complex in vitro models (CIVMs) for drug discovery.</a> SLAS Discovery: Advancing Life Sciences R &amp; D. 25 (10), 1174-1190 (2020).</li><li>Dekkers, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+3D+imaging+of+fixed+and+cleared+organoids.">High-resolution 3D imaging of fixed and cleared organoids.</a> Nature Protocols. 14 (6), 1756-1771 (2019).</li><li>Fujii, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+intestinal+organoids+maintain+self-renewal+capacity+and+cellular+diversity+in+niche-inspired+culture+condition.">Human intestinal organoids maintain self-renewal capacity and cellular diversity in niche-inspired culture condition.</a> Cell Stem Cell. 23 (6), 787-793 (2018).</li><li>Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+development+and+disease+with+organoids.">Modeling development and disease with organoids.</a> Cell. 165 (7), 1586-1597 (2016).</li><li>Castillo-Azofeifa, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+from+both+nerves+and+epithelium+is+a+key+trophic+factor+for+taste+bud+maintenance.">Sonic hedgehog from both nerves and epithelium is a key trophic factor for taste bud maintenance.</a> Development. 144 (17), 3054-3065 (2017).</li><li>Vintschgau, M. v., H&#246;nigschmied, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nervus+glossopharyngeus+und+schmeckbecher.">Nervus glossopharyngeus und schmeckbecher.</a> Archiv f&#252;r die gesamte Physiologie des Menschen und der Tiere. 14, 443-448 (1877).</li><li>Liu, H. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+Shh+signaling+centers+participate+in+fungiform+papilla+and+taste+bud+formation+and+maintenance.">Multiple Shh signaling centers participate in fungiform papilla and taste bud formation and maintenance.</a> Developmental Biology. 382 (1), 82-97 (2013).</li><li>Workman, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+human+pluripotent-stem-cell-derived+intestinal+tissues+with+a+functional+enteric+nervous+system.">Engineered human pluripotent-stem-cell-derived intestinal tissues with a functional enteric nervous system.</a> Nature Medicine. 23 (1), 49-59 (2017).</li><li>Koning, M., vanden Berg, C. W., Rabelink, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-derived+kidney+organoids:+engineering+the+vasculature.">Stem cell-derived kidney organoids: engineering the vasculature.</a> Cell and Molecular Life Sciences: CMLS. 77 (12), 2257-2273 (2020).</li></ol>

Rapportert her er en effektiv og lett repeterbar metode for dyrking, vedlikehold og behandling av språklige organoider avledet fra voksne musesmak stamceller. Det ble funnet at bruk av tre CVPer fra 8 til 20 uker gamle Lgr5-EGFP-mus er tilstrekkelig til å oppnå ~ 10.000 GFP+ celler for eksperimentell bruk, noe som resulterer i 50 brønner belagt med en tetthet på 200 celler per brønn i 48-brønnsplater. Fjerning av CVP grøft epithelia er optimalisert ved å injisere lingual epitel med nylaget Di...

