Name: circulating tumor cell lines: an innovative tool for fundamental and translational research
Uploaded: 2021-12-25T14:00:00
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Ce projet de recherche au laboratoire Pannequin a été soutenu par une subvention de recherche du SIRIC : Subvention « INCa-DGOS-Inserm 6045 ». Les thèses de doctorat de Guillaume Belthier et Zeinab Homayed ont été soutenues par la Ligue contre le Cancer. Le salaire de Céline Bouclier a été financé par la « région Occitanie ». Merci à Julian Venables pour le montage en anglais.

Tous les protocoles in vivo ont été approuvés par les agences d’éthique animale.
1. Amplification CTC dans des conditions de culture 3D
<ol><li>Pour cultiver des CTC en suspension, d’abord semer des CTC dans des puits d’une plaque de 24 puits Ultra-Low Attachment (ULA) à la concentration maximale de 5 cellules/μL et dans 1 mL de milieu M12 (c.-à-d. DMEM-F12 avancé complété par 2 mM l-glutamine, 100 unités/mL de pénicilline et de streptomycine, supplément d...

<ol>
	<li>Wittekind, C., Neid, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+invasion+and+metastasis.">Cancer invasion and metastasis.</a> Oncology. 69, 14-16 (2005).</li><li>Eger, A., Mikulits, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+epithelial-mesenchymal+transition.">Models of epithelial-mesenchymal transition.</a> Drug Discovery Today: Disease Models. 2, 57-63 (2005).</li><li>Palmirotta, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid+biopsy+of+cancer:+a+multimodal+diagnostic+tool+in+clinical+oncology.">Liquid biopsy of cancer: a multimodal diagnostic tool in clinical oncology.</a> Therapeutic Advances in Medical Oncology. 10, (2018).</li><li>Hong, B., Zu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+circulating+tumor+cells:+current+challenges+and+new+trends.">Detecting circulating tumor cells: current challenges and new trends.</a> Theranostics. 3, 377-394 (2013).</li><li>vander Toom, E. E., Verdone, J. E., Gorin, M. A., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+challenges+in+the+isolation+and+analysis+of+circulating+tumor+cells.">Technical challenges in the isolation and analysis of circulating tumor cells.</a> Oncotarget. 7, 62754-62766 (2016).</li><li>Jin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+diagnostic+value+of+circulating+tumor+cells+with+CytoSorter&#174;+CTC+capture+system+in+patients+with+breast+cancer.">Evaluation of the diagnostic value of circulating tumor cells with CytoSorter&#174; CTC capture system in patients with breast cancer.</a> Cancer Medicine. 9, 1638-1647 (2020).</li><li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+circulating+tumor+cells+and+tumor+response+in+colorectal+cancer+patients+treated+with+chemotherapy:+a+meta-analysis.">Relationship between circulating tumor cells and tumor response in colorectal cancer patients treated with chemotherapy: a meta-analysis.</a> BMC Cancer. 14, 976 (2014).</li><li>Yu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+culture+of+circulating+breast+tumor+cells+for+individualized+testing+of+drug+susceptibility.">Ex vivo culture of circulating breast tumor cells for individualized testing of drug susceptibility.</a> Science. 345, 216-220 (2014).</li><li>Aceto, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+Tumor+Cell+Clusters+are+Oligoclonal+Precursors+of+Breast+Cancer+Metastasis.">Circulating Tumor Cell Clusters are Oligoclonal Precursors of Breast Cancer Metastasis.</a> Cell. 158, 1110-1122 (2014).</li><li>Grillet, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumour+cells+from+patients+with+colorectal+cancer+have+cancer+stem+cell+hallmarks+in+ex+vivo+culture.">Circulating tumour cells from patients with colorectal cancer have cancer stem cell hallmarks in ex vivo culture.</a> Gut. 66, 1802-1810 (2017).</li><li>Lee, W. Y., Hong, H. K., Ham, S. K., Kim, C. I., Cho, Y. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Colorectal+Cancer+in+Differentially+Established+Liver+Metastasis+Models.">Comparison of Colorectal Cancer in Differentially Established Liver Metastasis Models.</a> Anticancer Research. 34, 3321-3328 (2014).</li><li>Giraud, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progastrin+production+transitions+from+Bmi1+/Prox1++to+Lgr5high+cells+during+early+intestinal+tumorigenesis.">Progastrin production transitions from Bmi1+/Prox1+ to Lgr5high cells during early intestinal tumorigenesis.</a> Translational Oncology. 14, (2020).</li><li>Xu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+and+Evaluation+of+a+Novel+Size+Based+Circulating+Tumor+Cell+Isolation+System.">Optimization and Evaluation of a Novel Size Based Circulating Tumor Cell Isolation System.</a> PLoS One. 10, 0138032 (2015).</li><li>Beije, N., Jager, A., Sleijfer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cell+enumeration+by+the+CellSearch+system:+the+clinician's+guide+to+breast+cancer+treatment.">Circulating tumor cell enumeration by the CellSearch system: the clinician's guide to breast cancer treatment.</a> Cancer Treatment Reviews. 41, 144-150 (2015).</li><li>Karabacak, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic,+marker-free+isolation+of+circulating+tumor+cells+from+blood+samples.">Microfluidic, marker-free isolation of circulating tumor cells from blood samples.</a> Nature Protocols. 9, 694-710 (2014).</li><li>Ozkumur, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inertial+Focusing+for+Tumor+Antigen-Dependent+and+-Independent+Sorting+of+Rare+Circulating+Tumor+Cells.">Inertial Focusing for Tumor Antigen-Dependent and -Independent Sorting of Rare Circulating Tumor Cells.</a> Science Translational Medicine. 5, (2013).</li></ol>

