Name: microcrystal electron diffraction of small molecules
Uploaded: 2021-03-15T15:00:00
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O laboratório Gonen é apoiado por fundos do Howard Hughes Medical Institute. Este estudo foi apoiado pelo National Institutes of Health P41GM136508.

1. Preparação de amostras de pequenas moléculas
<ol><li>Transfira uma pequena quantidade (0,01 - 1 mg) de pó, líquido ou sólidos para um pequeno frasco ou tubo.</li>
	<li>Para amostras já em pó, sele o tubo usando a tampa até que a amostra seja necessária. Secar as amostras líquidas em pós antes das tentativas do método 1 (passo 3) ou 2 (passo 4). NOTA: As amostras dissolvidas em líquido podem utilizar o método 3 (5.X) abaixo</li>
</ol>2. Preparação de grades de ETM
<p clas...

<ol>
	<li>Shi, D., Nannenga, B. L., Iadanza, M. G., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+electron+crystallography+of+protein+microcrystals.">Three-dimensional electron crystallography of protein microcrystals.</a> eLife. 2, 01345 (2013).</li><li>Nannenga, B. L., Shi, D., Leslie, A. G. W., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+structure+determination+by+continuous-rotation+data+collection+in+MicroED.">High-resolution structure determination by continuous-rotation data collection in MicroED.</a> Nature Methods. 11 (9), 927-930 (2014).</li><li>Hattne, J., Martynowycz, M. W., Penczek, P. A., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroED+with+the+Falcon+III+direct+electron+detector.">MicroED with the Falcon III direct electron detector.</a> IUCrJ. 6 (5), 921-926 (2019).</li><li>Hattne, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroED+data+collection+and+processing.">MicroED data collection and processing.</a> Acta Crystallographica Section A Foundations and Advances. 71 (4), 353-360 (2015).</li><li>Henderson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+and+limitations+of+neutrons,+electrons+and+X-rays+for+atomic+resolution+microscopy+of+unstained+biological+molecules.">The potential and limitations of neutrons, electrons and X-rays for atomic resolution microscopy of unstained biological molecules.</a> Quarterly Reviews of Biophysics. 28 (2), 171-193 (1995).</li><li>Martynowycz, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroED+structure+of+the+human+adenosine+receptor+determined+from+a+single+nanocrystal+in+LCP.">MicroED structure of the human adenosine receptor determined from a single nanocrystal in LCP.</a> BioRxiv. , 316109 (2020).</li><li>Martynowycz, M. W., Zhao, W., Hattne, J., Jensen, G. J., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collection+of+continuous+rotation+MicroED+data+from+ion+beam-milled+crystals+of+any+size.">Collection of continuous rotation MicroED data from ion beam-milled crystals of any size.</a> Structure. 27 (3), 545-548 (2019).</li><li>Martynowycz, M. W., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ligand+incorporation+into+protein+microcrystals+for+MicroED+by+on-grid+soaking.">Ligand incorporation into protein microcrystals for MicroED by on-grid soaking.</a> Structure. , (2020).</li><li>Martynowycz, M. W., Khan, F., Hattne, J., Abramson, J., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroED+structure+of+lipid-embedded+mammalian+mitochondrial+voltage-dependent+anion+channel.">MicroED structure of lipid-embedded mammalian mitochondrial voltage-dependent anion channel.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 117 (51), 32380-32385 (2020).