Hos gnagere er lingual smaksløker plassert i soppform papiller fordelt fremre, bilateral foliat papillisk bakre, samt en enkelt circumvallate papilla (CVP) ved den bakre midtlinjen av tungen1. Hver smaksløk består av 50-100 kortvarige, raskt fornyende smaksreseptorceller (TRCer), som inkluderer type I glial-lignende støtteceller, type II-celler som oppdager søte, bitre og umami, og type III-celler som oppdager sure2,3,4. I musen CVP produserer LGR5+ stamceller langs basal lamina alle TRC-typer samt ikke-smak epitelceller5. Når du fornyer smakslinjen, blir LGR5-datterceller først spesifisert som post-mitotic smak forløperceller (type IV-celler) som skriver inn en smaksløk og er i stand til å differensiere i noen av de tre TRC-typene6. Den raske omsetningen av TRCer gjør smakssystemet utsatt for forstyrrelser ved medisinske behandlinger, inkludert stråling og visse legemiddelbehandlinger7,8,9,10,11,12,13. Dermed er det viktig å studere smakssystemet i sammenheng med smaksstammecelleregulering og TRC-differensiering for å forstå hvordan du kan redusere eller forhindre smaksdysfunksjon.
Mus er en tradisjonell modell for in vivo-studier i smaksvitenskap siden de har et smakssystem organisert på samme måte som mennesker14,15,16. Mus er imidlertid ikke ideelle for studier med høy gjennomstrømning, da de er dyre å vedlikeholde og tidkrevende å jobbe med. For å overvinne dette har in vitro organoide kulturmetoder blitt utviklet de siste årene. Smak organoider kan genereres fra innfødt CVP vev, en prosess der organoider knopper av fra isolert mus CVP epitel dyrket ex vivo17. Disse organoidene viser et flerlags epitel i samsvar med in vivo smakssystemet. En mer effektiv måte å generere organoider som ikke krever ex vivo CVP kultur ble utviklet av Ren et al. i 201418. Tilpasningsmetoder og kulturmedier utviklet seg først for å vokse tarmorganoider, de isolerte enkle Lgr5-GFP+ stamceller fra mus CVP og belagt dem i matrisegel19. Disse enkeltcellene genererte linguale organoider som sprer seg i løpet av de første 6 dagene av kulturen, begynner å skille seg rundt dag 8, og ved slutten av kulturperioden inneholder ikke-smak epitelceller og alle tre TRC-typer18,20. Til dags dato har flere studier som bruker det linguale organoidmodellsystemet blitt publisert17,18,20,21,22; Metoder og kulturforhold som brukes til å generere disse organoidene varierer imidlertid på tvers av publikasjoner (Supplerende tabell 1). Dermed har disse metodene blitt justert og optimalisert her for å presentere en detaljert standardisert protokoll for kulturen av lingual organoider avledet fra LGR5+ forfedre av voksen mus CVP.
Lingual organoider gir en unik modell for å studere cellebiologiske prosesser som driver smakscelleutvikling og fornyelse. Etter hvert som anvendelsene av linguale organoider utvides og flere laboratorier beveger seg mot å bruke in vitro organoid-modeller, er det viktig at feltet streber etter å utvikle og vedta standardiserte protokoller for å forbedre reproduserbarheten. Etablering av linguale organoider som et standardverktøy innen smaksvitenskap ville muliggjøre studier med høy gjennomstrømning som erter fra hverandre hvordan enkeltstammeceller genererer de differensierte cellene i det voksne smakssystemet. I tillegg kan linguale organoider brukes til raskt å screene legemidler for potensielle påvirkninger på smak homeostase, som deretter kan undersøkes grundigere i dyremodeller. Denne tilnærmingen vil til slutt styrke innsatsen for å utarbeide terapier som forbedrer livskvaliteten for fremtidige narkotikamottakere.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibodies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 546 Donkey anti Goat IgG</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>A11056, RRID: AB_142628</td>
			<td>1:2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 546 Goat anti Rabbit IgG</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>A11010, RRID:AB_2534077</td>
			<td>1:2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 568 Goat anti Guinea pig IgG</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11075, RRID:AB_2534119</td>
			<td>1:2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 Donkey anti Rabbit IgG</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>A31573, RRID:AB_2536183</td>
			<td>1:2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 Goat anti Rat IgG</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>A21247, RRID:AB_141778</td>
			<td>1:2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI (for FACS)</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>62247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI (for immunohistochemistry)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D3571, RRID:AB_2307445</td>
			<td>1:10000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-CAR4</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>AF2414, RRID:AB_2070332</td>
			<td>1:50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guinea pig anti-KRT13</td>
			<td>Acris Antibodies</td>
			<td>BP5076, RRID:AB_979608</td>
			<td>1:250</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-GUSTDUCIN</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology Inc.</td>
			<td>sc-395, RRID:AB_673678</td>
			<td>1:250</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-NTPDASE2</td>
			<td>CHUQ</td>
			<td>mN2-36LI6, RRID:AB_2800455</td>
			<td>1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat anti-KRT8</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>TROMA-IS, RRID: AB_531826</td>
			<td>1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2D rocker</td>
			<td>Benchmark Scientific Inc.</td>
			<td>BR2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D Rotator</td>
			<td>Lab-Line Instruments</td>
			<td>4630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Big-Digit Timer/Stopwatch</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S407992</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5415D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 tank</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>CD USP50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FormaTM Series 3 Water Jackeed CO2 Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>4110</td>
			<td>184 L, Polished Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incucyte</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>Model: S3</td>
			<td>Cancer Center Cell Technologies Shared Resource, University of Colorado Anschutz Medical Campus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MoFlo XDP100</td>
			<td>Cytomation Inc</td>
			<td>Model: S13211997</td>
			<td>&#160;Gates Center Flow Cytometry Core, University of Colorado Anschutz Medical Campus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital Shaker</td>
			<td>New Brunswick Scientific</td>
