Name: intranasal immunization and milk collection in studies of maternal immunization in new zealand white rabbits (oryctolagus cuniculus)
Uploaded: 2021-07-31T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits Oryctolagus cuniculus at JoVE.com

作者要感谢杜克大学实验室动物资源司及其饲养团队对动物的帮助和极大的照顾。此外，作者还希望确认病理学系内的 PhotoPath 团队，感谢他们在手稿的音频和视频部分提供的帮助。这项工作得到了Staats实验室的可自由支配的研究资金的支持。

所有程序均按照杜克大学 IACUC 政策获得批准和执行。
注：所需材料在 材料表中提供。
1. 兔子安定和麻醉
<ol><li>通过以1毫克/公斤的剂量在肌肉内施用丙丙氨酸（IM），使雌性兔子（性成熟;大约5-30个月大）。根据动物的大小，使用1或3 mL注射器与25 G针。埃帕西拉肌肉是肌肉内注射的首选部位。 注意：丙丙氨酸也可以在皮下施用，但 IM 是?...

虽然上述协议没有说明，但这种母性模式和牛奶收集是必要的。在研究环境中，兔子很容易通过活盖繁殖。建议确实转移到降压笼繁殖，如果把钱关在自己的笼子里，也可以是领土和侵略性的。如果女性在15分钟后不接受（如逃跑咬人或发声所示），雌性应该被放回自己的笼子里。有几个关于兔子繁殖的信息视频和教程，可以在网上观察到29，但繁殖后，雄性通常会跌倒，并可能...

母体免疫和抗体转移的研究是无价的，原因有很多，因为这是免疫转移的最初途径，也是随后保护新生儿和婴儿免受病原体和疾病侵害的途径。孕产妇免疫有可能通过减少在这一脆弱时期与某些病原体有关的发病率和死亡率，对全球妇幼健康产生积极影响。该战略的主要目标是在整个怀孕期间提高特定产妇抗体的水平。然后，这些抗体可以转移到新生儿和婴儿的水平足以防止感染，直到他们的免疫系统足够成熟，足以充分应对挑战1，2，3。先前的工作已经表明，高抗体滴定剂在出生时与完全保护或延迟发病有关，并降低了新生儿许多不同传染病的严重程度，包括破伤风、百日咳、呼吸道同步病毒（RSV）、流感和B组链球菌感染1、2、3。
在人类中，母体抗体被动地通过胎盘转移，并通过哺乳通过母乳转移。先前的工作已经表明，感染该病毒的母亲在母乳中感染艾滋病毒的IgA水平与病毒产后传播减少有关，这表明母乳对抗艾滋病毒IgA4具有保护作用。对非人类灵长类动物的研究表明，对HIV的免疫可以诱导母乳中明显的抗体反应，虽然类似的血清IgG反应是在全身免疫和粘膜免疫后诱导的，但粘膜免疫在牛奶5、6中诱导了显著较高的IgA反应。
为这些研究确定一个经过转化的动物模型时，应考虑到被动抗体转移的胎盘类型和机制，以及通过母乳转移抗体。哺乳动物的胎盘主要有三种类型，基于母体-胎儿界面的组织类型和层，包括血细胞（灵长类动物、啮齿动物和兔子）、内皮体（食肉动物）和表皮（马、猪和反胃动物）。血吸盘是最具有侵入性的类型，允许产妇血液供应和胆汁或最外层胎儿膜之间的直接通信。根据足部细胞层的数量，有几种异质胎盘的变化，包括灵长类动物体内的异质胎盘、兔子的异质胎盘，以及在大鼠和小鼠中观察到的止痛胎盘。产妇血液供应和胆汁之间的这种直接接触允许在妊娠期间被动地将抗体转移至胎盘。IgG是唯一显著穿过人类胎盘8的抗体类，而IgA是人类母乳9中主要的Ig类。在科学相关的模型中，只有灵长类动物（包括人类）、兔子和豚鼠在牛奶10、11中将IgG转移到子宫和IgA中。因此，兔子模型包含的因素可与人类中控制IgG的异位转移和IgA的哺乳转移的因素相媲美。
除了作为母体免疫和疫苗开发的杰出模式外，兔子和人类鼻腔之间的相似性使其成为适当的产内免疫模式。兔子鼻腔的体积比基于相对体积12的啮齿动物模型更类似于人类。此外，卡斯特琳等人 12 日证明，与啮齿动物相比，与啮齿动物相比，与鼻部相关的淋巴组织（NALT）在兔子中更为庞大。NALT主要位于腹腔鼻肉的腹腔和腹腔方面，位于兔子鼻咽肉的横向和侧向方面，而在啮齿动物中，淋巴组织只存在于鼻咽肉窦12的腹腔方面。在兔子中，皮内和拉米纳丙淋巴细胞的结构和位置，以及孤立的淋巴状卵泡，与人类相似。
以兔子为母体和粘体免疫模型的其他优点包括它们的肥大度高和妊娠期相对较短。大型血管允许相对容易地获得大量血液进行连续采集。可以收集各种粘膜样本，用于抗原特异性抗体反应检测， 包括母乳13（哺乳时）、粘膜分泌物或洗涤液（如口服14、15、16、支气管13、17、18、19、阴道20、21、22）和粪便20、23、24、25。牛奶样本在哺乳期间可以很容易地收集，以评估抗原特异性抗体反应的存在。虽然没有人类和老鼠那么丰富，但各种实验试剂可用于兔子特有的研究和检测。在这篇文章中，我们将描述和演示新西兰白兔（奥里托拉格斯小兔）的产内免疫和牛奶收集。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Intranasal Immunization</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Machine/Vaporizer</td>
			<td>Vet Equip</td>
			<td>901807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic Needle (25 g)</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>07-806-7584</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane (250 mL Bottle)</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-1389</td>
			<td>2-4%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer Lock Syringe (1 mL)</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>07-892-7410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mucosal Vaccine</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Experimental Vaccine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nose Cone</td>
			<td>McCulloch Medical</td>
			<td>07891-1097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>53503-290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettor</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89079-962</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PromAce (Acepromazine maleate)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim</td>
			<td>07-893-5734</td>
			<td>1mg/kg IM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Sterile Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>07-888-2572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milk Collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol Prep 2-ply</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>07-839-8871</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Machine/Vaporizer</td>
			<td>Vet Equip</td>
			<td>901807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic Needles (25 g)</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>07-806-7584</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane (250 mL Bottle)</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-1389</td>
			<td>2-4%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer Lock Syringe (1 mL)</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>07-892-7410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Woven Sponge (4x4)</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>07-891-5815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nose Cone</td>
			<td>McCulloch Medical</td>
			<td>07891-1097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PromAce (Acepromazine Maleate)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim</td>
			<td>07-893-5734</td>
			<td>1mg/kg IM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Sterile Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>07-888-2572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Conical Vial (15 mL)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>14-959-49B</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intranasal immunization and milk collection in studies of maternal immunization in new zealand white rabbits (oryctolagus cuniculus)

