Name: intranasal immunization and milk collection in studies of maternal immunization in new zealand white rabbits (oryctolagus cuniculus)
Uploaded: 2021-07-31T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits Oryctolagus cuniculus at JoVE.com

Los autores desean agradecer a la División de Recursos de Animales de Laboratorio de la Universidad de Duke y a su equipo de cría por su asistencia y gran cuidado prestado a los animales. Además, a los autores les gustaría reconocer al equipo de PhotoPath dentro del Departamento de Patología por su asistencia con las partes de audio y video del manuscrito. Este trabajo fue apoyado por fondos de investigación discrecionales del laboratorio Staats.

Todos los procedimientos fueron aprobados y realizados de acuerdo con las políticas de la IACUC de la Universidad de Duke.
NOTA: Los materiales necesarios se proporcionan en la Tabla de materiales.
1. Sedación y anestesia del conejo
<ol><li>Sedar el conejo hembra (sexualmente maduro; aproximadamente 5-30 meses de edad) mediante la administración de acepromazina por vía intramuscular (IM) a una dosis de 1 mg/kg. Dependiendo del tamaño del anim...

Aunque no se describe en el protocolo anterior, la cría exitosa de los conejos es necesaria para este modelo materno y para permitir la recolección de leche. Los conejos son fácilmente criados por cubierta viva en un entorno de investigación. Se recomienda que se transfiera a la jaula del buck para la cría, ya que puede ser territorial y agresivo si se mantiene en su propia jaula con el buck. Si las hembras no son receptivas después de 15 minutos (como lo indica huir mordiendo o vocalizando), la dora debe ser coloc...