			<td>Excella E1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Real-Time PCR System</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4376600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerated Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5417R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ND-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Stereomicroscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Stemi SV6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal Cycler</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>580BR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-812</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Precision</td>
			<td>51220073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Media</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A83 01</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SML0788-5MG</td>
			<td>Stock concentration 10 mM, final concentration 500 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM/F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12634-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504044</td>
			<td>Stock concentration 50X, final concentration 1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15750-060</td>
			<td>Stock concentration 1000X, final concentration 1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Stock concentration 100X, final concentration 1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15630080</td>
			<td>Stock concentration 100X, final concentration 1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>315-09-1MG</td>
			<td>Stock concentration 500 &#181;g/mL, final concentration 50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine Noggin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>250-38</td>
			<td>Stock concentration 50 &#181;g/mL, final concentration 25 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-acetyl-L-cysteine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9165</td>
			<td>Stock concentration 0.5 M, final concentration 1 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N0636-100g</td>
			<td>Stock concentration 1 M, final concentration 1 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Stock concentration 100X, final concentration 1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primocin</td>
			<td>InvivoGen</td>
			<td>ant-pm-1</td>
			<td>Stock concentration 500X, final concentration 1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB202190</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>1264</td>
			<td>Stock concentration 10 mM, final concentration 0.4 &#181;M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WRN Conditioned media</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Received from Dempsey Lab (AMC Organoid and Tissue Modeling Share Resource). Derived from L-WRN (ATCC&#174; CRL-3276&#8482;) cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y27632 dihydochloride 10ug</td>
			<td>APExBIO</td>
			<td>A3008-10</td>
			<td>Stock concentration 10 mM, final concentration 10 &#181;M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml TB Syringe</td>
			<td>BD Syringe</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol, min. 98%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M3148-25ML</td>
			<td>&#946;-mercaptoethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.0 mL Microcentrifuge Tubes</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1420-2700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48-well plates</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>150687</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 3/4 inch Pasteur Pipets</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-678-8A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin from bovine serum (BSA)</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>A9647-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffer RLT Lysis buffer</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>1015750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Recovery Solution</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cohan-Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase from Clostridium histolyticum, type I</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>C0130-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex RGF BME, Type 2, Pathclear</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>3533-005-02</td>
			<td>Matrigel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II (neutral protease, grade II)</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Roche)</td>
			<td>4942078001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Filters</td>
			<td>Sysmex</td>
			<td>04-0042-2316</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Phosphate Buffered Saline pH 7.4 (1X) (Ca2+ &#38; Mg2+ free)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Phosphate Buffered Saline with Ca2+ &#38; Mg2+&#160;</td>
			<td>Sigma Life Sciences</td>
			<td>D8662-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11252-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA, 0.5M (pH 8.0)</td>
			<td>Promega</td>
			<td>V4231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elastase Lyophilized</td>
			<td>Worthington Biochemical</td>
			<td>LS002292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra Fine Bonn Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14084-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26140-079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount G</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>0100-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES Solution</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>H3537-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyClone Tryspin 0.25% + EDTA</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iScript cDNA Synthesis Kit</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1706691</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modeling Clay, Gray</td>
			<td>Sargent Art</td>
			<td>22-4084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle</td>
			<td>BD Syringe</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Goat Serum</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>005-000-121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerSYBR Green PCR Master Mix</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4367659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Micro Kit</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>74004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe-Lock Tubes 1.5 mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>022363204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate dibasic anhydrous</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>7558-79-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate monobasic anhydrous</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>7558-80-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperFrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors - Sharp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14002-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>T8787-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR micro cover glass</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48366067</td>
			<td>22x22mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation and culture of lingual organoids derived from adult mouse taste stem cells

