Name: intranasal immunization and milk collection in studies of maternal immunization in new zealand white rabbits (oryctolagus cuniculus)
Uploaded: 2021-07-31T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits Oryctolagus cuniculus at JoVE.com

Die Autoren möchten der Abteilung für Labortierressourcen an der Duke University und ihrem Haltungsteam für ihre Unterstützung und große Sorgfalt für die Tiere danken. Darüber hinaus möchten die Autoren das PhotoPath-Team innerhalb der Abteilung für Pathologie für ihre Unterstützung bei den Audio- und Videoabschnitten des Manuskripts anerkennen. Diese Arbeit wurde durch diskretionäre Forschungsmittel des Staatslabors unterstützt.

Alle Verfahren wurden in Übereinstimmung mit den IACUC-Richtlinien der Duke University genehmigt und durchgeführt.
HINWEIS: Benötigte Materialien sind in der Materialtabelle angegeben.
1. Kaninchensedierung und Anästhesie
<ol><li>Sedieren Sie das weibliche Kaninchen (geschlechtsreif; ca. 5-30 Monate alt) durch intramuskuläre Verabreichung von Acepromazin (IM) in einer Dosis von 1 mg/kg. Je nach Größe des Tieres verwenden Sie eine 1 oder 3 m...

Obwohl im obigen Protokoll nicht beschrieben, ist eine erfolgreiche Zucht der Kaninchen für dieses mütterliche Modell und für die Milchsammlung notwendig. Kaninchen können leicht durch Live-Deckung in einer Forschungsumgebung gezüchtet werden. Es wird empfohlen, dass sie zur Zucht in den Käfig des Bocks überführt werden, da dies territorial und aggressiv sein kann, wenn sie mit dem Bock in ihrem eigenen Käfig gehalten werden. Wenn Weibchen nach 15 Minuten nicht empfänglich sind (wie durch Weglaufen oder Vokalis...