</li><li>Jones, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CryoEM+method+MicroED+as+a+powerful+tool+for+small+molecule+structure+determination.">The CryoEM method MicroED as a powerful tool for small molecule structure determination.</a> ACS Central Science. 4 (11), 1587-1592 (2018).</li><li>Dick, M., Sarai, N. S., Martynowycz, M. W., Gonen, T., Arnold, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tailoring+tryptophan+synthase+TrpB+for+selective+quaternary+carbon+bond+formation.">Tailoring tryptophan synthase TrpB for selective quaternary carbon bond formation.</a> Journal of the American Chemical Society. 141 (50), 19817-19822 (2019).</li><li>Gallagher-Jones, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sub-&#229;ngstr&#246;m+cryo-EM+structure+of+a+prion+protofibril+reveals+a+polar+clasp.">Sub-&#229;ngstr&#246;m cryo-EM structure of a prion protofibril reveals a polar clasp.</a> Nature Structural &amp; Molecular Biology. 25 (2), 131-134 (2018).</li><li>Ting, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+scaffold+peptide+in+the+biosynthesis+of+amino+acid-derived+natural+products.">Use of a scaffold peptide in the biosynthesis of amino acid-derived natural products.</a> Science. 365 (6450), 280-284 (2019).</li><li>de la Cruz, M. J., Martynowycz, M. W., Hattne, J., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroED+data+collection+with+SerialEM.">MicroED data collection with SerialEM.</a> Ultramicroscopy. 201, 77-80 (2019).</li><li>Mastronarde, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+electron+microscope+tomography+using+robust+prediction+of+specimen+movements.">Automated electron microscope tomography using robust prediction of specimen movements.</a> Journal of Structural Biology. 152 (1), 36-51 (2005).</li><li>Schorb, M., Haberbosch, I., Hagen, W. J. H., Schwab, Y., Mastronarde, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Software+tools+for+automated+transmission+electron+microscopy.">Software tools for automated transmission electron microscopy.</a> Nature Methods. 16 (6), 471-477 (2019).</li><li>Kabsch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=XDS.">XDS.</a> Acta Crystallographica Section D Biological Crystallography. 66 (2), 125-132 (2010).</li><li>Winter, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DIALS:+Implementation+and+evaluation+of+a+new+integration+package.">DIALS: Implementation and evaluation of a new integration package.</a> Acta Crystallographica Section D. 74 (2), 85-97 (2018).</li><li>de la Cruz, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic-resolution+structures+from+fragmented+protein+crystals+with+the+cryoEM+method+MicroED.">Atomic-resolution structures from fragmented protein crystals with the cryoEM method MicroED.</a> Nature Methods. 14 (4), 399-402 (2017).</li><li>Shi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+collection+of+MicroED+data+for+macromolecular+crystallography.">The collection of MicroED data for macromolecular crystallography.</a> Nature Protocols. 11 (5), 895-904 (2016).</li><li>Nannenga, B. L., Shi, D., Hattne, J., Reyes, F. E., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+catalase+determined+by+MicroED.">Structure of catalase determined by MicroED.</a> eLife. 3, 03600 (2014).</li><li>Martynowycz, M. W., Zhao, W., Hattne, J., Jensen, G. J., Gonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qualitative+Analyses+of+Polishing+and+Precoating+FIB+Milled+Crystals+for+MicroED.">Qualitative Analyses of Polishing and Precoating FIB Milled Crystals for MicroED.</a> Structure. 27 (10), 1594-1600 (2019).</li></ol>

