Name: microcrystal electron diffraction of small molecules
Uploaded: 2021-03-15T15:00:00
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ゴネンラボは、ハワードヒューズ医学研究所からの資金によってサポートされています。この研究は、国立衛生研究所P41GM136508によってサポートされました。

1. 低分子サンプルの調製
<ol><li>少量(0.01〜1 mg)の粉末、液体、または固体を小さなバイアルまたはチューブに移します。</li>
	<li>すでに粉末状のサンプルの場合は、サンプルが必要になるまでキャップを使用してチューブを密封します。方法1(ステップ3)または2(ステップ4)を試す前に、液体サンプルを粉末に乾燥させます。 注:液体に溶解したサンプルは、以下の方法3(5.X)を使用できます</li...

<ol>
	<li>Shi, D., Nannenga, B. L., Iadanza, M. G., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+electron+crystallography+of+protein+microcrystals.">Three-dimensional electron crystallography of protein microcrystals.</a> eLife. 2, 01345 (2013).</li><li>Nannenga, B. L., Shi, D., Leslie, A. G. W., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+structure+determination+by+continuous-rotation+data+collection+in+MicroED.">High-resolution structure determination by continuous-rotation data collection in MicroED.</a> Nature Methods. 11 (9), 927-930 (2014).</li><li>Hattne, J., Martynowycz, M. W., Penczek, P. A., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroED+with+the+Falcon+III+direct+electron+detector.">MicroED with the Falcon III direct electron detector.</a> IUCrJ. 6 (5), 921-926 (2019).</li><li>Hattne, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroED+data+collection+and+processing.">MicroED data collection and processing.</a> Acta Crystallographica Section A Foundations and Advances. 71 (4), 353-360 (2015).</li><li>Henderson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+and+limitations+of+neutrons,+electrons+and+X-rays+for+atomic+resolution+microscopy+of+unstained+biological+molecules.">The potential and limitations of neutrons, electrons and X-rays for atomic resolution microscopy of unstained biological molecules.</a> Quarterly Reviews of Biophysics. 28 (2), 171-193 (1995).</li><li>Martynowycz, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroED+structure+of+the+human+adenosine+receptor+determined+from+a+single+nanocrystal+in+LCP.">MicroED structure of the human adenosine receptor determined from a single nanocrystal in LCP.</a> BioRxiv. , 316109 (2020).</li><li>Martynowycz, M. W., Zhao, W., Hattne, J., Jensen, G. J., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collection+of+continuous+rotation+MicroED+data+from+ion+beam-milled+crystals+of+any+size.">Collection of continuous rotation MicroED data from ion beam-milled crystals of any size.</a> Structure. 27 (3), 545-548 (2019).</li><li>Martynowycz, M. W., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ligand+incorporation+into+protein+microcrystals+for+MicroED+by+on-grid+soaking.">Ligand incorporation into protein microcrystals for MicroED by on-grid soaking.</a> Structure. , (2020).</li><li>Martynowycz, M. W., Khan, F., Hattne, J., Abramson, J., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroED+structure+of+lipid-embedded+mammalian+mitochondrial+voltage-dependent+anion+channel.">MicroED structure of lipid-embedded mammalian mitochondrial voltage-dependent anion channel.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 117 (51), 32380-32385 (2020).</li><li>Jones, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CryoEM+method+MicroED+as+a+powerful+tool+for+small+molecule+structure+determination.">The CryoEM method MicroED as a powerful tool for small molecule structure determination.