Studien zur mütterlichen Immunisierung und zum Antikörpertransfer sind aus zahlreichen Gründen von unschätzbarem Wert, da dies der erste Weg des Immunitätstransfers und des anschließenden Schutzes vor Krankheitserregern und Krankheiten bei Neugeborenen und Säuglingen ist. Die Immunisierung von Müttern hat das Potenzial, sowohl die Gesundheit von Müttern als auch von Säuglingen/ Kindern auf globaler Ebene positiv zu beeinflussen, indem die Morbidität und Mortalität im Zusammenhang mit bestimmten Krankheitserregern während dieser anfälligen Periode reduziert wird1. Das Hauptziel dieser Strategie ist es, die Spiegel spezifischer mütterlicher Antikörper während der Schwangerschaft zu erhöhen. Diese Antikörper können dann auf das Neugeborene und den Säugling in einem Niveau übertragen werden, das ausreicht, um vor Infektionen zu schützen, bis sein Immunsystem reif genug ist, um angemessen auf die Herausforderungen1,2,3zu reagieren. Frühere Arbeiten haben gezeigt, dass höhere Antikörpertiter bei der Geburt entweder mit einem vollständigen Schutz oder einem verzögerten Auftreten und einer reduzierten Schwere zahlreicher verschiedener Infektionskrankheiten beim Neugeborenen verbunden sind, einschließlich Tetanus, Pertussis, respiratorisches Synzytialvirus (RSV), Influenza und Streptokokkeninfektionen der Gruppe B1,2,3.
Beim Menschen werden mütterliche Antikörper passiv über die Plazenta übertragen und über das Stillen auch durch die Muttermilch übertragen. Frühere Arbeiten haben gezeigt, dass HIV-spezifische IgA-Spiegel in der mutterstillenden Muttermilch von müttern, die mit dem Virus infiziert waren, mit einer reduzierten postnatalen Übertragung des Virus verbunden waren, was auf eine schützende Rolle für Muttermilch gegen HIV IgA4hindeutet. Studien an nichtmenschlichen Primaten haben gezeigt, dass eine Immunisierung gegen HIV eine signifikante Antikörperreaktion in der Muttermilch auslösen kann, und obwohl ähnliche Serum-IgG-Reaktionen nach systemischer versus Schleimhautimmunisierung induziert wurden, induzierte die Schleimhautimmunisierung eine signifikant höhere IgA-Reaktion in der Milch5,6.
Bei der Identifizierung eines translational geeigneten Tiermodells für diese Studien sollten die Plazentationsart und die Mechanismen des passiven Antikörpertransfers sowie der Transfer von Antikörpern durch die Muttermilch berücksichtigt werden. Es gibt drei Haupttypen der Plazentation bei Säugetieren, basierend auf den Gewebetypen und Schichten an der materno-fetalen Grenzfläche, einschließlich Hämochorial (Primaten, Nagetiere und Kaninchen), Endotheliochorial (Fleischfresser) und Epitheliochorial (Pferde, Schweine und Wiederkäuer). Die hämochoriale Plazenta ist der invasivste Typ, der eine direkte Kommunikation zwischen der mütterlichen Blutversorgung und dem Chorion oder der äußersten fetalen Membran ermöglicht. Basierend auf der Anzahl der Trophoblastenschichten gibt es mehrere Variationen der hämochorialen Plazentation, einschließlich der hämomonochorialen Plazenta bei Primaten, der hämodichorialen Plazenta bei Kaninchen und der hämotrichorialen Plazenta, die bei Ratten und Mäusen beobachtet wird7. Dieser direkte Kontakt zwischen mütterlicher Blutversorgung und Chorion ermöglicht den passiven Transfer von Antikörpern über die Plazenta während der Schwangerschaft. IgG ist die einzige Antikörperklasse, die die menschliche Plazenta8signifikant durchquert, während IgA die vorherrschende Klasse von Ig in der menschlichen Muttermilchist 9. Von den wissenschaftlich relevanten Modellen übertragen nur Primaten (einschließlich Menschen), Kaninchen und Meerschweinchen IgG in utero und IgA in der Milch10,11. Daher enthält das Kaninchenmodell Faktoren, die mit denen beim Menschen vergleichbar sind, die den transplazentaren Transfer von IgG und den Laktationstransfer von IgA steuern.
Neben der Funktion als außergewöhnliches Modell für die mütterliche Immunität und Impfstoffentwicklung machen Ähnlichkeiten zwischen dem Kaninchen und den menschlichen Nasenhöhlen sie zu einem geeigneten Modell für die intranasale Immunisierung. Das Volumen der Kaninchennasenhöhle ist dem Menschen ähnlicher als Nagetiermodelle, die auf der relativen Körpermasse basieren12. Darüber hinaus zeigten Casteleyn et al. 12, dass das nasenbegbundene lymphatische Gewebe (NALT) beim Kaninchen im Vergleich zu Nagetieren voluminöser ist. Die NALT befindet sich hauptsächlich am ventralen und ventromedialen Aspekt des ventralen Nasenfleisches und am lateralen und dorsolateralen Aspekt des Nasopharynxfleisches bei Kaninchen, während bei Nagetieren das lymphatische Gewebe nur entlang des ventralen Aspekts des nasopharyngealen meatus vorhanden ist12. Bei Kaninchen ähneln strukturell und lage der intraepithelialen und lamina propria lymphatischen Lymphozyten sowie der isolierten lymphatischen Follikel dem Menschen12.
Weitere Vorteile der Verwendung des Kaninchens als Modell für die mütterliche und mukosale Immunität sind ihre hohe Fruchtbarkeit und relativ kurze Tragzeit. Große aurikuläre Blutgefäße ermöglichen einen relativ einfachen Zugang zu großen Blutmengen für serielle Sammlungen. Eine Vielzahl von Schleimhautproben kann für antigenspezifische Antikörper-Response-Assays gesammelt werden, einschließlich Muttermilch13 (beim Stillen), Schleimhautsekreten oder Waschungen (z. B. oral14,15,16, bronchoalveoläre Lavage13,17,18,19, vaginal20,21,22) und Kot20,23,24,25. Milchproben können während der Stillzeit leicht gesammelt werden, um das Vorhandensein antigenspezifischer Antikörperreaktionen zu beurteilen. Obwohl nicht so reichlich wie bei Menschen und Mäusen, steht eine Vielzahl von experimentellen Reagenzien für kaninchenspezifische Studien und Assays zur Verfügung. In diesem Artikel werden wir die intranasale Immunisierung und Milchsammlung bei neuseeländischen Weißen Kaninchen (Oryctolagus cuniculus )beschreiben und demonstrieren.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Intranasal Immunization</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Machine/Vaporizer</td>
			<td>Vet Equip</td>
			<td>901807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic Needle (25 g)</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>07-806-7584</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane (250 mL Bottle)</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-1389</td>
			<td>2-4%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer Lock Syringe (1 mL)</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>07-892-7410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mucosal Vaccine</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Experimental Vaccine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nose Cone</td>
			<td>McCulloch Medical</td>
			<td>07891-1097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>53503-290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettor</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89079-962</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PromAce (Acepromazine maleate)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim</td>
			<td>07-893-5734</td>
			<td>1mg/kg IM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Sterile Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>07-888-2572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milk Collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol Prep 2-ply</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>07-839-8871</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Machine/Vaporizer</td>
			<td>Vet Equip</td>
			<td>901807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic Needles (25 g)</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>07-806-7584</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane (250 mL Bottle)</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-1389</td>
			<td>2-4%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer Lock Syringe (1 mL)</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>07-892-7410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Woven Sponge (4x4)</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>07-891-5815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nose Cone</td>
			<td>McCulloch Medical</td>
			<td>07891-1097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PromAce (Acepromazine Maleate)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim</td>
			<td>07-893-5734</td>
			<td>1mg/kg IM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Sterile Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>07-888-2572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Conical Vial (15 mL)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>14-959-49B</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intranasal immunization and milk collection in studies of maternal immunization in new zealand white rabbits (oryctolagus cuniculus)