由于胎盘和抗体转移与人类相似，兔子是产妇免疫的优良模式。这种研究模式的其他优点是育种和样品收集的方便性、妊娠期相对较短和垃圾量大。通常评估的免疫途径包括皮下、肌肉内、内在和皮肤内。非中期样本收集，按时间顺序检测这些免疫反应，包括从水坝和包中采集血液，以及从哺乳期采集牛奶。在本文中，我们将展示我们的实验室在新西兰白兔（奥里托拉格斯小兔）的母体免疫研究中采用的技术，包括产内免疫和牛奶收集。

图1概述了典型的产妇内免疫研究设计，包括免疫接种、育种、育苗、哺乳和抗体转移。虽然没有说明，血液应在初步免疫前收集，以便进行基线测量，并定期在整个研究的剩余部分收集。血液很容易通过中耳动脉获得温和镇定和局部镇痛剂（如利多卡因2.5%和普洛卡因2.5%霜）。这些样本中可以测量抗原特异性IgG水平的存在。雌性兔子通过鼻内路线接种疫苗，如协议所述，并?...

Watch this Scientific Journal Video about Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits Oryctolagus cuniculus at JoVE.com

Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits Oryctolagus cuniculus

本文描述并演示了鼻内疫苗的管理以及哺乳兔（Oryctolagus cuniculus）的牛奶收集，作为在转换适当的母体免疫模式下评估粘膜免疫力的一种手段。

新西兰白兔产妇免疫研究中的内在免疫和牛奶收集

Due to similarities in placentation and antibody transfer with humans, rabbits are an excellent model of maternal immunization. Additional advantages of ...