</a> ACS Central Science. 4 (11), 1587-1592 (2018).</li><li>Dick, M., Sarai, N. S., Martynowycz, M. W., Gonen, T., Arnold, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tailoring+tryptophan+synthase+TrpB+for+selective+quaternary+carbon+bond+formation.">Tailoring tryptophan synthase TrpB for selective quaternary carbon bond formation.</a> Journal of the American Chemical Society. 141 (50), 19817-19822 (2019).</li><li>Gallagher-Jones, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sub-&#229;ngstr&#246;m+cryo-EM+structure+of+a+prion+protofibril+reveals+a+polar+clasp.">Sub-&#229;ngstr&#246;m cryo-EM structure of a prion protofibril reveals a polar clasp.</a> Nature Structural &amp; Molecular Biology. 25 (2), 131-134 (2018).</li><li>Ting, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+scaffold+peptide+in+the+biosynthesis+of+amino+acid-derived+natural+products.">Use of a scaffold peptide in the biosynthesis of amino acid-derived natural products.</a> Science. 365 (6450), 280-284 (2019).</li><li>de la Cruz, M. J., Martynowycz, M. W., Hattne, J., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroED+data+collection+with+SerialEM.">MicroED data collection with SerialEM.</a> Ultramicroscopy. 201, 77-80 (2019).</li><li>Mastronarde, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+electron+microscope+tomography+using+robust+prediction+of+specimen+movements.">Automated electron microscope tomography using robust prediction of specimen movements.</a> Journal of Structural Biology. 152 (1), 36-51 (2005).</li><li>Schorb, M., Haberbosch, I., Hagen, W. J. H., Schwab, Y., Mastronarde, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Software+tools+for+automated+transmission+electron+microscopy.">Software tools for automated transmission electron microscopy.</a> Nature Methods. 16 (6), 471-477 (2019).</li><li>Kabsch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=XDS.">XDS.</a> Acta Crystallographica Section D Biological Crystallography. 66 (2), 125-132 (2010).</li><li>Winter, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DIALS:+Implementation+and+evaluation+of+a+new+integration+package.">DIALS: Implementation and evaluation of a new integration package.</a> Acta Crystallographica Section D. 74 (2), 85-97 (2018).</li><li>de la Cruz, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic-resolution+structures+from+fragmented+protein+crystals+with+the+cryoEM+method+MicroED.">Atomic-resolution structures from fragmented protein crystals with the cryoEM method MicroED.</a> Nature Methods. 14 (4), 399-402 (2017).</li><li>Shi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+collection+of+MicroED+data+for+macromolecular+crystallography.">The collection of MicroED data for macromolecular crystallography.</a> Nature Protocols. 11 (5), 895-904 (2016).</li><li>Nannenga, B. L., Shi, D., Hattne, J., Reyes, F. E., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+catalase+determined+by+MicroED.">Structure of catalase determined by MicroED.</a> eLife. 3, 03600 (2014).</li><li>Martynowycz, M. W., Zhao, W., Hattne, J., Jensen, G. J., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qualitative+Analyses+of+Polishing+and+Precoating+FIB+Milled+Crystals+for+MicroED.">Qualitative Analyses of Polishing and Precoating FIB Milled Crystals for MicroED.</a> Structure. 27 (10), 1594-1600 (2019).</li></ol>