A preparação da amostra é tipicamente um processo iterativo, onde as otimizações são feitas após sessões de triagem e coleta de dados. Para amostras de moléculas pequenas, muitas vezes é prudente tentar primeiro a preparação da grade sem descarga de brilho das grades, uma vez que muitos fármacos tendem a ser hidrofóbicos10,11. Se as grades tiverem poucos depósitos nanocristalinos, é uma boa ideia tentar novamente após a primeira descarga de brilh...

A difração eletrônica de microcristais (MicroED) é um método de criomicroscopia eletrônica (crio-EM) para determinar estruturas de resolução atômica a partir de cristais de tamanho submicrométrico 1,2. Os cristais são aplicados a grades de microscópio eletrônico de transmissão padrão (TEM) e congelados mergulhando em etano líquido ou nitrogênio líquido. As grades são então carregadas em um MET operando em temperaturas criogênicas. Os cristais são localizados na grade e peneirados para a qualidade inicial da difração. Os dados MicroED de rotação contínua são coletados de um subconjunto dos cristais peneirados, onde os dados são salvos usando uma câmera rápida como um filme3. Esses filmes são convertidos para um formato cristalográfico padrão e processados quase de forma idêntica como um experimento de cristalografia de raios X4.
O MicroED foi originalmente desenvolvido para investigar microcristais de proteína 1,2. Um gargalo na cristalografia de proteínas é o crescimento de cristais grandes e bem ordenados para experimentos tradicionais de difração de raios X síncrotron. Como os elétrons interagem com ordens de magnitude da matéria mais fortes que os raios X, as limitações do tamanho do cristal necessário para produzir difração detectável é consideravelmente menor5. Além disso, a razão entre eventos de espalhamento elástico e inelástico é mais favorável para elétrons, sugerindo que dados mais úteis podem ser coletados com uma menor exposição global5. Desenvolvimentos constantes têm permitido a coleta de dados de MicroED a partir dos microcristais mais desafiadores 6,7,8,9.
Recentemente, o MicroED tem se mostrado uma poderosa ferramenta para determinar as estruturas de fármacos de pequenas moléculas a partir de materiais aparentemente amorfos10,11,12,13. Esses pós podem vir diretamente de um frasco de reagente comprado, de uma coluna de purificação ou até mesmo do esmagamento de uma pílula em um pó fino10. Esses pós parecem amorfos a olho nu, mas podem ser inteiramente compostos de nanocristais ou simplesmente conter traços de depósitos nanocristalinos em uma fração amorfa não cristalina maior. A aplicação do material na grade é fácil, e as etapas subsequentes de identificação de cristais, triagem e coleta de dados podem até ser automatizadas em um futuro próximo14. Enquanto outros podem utilizar diferentes métodos para preparação de amostras e coleta de dados, aqui são detalhados os protocolos desenvolvidos e utilizados no laboratório de Gonen para a preparação de amostras de pequenas moléculas para MicroED e para a coleta de dados.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.1-1.5mL Eppendorf tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-282-300</td>
			<td>Any vial or tube will do.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autogrid clips</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>1036173</td>
			<td>Clipped grids are not required for MicroED. They are required for Thermo-Fisher TEMs equipped with an autoloader system.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autogrid C-rings</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>1036171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbamazapine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C4024-1G</td>
			<td>Any amount will suffice for these experiments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMOS based detector</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>CetaD 16M</td>
			<td>We used a CetaD 16M, but any detector with rolling shutter mode or sufficiently fast readout is acceptable.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delphi software</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Software on Thermo-Fisher TEM systems that allows for manual rotation of the sample stage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EPU-D software</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Commercial software for the acquisition of MicroED data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass cover slides</td>
			<td>Hampton</td>
			<td>HR3-231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glow discharger</td>
			<td>Pelco</td>
			<td>easiGlow</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High PrecisionTweezers</td>
			<td>EMS</td>
			<td>78325-AC</td>
			<td>Any high precision tweezer will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid nitrogen vessel</td>
			<td>Spear Lab</td>
			<td>FD-800</td>
			<td>A standard foam vessel for handling specimens under liquid nitrogen - 800mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SerialEM software</td>
			<td>UC Boulder</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Free software distributed by D. Mastronarde. Department of Molecular, Cellular, and Developmental Biology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM grids</td>
			<td>Quantifoil/EMS</td>
			<td>Q310CMA</td>
			<td>Multi-A 300 mesh grids were used here, but any thin carbon grids will work. For these small molecules, we suggest starting with continuous carbon.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>transmission electron microscope (TEM)</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>Talos Arctica</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman circular filter paper</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>WHA1001090</td>
			<td>90mm or larger</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microcrystal electron diffraction of small molecules

Um protocolo detalhado para a preparação de amostras de pequenas moléculas para experimentos de difração eletrônica de microcristais (MicroED) é descrito. O MicroED foi desenvolvido para resolver estruturas de proteínas e pequenas moléculas usando equipamentos de criomicroscopia eletrônica padrão (cryo-EM). Dessa forma, pequenas moléculas, peptídeos, proteínas solúveis e proteínas de membrana foram recentemente determinadas com altas resoluções. Protocolos são apresentados aqui para a preparação de grades de fármacos de pequenas moléculas usando o fármaco carbamazepina como exemplo. Protocolos para triagem e coleta de dados são apresentados. Etapas adicionais no processo geral, como integração de dados, determinação de estrutura e refinamento são apresentadas em outro lugar. Estima-se que o tempo necessário para preparar as grades de moléculas pequenas seja inferior a 30 min.

