Name: gene knock-in by crispr/cas9 and cell sorting in macrophage and t cell lines
Uploaded: 2021-11-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Gene Knock-in by CRISPR/Cas9 and Cell Sorting in Macrophage and T Cell Lines at JoVE.com

我们感谢新乡医科大学的流细胞学核心设施。国家自然科学基金向LZ、81471595和32070898提供81601360支持了这种技术的发展。这项工作也得到了河南省教委第21号IRTSTHN030基金会的支持。

1. 以 罗莎26 蝗虫为目标的 sgRNA 的设计和普拉斯米德构造
<ol><li>围绕所需插入站点的设计指南 RNA
	<ol>
<li>确保鼠标Rosa26（以下简称mRosa26）的插入点位于mRosa26的第一个内电路：这个网站已经用于以前的研究28，29。对于人体细胞的敲击实验，确保插入位点位于人类ROSA26位点（以下简称hROSA26）?...

在我们的实验中，我们演示了如何使用人类 Jurkat T 细胞和 Murine RAW264.7 巨噬细胞进行免疫细胞的敲击编辑，从结构设计到敲击细胞筛选和验证。T细胞和巨噬细胞系都耐转染36，37：然而，CRISPR/Cas9交付效率低下的问题可以通过荧光记者的辅助和细胞分拣来克服。本协议适用于基因抢救实验和蛋白质-蛋白质相互作用实验，但不能应用于调控DNA序列的研究，...

免疫细胞对防御病原体至关重要。先天免疫和适应性免疫是需要清除感染剂和维持组织平衡1，2。细胞系模型是了解哺乳动物免疫系统分子基本原理的重要工具：它们用于体外功能测定，如模拟人体T细胞活化，以及确定遗传因素在激活或抑制免疫反应中的功能3，4。需要注意的是，哺乳动物的免疫系统是极其异质的，同样重要的是，大量的分子控制着特定细胞类型5、6的分化、迁移和功能。
聚类定期间歇性短白细胞重复（CRISPR）/Cas9基因组编辑工具允许特定细胞类型的基因操作，从而促进基因的功能注释以精确的方式7，8。一些已发表的协议描述了CRISPR/Cas9的交付形式Cas9导引RNA复合物称为核糖核蛋白（RNP）在HIK293细胞，Jurkat细胞系，原发T细胞9，10，巨噬细胞11，12，13，干细胞14，和其他15，16。在这些协议中，基因标记通常是通过将荧光标签与内源性蛋白质17、18融合来实现的。然而，很少尝试使用双荧光记者，这是兼容的单细胞排序，以促进敲击实验19，20，特别是在免疫细胞。
旨在理解免疫细胞中新基因因子功能的深入机械分析通常需要细胞类型特定地删除基因、基因拯救实验以及理想地识别其相互作用物。尽管在免疫细胞中优化基因缺失的方法已经公布9，15，21，但关于引入具有多功能的敲击等位基因来理解免疫反应的方法却少得多。因此，在这个协议中，我们旨在详细描述一个高效和高度可重复的协议，以表达一个蛋白质的兴趣在安全港点Rosa26在人类和穆林免疫细胞线。我们设计了一个双色报告系统，用于丰富用质粒表示CRISPR/Cas9（DsRed2）和重组DNA模板（EBFP2）的细胞，这些模板可以通过细胞分拣进行分离。根据这个协议，我们获得了人类T细胞系Jurkat和穆林巨噬细胞RAW264.7的多个敲击线，用于对研究不善的蛋白质进行功能分析。
例如，我们在此协议中展示如何获得可敲击 RAW264.7 巨噬细胞，稳定地表达人类ACE2（SARS-Cov-2的受体）22。由于先天免疫细胞参与Covid-1923、24和人类ACE2的发病机制，被认为是病毒在复制前进入细胞所需的主要受体，具有人类ACE2的微噬细胞可以作为巨噬细胞内病毒增殖的机械研究的有用工具。同时，我们还介绍了一个基因在人类ROS26位点敲击来表达RASGRP1蛋白的例子，该蛋白在其氨基终点与亲和力双链球菌标签（OST）融合在一起。T细胞是免疫疗法中的关键靶细胞，越来越多的研究集中在对癌症的反应上。由于Rasgrp1是T细胞受体下游的关键信号分子，其相互作用因素27日没有得到很好的阐明，OST-RASGRP1的敲击模型为识别调节T细胞对肿瘤和感染反应的相互作用者奠定了基础。综合起来，这些工具可用于Covid-19的研究和发现与Rasgrp1相互作用的新分子。