母体免疫和抗体转移的研究是无价的，原因有很多，因为这是免疫转移的最初途径，也是新生儿和婴儿预防病原体和疾病的最初途径。由于胎盘和抗体转移与人类相似，兔子是产妇免疫的优良模式。在这篇文章中，我们演示了我们的实验室在新西兰白兔产妇免疫研究中采用的技术，包括产内免疫和牛奶收集。我们将首先描述新西兰白兔的粘性母体免疫研究的示例时间表和一系列事件。雌性兔子通过鼻内途径接种疫苗，如本视频中所示。根据研究，疫苗可能需要增强，或者可能需要通过额外的途径，如肌肉内免疫接种。虽然没有描述，血液应在初步免疫前收集，以便进行基线测量，并在研究的剩余部分定期采集。血液很容易获得中央耳动脉与温和镇痛和局部镇痛剂。这些样本中可以测量抗原特异性IgG水平的存在。兔子然后繁殖。我们更愿意从供应商处购买久经考验的育种者，以确保这些研究的怀孕率更高。根据免疫时间表，兔子可能会在整个怀孕期间接受额外的免疫接种。抗原特异性IgG被异位转移到试剂盒中。在大约30至32天后，怀孕确实会点燃。我们建议在头几天限制对套件的处理，以尽量减少对套件的拒绝。血液样本可以从试剂盒中采集，以评估异地转移的抗原特定IgG水平。血液可以在出生时或出生时附近的少量试剂盒中采集，以评估早期抗原特定抗体水平。除了各种各样的营养物质外，试剂盒在哺乳期间还从哺乳剂中接受抗原特异性IgA。套件通常在四到八周大时断奶。断奶前可以很容易地从哺乳中收集，如本视频所示。然后对采集的牛奶样本进行加工，以检测抗原特异性IgA。根据研究，疫苗和助推剂盒可以施用，并且可以在很小的时候使用横向树脂从试剂盒中采集序列血样。我们现在将在新西兰白兔展示产内免疫和牛奶收集。所有程序均按照杜克大学机构动物护理和使用委员会的政策获得批准和执行。鼻内免疫。所需的材料：醋氨酸、注射器和针头、眼科润滑剂、异丙酮、鼻锥、移液器和移液器尖端、粘膜疫苗。在动物处理之前准备免疫解决方案。兔子在肌肉内每公斤用Acepromazine镇静剂一毫克，用鼻锥用伊索夫鲁兰麻醉。一旦完全麻醉，通过眼睑反射评估，眼科润滑剂添加到每个眼睛，以防止眼睛干燥和随后的角膜溃疡。一旦实验室成员准备好接种疫苗，兔子处于麻醉的足够平面，关闭异氟素和氧气，并取出鼻锥。将兔子放在背上重新任职，以大约45度角支撑颈部和头部，使管理疫苗的实验室成员能够方便地访问和可视化两个肛门。将移液器装载不超过 100 微升的疫苗溶液，并快速将溶液施用到一个鼻孔，并重复第二个鼻孔的程序。移液器应以大约 45 度角举行。向鼻腔通道的中间方面倾斜。免疫的目的是解决接触鼻膜的粘膜。因此，提示不应放在鼻腔内，因为这可能会导致粘膜组织的磨擦或刺激，并可能影响鼻腔管理疫苗的免疫原性。疫苗应快速施用，并在其他鼻孔以同样的方式进行。在两个鼻腔进行给药后，兔子在后部重新任职30秒，以尽量减少疫苗溶液的泄漏。实验室通常一次管理不超过100微升的鼻孔。如果要以最大总容量为 500 微升的量进行管理，则疫苗可以在 100 微升的别名中接种，免疫之间有 30 秒的休息时间。在疫苗总量交付之前，每个给例之间需要休息30秒，并重复使用额外的疫苗。免疫后，将兔子放在通风口进行恢复，并密切监测动物，直到它能够维持尾部重新任职。在某些情况下，疫苗配方可能无法完全输送到鼻腔，疫苗制剂的一部分可能保留在鼻腔的外部部分。在这种情况下，由于不清楚正确输送到鼻腔的疫苗的确切数量，因此不建议重新使用额外的疫苗材料，因为这会为实验增加一个未定义的变量。重要的是使用疫苗输送技术，向鼻孔提供完整和一致的疫苗配方。牛奶收集。所需的材料：醋氨酸、注射器和针头、酒精拭子、纱布、眼润滑剂、伊索夫鲁兰、鼻锥、催产素和小瓶。兔子在肌肉内每公斤用Acepromazine镇静剂一毫克，用鼻锥用伊索夫鲁兰麻醉。一旦完全麻醉，通过眼睑反射评估，眼科润滑剂应用于每只眼睛，以防止眼睛干燥和随后的角膜溃疡。用酒精拭子清洁边缘耳静脉的皮肤。使用一米注射器和25米针头，通过边缘耳静脉静脉给大约一到两个国际单位的催产素，以诱导牛奶放低。由于肌肉的平稳放松，兔子在施用催产素后经常小便或排便。催产素施用后，用一块纱布对注射部位施加压力，以提供止血剂。在保持麻醉面膜或鼻锥在兔子的鼻子上，支撑兔子的后部。顺便提一下，牛奶收集也可以与动物在横向重新任职，但实验室发现，收集更容易，当兔子支撑在它的臀部与助手举行兔子直立与麻醉面膜。打开无菌管准备收集牛奶，并定位乳腺组织和相关奶嘴。兔子通常有四到五对乳腺。奶嘴通常被最近护理的湿毛包围着，当充满牛奶时，乳腺组织很容易被察觉。抓住与拇指和食指之间的奶嘴相关的乳腺组织，向奶嘴方向的腺组织施加温和的按摩压力。将收集管放在奶嘴上收集表达的牛奶。催产素有时可能需要几分钟才能有效，乳腺的产奶量似乎各不相同。如果牛奶表达不成功，请等待几分钟或旋转到额外的乳腺。所有奶嘴的牛奶都可以在同一个卑鄙中收集。通常，几毫升牛奶可以很容易地从哺乳的鹿收集。收集到所需的牛奶量后，关闭伊索夫鲁兰和氧气，从兔子身上取出鼻锥，让兔子在密切监测的同时恢复，直到动物能够维持尾部重新驻留。代表性结果。图一。对于产妇研究，尽早确定怀孕有助于确认母体不需要再繁殖。妊娠检测选项包括心绞痛、超声波、放射图、体重增加和分子技术，如胰岛素生长因子和孕酮的测量。维持兔子怀孕所需的足够的孕酮水平。因此，一些研究还评估了怀孕兔子的孕酮水平，并证明与非怀孕兔子相比，特别是妊娠中期器官形成期间，其水平较高。如图一所示，与非怀孕的兔子相比，怀孕的兔子可以检测到孕酮水平升高，即使交配一降压被证实。使用自动化疗检测测量血清前列腺激素水平。图二。在妊娠期间异位转移的抗原特异性IgG可以通过 Elisa 在试剂盒的血清中测量。血液可以在出生时或出生时附近的少量试剂盒中采集，以评估早期抗原特定抗体水平。串行采血在技术上要容易得多，因为工具包老化和大小增加。如图二所示，可测量试剂盒中抗原特定IgG的血清水平，并与母体水平进行比较。孕产妇转移的IgG水平在出生时较高，并随着时间的推移而减少。图三。兔子奶可以收集如本视频所示，并经过处理，以测量Elisa的总抗原和抗原特异性抗体水平。如此图所示，IgA 在母乳中可用于被动转移到试剂盒的总抗体中占很大一部分。伊加和IgG水平都大大高于IgM.本视频文章描述并演示了鼻内疫苗的管理以及哺乳兔子的牛奶收集，作为在转换适当的母体免疫模式下评估粘膜免疫力的一种手段。描述是一个典型的产妇内免疫研究设计，结合免疫接种，育种，点燃，哺乳和抗体转移的摘要图像。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits (Oryctolagus cuniculus)