Smakssansen formidles av smaksløker på tungen, som består av raskt fornyende smaksreseptorceller (TRCer). Denne kontinuerlige omsetningen drives av lokale stamceller og gjør smaksfunksjonen utsatt for forstyrrelser av en rekke medisinske behandlinger, noe som igjen påvirker livskvaliteten sterkt. Å studere denne prosessen i sammenheng med narkotikabehandling er derfor avgjørende for å forstå om og hvordan smaksforfedrederfunksjon og TRC-produksjon påvirkes. Gitt de etiske bekymringene og begrenset tilgjengelighet av menneskelig smaksvev, brukes musemodeller, som har et smakssystem som ligner på mennesker. Sammenlignet med in vivo-metoder, som er tidkrevende, dyre og ikke mottagelige for studier med høy gjennomstrømning, kan murine lingual organoider gjøre det mulig å kjøre eksperimenter raskt med mange replikeringer og færre mus. Her har tidligere publiserte protokoller blitt tilpasset og en standardisert metode for å generere smakorganoider fra smaksforfedrederceller isolert fra circumvallate papilla (CVP) av voksne mus presenteres. Smak forfedre celler i CVP uttrykke LGR5 og kan isoleres via EGFP fluorescens-aktivert celle sortering (FACS) fra mus som bærer en Lgr5EGFP-IRES-CreERT2 allele. Sorterte celler er belagt på et matrisegelbasert 3D-kultursystem og dyrket i 12 dager. Organoider utvides de første 6 dagene av kulturperioden via spredning og går deretter inn i en differensieringsfase, hvor de genererer alle tre smakscelletypene sammen med ikke-smak epitelceller. Organoider kan høstes ved modning på dag 12 eller når som helst under vekstprosessen for RNA-uttrykk og immunhiistokjemisk analyse. Standardisering av kulturmetoder for produksjon av linguale organoider fra voksne stamceller vil forbedre reproduserbarheten og fremme språklige organoider som et kraftig verktøy for legemiddelscreening i kampen for å hjelpe pasienter som opplever smaksdysfunksjon.