Los estudios de inmunización materna y transferencia de anticuerpos son invaluables por numerosas razones, ya que esta es la ruta inicial de transferencia de inmunidad y la posterior protección contra patógenos y enfermedades en recién nacidos y bebés. La inmunización materna tiene el potencial de tener un impacto positivo en la salud materna y del lactante/niño a nivel mundial al reducir la morbilidad y la mortalidad asociadas con ciertos patógenos durante este período vulnerable1. El objetivo principal de esta estrategia es aumentar los niveles de anticuerpos maternos específicos durante todo el embarazo. Estos anticuerpos pueden entonces ser transferidos al recién nacido y al bebé a niveles suficientes para proteger contra infecciones hasta que su sistema inmunológico esté lo suficientemente maduro como para responder adecuadamente a los desafíos1,2,3. Trabajos anteriores han demostrado que los títulos de anticuerpos más altos al nacer se asocian con una protección completa o con un inicio tardío y una gravedad reducida de numerosas enfermedades infecciosas diferentes en el recién nacido, incluyendo tétanos, tos ferina, virus sincitial respiratorio (RSV), influenza e infecciones estreptocócicas del grupo B1,2,3.
En los seres humanos, los anticuerpos maternos se transfieren pasivamente a través de la placenta y también se transfieren a través de la leche materna a través de la lactancia. Trabajos anteriores han demostrado que los niveles de IgA específicos del VIH en la leche materna humana de madres infectadas con el virus se asociaron con la reducción de la transmisión postnatal del virus, lo que sugiere un papel protector de la leche materna contra el VIH IgA4. Estudios en primates no humanos han demostrado que la inmunización contra el VIH puede inducir una respuesta significativa de anticuerpos en la leche materna, y aunque se indujeron respuestas similares a la IgG sérica después de la inmunización sistémica versus de la mucosa, la inmunización de la mucosa indujo una respuesta IgA significativamente mayor dentro de la leche5,6.
La identificación de un modelo animal apropiado traslacionalmente para estos estudios debe tener en cuenta el tipo de placentación y los mecanismos de transferencia pasiva de anticuerpos, así como la transferencia de anticuerpos a través de la leche materna. Hay tres tipos principales de placentación en mamíferos basados en los tipos de tejido y capas en la interfaz materno-fetal, incluyendo hemocorial (primates, roedores y conejos), endoteliocorial (carnívoros) y epiteliocorial (caballos, cerdos y rumiantes). La placenta hemocorial es el tipo más invasivo, lo que permite la comunicación directa entre el suministro de sangre materna y el corion, o la membrana fetal más externa. Con base en el número de capas de trofoblastos, existen varias variaciones de placentación hemocorial, incluyendo la placenta hemomonocorial encontrada en primates, la placenta hemodicorial en conejos y la placenta hemotricorial observada en ratas y ratones7. Este contacto directo entre el suministro de sangre materna y el corion permite la transferencia pasiva de anticuerpos a través de la placenta durante la gestación. IgG es la única clase de anticuerpos que atraviesa significativamente la placenta humana8,mientras que IgA es la clase predominante de Ig que se encuentra en la leche materna humana9. De los modelos científicamente relevantes, sólo los primates (incluidos los humanos), los conejos y los conejillos de Indias transfieren IgG en el útero e IgA en la leche10,11. Por lo tanto, el modelo de conejo incorpora factores comparables a los de los humanos que controlan la transferencia transplacental de IgG y la transferencia de IgA.
Además de servir como un modelo excepcional para la inmunidad materna y el desarrollo de vacunas, las similitudes entre el conejo y las cavidades nasales humanas las convierten en un modelo apropiado para la inmunización intranasal. El volumen de la cavidad nasal del conejo es más similar a los humanos que los modelos de roedores basados en la masa corporal relativa12. Además, Casteleyn et al. 12 demostraron que el tejido linfoide asociado nasal (NALT) es más voluminoso en el conejo en comparación con los roedores. El NALT se localiza principalmente en el aspecto ventral y ventromedial del meato nasal ventral y en el aspecto lateral y dorsolateral del meato nasofaríngeo en conejos, mientras que en roedores, el tejido linfoide sólo está presente a lo largo del aspecto ventral del meato nasofaríngeo12. En los conejos, la estructura y localización de los linfocitos intraepiteliales y de la lámina propia, así como de los folículos linfoides aislados, son similares a los humanos12.
Las ventajas adicionales de usar el conejo como modelo para la inmunidad materna y de la mucosa incluyen su alta fecundidad y su período de gestación relativamente corto. Los vasos sanguíneos auriculares grandes permiten el acceso relativamente fácil a los grandes volúmenes de sangre para las colecciones seriales. Se puede recolectar una variedad de muestras de la mucosa para ensayos de respuesta de anticuerpos específicos del antígeno, incluida la leche materna13 (al amamantar), secreciones o lavados de la mucosa (por ejemplo,oral 14,15,16,lavado broncoalveolar13,17,18,19,vaginal20,21,22)y heces20,23,24,25. Las muestras de leche se pueden recolectar fácilmente durante la lactancia para evaluar la presencia de respuestas de anticuerpos específicos del antígeno. Aunque no es tan abundante como para los seres humanos y los ratones, una amplia variedad de reactivos experimentales están disponibles para estudios y ensayos específicos de conejos. En este artículo, describiremos y demostraremos la inmunización intranasal y la recolección de leche en conejos blancos de Nueva Zelanda (Oryctolagus cuniculus).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Intranasal Immunization</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Machine/Vaporizer</td>
			<td>Vet Equip</td>
			<td>901807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic Needle (25 g)</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>07-806-7584</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane (250 mL Bottle)</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-1389</td>
			<td>2-4%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer Lock Syringe (1 mL)</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>07-892-7410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mucosal Vaccine</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Experimental Vaccine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nose Cone</td>
			<td>McCulloch Medical</td>
			<td>07891-1097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>53503-290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettor</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89079-962</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PromAce (Acepromazine maleate)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim</td>
			<td>07-893-5734</td>
			<td>1mg/kg IM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Sterile Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>07-888-2572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milk Collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol Prep 2-ply</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>07-839-8871</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Machine/Vaporizer</td>
			<td>Vet Equip</td>
			<td>901807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic Needles (25 g)</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>07-806-7584</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane (250 mL Bottle)</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-1389</td>
			<td>2-4%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer Lock Syringe (1 mL)</td>
			<td>Air-Tite</td>
			<td>07-892-7410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Woven Sponge (4x4)</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>07-891-5815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nose Cone</td>
			<td>McCulloch Medical</td>
			<td>07891-1097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PromAce (Acepromazine Maleate)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim</td>
			<td>07-893-5734</td>
			<td>1mg/kg IM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Sterile Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>07-888-2572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Conical Vial (15 mL)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>14-959-49B</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intranasal immunization and milk collection in studies of maternal immunization in new zealand white rabbits (oryctolagus cuniculus)