Le protocole décrit ci-dessus a été utilisé initialement pour la caractérisation fonctionnelle du CTC colorectal, mais il peut être utilisé pour d’autres types de cancer tels que le cancer du sein et peut être adapté pour des modèles murins.
Le véritable facteur limitant est le nombre de CTC présents dans l’échantillon de sang et l’efficacité de la technique utilisée pour les isoler et les étendre. Plusieurs techniques d’isolation CTC ont été décrites sur la base de ...

Malgré les améliorations récentes dans le diagnostic précoce du cancer et dans la stratégie thérapeutique, plus de quatre-vingt-dix pour cent de la morbidité cancéreuse est toujours due à des métastases1. Le processus métastatique est une cascade en plusieurs étapes qui commence par le détachement local des cellules de la tumeur primaire et leur entrée dans la circulation sanguine où elles deviennent des cellules tumorales circulantes (CTC) pour finalement coloniser des sites éloignés tels que le foie et les poumons, dans le cas du cancer colorectal (CCR)2. Récemment, on s’est de plus en plus intéressé aux biopsies liquides, qui sont un outil non invasif permettant notamment de détecter et de dénombrer les CTC à partir d’échantillons de sang de patients. L’hétérogénéité génétique intratumorale est une cause majeure de résistance aux médicaments; ainsi, isoler des cellules représentatives du matériel tumoral constitue un outil prometteur pour la médecine personnalisée3.
Malgré une faible fréquence de CTC dans le sang (1 CTC pour 106 - 107 leucocytes)4,plusieurs techniques de détection et d’isolement ont été développées sur la base de différences de propriété entre les CTC et d’autres composants du sang5. Le nombre de CTC dans les échantillons de sang de patients, seul, peut fournir des informations sur le stade de la malignité, la réponse au traitement et la progression de la maladie6,7. Ainsi, l’isolement du CTC est un outil crucial pour les études translationnelles permettant d’évaluer l’hétérogénéité génétique ou d’effectuer un dépistage médicamenteux, ainsi que pour les études fondamentales visant à caractériser ces cellules invasives, car elles sont les acteurs clés de l’induction métastatique8,9. En effet, par rapport aux lignées cellulaires cancéreuses commercialement établies qui ont accumulé des milliers de mutations au fil du temps, les CTC frais partagent les principales caractéristiques de la tumeur primaire d’origine, y compris une puissante capacité à métastaser, et ils sont un meilleur reflet de la maladie. Ces caractéristiques en font un outil robuste pour les études fondamentales, en particulier dans les expériences de knockout des facteurs clés prédits impliqués dans les métastases. Le résultat de ces expériences peut être validé in vivo,sur des souris, comme décrit ci-dessous.
Une fois les CTC isolés, ils peuvent être étendus dans des conditions de culture non adhérentes et ensuite, ils peuvent être manipulés comme n’importe quelle lignée cellulaire cancéreuse disponible, c’est-à-dire qu’ils peuvent également être cultivés dans des conditions adhérentes ou incorporés dans Matrigel, selon la question scientifique10. Par exemple, pour tester l’expression et la localisation d’une protéine d’intérêt, les sphères CTC peuvent être cultivées en suspension et être incorporées dans Histogel pour effectuer une immunofluorescence sur des sections de sphère. De plus, si la protéine est membraneuse, son expression sur les cellules vivantes peut être mesurée par cytométrie.
Pour les études fonctionnelles, afin de tester le rôle d’une protéine d’intérêt qui pourrait jouer un rôle dans la colonisation du foie, des CTC avec des gènes modifiés, par shRNA ou CRISPR/Cas9, peuvent être injectés dans la rate de souris immunodéficientes. Cette dernière expérience est un modèle puissant pour imiter la colonisation des métastases hépatiques11.
La capacité des CTC à initier des tumeurs peut être évaluée en injectant un très petit nombre de cellules dans des souris immunodéficientes. Comme l’initiation tumorale est une caractéristique des cellules souches cancéreuses (CSC), ce test indiquera le pourcentage de CSC dans les lignées CTC. Ce phénotype de cellules souches rend les lignées cellulaires tumorales circulantes résistantes à certaines thérapies anticancéreuses de référence. Les CTC élargis peuvent donc être utilisés pour dépister les médicaments et identifier le meilleur traitement efficace potentiel pour le patient; La réponse du CTC au traitement peut être testée in vitro à l’aide d’un test de viabilité de la luminescence, par exemple.
Dans une perspective à long terme, le dépistage de médicaments sur des CTC fraîchement isolés et amplifiés pourrait être utilisé comme un nouvel outil de médecine personnalisée pour aider à choisir le traitement le plus efficace et le plus adapté pour les patients.
Dans le présent article, les protocoles de culture de lignées CTC, de coloration de protéines spécifiques par immunocoloration et cytométrie, d’effectuer des tests de cytotoxicité ainsi que des expériences de xénogreffe in vivo avec CTC sont détaillés.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Accumax solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM/F-12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12634028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G7570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar 24-well Clear Flat Bottom Ultra-Low Attachment Multiple Well Plates,</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histiogel Specimen Medium</td>
			<td>LabStorage</td>
			<td>HG-4000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human EGF, premium grade</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-097-751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human FGF-2, premium grade</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-564</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine (200 mM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (5,000 U/mL)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070063</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

circulating tumor cell lines: an innovative tool for fundamental and translational research