O MicroED é um método crioEM que aproveita as fortes interações entre elétrons e matéria, o que permite a investigação de cristais pequenosque desaparecem12,13. Após essas etapas, espera-se ter um filme de difração em formato cristalográfico coletado de microcristais (Filme 1). Aqui, a técnica é demonstrada com o uso da carbamazepina12. Os resultados mostram um conjunto de dados MicroED de rotação contínua...

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Microcrystal Electron Diffraction of Small Molecules

Aqui, descrevemos os procedimentos desenvolvidos em nosso laboratório para a preparação de pós de cristais de pequenas moléculas para experimentos de difração eletrônica de microcristais (MicroED).

Difração de Elétrons Microcristal de Pequenas Moléculas

A detailed protocol for preparing small molecule samples for microcrystal electron diffraction (MicroED) experiments is described. MicroED has been ...

Neste procedimento, mostramos como proceder de uma pequena molécula em pó para uma estrutura tridimensional em minutos. Esta é uma técnica transformadora para a comunidade química. Muitos compostos não crescem facilmente em grandes cristais.Com o MicroED, podemos determinar estruturas de resolução atômica a partir de cristais de tamanho nanométrico. Quem demonstrará o procedimento será o Dr. Mike Martynowycz, que é professor da UCLA. Para começar, transfira uma pequena quantidade de pó, líquido ou sólidos para um pequeno frasco ou tubo.Para amostras já em pó, sele o tubo usando a tampa até que a amostra seja necessária. Da mesma forma, seque as amostras líquidas em pós. Embrulhe filme plástico em torno de uma extremidade de uma lâmina de tampa de vidro.Coloque as grades de MET sobre o filme na parte superior da lâmina da tampa com o lado de carbono de cor marrom voltado para cima. Em seguida, coloque a lâmina com grades na câmara de descarga de brilho e descarregue a lâmina de cobertura por aproximadamente 30 segundos usando a configuração negativa em 15 picoamperes. Guarde as grades na tampa dentro de uma placa de Petri de vidro forrada com papel filtro antes de adicionar a amostra às grades.Retire a grade de TEM de descarga de brilho da placa de Petri coberta usando uma pinça e coloque-a em um papel de filtro circular com o lado de carbono voltado para cima. Usando uma pequena espátula, retire uma colher muito pequena de pó e coloque-a em uma pequena tampa de vidro quadrada ao lado da grade de TEM no papel de filtro. Coloque outra pequena lâmina de vidro quadrada ou tampa deslizante em cima do pó.Com os dedos, esfregue suavemente as duas lâminas de vidro juntas para fazer um pó fino. Incline as lâminas da tampa e posicione-as logo acima da grade do MET no papel de filtro e continue a esfregar as lâminas da tampa juntas apenas alguns centímetros acima da grade do MET descarregada com brilho. Observe se o pó está caindo em direção à grade.Descubra o pó finamente moído removendo uma das duas lamínulas da tampa de vidro. Em seguida, escove suavemente o pó fino da tampa, deslize para a grade do TEM usando um pedaço de papel de filtro. Pegue a borda da grade de ETM usando um conjunto de pinças, garantindo que as pontas não furem nenhum dos quadrados da grade.Levante a grade de um a dois centímetros acima do papel de filtro e incline a grade a 90 graus em relação ao papel abaixo. Bata suavemente na pinça enquanto mantém a grade firmemente pinçada para remover qualquer pó solto. Congele a grade movendo a ponta da pinça com a grade diretamente em um recipiente de nitrogênio líquido à mão e espere até que a grade e a pinça parem de ferver.Sob nitrogênio líquido, coloque a grade no porta-amostras com o lado carbono orientado de tal forma que a amostra seja atingida pelo feixe antes do filme de suporte de carbono. Coloque o porta-amostras no MET garantindo que a grade seja sempre mantida em temperaturas de nitrogênio líquido. Para sistemas de carregadores automáticos, coloque as grades cortadas em um em um recipiente refrigerado por nitrogênio líquido, o que permite que a robótica do carregador automático aceite o, mantendo as amostras seguras para o transporte entre o carregador