Debido a las similitudes en la placentación y la transferencia de anticuerpos con los humanos, los conejos son un excelente modelo de inmunización materna. Las ventajas adicionales de este modelo de investigación son la facilidad de reproducción y recolección de muestras, el período de gestación relativamente corto y los grandes tamaños de camada. Las vías de inmunización comúnmente evaluadas incluyen subcutánea, intramuscular, intranasal e intradérmica. La recolección de muestras no terminales para la detección cronológica de las respuestas inmunológicas a estas inmunizaciones incluye la recolección de sangre, tanto de presas como de kits, y la leche de la lactancia. En este artículo, demostraremos las técnicas que nuestro laboratorio ha utilizado en estudios de inmunización materna en conejos blancos de Nueva Zelanda(Oryctolagus cuniculus),incluida la inmunización intranasal y la recolección de leche.

En la Figura 1se muestra una visión general de un diseño típico de un estudio de inmunización intranasal materna, que incorpora las inmunizaciones, la reproducción, el encamiento, la lactancia y la transferencia de anticuerpos. Aunque no se ilustra, la sangre se debe recoger antes de la inmunización inicial para las medidas de la línea de fondo y a través del resto del estudio a intervalos regulares. La sangre se obtiene fácilmente a través de la arteria del oído central con sedac...

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Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits Oryctolagus cuniculus

Este artículo describe y demuestra la administración de vacunas intranasales y la colección de leche de los conejos lactantes (Cuniculus de Oryctolagus) como medios de evaluar inmunidad de la mucosa en un modelo traslacional apropiado de la inmunización maternal.

Inmunización intranasal y recolección de leche en estudios de inmunización materna en conejos blancos de Nueva Zelanda (Oryctolagus cuniculus)

Due to similarities in placentation and antibody transfer with humans, rabbits are an excellent model of maternal immunization. Additional advantages of ...