サンプル調製は通常反復的なプロセスであり、スクリーニングとデータ収集のセッションの後に最適化が行われます。低分子サンプルの場合、多くの医薬品は疎水性である傾向があるため、グリッドをグロー放電せずに最初にグリッド調製を試みることが賢明であることがよくあります10,11。グリッドのナノ結晶堆積物が少なすぎる場合は、最初に...

微結晶電子回折(MicroED)は、サブマイクロメートルサイズの結晶から原子分解能構造を決定するためのクライオ電子顕微鏡(クライオEM)法です1,2。結晶は標準的な透過型電子顕微鏡(TEM)グリッドに適用され、液体エタンまたは液体窒素に突入することによって凍結されます。次に、グリッドは極低温で動作するTEMにロードされます。結晶はグリッド上に配置され、初期回折品質についてスクリーニングされます。連続回転マイクロEDデータは、スクリーニングされた結晶のサブセットから収集され、そこでデータは高速カメラを使用してムービー3として保存されます。これらの動画は、標準的な結晶学フォーマットに変換され、X線結晶学実験4とほぼ同じように処理されます。
MicroEDはもともとタンパク質の微結晶を調べるために開発されました1,2。タンパク質結晶構造解析のボトルネックは、従来のシンクロトロンX線回折実験のために大きく整然とした結晶を成長させることです。電子はX線よりも桁違いに強い物質と相互作用するため、検出可能な回折を生成するために必要な結晶サイズの限界はかなり小さくなります5。さらに、弾性散乱イベントと非弾性散乱イベントの比率は電子にとってより有利であり、より小さな全体的な曝露でより有用なデータを収集できることを示唆しています5。絶え間ない開発により、最も困難な微結晶からMicroEDデータを収集できるようになりました6、7、8、9。
最近、MicroEDは、明らかに非晶質材料から低分子医薬品の構造を決定するための強力なツールであることが示されている10、11、12、13。これらの粉末は、購入した試薬のボトル、精製カラムから直接、または錠剤を微粉末に粉砕することからでも得る10。これらの粉末は、目で見るとアモルファスに見えるが、完全にナノ結晶で構成されているか、または単により大きな非結晶性のアモルファス画分に微量のナノ結晶堆積物を含むことができる。グリッドへの材料の塗布は容易であり、結晶の同定、スクリーニング、およびデータ収集の後続のステップは、近い将来自動化される可能性さえあります14。他の人はサンプル調製とデータ収集に異なる方法を使用するかもしれませんが、ここでは、MicroED用の低分子のサンプルを調製し、データ収集するためにGonenラボで開発および使用されているプロトコルが詳しく説明されています。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.1-1.5mL Eppendorf tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-282-300</td>
			<td>Any vial or tube will do.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autogrid clips</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>1036173</td>
			<td>Clipped grids are not required for MicroED. They are required for Thermo-Fisher TEMs equipped with an autoloader system.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autogrid C-rings</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>1036171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbamazapine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C4024-1G</td>
			<td>Any amount will suffice for these experiments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMOS based detector</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>CetaD 16M</td>
			<td>We used a CetaD 16M, but any detector with rolling shutter mode or sufficiently fast readout is acceptable.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delphi software</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Software on Thermo-Fisher TEM systems that allows for manual rotation of the sample stage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EPU-D software</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Commercial software for the acquisition of MicroED data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass cover slides</td>
			<td>Hampton</td>
			<td>HR3-231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glow discharger</td>
			<td>Pelco</td>
			<td>easiGlow</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High PrecisionTweezers</td>
			<td>EMS</td>
			<td>78325-AC</td>
			<td>Any high precision tweezer will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid nitrogen vessel</td>
			<td>Spear Lab</td>
			<td>FD-800</td>
			<td>A standard foam vessel for handling specimens under liquid nitrogen - 800mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SerialEM software</td>
			<td>UC Boulder</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Free software distributed by D. Mastronarde. Department of Molecular, Cellular, and Developmental Biology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM grids</td>
			<td>Quantifoil/EMS</td>
			<td>Q310CMA</td>
			<td>Multi-A 300 mesh grids were used here, but any thin carbon grids will work. For these small molecules, we suggest starting with continuous carbon.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>transmission electron microscope (TEM)</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>Talos Arctica</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman circular filter paper</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>WHA1001090</td>
			<td>90mm or larger</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microcrystal electron diffraction of small molecules

微結晶電子回折(MicroED)実験用の低分子サンプルを調製するための詳細なプロトコルについて説明します。MicroEDは、標準的なクライオ電子顕微鏡(クライオEM)装置を用いてタンパク質や低分子の構造を解明するために開発されました。このようにして、低分子、ペプチド、可溶性タンパク質、および膜タンパク質が最近高解像度に決定されている。例として薬物カルバマゼピンを使用して低分子医薬品のグリッドを調製するためのプロトコルがここに提示される。データのスクリーニングと収集のためのプロトコルが提示されます。データ統合、構造決定、改良など、プロセス全体の追加ステップは、他の場所で紹介されています。低分子グリッドの調製に要する時間は30分未満と推定される。

MicroEDは、電子と物質の間の強い相互作用を利用するクライオ電子顕微鏡法であり、消えるほど小さな結晶の研究を可能にします12,13。これらの工程の後、微結晶から収集された結晶学的形式の回折ムービーを有することが期待される(Movie 1)。ここでは、カルバマゼピン12を用いてこの手法を実証する。結果は、TEMグリ?...