Mus har en CVP, plassert bakre på tungen, hvorfra LGR5+ stamceller kan isoleres (Figur 1A, svart boks). Injeksjon av en enzymoppløsning under og rundt CVP (figur 1B) resulterer i liten hevelse i epitelet og fordøyelsen av bindevevet. Tilstrekkelig fordøyelse oppnås etter en 33 min inkubasjon, noe som gjør det enkelt separasjon av CVP-epitelet fra det underliggende vevet. Ved forsøk på å skrelle CVP-epitelet, bør det kuttes i...

Watch this Scientific Journal Video about Generation and Culture of Lingual Organoids Derived from Adult Mouse Taste Stem Cells at JoVE.com

Generation and Culture of Lingual Organoids Derived from Adult Mouse Taste Stem Cells

Protokollen presenterer en metode for dyrking og behandling av linguale organoider avledet fra smaksstammeceller isolert fra den bakre smaken papilla av voksne mus.

Generering og kultur av lingual organoider avledet fra voksen mus smak stamceller

The sense of taste is mediated by taste buds on the tongue, which are composed of rapidly renewing taste receptor cells (TRCs). This continual turnover is ...

Organoider er kraftig in vitro-teknologi som brukes til legemiddelscreening og forståelse av biologiske prosesser. Så å generere organoider som modellerer tungen er avgjørende for å studere smakscelleutvikling og regenerering. Tradisjonelle in vivo smaksstudier kan være dyre og tidkrevende.Denne organoidprotokollen tilbyr et standardisert, reproduserbart alternativ som minimerer disse utfordringene samtidig som det gir mulighet for eksperimenter med høyere gjennomstrømning. Etter å ha euthanizing en voksen mus, bruk stor steril disseksjon saks for å kutte kinnene og bryte kjeven. Løft deretter tungen og kutt den linguale frenulumen for å skille tungen fra gulvet i munnhulen.Klipp tungen ut og samle den i steril iskald dPBS med kalsium og magnesium. Under et spredende mikroskop, fjern og kast den fremre tungen ved å kutte bare fremre av inter malar eminens med et barberblad. Deretter bruker du en delikat oppgaveserviett for å fjerne hår og overflødig væske fra den bakre tungen.Fyll deretter en en milliliter sprøyte med 200 til 300 mikroliter injeksjonsenzymoppløsning og sett inn en 30 gauge halv tomme nål like over inter malar eminens til bare fremre av circumvallate papillae, eller CVP. Injiser enzymoppløsningen under og ved sidekantene av CVP mellom epitelet og det underliggende vevet. Trekk sprøyten langsomt og kontinuerlig ut av tungen når oppløsningen injiseres.Inkuber tungen og steril kalsium magnesiumfri dPBS ved romtemperatur i nøyaktig 33 minutter. Bruk ekstra fin disseksjon saks, gjør små kutt i epitelet bilateralt og bare fremre av CVP. Skrell deretter epitelet forsiktig ved å løfte det med fine tang.Når grøftepitelet er fritt for det underliggende bindevevet, plasserer du det i to milliliter mikrocentrifugerør, forhåndsbelagt med FBS. Tilsett dissosiasjonsenzymcocktailen til rørene som inneholder den skrellede CVP-epitheliaen og inkuber dem i et 37 grader Celsius vannbad i 45 minutter med kort virvel hver 15. I løpet av de siste 15 minuttene av inkubasjon, prewarm 0,25% Trypsin-EDTA i vannbadet.Etter inkubasjon, virvel rørene i triturat med en glass Pasteur pipette i ett minutt. Etter at vevstykker har avgjort seg, pipetterer du supernatanten som inneholder den første samlingen av dissosierte celler i nye FBS-belagte 1,5 milliliter mikrocentrifugerør. Snurr supernatanten i fem minutter ved 370 ganger G og fire grader Celsius for å pellet cellene.Fjern den resulterende supernatanten, og bruk deretter cellepelletet i FACS-bufferen på nytt og hold den på is. For å fjerne de resterende vevsstykkene i de originale to milliliter mikrocentrifugerørene, tilsett forvarmede 0,25% Trypsin-EDTA og inkuber ved 37 grader Celsius i 30 minutter med kort virvel hver 10. Deretter triturerer du vevstykkene med en glass Pasteur pipette i ett minutt.Etter at vevstykkene har avgjort seg, pipetterer du supernatanten inn i mikrocentrifugerørene på 1,5 milliliter som inneholder de tidligere innsamlede dissosierte cellene i FACS-bufferen. Snurr rørene med de dissosierte cellene. Etter å ha fjernet supernatanten, resuspend cellepellets i FACS buffer og holde dem på is.Deretter isolerer du Lgr5-GFP positive celler via FACS ved hjelp av den grønne fluorescerende proteinkanalen som beskrevet i tekstmanuskriptet. Overfør ønsket antall Lgr5 positive suspenderte celler til et nytt mikrosenterrør. Snurr røret i fem minutter ved 370 ganger G og fire grader Celsius for å pellet cellene.Fjern supernatanten og legg røret på is. Resuspend cellepellet forsiktig i riktig mengde matrisegel med skånsom pipettering. Hold deretter mikrosentrifugerøret på is i et 50 milliliter konisk rør for å forhindre at matrisegelen gelerer.Tilsett 15 mikroliter av matrisegelen i celleblanding i midten av hver brønn av en 48-brønns plate. For å sikre en jevn fordeling av celler, bland matrisegelen og celleblandingen ved å pipettere opp og ned etter plating hver tredje brønn. Plasser platen i en inkubator ved 37 grader Celsius, 5% karbondioksid og 95% fuktighet i 10 minutter for å tillate gelling av matrisegelen.Tilsett deretter 300 mikroliter romtemperatur WENRAS-medier supplert med berghemmeren, Y27632, til hver brønn og returner platen til inkubatoren. To dager etter plating, fjern mediet fra hver brønn ved hjelp av en en milliliter pipette eller via vakuumaspirasjon, noe som sikrer ingen krysskontaminering mellom forholdene. Tilsett 300 mikroliter WENRAS-medier nedover siden av brønnen, pass på at du ikke forstyrrer matrisegelen og returnerer platen til inkubatoren.Når lingual organoider dyrkes ved hjelp av WENR-medier, vokser de ikke effektivt. Men etter å ha lagt til A 83-01, en TGF-beta signalhemmer, og SB202190, P-38 kart kinase signalhemmer, observeres robust vekst. Interessant nok, å fjerne disse inhibitorene fra media etter seks dager resulterer i høyere uttrykk for generell smaksreseptorcellemarkør, Kcnq1, noe som tyder på at A 83-01 og SB-202190 hindrer smakscelledifferensiering.Dermed oppnås optimal vekst og differensiering ved å dyrke organoider i WENRAS-medier fra dag null til seks og WENR-medier fra dag seks til 12. Eldre organoider inneholder både smaksceller merket med keratin-8 og ikke-smak epitelceller merket med keratin-13. Videre uttrykkes keratin-13 på høyere nivåer enn alle tre smaksreseptorcellemarkører, noe som tyder på at organoider hovedsakelig består av ikke-smake epitelceller.Organoidene uttrykker alle smaksreseptorcelletyper. Type en celler merket av Entpd2 og bitter type to celler merket med Gnat3 er svært uttrykt i smak organoider, mens sur sensing type tre celler merket av Car4 er mindre vanlige. Smaksreseptorcellene fordeles tilfeldig i organoidene i stedet for i diskrete smaksløkstrukturer observert in vivo.Pass på å inkludere litt vev posterior til CVP når du dissekerer tungen fra munnhulen. I tillegg må du sørge for at begge skyttergravene spretter ut og oppnås når du skreller epitelet.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation and Culture of Adult Zebrafish Brain-derived Neurospheres