Los estudios de inmunización materna y transferencia de anticuerpos son invaluables por numerosas razones, ya que esta es la ruta inicial de transferencia de inmunidad y la posterior protección contra patógenos y enfermedades en recién nacidos y bebés. Debido a las similitudes en la placentación y la transferencia de anticuerpos con los humanos, los conejos son un excelente modelo de inmunización materna. En este artículo en video demostramos las técnicas que nuestro laboratorio ha utilizado en estudios de inmunización materna en conejos blancos de Nueva Zelanda, incluida la inmunización intranasal y la recolección de leche.Primero describiremos una línea de tiempo de ejemplo y una serie de eventos para un estudio de inmunización materna de la mucosa en conejos blancos de Nueva Zelanda. Las hembras de conejos se inmunizan por vía intranasal, como se demuestra en este vídeo. Dependiendo del estudio, la vacuna puede requerir un impulso o puede necesitar ser dada a través de una ruta adicional, como la inmunización intramuscular.Aunque no se representa, la sangre debe recolectarse antes de la inmunización inicial para las mediciones iniciales, y durante el resto del estudio a intervalos regulares. La sangre es obtenida fácilmente por la arteria del oído central con la sedación suave y un agente analgésico tópico. La presencia de niveles antígeno-específicos de IgG se puede medir en estas muestras.Los conejos se crían entonces. Preferimos comprar criadores probados de vendedores para usar para asegurar una tasa de embarazo más alta para estos estudios. Dependiendo del calendario de inmunización, los conejos pueden recibir inmunizaciones adicionales durante todo el embarazo.La IgG específica del antígeno se transfiere transplacentemente a los kits. Aproximadamente a los 30 a 32 días después de la cría, las gestantes se encenderán. Recomendamos limitar el manejo de los kits durante los primeros días para minimizar el rechazo de los hace.Las muestras de sangre se pueden recoger de los kits para evaluar los niveles específicos de IgG del antígeno que fueron transferidos transplacentally. La sangre se puede recolectar de un pequeño número de kits en o cerca del momento del nacimiento para evaluar los niveles tempranos de anticuerpos específicos del antígeno. Además de una amplia variedad de nutrientes, los kits reciben IgA específica de antígenos de la dora lactante mientras amamanta.Los kits se destete típicamente a las cuatro a ocho semanas de edad. Antes del destete, la leche se puede recolectar fácilmente de los productos de lactancia, como se demuestra en este video. Las muestras de leche recogidas se procesan para la detección de IgA específico del antígeno.Dependiendo del estudio, se pueden administrar vacunas y un impulso a los kits y se pueden recolectar muestras de sangre en serie de los kits a una edad muy temprana utilizando la vena safena lateral. Ahora demostraremos la inmunización intranasal y la recolección de leche en New Zealand White Rabbits.Protocol. Todos los procedimientos fueron aprobados y realizados de acuerdo con las políticas del Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Duke.Inmunización intranasal. Materiales necesarios: Acepromazina, jeringa y aguja, lubricante oftálmico, isoflurano, cono de nariz, pipeta y puntas de pipeta, vacuna de la mucosa. Prepare la solución de inmunización antes de la manipulación de animales.Los conejos son sedados con Acepromazina un miligramo por kilogramo por vía intramuscular, y anestesiados con Isoflurano usando un cono de la nariz. Una vez completamente anestesiado según lo evaluado por el reflejo del párpado, se agrega un lubricante oftálmico a cada ojo para prevenir el secado de los ojos y la posterior ulceración corneal. Una vez que el miembro del laboratorio esté listo para administrar la vacuna y el conejo esté en un plano adecuado de anestesia, apague el isoflurano y el oxígeno y retire el cono de la nariz.Colocar el conejo en reclinación dorsal y apuntalar el cuello y la cabeza en un ángulo aproximado de 45 grados que permita un fácil acceso y visualización de ambos alars por parte del miembro del laboratorio que administra la vacuna. Cargue la pipeta con no más de 100 microlitros de la solución de la vacuna y administre rápidamente la solución a una fosa nasal y repita el procedimiento para la segunda fosa nasal. La pipeta debe mantenerse en un ángulo aproximado de 45 grados.Ángulo hacia el aspecto medial del conducto nasal. El objetivo de la inmunización es que la solución entre en contacto con las membranas mucosas de las narinas. Por lo tanto, la punta no debe colocarse dentro de las narinas, ya que esto puede resultar en abrasión o irritación de los tejidos de la mucosa y potencialmente influir en la inmunogenicidad de la vacuna administrada por vía nasal.La vacuna debe administrarse rápidamente y hacerse de la misma manera en la otra fosa nasal. Después de la administración en ambas fosas nasales, el conejo se mantiene en reclinación dorsal durante 30 segundos para minimizar la fuga de la solución vacunal. Por lo general, el laboratorio no administrará más de 100 microlitros por fosa nasal a la vez.Si se va a administrar un volumen mayor con un volumen total máximo de 500 microlitros, la vacuna se puede administrar en 100 alícuotas de microlitro con un período de descanso de 30 segundos entre inmunizaciones. Y administraciones adicionales de la vacuna repetidas con 30 segundos de descanso entre cada administración hasta que se entregue el volumen total de la vacuna. Después de la inmunización, coloque el conejo en el ventrum para su recuperación y vigile de cerca al animal hasta que pueda mantener la reclinación esternal.En algunos casos, la formulación de la vacuna puede no administrarse completamente a la cavidad nasal y una parte de la formulación de la vacuna puede permanecer en la parte exterior de las narinas. En este caso, debido