Les métastases sont l’une des principales causes de décès par cancer. Malgré l’amélioration des stratégies de traitement, le cancer métastatique a un mauvais pronostic. Nous sommes donc confrontés à un besoin urgent de comprendre les mécanismes à l’origine du développement des métastases, et donc de proposer des traitements efficaces pour le cancer avancé. Les cancers métastatiques sont difficiles à traiter, car les biopsies sont invasives et inaccessibles. Récemment, il y a eu un intérêt considérable pour les biopsies liquides, y compris l’acide désoxyribonucléique circulant (ADN) sans cellules et les cellules tumorales circulantes du sang périphérique et nous avons établi plusieurs lignées cellulaires tumorales circulantes de patients atteints de cancer colorectal métastatique pour participer à leur caractérisation. En effet, pour caractériser fonctionnellement ces cellules rares et mal décrites, l’étape cruciale est de les étendre. Une fois établies, les lignées de cellules tumorales circulantes (CTC) peuvent ensuite être cultivées dans des conditions de suspension ou d’adhérence. Au niveau moléculaire, les lignées CTC peuvent également être utilisées pour évaluer l’expression de marqueurs d’intérêt spécifiques (tels que la différenciation, les cellules souches épithéliales ou cancéreuses) par immunofluorescence ou analyse cytométrique. En outre, les lignes CTC peuvent être utilisées pour évaluer la sensibilité des médicaments aux chimiothérapies de référence ainsi qu’aux thérapies ciblées. La capacité des lignées CTC à initier des tumeurs peut également être testée par injection sous-cutanée de CTC chez des souris immunodéficientes.
Enfin, il est possible de tester le rôle de gènes spécifiques d’intérêt qui pourraient être impliqués dans la dissémination du cancer en éditant les gènes CTC, par l’acide ribonucléique en épingle à cheveux court (shRNA) ou Crispr / Cas9. Des CTC modifiés peuvent ainsi être injectés dans des rates de souris immunodéficientes, pour imiter expérimentalement une partie du processus de développement métastatique in vivo.
En conclusion, les lignées CTC sont un outil précieux pour la recherche future et pour la médecine personnalisée, où elles permettront de prédire l’efficacité du traitement en utilisant les cellules mêmes qui sont à l’origine responsables des métastases.

Les expressions EpCAM et CD26 observées par IF (Panneau de droitede lafigure 1A) et FACS(figure 1B)respectivement indiquent que la ligne CTC est épithéliale et affichent l’une des caractéristiques du CSC10. Ce trait épithélial peut être caractérisé par une coloration avec des anticorps dirigés contre d’autres marqueurs épithéliaux et mésenchymateux. Ainsi, il pourrait être possible de savoir approximativ...

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Circulating Tumor Cell Lines: an Innovative Tool for Fundamental and Translational Research

La culture des CTC permet une caractérisation fonctionnelle plus profonde du cancer, en testant l’expression de marqueurs spécifiques et en évaluant la résistance aux médicaments et la capacité de coloniser le foie, entre autres possibilités. Dans l’ensemble, la culture du CCT pourrait être un outil clinique prometteur pour la médecine personnalisée afin d’améliorer les résultats pour les patients.

Les lignées cellulaires tumorales circulantes : un outil innovant pour la recherche fondamentale et translationnelle

Metastasis is a leading cause of cancer death. Despite improvements in treatment strategies, metastatic cancer has a poor prognosis. We thus face an ...