Aufgrund von Ähnlichkeiten in der Plazentation und dem Antikörpertransfer mit dem Menschen sind Kaninchen ein hervorragendes Modell für die mütterliche Immunisierung. Weitere Vorteile dieses Forschungsmodells sind die einfache Züchtung und Probenentnahme, die relativ kurze Tragzeit und die großen Wurfgrößen. Häufig bewertete Immunisierungswege umfassen subkutane, intramuskuläre, intranasale und intradermale. Die nichtterminale Probenentnahme zum chronologischen Nachweis der immunologischen Reaktionen auf diese Impfungen umfasst die Entnahme von Blut sowohl von Muttertieren als auch von Kits sowie von Milch von der Stillzeit. In diesem Artikel werden wir Techniken demonstrieren, die unser Labor in Studien zur mütterlichen Immunisierung bei neuseeländischen Weißen Kaninchen (Oryctolagus cuniculus) verwendet hat, einschließlich intranatale Immunisierung und Milchsammlung.

Ein Überblick über ein typisches design einer mütterlichen intranasalen Immunisierungsstudie ist in Abbildung 1dargestellt, die die Immunisierungen, Züchtung, Anzündung, Laktation und Antikörpertransfer umfasst. Obwohl nicht dargestellt, sollte Blut vor der ersten Immunisierung für Baseline-Messungen und während des restlichen Verlaufs der Studie in regelmäßigen Abständen entnommen werden. Blut wird leicht über die zentrale Ohrarterie mit leichter Sedierung und einem topischen An...

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Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits Oryctolagus cuniculus

Dieser Artikel beschreibt und demonstriert die Verabreichung von intranasalen Impfstoffen und die Sammlung von Milch von stillenden Kaninchen (Oryctolagus cuniculus) als Mittel zur Beurteilung der Schleimhautimmunität in einem translational geeigneten Modell der mütterlichen Immunisierung.

Intranasale Immunisierung und Milchsammlung in Studien zur mütterlichen Immunisierung bei neuseeländischen Weißen Kaninchen (Oryctolagus cuniculus)

Due to similarities in placentation and antibody transfer with humans, rabbits are an excellent model of maternal immunization. Additional advantages of ...