a que no está claro el volumen exacto de la vacuna que se entregó correctamente a la cavidad nasal, no se recomienda volver a aplicar material adicional de la vacuna, ya que esto agregaría una variable indefinida al experimento. Es importante utilizar una técnica de administración de vacunas que proporcione una entrega completa y consistente de la formulación de la vacuna a las narinas.Recolección de leche. Materiales necesarios: Acepromazina, jeringas y agujas, hisopo de alcohol, gasa, lubricante oftálmico, isoflurano, cono de nariz, oxitocina y un vial de recolección. Los conejos son sedados con Acepromazina un miligramo por kilogramo por vía intramuscular, y anestesiados con Isoflurano usando un cono de la nariz.Una vez completamente anestesiado según lo evaluado por el reflejo palpebral, se aplica un lubricante oftálmico a cada ojo para evitar el secado de los ojos y la posterior ulceración corneal. Limpie la piel sobre la vena marginal del oído con el hisopo de alcohol. Usando una jeringa de un mil y una aguja de calibre 25, administre aproximadamente de una a dos unidades internacionales de oxitocina por vía intravenosa por la vena marginal del oído para inducir la leche a la baja.Debido a la relajación del músculo liso, es común que el conejo orine o defeque después de la administración de oxitocina. Después de la administración de oxitocina, aplique presión al sitio de inyección con un pedazo de gasa para proporcionar hemostasia. Mientras mantiene la máscara de anestesia o el cono de la nariz sobre la nariz del conejo, sostendría el conejo en sus cuartos traseros.Como nota al margen, la recolección de leche también se puede realizar con el animal en reclinación lateral, pero el laboratorio encuentra que la recolección es más fácil cuando el conejo está apoyado en su grupa con un asistente sosteniendo el conejo en posición vertical con la máscara de anestesia. Abra el tubo estéril para prepararse para la recolección de leche y localice el tejido mamario y las tetinas asociadas. Los conejos típicamente tienen de cuatro a cinco pares de glándulas mamarias.Las tetinas están típicamente rodeadas por piel húmeda de la lactancia reciente y el tejido mamario es fácilmente palpable cuando está lleno de leche. Agarre el tejido mamario asociado con el pezón entre el pulgar y el índice y aplique una presión de masaje suave al tejido glandular en la dirección del pezón. Coloque el tubo de recolección sobre el pezón para recoger la leche extraída.A veces puede tomar varios minutos para que la oxitocina sea efectiva, y la producción de leche parece variar entre las glándulas mamarias. Si la expresión de la leche no es exitosa, espere varios minutos o gire alrededor de una glándula mamaria adicional. La leche de todas las tetinas se puede recoger en el mismo vil.Por lo general, varios mililitros de leche se pueden recolectar fácilmente de una dora lactante. Después de que se haya recogido el volumen deseado de leche, apague el isoflurano y el oxígeno y retire el cono de la nariz del conejo, y permita que el conejo se recupere mientras es monitoreado de cerca hasta que el animal pueda mantener la reclinación esternal. Resultados representativos.Figura uno. Para los estudios maternos, determinar el embarazo lo antes posible es útil para confirmar que la mente no necesita ser re-criada. Las opciones para la detección del embarazo incluyen la palpación, el ultrasonido, las radiografías, el aumento de peso, y las técnicas moleculares tales como medidas de los factores de crecimiento de la insulina y de la progesterona.Los niveles adecuados de progesterona son necesarios para el mantenimiento del embarazo en conejos. Por lo tanto, varios estudios también han evaluado los niveles de progesterona en conejos preñadas y han demostrado niveles elevados en relación con las conejos no preñadas, particularmente durante la organogénesis alrededor de la mitad de la gestación. Como se muestra en la figura uno, se pueden detectar niveles elevados de progesterona en conejos preñadas en comparación con conejos no preñadas, incluso después de que se confirmaron los apareamientos por un dólar para todos.Los niveles de la progesterona del suero fueron medidos usando un análisis quimioluminiscente automatizado. Figura dos. El Antígeno Específico IgG que fue transferido transplacentally durante la gestación se puede medir en el suero de los kits por Elisa.La sangre se puede recolectar de un pequeño número de kits en o cerca del momento del nacimiento para evaluar los niveles tempranos de anticuerpos específicos del antígeno. La recolección de sangre en serie es técnicamente mucho más fácil a medida que los kits envejecen y aumentan de tamaño. Como se muestra en la Figura Dos, los niveles séricos de IgG específica de antígeno en los kits se pueden medir y comparar con los niveles maternos.Los niveles de IgG transferidos por la madre son más altos al nacer y disminuyen con el tiempo. Figura tres. La leche de conejo se puede recolectar como se muestra en este video y procesarse para medir los niveles de anticuerpos totales y específicos de antígenos por Elisa.Como se muestra en esta figura, igA constituye una parte significativa de los anticuerpos totales dentro de la leche materna que están disponibles para la transferencia pasiva a los kits. Los niveles de IgA e IgG son considerablemente más altos que IgM.Summary. Este artículo video describe y demuestra la administración de vacunas intranasales y la colección de leche de conejos lactantes como medios para evaluar inmunidad de la mucosa en un modelo traslacionalmente apropiado de inmunización materna.Se muestra una imagen resumida de un diseño típico del estudio de inmunización intranasal materna que incorpora las inmunizaciones, la reproducción, el encizado, la lactancia y la transferencia de anticuerpos.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits (Oryctolagus cuniculus)

