Name: &#181;tongue: a microfluidics-based functional imaging platform for the tongue in vivo
Uploaded: 2021-04-22T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ã‚ÂµTongue: A Microfluidics-Based Functional Imaging Platform for the Tongue In Vivo at JoVE.com

Эта работа была поддержана Институтом фундаментальных наук (IBS-R015-D1), грантом Национального исследовательского фонда Кореи (NRF), финансируемым правительством Кореи (MSIT) (No 2019M3A9E2061789), и грантом Национального исследовательского фонда Кореи (NRF), финансируемым правительством Кореи (MSIT) (No 2019M3E5D2A01058329). Мы благодарны Ынсу Киму и Юджину Ли за их техническую помощь.

Все хирургические процедуры были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) Университета Сунгюнван и Сеульского национального университета.
1. Приготовление растворов: искусственной слюны и вкусовых постоялых веществ
<ol><li>Гото?...

<ol>
	<li>Mao, T., O'Connor, D. H., Scheuss, V., Nakai, J., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+subcellular+targeting+of+GCaMP-type+genetically-encoded+calcium+indicators.">Characterization and subcellular targeting of GCaMP-type genetically-encoded calcium indicators.</a> PLoS One. 3 (3), 1-10 (2008).</li><li>Shih, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+microscopy+as+a+tool+to+study+blood+flow+and+neurovascular+coupling+in+the+rodent+brain.">Two-photon microscopy as a tool to study blood flow and neurovascular coupling in the rodent brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 32 (7), 1277-1309 (2012).</li><li>Choi, M., Kwok, S. J. J., Yun, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+fluorescence+microscopy:+Lessons+from+observing+cell+behavior+in+their+native+environment.">In vivo fluorescence microscopy: Lessons from observing cell behavior in their native environment.</a> Physiology. 30 (1), 40-49 (2015).</li><li>Caicedo, A., Samir Jafri, M., Roper, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+Ca2++imaging+reveals+neurotransmitter+receptors+for+glutamate+in+taste+receptor+cells.">In situ Ca2+ imaging reveals neurotransmitter receptors for glutamate in taste receptor cells.</a> Journal of Neuroscience. 20 (21), 7978-7985 (2000).</li><li>Tomchik, S. M., Berg, S., Kim, J. W., Chaudhari, N., Roper, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breadth+of+tuning+and+taste+coding+in+mammalian+taste+buds.">Breadth of tuning and taste coding in mammalian taste buds.</a> Journal of Neuroscience. 27 (40), 10840-10848 (2007).</li><li>Dando, R., Roper, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-to-cell+communication+in+intact+taste+buds+through+ATP+signalling+from+pannexin+1+gap+junction+hemichannels.">Cell-to-cell communication in intact taste buds through ATP signalling from pannexin 1 gap junction hemichannels.</a> The Journal of Physiology. 587 (24), 5899-5906 (2009).</li><li>Chandrashekar, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cells+and+peripheral+representation+of+sodium+taste+in+mice.">The cells and peripheral representation of sodium taste in mice.</a> Nature. 464 (7286), 297-301 (2010).</li><li>Oka, Y., Butnaru, M., von Buchholtz, L., Ryba, N. J. P., Zuker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+salt+recruits+aversive+taste+pathways.">High salt recruits aversive taste pathways.</a> Nature. 494 (7438), 472-475 (2013).</li><li>Choi, M., Lee, W. M., Yun, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopic+interrogation+of+peripheral+taste+sensation.">Intravital microscopic interrogation of peripheral taste sensation.</a> Scientific Reports. 5 (8661), 1-6 (2015).</li><li>Han, J., Choi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+functional+screening+of+taste+sensation+in+vivo.">Comprehensive functional screening of taste sensation in vivo.</a> bioRxiv. 16419 (371682), 1-22 (2018).</li><li>Thestrup, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+ratiometric+calcium+sensors+for+functional+in+vivo+imaging+of+neurons+and+T+lymphocytes.">Optimized ratiometric calcium sensors for functional in vivo imaging of neurons and T lymphocytes.</a> Nature Methods. 11 (2), 175-182 (2014).</li><li>Danilova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glossopharyngeal+nerves+to+taste+stimuli+in+C57BL+/+6J+mice.">Glossopharyngeal nerves to taste stimuli in C57BL / 6J mice.</a> BME Neuroscience. 15, 1-15 (2003).</li><li>Wu, A., Dvoryanchikov, G., Pereira, E., Chaudhari, N., Roper, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breadth+of+tuning+in+taste+afferent+neurons+varies+with+stimulus+strength.">Breadth of tuning in taste afferent neurons varies with stimulus strength.</a> Nature Communications. 6 (8171), 1-11 (2015).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+An+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: An open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Tan, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gut-brain+axis+mediates+sugar+preference.">The gut-brain axis mediates sugar preference.</a> Nature. 580 (7804), 511-516 (2020).</li><li>Roebber, J. K., Roper, S. D., Chaudhari, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+anion+in+salt+(NaCl)+detection+by+mouse+taste+buds.">The role of the anion in salt (NaCl) detection by mouse taste buds.</a> The Journal of Neuroscience. 39 (32), 6224-6232 (2019).</li><li>Kusuhara, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taste+responses+in+mice+lacking+taste+receptor+subunit+T1R1.">Taste responses in mice lacking taste receptor subunit T1R1.</a> Journal of Physiology. 591 (7), 1967-1985 (2013).</li></ol>