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Amersham Imager 600</td>
			<td>Ge Healthcare</td>
			<td></td>
			<td>imaging of chemiluminescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin, sodium salt</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>194526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>7074</td>
			<td>at 1/5000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-RasGRP1 antibody, clone 10.1</td>
			<td>Merck</td>
			<td>MABS146</td>
			<td>1.0 &#956;g/mL of working concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AscI</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>R0558S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Actin (D6A8) Rabbit mAb</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>8457</td>
			<td>at 1/1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BamHI-HF</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>R3136S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BbsI-HF</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>R3539S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellometer Mini Automated Cell Counter</td>
			<td>Nexcelom Bioscience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E.coli DH5&#945; Competent Cells</td>
			<td>Takara</td>
			<td>9057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO (Dimethyl Sulfoxide)</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>196055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNeasy Blood &#38; Tissue Kits</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69506</td>
			<td>cell culture reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS (10X), no calcium, no magnesium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14200075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM) with high glucose</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30022.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EcoRI-HF</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>R3101S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSAria&#8482; Fusion</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td>equipped with biosafety cabinet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Canto flow cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 5 ml polystyrene round bottom test tube</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>352003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10099141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo version 10.7</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GAPDH (D16H11) XP&#160;Rabbit mAb</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>5174</td>
			<td>at 1/1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG (H+L) Secondary Antibody, HRP</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>31430</td>
			<td>at 1/5000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilon ECL Ultra Western HRP Substrate</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>WBKLS0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilon-PSQ PVDF Membrane</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>ISEQ00010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jurkat</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>TIB-152</td>
			<td>https://www.atcc.org/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin sulfate</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>194531</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB agar powder</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>22700041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-channel Pipette (30-300 &#956;L)</td>
			<td>Eppendorf, or similar</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neon Transfection System</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>MPK5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neon Transfection System, 10 &#956;L kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>MPK1096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc 15 mL Conical Sterile Centrifuge Tubes</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>339651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OneTaq&#174; Hot Start Quick-Load&#174; 2X Master Mix</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>(M0489)</td>
			<td>for high GC% template</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PageRuler Prestained Protein Ladder, 10 to 180 kDa</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>26616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tip 0.1-20&#181;l</td>
			<td>Eppendorf, or similar</td>
			<td>0030 075.005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tip 2-200&#181;l</td>
			<td>Eppendorf, or similar</td>
			<td>0030 075.021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tip 50-1000&#181;l</td>
			<td>Eppendorf, or similar</td>
			<td>0030 075.064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid Maxi Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>12163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pX458-DsRed2</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>112219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAquick PCR Purification Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>28104</td>
			<td>purify plasmid from restriction digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q5 Hot Start High-Fidelity 2X Master Mix</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>M0494S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RAW264.7</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>TIB-71</td>
			<td>https://www.atcc.org/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Anti-ACE2 antibody [EPR4435(2)]</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab108252</td>
			<td>at 1/1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30027.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strep-Tactin Sepharose beads</td>
			<td>IBA Lifesciences</td>
			<td>2-1201-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYTOX&#8482; Red Dead Cell Stain, for 633 or 635 nm excitation</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>S34859</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA ligase</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>M0202S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 Polynucleotide Kinase</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>M0201S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Solution, 0.4%</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15250061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA solution (0.25%), with phenol red</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZOE Fluorescent Cell Imager</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL microtubes, PCR-clean</td>
			<td>Eppendorf, or similar</td>
			<td>0030 125.215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well Clear TC-treated Multiple Well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well Clear Flat Bottom Polystyrene TC-treated Microplates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well Clear Round Bottom TC-treated Microplate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3799</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