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

T细胞受体在小鼠T细胞的逆转录病毒转导

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

科研

免疫与感染

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

建立的液体覆盖的文化偏光人类呼吸道上皮的CALU-3细胞研究呼吸系统病原宿主细胞的反应<em在体外</em

The  apical and basolateral surfaces of airway epithelial cells demonstrate  directional responses to pathogen exposure in  vivo. Thus, ideal in vitro ...

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

监测改变膜极性，膜完整性和细胞内离子浓度<em&gt;肺炎链球菌</em&gt;使用荧光染料

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact ...

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

从老鼠皮肤及引流淋巴结髓细胞分离皮下继免疫减毒活<em&gt;疟原虫</em&gt;孢子

Malaria infection begins when the sporozoite stage of Plasmodium is inoculated into the skin of a mammalian host through a mosquito bite. The highly ...

Human Placental and Decidual Organ Cultures to Study Infections at the Maternal-fetal Interface

人胎盘及蜕膜器官培养研究在母胎界面感染

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is ...

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

黏膜衬里流体为体内上呼吸道免疫介质水平量化的无创性取样

This protocol describes noninvasive sampling of undisturbed upper airway mucosal lining fluid. It also details the extraction procedure used prior to the ...

A Method for Targeted 16S Sequencing of Human Milk Samples

人乳样品靶向16S 测序方法的研究

Studies of microbial communities have become widespread with the development of relatively inexpensive, rapid, and high throughput sequencing. However, as ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

酶联免疫吸附法表征小鼠胸腺依赖性和胸腺独立免疫球蛋白同种反应

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Immunization of Adult Zebrafish for the Preclinical Screening of DNA-based Vaccines

成人斑马鱼对 DNA 疫苗临床前筛选的免疫研究

The interest in DNA-based vaccination has increased during the past two decades. DNA vaccination is based on the cloning of a sequence of a selected ...

Human Colonoid Monolayers to Study Interactions Between Pathogens, Commensals, and Host Intestinal Epithelium

人类舱内单聚物研究病原体、共脉和宿主肠道上皮细胞之间的相互作用

Human 3-dimensional (3D) enteroid or colonoid cultures derived from crypt base stem cells are currently the most advanced ex vivo model of the intestinal ...