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Transducción retroviral de receptores de células T en ratones las células T

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Investigación

Inmunología e Infección

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

El establecimiento de un cultivo líquido cubierto de las vías respiratorias humanas epiteliales polarizadas Calu-3 células para estudiar la respuesta del huésped celular a patógenos respiratorios<em&gt; In vitro</em

The  apical and basolateral surfaces of airway epithelial cells demonstrate  directional responses to pathogen exposure in  vivo. Thus, ideal in vitro ...

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Vigilar los cambios en la polaridad de la membrana, membrana Integridad, e intracelular de iones concentraciones en<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Uso de tintes fluorescentes

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact ...

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

El aislamiento de las células mieloides de ratón de la piel y el drenaje de ganglios linfáticos Siguiendo intradérmica La inmunización con viva atenuada<em&gt; Plasmodium</emLos esporozoitos&gt;

Malaria infection begins when the sporozoite stage of Plasmodium is inoculated into the skin of a mammalian host through a mosquito bite. The highly ...

Human Placental and Decidual Organ Cultures to Study Infections at the Maternal-fetal Interface

Los cultivos humanos de la placenta y Decidual de órganos para el Estudio de Infecciones en la interfase materno-fetal

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is ...

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

Muestreo no invasivo de revestimiento mucoso líquido para la cuantificación In Vivo de la vía aérea superior mediador inmune niveles

This protocol describes noninvasive sampling of undisturbed upper airway mucosal lining fluid. It also details the extraction procedure used prior to the ...

A Method for Targeted 16S Sequencing of Human Milk Samples

Un método de secuenciación de 16S específica de las muestras de leche humana

Studies of microbial communities have become widespread with the development of relatively inexpensive, rapid, and high throughput sequencing. However, as ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Caracterización de las respuestas de isotipo de inmunoglobulina dependiente del timo y timo-independiente en ratones usando el análisis enzima-ligado del inmunosorbente

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Immunization of Adult Zebrafish for the Preclinical Screening of DNA-based Vaccines

Inmunización de pez cebra adulto para la evaluación preclínica de vacunas basadas en ADN

The interest in DNA-based vaccination has increased during the past two decades. DNA vaccination is based on the cloning of a sequence of a selected ...

Human Colonoid Monolayers to Study Interactions Between Pathogens, Commensals, and Host Intestinal Epithelium

Monocapas de Colonoid humano para estudiar las interacciones entre patógenos, comensales y epitelio Intestinal Host

Human 3-dimensional (3D) enteroid or colonoid cultures derived from crypt base stem cells are currently the most advanced ex vivo model of the intestinal ...