gene knock-in by crispr/cas9 and cell sorting in macrophage and t cell lines

免疫系统的功能基因组学研究需要基因操作，包括删除目标基因和在感兴趣的蛋白质中添加元素。细胞系模型中基因功能的识别对于基因的发现和细胞内在机制的探索具有重要意义。然而，使用CRISPR/Cas9介质敲击的免疫细胞（如T细胞和巨噬细胞系）的基因操作是困难的，因为这些细胞的转染效率低，尤其是在静止状态下。为了改变免疫细胞中的基因，耐药性选择和病毒载体通常用于丰富表达CRIPSR/Cas9系统的细胞，这不可避免地导致细胞的不良干预。在之前的研究中，我们设计了双荧光记者耦合到CRISPR/Cas9，在电透后短暂表达。这种技术解决方案可导致免疫细胞中快速基因缺失：然而，基因敲击免疫细胞，如T细胞和巨噬细胞，而不使用耐药性选择或病毒载体是更具挑战性的。在本文中，我们表明，通过使用细胞分拣来帮助选择暂时表达CRISPR/Cas9结构的目标 Rosa26 细胞群结合供体质粒，基因敲击可以在T细胞和巨噬细胞中实现，而无需耐药性浓缩。例如，我们通过进行敲击实验，在RAW264.7巨噬细胞中展示如何表达人类ACE2，SARS-Cov-2的受体，它负责当前Covid-19大流行。这种基因敲击细胞可以广泛用于机械研究。

按照上述协议，使用木乃伊RAW264.7巨噬细胞在 mRosa26 靶点进行敲击实验，我们设计了一个靶向载体来表达人类ACE2，SARS-Cov-2病毒的受体（图2A）。使用类似的设计，我们生成了人类Jurkat T细胞与OST标记RASGRP1融合蛋白（图2C）的敲击。在转染三个质粒后，其中两个用于表示 CRISPR/Cas9 （DsRed2; pdsR-mR26-sg1 和 pDsR-mR-sg2 用于 mRosa26 敲击; pdsR-hR26-sg1 和 ...

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Gene Knock-in by CRISPR/Cas9 and Cell Sorting in Macrophage and T Cell Lines

该协议使用荧光记者和细胞分拣来简化巨噬细胞和T细胞系的敲击实验。两个质粒用于这些简化的敲击实验，即CRISPR/Cas9-和DsRed2表达质粒和同源重组供体质粒表达EBFP2，这是永久整合在 Rosa26 点在免疫细胞。

基因敲击由CRISPR/Cas9和细胞排序在巨噬细胞和T细胞线

Functional genomics studies of the immune system require genetic manipulations that involve both deletion of target genes and addition of elements to ...