Isolasjon og Culture of Adult Sebrafisk Brain-avledet Neurosfærer

The zebrafish is a highly relevant model organism for understanding the cellular and molecular mechanisms involved in neurogenesis and brain regeneration ...

Large-Scale Production of Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells Using a Highly Reproducible Small Molecule-Based Differentiation Protocol

Storskala produksjon av cardiomyocytes fra Menneskelig Pluripotent stamceller ved hjelp av en meget reproduserbar lite molekyl-Based Differensiering Protocol

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

Generation of Standardized and Reproducible Forebrain-type Cerebral Organoids from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Generasjon av standardiserte og reproduserbar Forebrain-type Cerebral Organoids fra menneske indusert Pluripotent stamceller

The human cortex is highly expanded and exhibits a complex structure with specific functional areas, providing higher brain function, such as cognition. ...

The Isolation and Culture of Primary Epicardial Cells Derived from Human Adult and Fetal Heart Specimens

Isolasjon og kultur av primære Epicardial celler avledet fra menneskelige voksne og fosterets hjerte prøver

The epicardium, an epithelial cell layer covering the myocardium, has an essential role during cardiac development, as well as in the repair response of ...

Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Generasjon 3D huden Organoid fra ledningen blod-avledet indusert Pluripotent stamceller

The skin is the body&#8217;s largest organ and has many functions. The skin acts as a physical barrier and protector of the body and regulates bodily ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

I Vitro generasjon av Somite derivater fra menneske indusert stamceller Pluripotent

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Generation of Organoids from Mouse Extrahepatic Bile Ducts

Generasjon av Organoids fra mus Extrahepatic galle kanaler

Cholangiopathies, which affect extrahepatic bile ducts (EHBDs), include biliary atresia, primary sclerosing cholangitis, and cholangiocarcinoma. They have ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

Utarbeidelse av små RNA biblioteker for sekvensering fra tidlig mus embryoer

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...

Accurate Follicle Enumeration in Adult Mouse Ovaries

Nøyaktig follikkelopplisting i voksenmusovaries

Sexually reproducing female mammals are born with their entire lifetime supply of oocytes. Immature, quiescent oocytes are found within primordial ...

Generation of 3D Whole Lung Organoids from Induced Pluripotent Stem Cells for Modeling Lung Developmental Biology and Disease

Generering av 3D Hele lungeorganoider fra induserte pluripotente stamceller for modellering av lungeutviklingsbiologi og sykdom

Human lung development and disease has been difficult to study due to the lack of biologically relevant in vitro model systems. Human induced pluripotent ...