Les métastases sont l’une des principales causes de décès liés au cancer. Ce phénomène se produit lorsque les cellules cancéreuses se détachent de la tumeur primaire, vont dans la circulation sanguine pour finalement atteindre un organe cible éloigné. Une fois que ces cellules détachées vont dans le sang, nous les appelons cellules tumorales secondaires.Ils représentent un matériau variable car d’une part, ils sont les principaux responsables de la formation de métastases et d’autre part, ils sont plus faciles que les biopsies tumorales. En effet, ils peuvent être prélevés par une simple ponction de sang. Malgré le faible nombre de ces cellules dans l’échantillon de sang, nous sommes les premiers à établir plusieurs lignées cellulaires tumorales circulantes à partir du sang du patient le plus préoccupant en utilisant la condition contrôlée en 3D.Cette lignée cellulaire peut être utilisée dans n’importe quelle lignée cellulaire commerciale pour des expériences de routine. Par exemple, pour le dépistage génétique des médicaments, pour les protéines d’intérêt, mais aussi pour l’expérience in vivo pour tester la capacité d’initiation tumorale et leur potentiel métastatique. CTC, lignées cellulaires tumorales circulantes, doivent être cultivées dans des conditions 3D en hypoxie.Une fois que le CTC a formé des sphères, nous pouvons le mettre dans le milieu et le centrifuger pendant cinq minutes à 300 RCF. Jetez le surnageant et ajoutez 500 microlitres d’Accumax. Nous en suspendons un et incubons la solution 20 minutes à 37 degrés.Ensuite, lavez les sphères dissociées avec du PBS et abattez les cellules. Remettez en suspension la pastille avec un DMEM/F12 fraîchement supplémenté et voyez les cellules à la densité de cinq cellules par microlitre dans une nouvelle plaque 24 Low Attachment. Centrifuger les sphères CTC éliminent le surnageant et lavent la pastille deux fois avec du PBS.À 500 microlitres de PFE, mélangez bien et incubez le tube sur de la glace pendant 20 minutes. Ensuite, centrifugez les sphères fixes et lavez la pastille deux fois avec du PBS, éliminant ainsi le volume maximal de PBS et ajoutez 20 microlitres d’HistoGel formé. Mettez-le en suspension et faites une gouttelette sur le vase de culture, laissez-le sécher pendant 10 minutes et détachez-le à l’aide d’un scalpel.Vous pouvez maintenant traiter pour n’importe quel désiré afin de CTC ciblant une protéine d’intérêt souhaitée. Collectez les CTC et dissociez les sphères avec Accumax comme décrit précédemment. Éliminez l’Accumax et remettez en suspension la pastille avec trois mL de tampon bloquant et transférez la suspension à travers une passoire cellulaire de 14 micromètres pour obtenir une solution à cellule unique.Comptez les cellules et expédiez-les dans des tubes et ajoutez un volume de 200 000 cellules, centrifugez les tubes et jetez le surnageant. Selon la fiche technique de l’anticorps, ajoutez dans un tube, le volume souhaité de l’anticorps et dans un autre tube son isotype et continuez les étapes en suivant les directives du fabricant. Le tube restant ne sera pas étiqueté et l’utilisation d’un marché de viabilité est fortement suggérée dans cette expérience.Sur le cytomètre, commencez par le tube non marqué pour régler la tension dans la