Studien zur mütterlichen Immunisierung und zum Antikörpertransfer sind aus zahlreichen Gründen von unschätzbarem Wert, da dies der erste Weg des Immunitätstransfers und des anschließenden Schutzes vor Krankheitserregern und Krankheiten bei Neugeborenen und Säuglingen ist. Aufgrund von Ähnlichkeiten in der Plazentation und dem Antikörpertransfer mit dem Menschen sind Kaninchen ein hervorragendes Modell für die mütterliche Immunisierung. In diesem Videoartikel demonstrieren wir Techniken, die unser Labor in Studien zur mütterlichen Immunisierung bei neuseeländischen Weißen Kaninchen eingesetzt hat, einschließlich intranataner Immunisierung und Milchsammlung.Wir werden zunächst einen Beispielzeitplan und eine Reihe von Ereignissen für eine Schleimhaut-Mütter-Immunisierungsstudie bei neuseeländischen White Rabbits beschreiben. Weibliche Kaninchen werden über den intranasalen Weg immunisiert, wie in diesem Video gezeigt. Abhängig von der Studie kann der Impfstoff einen Schub erfordern oder muss möglicherweise über einen zusätzlichen Weg verabreicht werden, z. B. durch intramuskuläre Immunisierung.Obwohl nicht dargestellt, sollte Blut vor der ersten Immunisierung für Baseline-Messungen und während des restlichen Verlaufs der Studie in regelmäßigen Abständen entnommen werden. Blut wird leicht von der zentralen Ohrarterie mit leichter Sedierung und einem topischen Analgetikum gewonnen. Das Vorhandensein von antigenspezifischen IgG-Spiegeln kann in diesen Proben gemessen werden.Kaninchen werden dann gezüchtet. Wir ziehen es vor, bewährte Züchter von Anbietern zu kaufen, um eine höhere Schwangerschaftsrate für diese Studien zu gewährleisten. Abhängig vom Impfzeitplan können Kaninchen während der Schwangerschaft zusätzliche Impfungen erhalten.Antigenspezifisches IgG wird transplazent auf die Kits übertragen. Nach etwa 30 bis 32 Tagen nach der Zucht wird schwanger werden. Wir empfehlen, die Handhabung der Kits für die ersten Tage zu begrenzen, um die Ablehnung durch die Does zu minimieren.Blutproben können aus den Kits entnommen werden, um antigenspezifische IgG-Spiegel zu beurteilen, die transplazent übertragen wurden. Blut kann aus einer kleinen Anzahl von Kits zum oder in der Nähe der Geburt entnommen werden, um frühe antigenspezifische Antikörperspiegel zu beurteilen. Zusätzlich zu einer Vielzahl von Nährstoffen erhalten Kits antigenspezifisches IgA vom stillenden Doe während der Stillzeit.Kits werden in der Regel im Alter von vier bis acht Wochen entsönet. Vor dem Absetzen kann Milch leicht aus laktierenden Nähren gesammelt werden, wie in diesem Video gezeigt. Die gesammelten Milchproben werden dann für den Nachweis von antigenspezifischem IgA aufbereitet.Je nach Studie können Impfstoffe und ein Boost an die Kits verabreicht werden und Serienblutproben können in einem sehr frühen Alter mit der lateralen Vena saphena entnommen werden. Wir werden nun die intranasale Immunisierung und Milchsammlung in Neuseeland White Rabbits demonstrieren.Protokoll. Alle Verfahren wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien des Duke University Institutional Animal Care And Use Committee genehmigt und durchgeführt.Intranasale Immunisierung. Benötigte Materialien: Acepromazin, Spritze und Nadel, Augengleitmittel, Isofluran, Nasenkegel, Pipette und Pipettenspitzen, Schleimhautimpfstoff. Bereiten Sie die Impflösung vor dem Umgang mit dem Tier vor.Kaninchen werden mit Acepromazin ein Milligramm pro Kilogramm intramuskulär sediert und mit Isofluran mit einem Nasenkegel betäubt. Nach der vollständigen Betäubung, wie durch den Augenlidreflex beurteilt, wird jedem Auge ein ophthalmisches Gleitmittel hinzugefügt, um das Austrocknen der Augen und nachfolgende Hornhautgeschwüre zu verhindern. Sobald das Labormitglied bereit ist, den Impfstoff zu verabreichen und sich das Kaninchen in einer angemessenen Anästhesieebene befindet, schalten Sie das Isofluran und den Sauerstoff aus und entfernen Sie den