Здесь описан подробный протокол применения μTongue к исследованию функциональной активности вкусовых клеток in vivo. В этом протоколе выполняется функциональная визуализация на вкусовых клетках с использованием генетически закодированных показателей кальция. В дополнение к использ?...

Прижизальный флуоресцентный микроскоп широко используется для изучения пространственно-временной динамики на живых тканях. Исследователи быстро разрабатывают генетически закодированные датчики, которые обеспечивают специфические и чувствительные преобразования биологических процессов в флуоресцентные сигналы, которые могут быть легко записаны с помощью флуоресцентных микроскопов, которые широко доступны1,2. Хотя большинство внутренних органов у грызунов были исследованы с помощью микроскопа, его успешное применение к языку еще не было успешным3.
Предыдущие исследования по кальциевой визуализации вкусовых клеток проводились ex vivo путем тонкого срезания ткани языка для получения циркумваллятных вкусовых рецепторов4,5,6 или путем отслаивания вкусового эпителия для получения грибовидных вкусовых рецепторов7,8. Подготовка этих образцов была неизбежно инвазивной, поэтому естественные микросреды, такие как иннервация нервов, барьеры проницаемости и кровообращение, были в значительной степени возмущены. Первое окно визуализации языка прижизненным путем было зарегистрировано в 2015 году Choi et al., но надежная функциональная запись была недостижима из-за движения и оптических артефактов, вызванных жидкими тастантными стимулами9.
Недавно была введена микрофлюидика на языке (μTongue)10. Это устройство объединяет микрофлюидную систему с окном визуализации на языке мыши. Достигая квази-стационарного потока тастантных стимулов в течение всего периода визуализации, артефакты от плавного движения могут быть сведены к минимуму(рисунок 1). Входной порт питается от серии многоканальных регуляторов давления, тогда как выходной порт подключен к шприцевому насосу, который поддерживает 0,3 мл / мин. Кроме того, оптические артефакты, вызванные разницей в показателях преломления растворов вкуса, были сведены к минимуму с помощью ратиометрического анализа с введением индикатора нечувствительности к кальцию (tdTomato), а также индикатора кальция (GCaMP6)11. Такая конструкция обеспечивала микроскопическую стабильность вкусовых клеток in vivo даже при резком переключении между текучими каналами. Следовательно, μTongue реализуют надежный функциональный скрининг нескольких вкусовых рецепторов мыши in vivo.
В этом протоколе подробно объясняются экспериментальные процедуры для визуализации кальция мышиных грибовидных вкусовых рецепторов in vivo с использованием μTongue. Сначала описано приготовление искусственной слюны и растворов вкусности. Во-вторых, вводится настройка микрофлюидной системы для достижения квазистабитичного потока. В-третьих, процедуры, используемые для установки языка мыши на μTongue для получения изображения, очерчены. Наконец, каждый этап анализа изображения, включая коррекцию артефактов бокового движения и ратиометрию, задается. Этот протокол может быть легко адаптирован к любой исследовательской лаборатории с мышиным оборудованием и двухфотонным микроскопом или эквивалентным оборудованием.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>acesulfame K</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>04054-25G</td>
			<td>Artificial saliva / tastant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>calcium chloride solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>21115-100ML</td>
			<td>Artificial saliva / tastant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>citric acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0759-100G</td>
			<td>Artificial saliva / tastant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cycloheximide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>01810-5G</td>
			<td>Artificial saliva / tastant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>denatonium</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D5765-5G</td>
			<td>Artificial saliva / tastant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental glue</td>
			<td>Denkist</td>
			<td>P0000CJT-A2</td>
			<td>Animal preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td>NIH</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td>Data analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMP</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>57510-5G</td>
			<td>Artificial saliva / tastant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instant adhesive</td>
			<td>Loctite</td>
			<td>Loctite 4161, Henkel</td>
			<td>Animal preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P3786-100G</td>
			<td>Artificial saliva / tastant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P9541-500G</td>
			<td>Artificial saliva / tastant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Yuhan</td>
			<td>Ketamine 50</td>
			<td>Animal preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P0662-25G</td>
			<td>Artificial saliva / tastant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KHCO3</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>237205-500G</td>
			<td>Artificial saliva / tastant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB</td>
			<td>Mathwork</td>
			<td>MATLAB</td>
			<td>Data analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M8266-100G</td>
			<td>Artificial saliva / tastant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MPG</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>49601-100G</td>
			<td>Artificial saliva / tastant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mutiphoton microscope</td>
			<td>Thorlab</td>
			<td>&#160;Bergamo II</td>
			<td>Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S3014-500G</td>
			<td>Artificial saliva / tastant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>792519-500G</td>
			<td>Artificial saliva / tastant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>N16XLWD-PF</td>
			<td>Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octaflow</td>
			<td>ALA Scientific Instruments</td>
			<td>OCTAFLOW II</td>
			<td>Fluidic control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC</td>
			<td>LG</td>
			<td>Lg15N54</td>
			<td>Fluidic control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PH meter</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>ORION STAR AZ11</td>
			<td>Artificial saliva / tastant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>806562</td>
			<td>Artificial saliva / tastant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>quinine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Q1125-5G</td>
			<td>Artificial saliva / tastant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>Havard Apparatus</td>
			<td>PHD ULTRA 4400</td>
			<td>Fluidic control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRITC-dextran</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>52194-1G</td>
			<td>Animal preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrafast fiber laser</td>
			<td>Toptica</td>
			<td>FFultra920 01042</td>
			<td>Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Bayer Korea</td>
			<td>Rompun</td>
			<td>Animal preparation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