zone marquée négativement. Ensuite, placez le tube isotype. L’isotype servirait de contrôle négatif pour distinguer le signal positif du signal non spécifique.Et terminez l’expérience avec les cellules marquées avec l’anticorps d’intérêt où vous devriez voir un changement dans la porte marquée positivement, si la protéine d’intérêt est exprimée. Cette suspension dissocie les CTC dans un milieu supplémenté à la densité de 200 000 cellules par mL. Dans une fixation Ultra Low 96, plaque de puits, sceller le volume de 50 microlitres et incuber la plaque 24 heures dans l’hypoxie.Le lendemain, ajoutez 50 microlitres de concentration différente du médicament testé et ajoutez le même volume de DMEM / F12 uniquement pour déterminer davantage la base de la viabilité cellulaire et incuber la plaque pendant 48 heures supplémentaires. Au troisième jour, reconstituez l’agent et ajoutez 70 microlitres du mélange dans chaque puits. Placez la plaque sur un agitateur orbital pendant 20 minutes, puis mesurez la luminescence.Ce test est un outil utile pour tester un grand nombre de médicaments afin d’évaluer leurs effets sur la croissance cellulaire du CTC. À Eppendorf, ressuspendez les cellules dans 100 microlitres de PBS pincent la peau à l’arrière de la souris et insèrent l’aiguille sous la peau. Injecter lentement tout le volume au même endroit et surveiller la croissance tumorale tous les deux jours et sacrifier les souris si la tumeur dépassait une taille de 1,5 centimètre cube.Avant la chirurgie, injecter par voie sous-cutanée un analgésique, à la face dorsale ventrale de la souris, faire une petite incision sous la 10ème côte. Soulevez doucement la rate et posez-la sur une gaze stérile. À l’aide d’une seringue à insuline, injecter 50 microlitres de CTC remis en suspension dans le PBS et attendre trois minutes sans retirer l’aiguille.Ligaturez le vaisseau artériel d’un côté et le vaisseau vénal de l’autre côté. Ensuite, retirez la rate en coupant directement au-dessus des deux ligatures. Coudre le péritoine abdominal et la peau et bien désinfecter la région.Le but de cette expérience est de tester la capacité des CTC dérivés d’un patient atteint d’un cancer colorectal à coloniser le foie en induisant une prévoyance métastatique visible. L’isolement et l’établissement de la lignée cellulaire tumorale clinique est un outil émergent pour les études fondamentales et translationnelles. Par exemple, si vous avez un gène d’intérêt où les études in vivo ont démontré que ce gène est impliqué dans la capacité de migration et d’invasion des lignées cellulaires du cancer colorectal, éliminer ce gène dans les lignées cellulaires tumorales circulantes avant l’injection dans la rate de souris, pour les laisser coloniser le foie pourrait être un bon outil pour confirmer votre résultat in vivo.Pour les études translationnelles, notre principale perspective d’isolement des lignées cellulaires tumorales circulantes est d’utiliser ce précieux matériau en médecine personnalisée. À partir des échantillons de sang des patients, nous isolerions et amplifierions les CTC en culture pendant deux ou trois semaines afin d’avoir suffisamment de matériel pour examiner le panel de médicaments disponibles et évaluer sa cytotoxicité pour finalement attribuer