Nasenkegel.Legen Sie das Kaninchen in die dorsale Liege und stützen Sie Hals und Kopf in einem Winkel von etwa 45 Grad, der einen einfachen Zugang und die Visualisierung beider Alaren durch das Labormitglied ermöglicht, das den Impfstoff verabreicht. Laden Sie die Pipette mit nicht mehr als 100 Mikrolitern der Impfstofflösung und verabreichen Sie die Lösung schnell an ein Nasenloch und wiederholen Sie den Vorgang für das zweite Nasenloch. Die Pipette sollte in einem Winkel von ca. 45 Grad gehalten werden.Winkel zum medialen Aspekt des Nasengangs. Das Ziel der Immunisierung ist es, dass die Lösung die Schleimhautmembranen der Nares berührt. Daher sollte die Spitze nicht innerhalb der Nares platziert werden, da dies zu Abrieb oder Reizung des Schleimhautgewebes führen und möglicherweise die Immunogenität des nasal verabreichten Impfstoffs beeinflussen kann.Der Impfstoff sollte schnell verabreicht und auf die gleiche Weise im anderen Nasenloch verabreicht werden. Nach der Verabreichung in beiden Nasengängen wird das Kaninchen 30 Sekunden lang in dorsaler Liege gehalten, um das Austreten der Impfstofflösung zu minimieren. Das Labor verabreicht in der Regel nicht mehr als 100 Mikroliter pro Nasenloch gleichzeitig.Soll ein größeres Volumen mit einem maximalen Gesamtvolumen von 500 Mikrolitern verabreicht werden, kann der Impfstoff in 100 Mikroliter Aliquoten mit einer 30-sekündigen Ruhezeit zwischen den Impfungen verabreicht werden. Und zusätzliche Verabreichungen von Impfstoff wiederholt mit 30 Sekunden Ruhe zwischen jeder Verabreichung, bis das gesamte Impfstoffvolumen geliefert ist. Legen Sie das Kaninchen nach der Immunisierung zur Genesung auf das Ventrum und überwachen Sie das Tier genau, bis es in der Lage ist, die sternale Liege zu erhalten.In einigen Fällen kann die Impfstoffformulierung nicht vollständig an die Nasenhöhle abgegeben werden, und ein Teil der Impfstoffformulierung kann auf dem äußeren Teil der Nares verbleiben. Da in diesem Fall nicht klar ist, wie viel genau der Impfstoff in die Nasenhöhle abgegeben wurde, empfehlen Sie nicht, zusätzliches Impfstoffmaterial erneut aufzuträgen, da dies dem Experiment eine undefinierte Variable hinzufügen würde. Es ist wichtig, eine Impfstoffverabreichungstechnik zu verwenden, die eine vollständige und konsistente Abgabe der Impfstoffformulierung an die Nares ermöglicht.Milchsammlung. Benötigte Materialien: Acepromazin, Spritzen und Nadeln, Alkoholtupfer, Gaze, ophthalmisches Gleitmittel, Isofluran, Nasenkegel, Oxytocin und eine Sammelfläschchen. Kaninchen werden mit Acepromazin ein Milligramm pro Kilogramm intramuskulär sediert und mit Isofluran mit einem Nasenkegel betäubt.Nach der vollständigen Betäubung, wie durch den Augenlidreflex beurteilt, wird auf jedes Auge ein ophthalmisches Gleitmittel aufgetragen, um das Austrocknen der Augen und nachfolgende Hornhautgeschwüre zu verhindern. Reinigen Sie die Haut über der randalen Ohrvene mit dem Alkoholtupfer. Verabreichen Sie mit einer Spritze von einem Mil und einer 25-Gauge-Nadel etwa ein bis zwei internationale Einheiten Oxytocin intravenös über die marginale Ohrvene, um milchablassend zu induzieren.Aufgrund der Entspannung der glatten Muskulatur ist es üblich, dass das Kaninchen nach der Verabreichung von Oxytocin uriniert oder defäkiert. Nach der Verabreichung von Oxytocin mit einem Stück Gaze Druck auf die Injektionsstelle ausüben, um eine Hämostase zu erhalten. Während Sie die Anästhesiemaske oder den Nasenkegel über der Nase des Kaninchens halten, stützen Sie das Kaninchen auf seinen Hintervierteln.Als Randnotiz kann die Milchsammlung auch mit dem Tier in seitlicher Liege durchgeführt werden, aber das Labor stellt fest, dass die Sammlung einfacher ist, wenn das Kaninchen auf seinem Hintern gestützt wird, wobei ein Assistent das Kaninchen mit der Anästhesiemaske aufrecht hält. Öffnen Sie das sterile Röhrchen, um sich auf die Milchsammlung vorzubereiten, und lokalisieren Sie