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Microcrystal Electron Diffraction of Small Molecules

ここでは、微結晶電子回折(MicroED)実験用の低分子結晶粉末を調製するために私たちの研究室で開発された手順について説明します。

低分子の微小結晶電子回折

A detailed protocol for preparing small molecule samples for microcrystal electron diffraction (MicroED) experiments is described. MicroED has been ...

この手順では、低分子粉末から3次元構造まで数分で進む方法を示します。これは、化学コミュニティにとって変革的な手法です。多くの化合物は容易に大きな結晶に成長しません。MicroEDでは、ナノメートルサイズの結晶から原子分解能の構造を決定することができます。手順を実演するのは、UCLAの教授であるマイク・マルティノウィッツ博士です。はじめに、少量の粉末、液体、または固体を小さなバイアルまたはチューブに移します。すでに粉末状のサンプルの場合は、サンプルが必要になるまでキャップを使用してチューブを密封します。同様に、液体サンプルを粉末に乾燥させます。スライドガラスカバーの一方の端にプラスチックフィルムを巻き付けます。TEMグリッドをカバースライドの上のフィルムに置き、茶色のカーボン面を上に向けて配置します。次に、グリッド付きのスライドをグロー放電チャンバーに入れ、30ピコアンペアの負の設定を使用してカバースライドを約15秒間グロー放電します。サンプルをグリッドに追加する前に、ろ紙で裏打ちされたガラスペトリ皿内のカバースライドにグリッドを保管します。ピンセットを使用して、覆われたペトリ皿からグロー放電TEMグリッドを取り外し、カーボン側を上に向けて円形のろ紙の上に置きます。小さなへらを使用して、非常に小さな粉末のスクープを取り除き、ろ紙のTEMグリッドのすぐ隣にある小さな正方形のガラスカバースリップに置きます。パウダーの上に別の小さな正方形のスライドガラススライドまたはカバースリップを置きます。指で、2つのスライドガラスをそっとこすり合わせて微粉末を作りました。カバースリップを傾けてろ紙のTEMグリッドのすぐ上に配置し、グロー放電TEMグリッドのわずか数センチ上でカバースリップをこすり合わせ続けます。粉末がグリッドに向かって落下しているかどうかを確認します。2つのガラスカバースリップの1つを取り外して、細かく粉砕された粉末のカバーを外します。次に、ろ紙を使用して、カバースリップからTEMグリッド上に微粉末をそっと払い落とします。ピンセットのセットを使用してTEMグリッドの端をつかみ、チップがグリッドの正方形に穴を開けないようにします。グリッドをろ紙から1〜2センチ上に持ち上げ、グリッドを下の紙に対して90度の角度にします。グリッドをしっかりとピンセットしたままピンセットを軽くたたいて、緩い粉を取り除きます。ピンセットの先端をグリッドで液体窒素容器に直接手で動かしてグリッドを凍結し、グリッドとピンセットの沸騰が止まるまで待ちます。液体窒素下で、カーボン支持フィルムの前にサンプルがビームに当たるように、カーボン側を向けたサンプルホルダーにグリッドを配置します。サンプルホルダーをTEMにロードし、グリッドが常に液体窒素温度に保たれるようにします。オートローダーシステムの場合、クリップされたグリッドを液体窒素冷却容器内のカセットに入れると、オートローダーロボットは、オートローダーとカラムの間を行き来するためにサンプルを安全に保ちながらカセットを受け入れることができます。TEMカラムバルブを開き、ハンドパネルを使用して倍率を可能な限り低い倍率に調整します。ハンドパネルの強度ノブを調整して、蛍光スクリーンに丸い明るい領域が表示されるようにして、ビームを見つけます。