此协议的目标是简化 CRISPR/Cas9 在荧光记者的帮助下，在巨噬细胞和 T 细胞线中进行介质的敲击实验，并影响细胞分拣。ROSA26 蝗虫被称为插入转基因的基因组安全港。在26个细胞的老鼠世界里，或在人类正宗日志中，表达感兴趣的蛋白质，无论是否遭到攻击，都是一种常见的表达。第1部分：针对罗莎26蝗虫的sgRNA的设计与普拉斯米德建筑。首先，使用小鼠基因组信息学序列和组合基因组浏览器，从小鼠Rosa26位位设计sgRNA，然后下载小鼠Rosa26基因的基因组序列。去在线网络工具， CRISPOR， 粘贴 100 基础对的输入序列从 Rosa26 蝗虫.然后选择一个基因组，例如，肌肉-小鼠参考基因组2011年。接下来，选择 PAM 的类型。使用 20bp NGG"PAM 主题，由 spCas9 识别。单击"提交"。选择具有高特异性分数、高做分和较少偏离目标的指南。应避免指示效率低下的指南。值得注意的是，最好选择两个序列重叠的指南，这可能会提高报告的敲击效率。对于温餐序列，合成一个转发非法和逆转非法，其中退火磷和准备克隆的因素。准备线性减少每个Vactor可以表达的是，我不得不记者由BBS一消化，如得到尼尔，法律线性载体产生最终构造，这同时表示引导RNA和CAS九核与DSRIP两个荧光记者连接。第二部分：将目标矢量构建为同源重组模板。表达感兴趣的蛋白质。例如，人类持续了。您希望通过商业来源和亲和力 OST 标签或其他常用的攻击来合成 cDNA 序列，以便蛋白质的纯化可以融合到 cDNA 序列中。请记住，在 cDNA 启动之前，请包含哈萨克共识序列。通过Asc1限制酶消化，喜欢得到CD和插入到骨干。血管，即pKhR26-IBFP IBP产生最终目标浓缩容器，每个，KB的五个黄金和三个黄金同源武器。表达演员集包括一个CG推广人，UST餐厅，如果你想库宁地区链接到虹膜，如果VFD记者和多AC基金。最后，使用独特的切割剂酶（如 EcoR1 或 BamH1）瞄准载体，在零下 20 度的电极笔记中对消化和产品进行净化。建议获得高浓度的线性病媒DNA。第三部分：在杰里茎细胞分离后，巨噬细胞和T细胞系的电位化准备细胞培养。转染时，最佳细胞密度约为每毫升50万细胞。全电在10个宏观小核时尚尖端格式准备一个24井板包含500微升的完全生长，介质没有抗生素在每口井。预热板在加湿37度，5%覆盖设置孵化器。关闭电动操作系统输入喷射猫或罗萨莱斯的电聚参数。准备细胞DNA混合物随访或手术收集鸡细胞。柯钦25平方厘米的烧瓶转移细胞在15种动物。既然你管，然后菲利普细胞通过离心在90倍G在室温下8分钟，要求它，超分子。对于洗涤，使用五个 ML PBS 重新使用电池，然后使用与前一步相同的条件通过离心旋转细胞悬浮。删除 DPP。并使用两个 ML 的 DBS 重新使用细胞枕头。您保持微小细胞悬架，并与等量的0.2%特雷潘巴鲁混合，以计算插槽插入康妮幻灯片在自动细胞康纳和查看图像本身估计细胞计数负载样本。然后获取细胞计数结果。计算200万个细胞将发现每个敲击实验的电电声名声，通过离心化将细胞数量转移到1.5ML.离心两个颗粒细胞中。为了节省时间，在离心过程中可以制备电化混合物，每增加2.5微克CRISPR CAS 9载体2.4微克贝琳达大米，健谈载体，并重新悬浮布法罗。我们的总容量为 55 宏观垃圾在一个新的 1.5 ML 离心管轻轻地顶点和。简要地，可以很好地混合。使用前留下卢克索压力混合物和室温。旋转阿斯一周后，DTB 本质上是将导火索再熔断 30 秒，通过轻轻地向上和向下添加准备好的电聚混合物移液器，尽可能多地去除超高分子，重新悬浮细胞。电位要求使用10微小核派系尖端的细胞电聚变频器是移液器的重要。在皮宠物期间避免气泡会使电镀失败付出代价。按开始。之后，操作在一段时间内转移样品。在24个井板中，总介质的预警告在其余4个复制样品上执行与上述相同的电压和程序，轻轻摇动板，以确保细胞均匀分布。在37度孵化器中孵育细胞48至72小时。在此之前，细胞分拣在转染后24小时，检查干扰两个餐厅记者的表情使用荧光显微镜分离代表为我们自己表明，电电工作正常。第4部分：细胞分类以隔离假定敲击细胞。在细胞分拣准备之前，在96个井板与150微小的细胞类型特定毛中等每井使用错误的底部微地方培养和本身和平面底部微的地方，所有细胞转移到无菌FACS保持管在冰上，并把盒子在路径通过窗口， 当适用设置细胞分拣机时，连接到细胞分拣室，配备 85 微米喷嘴和低流量的免疫细胞分拣，以实现最佳的细胞可评估性和生存性，并短暂地从直通窗口顶点采集样本，并在采集中加载样品。Champer 为细胞排序设置了事实滑冰，首先定义了福特散射和侧散射的销售漏斗，然后通过获得设置谈话红色负细胞来定义生命细胞。接下来，他们使用FSC H和FSE多变块，通过单单点盖住找到活的单细胞。最后为所需的DSR二和B设置了一扇闸门，如果沃尔沃正子人口，这表明细胞成功地与CRISPR载体和口袋载体共同感染。因此，10个单细胞在每口井的96个，井板辅以预热，完整的生长介质使用周期模式或单细胞模式后分拣孵化96，井板在细胞培养孵化器中进行细胞扩张。第五部分：筛选正撞击细胞的高程 经过大约两周的细胞扩张后存活下来，48井板中的细胞使用壁型细胞作为负控制细胞群，利用少量增殖自身来评估BFP或流细胞的表达，保持较高的BFP阳性细胞百分比，以完成从我们应该表达的细胞中提取基因组DNA的验证BFP通过PCR通过分离的基因组DNA与底漆跨越同源臂的每一侧，即一个主要位置在基因组序列，外部的目标载体。在本次实验中，与向量对话的一面是，预测的PCR产品尺寸与原体放大为1.2千伏。与 F 二和 R 二是 1.2 KB 桑格测序结果。因此，PCR 产品显示每个集成路口的序列，显示罗莎 26 Lucas 的正确和敲击位置。我说像免疫印迹一样， 能够验证正确的敲击蛋白质水平第六部分的代表性结果。例如，在之前的研究中，我们表示，得到45个分子钉，与OSD标签之间的相互，并有一个26个点在结账T细胞随后美元机智。我得到 45 和事件导演或拉下来的亲和力净化和质谱的主体。他们蛋白细胞学数据揭示了T细胞的相互作用。因此，这个产品库极大地促进了寻找新的相互作用器来阐明给定蛋白质的功能。此技术演示表明，通过瞬态表达增加每个投线 RFP 与谈话载体共同表达和 BFP 为 Rosa 26 点。我们在T细胞和巨噬细胞中都产生了具有永久基因表达的敲击细胞系，这在基因操作中是很难实现的。这种方法和建议适用于克里斯允许在大DNA片段的断言免疫细胞的机械研究，如蛋白质的识别，蛋白质相互作用研究。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Purification of Specific Cell Population by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)