das Brustgewebe und die zugehörigen Zitzen. Kaninchen haben typischerweise vier bis fünf Paar Brustdrüsen.Die Zitzen sind typischerweise von nassem Fell aus der jüngsten Stillzeit umgeben und das Brustgewebe ist leicht tastbar, wenn es mit Milch gefüllt ist. Greifen Sie nach dem Brustgewebe, das mit der Zitze zwischen Daumen und Zeigefinger verbunden ist, und drücken Sie einen sanften Massagedruck auf das Drüsengewebe in Richtung der Zitze aus. Legen Sie das Auffangrohr über die Zitze, um die abgepumpte Milch zu sammeln.Es kann manchmal mehrere Minuten dauern, bis das Oxytocin wirksam ist, und die Milchproduktion scheint zwischen den Brustdrüsen zu variieren. Wenn die Milchexpression nicht erfolgreich ist, warten Sie einige Minuten oder drehen Sie sich zu einer zusätzlichen Brustdrüse. Milch aus allen Zitzen kann im selben Vile gesammelt werden.Typischerweise können mehrere Milliliter Milch leicht von einem stillenden Doe gesammelt werden. Nachdem das gewünschte Milchvolumen gesammelt wurde, schalten Sie das Isofluran und den Sauerstoff aus und entfernen Sie den Nasenkegel vom Kaninchen und lassen Sie das Kaninchen sich erholen, während es genau überwacht wird, bis das Tier in der Lage ist, die sternale Liege zu erhalten. Repräsentative Ergebnisse.Abbildung eins. Für mütterliche Studien ist die Frühbestimmung der Schwangerschaft hilfreich, um zu bestätigen, dass das Resi nicht neu gezüchtet werden muss. Optionen für die Schwangerschaftserkennung umfassen Palpation, Ultraschall, Röntgenaufnahmen, Gewichtszunahme und molekulare Techniken wie Messungen von Insulinwachstumsfaktoren und Progesteron.Ausreichende Progesteronspiegel sind für die Aufrechterhaltung der Trächtigkeit bei Kaninchen notwendig. Daher haben mehrere Studien auch den Progesteronspiegel bei trächtigen Kaninchen untersucht und erhöhte Werte im Vergleich zu nicht trächtigen Kaninchen gezeigt, insbesondere während der Organogenese um die Mitte der Schwangerschaft. Wie in Abbildung eins gezeigt, können erhöhte Progesteronspiegel bei trächtigen Kaninchen im Vergleich zu nicht trächtigen Kaninchen nachgewiesen werden, selbst nachdem die Paarung durch einen Bock für alle Bestände bestätigt wurde.Der Serumprogesteronspiegel wurde mit einem automatisierten Chemilumineszenz-Assay gemessen. Abbildung zwei. Antigenspezifisches IgG, das während der Schwangerschaft transplazentarisch übertragen wurde, kann im Serum der Kits von Elisa gemessen werden.Blut kann aus einer kleinen Anzahl von Kits zum oder in der Nähe der Geburt entnommen werden, um frühe antigenspezifische Antikörperspiegel zu beurteilen. Die serielle Blutentnahme ist technisch viel einfacher, da die Kits altern und an Größe zunehmen. Wie in Abbildung zwei dargestellt, können die Serumspiegel von antigenspezifischem IgG in den Kits gemessen und mit den mütterlichen Spiegeln verglichen werden.Die mütterlich übertragenen IgG-Spiegel sind bei der Geburt höher und nehmen im Laufe der Zeit ab. Abbildung Drei. Kaninchenmilch kann wie in diesem Video gezeigt gesammelt und verarbeitet werden, um die Gesamt- und Antigen-spezifischen Antikörperspiegel von Elisa zu messen.Wie in dieser Abbildung gezeigt, macht IgA einen signifikanten Teil der gesamten Antikörper in der Muttermilch aus, die für den passiven Transfer in die Kits zur Verfügung stehen. Sowohl der IgA- als auch der IgG-Spiegel sind deutlich höher als der IgM.Summary. Dieser Videoartikel beschreibt und demonstriert die Verabreichung von intranasalen Impfstoffen und die Sammlung von Milch von stillenden Kaninchen als Mittel zur Beurteilung der Schleimhautimmunität in einem translational geeigneten Modell der mütterlichen Immunisierung.Abgebildet ist ein zusammenfassendes Bild für ein typisches mütterliches intranataler Immunisierungsstudiendesign, das die Immunisierungen, Züchtung, Anzündung, Laktation und Antikörpertransfer umfasst.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits (Oryctolagus cuniculus)