automático e a coluna.Abra as válvulas da coluna TEM e ajuste a ampliação usando os painéis manuais para a menor ampliação possível. Encontre o feixe ajustando o botão de intensidade nos painéis de mão de modo que uma área brilhante redonda seja visível na tela fluorescente. Faça um atlas de toda a grade em baixa ampliação usando o software apropriado, garantindo que o microscópio esteja bem alinhado para imagens de baixa e alta ampliação antes de coletar dados MicroED de alta resolução.Identifique quadrados de grade sem carbono quebrado e grãos pretos ou escuros visíveis no filme. Navegue pela grade fisicamente usando o joystick nos painéis de mão ou virtualmente no atlas coletado para procurar quadrados de grade que não estejam quebrados e contenham microcristais. Adicione o centro de cada um desses quadrados a uma lista de locais de grade para investigação, que pode ser adicionada a um notebook na interface do usuário do microscópio ou no software de automação do microscópio.Defina a ampliação entre 500 a 1300x. Ajuste a altura central em cada local de grade armazenado e atualize o valor z salvo para as posições anotadas. Pesquise na tela fluorescente ou em uma câmera plana por pequenos pontos pretos ou grãos na grade.Uma boa amostra geralmente terá bordas afiadas em alta ampliação, sugerindo cristal em ordem. Mova um cristal potencial localizado para o centro da tela e aumente a ampliação de tal forma que o MET entre no modo de alta ampliação. Insira uma abertura de área selecionada e altere a abertura para um tamanho maior ou menor para garantir que a área selecionada seja maior que o cristal.Mude para o modo de defração pressionando o botão de defração nos painéis manuais TEM, garantindo que a tela fluorescente seja inserida. Ajuste o comprimento da câmera usando o botão de ampliação de modo que a borda tenha pelo menos uma resolução angstrom. Ajuste o foco de difração de forma que o ponto central seja o mais nítido e pequeno possível.Usando os botões de deslocamento de difração, mova o feixe central para o centro da tela fluorescente. Insira a parada do feixe certificando-se de que o feixe está atrás dele. Levante a tela fluorescente e faça uma breve exposição na câmera.Inspecione o padrão de defração correspondente, certificando-se de que o padrão terá pontos pontiagudos que são regularmente dispostos em colunas e linhas. Salve as coordenadas de cristal na interface do usuário do MET ou anote-as e, em seguida, repita a triagem de difração para todos os cristais potenciais de interesse no quadrado da grade atual. Centralize o cristal peneirado em uma ampliação maior que 1000x e ajuste a altura cêntrica do cristal usando uma rotina automática ou manualmente.Insira a abertura de área selecionada que melhor se adapta ao tamanho e à forma do cristal. Incline o palco nas direções negativa e positiva até que a imagem seja ocluída pelas barras de grade. E observe esses ângulos para fins de coleta de dados, lendo os dados a cada um segundo em uma câmera moderna com um modo de leitura do obturador rolante.Defina a taxa de rotação especificando a porcentagem da velocidade máxima de inclinação e quando parar na interface do usuário do microscópio ou no software dedicado. Salve os dados em uma variedade de formatos, diz quadros individuais ou como uma pilha de imagens. Um filme de defração em formato cristalográfico coletado de microcristais mostra um conjunto de dados MicroED de rotação contínua a partir de um microcristal de carbamazepina identificado em uma grade de MET.Após a coleta, integração e solução da estrutura dos dados, uma estrutura de alta resolução é determinada e sua clareza depende da qualidade e completude dos dados. A aplicação da amostra à grade é fundamental para a aquisição de bons dados. Seguindo este método, os dados podem ser processados usando software cristalográfico padrão.Demonstrar que o MicroED é um método poderoso para pequenas moléculas abriu seu uso em todo o mundo para resolver novas estruturas de moléculas criticamente importantes.

Research

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Biochemistry

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