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Capture and Release of Viable Circulating Tumor Cells from Blood

Captage et sortie de Viable cellules tumorales circulantes du sang

We demonstrate a method for size based capture of viable circulating tumor cell (CTC) from whole blood, along with the release of these cells from chip ...

Recherche

Recherche en cancérologie

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Isolation des cellules tumorales circulantes dans un modèle de souris orthotopique du cancer colorectal

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

The Establishment of a Lung Colonization Assay for Circulating Tumor Cell Visualization in Lung Tissues

La mise en place d’un essai de colonisation poumon pour la visualisation de cellules de tumeur dans les tissus pulmonaires en circulation

Metastasis is the major cause of cancer death. The role of circulating tumor cells (CTCs) in promoting cancer metastasis, in which lung colonization by ...

Paramyxoviruses for Tumor-targeted Immunomodulation: Design and Evaluation Ex Vivo

Paramyxovirus pour tumeur ciblées Immunomodulation : conception et évaluation Ex Vivo

Successful cancer immunotherapy has the potential to achieve long-term tumor control. Despite recent clinical successes, there remains an urgent need for ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Modèles de xénogreffe orthopiques dérivés du patient pour le carcinome humain de cellules urotheliales et la croissance de tumeur de cancer colorectal et la métastasie spontanée

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Establishment and Characterization of Three Afatinib-resistant Lung Adenocarcinoma PC-9 Cell Lines Developed with Increasing Doses of Afatinib

Établissement et caractérisation de trois lignées cellulaires résistantes à l'adénocarciane pulmonaire résistante à l'afatinib PC-9 développées avec des doses croissantes d'Afatinib

Acquired resistance to molecular target inhibitors is a severe problem in cancer therapy. Lung cancer remains the leading cause of cancer-related death in ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

Micromanipulation de cellules tumorales circulantes pour l’analyse moléculaire en aval et l’évaluation du potentiel métastatique

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Detection and Monitoring of Tumor Associated Circulating DNA in Patient Biofluids

Détection et surveillance de l'ADN circulant associé à la tumeur dans les biofluides des patients

Complications associated with upfront and repeat surgical tissue sampling present the need for minimally invasive platforms capable of molecular ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Établissement de modèles de xénogreffe dérivés du cancer gastrique et de lignées cellulaires primaires

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

Caractérisation semi-automatique De MD-L1 et recensement des cellules tumorales circulantes de patients atteints d'immunofluorescence

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...