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Retrovirale Transduktion von T-Zell-Rezeptoren in Maus-T-Zellen

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Aufbau einer Liquid-bedeckten Kultur Polarized Menschliche Airway Epithelial Calu-3-Zellen, um Host-Zell-Antwort, um Atemwegspathogene Studie<em&gt; In-vitro-</em

The  apical and basolateral surfaces of airway epithelial cells demonstrate  directional responses to pathogen exposure in  vivo. Thus, ideal in vitro ...

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Überwachen von Änderungen in Membran-Polarity, Membrane Integrity und intrazelluläre Ionenkonzentrationen in<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Verwenden von Fluoreszenzfarbstoffen

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact ...

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloischen Zellisolierung von Mäusehaut und ableitenden Lymphknoten Nach intradermale Impfung mit attenuierten Lebend<em&gt; Plasmodium</em&gt; Sporozoiten

Malaria infection begins when the sporozoite stage of Plasmodium is inoculated into the skin of a mammalian host through a mosquito bite. The highly ...

Human Placental and Decidual Organ Cultures to Study Infections at the Maternal-fetal Interface

Menschliche Plazenta und Deziduale Organkulturen Infektionen zu studieren an der Maternal-fetale Schnittstelle

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is ...

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Nicht-invasive Probenahme von Schleimhaut-Flüssigkeit für die Quantifizierung von In Vivo oberen Atemwegen immun-Mediator-Level

This protocol describes noninvasive sampling of undisturbed upper airway mucosal lining fluid. It also details the extraction procedure used prior to the ...

A Method for Targeted 16S Sequencing of Human Milk Samples

Eine Methode zur gezielten 16 s Sequenzierung des menschlichen Milchproben

Studies of microbial communities have become widespread with the development of relatively inexpensive, rapid, and high throughput sequencing. However, as ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Charakterisierung der Thymus-abhängig und Thymus-unabhängige Immunglobulin Isotype Antworten bei Mäusen mit Enzym-linked Immunosorbentprobe Assay

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Immunization of Adult Zebrafish for the Preclinical Screening of DNA-based Vaccines

Impfung von Erwachsenen Zebrafisch für die präklinische Screening von DNA-basierte Impfstoffe

The interest in DNA-based vaccination has increased during the past two decades. DNA vaccination is based on the cloning of a sequence of a selected ...

Human Colonoid Monolayers to Study Interactions Between Pathogens, Commensals, and Host Intestinal Epithelium

Menschliche Colonoid Monolagen Wechselwirkungen zwischen Erreger, Kommensalen und Host Darmepithel zu studieren

Human 3-dimensional (3D) enteroid or colonoid cultures derived from crypt base stem cells are currently the most advanced ex vivo model of the intestinal ...