高解像度のMicroEDデータを収集する前に、適切なソフトウェアを使用して低倍率ですべてのグリッドアトラスを取得し、顕微鏡が低倍率と高倍率の両方のイメージングに対して適切に位置合わせされていることを確認します。カーボンが壊れておらず、フィルム上に黒または暗い粒子が見えるグリッドの正方形を特定します。ハンドパネルのジョイスティックを使用して物理的にグリッド内を移動するか、収集されたアトラスを仮想的にナビゲートして、壊れておらず、微小結晶を含むグリッドの正方形を検索します。これらの各正方形の中心を調査用のグリッド位置のリストに追加し、顕微鏡のユーザーインターフェイスまたは顕微鏡自動化ソフトウェアのノートブックに追加できます。倍率を500〜1300倍に設定します。格納されている各グリッド位置の中心高さを調整し、保存した Z 値をメモした位置に更新します。蛍光灯またはフラットカメラで、グリッド上の小さな黒い斑点や粒子を検索します。良いサンプルは、多くの場合、高倍率で鋭いエッジを持ち、順番に結晶を示唆しています。位置したポテンシャル結晶を画面の中央に移動し、TEMが高倍率モードに入るように倍率を上げます。選択した領域の開口部を挿入し、絞りを大きいサイズまたは小さいサイズに変更して、選択した領域が水晶振動子よりも大きくなるようにします。蛍光スクリーンが挿入されていることを確認するTEMハンドパネルの屈折ボタンを押して、屈折モードに切り替えます。拡大ノブを使用してカメラの長さを調整し、エッジが少なくとも1オングストローム解像度になるようにします。中心スポットができるだけシャープで小さくなるように回折焦点を調整します。回折シフトノブを使用して、中央ビームを蛍光スクリーンの中央に移動します。ビームストップを挿入して、ビームがその後ろにあることを確認します。蛍光スクリーンを持ち上げて、カメラで短時間露光します。対応する回折パターンを調べて、パターンに列と行に規則的に配置された鋭いスポットがあることを確認します。結晶座標をTEMユーザーインターフェイスに保存するか、書き留めてから、現在のグリッド正方形上の関心のあるすべての潜在的な結晶に対して回折スクリーニングを繰り返します。遮蔽された水晶振動子を1000倍以上の倍率で中央に配置し、自動ルーチンまたは手作業を使用して水晶の中心高さを調整します。結晶のサイズと形状に最適な選択した領域開口部を挿入します。ステージを負方向と正方向に傾けて、画像がグリッドバーで遮られるようにします。また、ローリングシャッター読み出しモードを備えた最新のカメラで1秒ごとにデータを読み取ることにより、データ収集の目的でこれらの角度に注意してください。最大傾斜速度の割合と停止するタイミングを顕微鏡のユーザーインターフェースまたは専用ソフトウェアで指定して、回転速度を設定します。さまざまな形式でデータを保存すると、個々のフレームまたは画像のスタックとして記録されます。微小結晶から収集された結晶学的形式の屈折動画は、TEMグリッド上で同定されたカルバマゼピン微結晶からの連続回転MicroEDデータセットを示しています。データ収集、統合、および構造ソリューションの後、高解像度の構造が決定され、その明確さはデータの品質と完全性に依存します。サンプルをグリッドに適用することは、良好なデータを取得するために重要です。この方法に従って、標準的な結晶学ソフトウェアを使用してデータをさらに処理することができます。MicroEDが低分子の強力な方法であることを実証することで、非常に重要な分子の新しい構造を解決するために世界中で使用が開かれました。

Research

JoVE Journal

Biochemistry

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Microcrystallography of Protein Crystals and In Cellulo Diffraction

タンパク質結晶の微結晶化および<em&gt;セルロで</em&gt;回折

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