Purification of Specific Cell Population by Fluorescence Activated Cell Sorting FACS

特定细胞群的净化荧光激活细胞分选（FACS）

Experimental and clinical studies often require highly purified cell populations.  FACS is a technique of choice to purify cell populations of known ...

科研

免疫与感染

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

T细胞受体在小鼠T细胞的逆转录病毒转导

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

胸腺淋巴瘤的T细胞系的推导 ATM - / -</sup P53 - / -</sup鼠标

Established cell lines are a critical research tool that can reduce the use of laboratory animals in research. Certain strains of genetically modified ...

Methods to Assess Beta Cell Death Mediated by Cytotoxic T Lymphocytes

β细胞死亡介导细胞毒性T淋巴细胞的方法来评估

Type 1 diabetes (T1D) is a T cell mediated autoimmune disease.  During the pathogenesis, patients become progressively more insulinopenic as 
insulin ...

Generation of Multivirus-specific T Cells to Prevent/treat Viral Infections after Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplant

Multivirus特异性T细胞的生成，预防/治疗异基因造血干细胞移植后的病毒感染

Viral infections cause morbidity and mortality in allogeneic hematopoietic stem cell transplant (HSCT) recipients. We and others have successfully ...

Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus

扩大目标，脐血细胞毒性T淋巴细胞，巨细胞病毒，EB病毒，腺病毒

Virus infections after stem cell transplantation are among the most common causes of death, especially after cord blood (CB) transplantation (CBT) where ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac转座子初级人类T细胞系统改造

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

鼠标朴素CD4<sup&gt; +</sup&gt; T细胞分离和<em&gt;在体外</em&gt;分化为T细胞亚群

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice

Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice

使用"桅杆细胞敲击"小鼠分析体内桅杆细胞的功能

Mast cells (MCs) are hematopoietic cells which reside in various tissues, and are especially abundant at sites exposed to the external environment, such ...

An Efficient and Simple Method to Establish NK and T Cell Lines from Patients with Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection

慢性活性泼斯坦-巴尔病毒感染患者 NK 和 T 细胞系建立的高效简便方法

A number of methods have been described to establish NK/T cell lines from patients with lymphoma or lymphoproliferative syndrome. These methods employed ...