&#181;tongue: a microfluidics-based functional imaging platform for the tongue in vivo

Прижизневая флуоресцентная микроскопия является инструментом, широко используемым для изучения многоклеточной динамики у живого животного. Однако он не был успешно использован во вкусовом органе чувств. Интегрируя микрофлюидику в окно визуализации языка прижизностно, μTongue обеспечивает надежные функциональные изображения вкусовых клеток in vivo при контролируемом воздействии нескольких вкусовых гастян. В данной работе представлена подробная пошаговая процедура использования системы μTongue. Существует пять подразделов: подготовка вкусных решений, настройка микрофлюидного модуля, монтаж образца, получение функциональных данных изображения и анализ данных. Также представлены некоторые советы и методики решения практических вопросов, которые могут возникнуть при использовании μTongue.

Мышь Pirt-GCaMP6f-tdTomato использовалась для получения изображения вкусовых рецепторов. Поверхность мышиного языка была покрыта автофлуоресцентными нитевидными сосочами. Вкусовые рецепторы разложены по поверхности языка(рисунок 4А). Изображения вкусового рецептора и его стр?...

Watch this Scientific Journal Video about Ã‚ÂµTongue: A Microfluidics-Based Functional Imaging Platform for the Tongue In Vivo at JoVE.com

Ãƒâ€šÃ‚ÂµTongue: A Microfluidics-Based Functional Imaging Platform for the Tongue In Vivo

В статье представлено устройство μTongue (микрофлюидика на языке) для функциональной визуализации вкусовых клеток in vivo путем интеграции микрофлюидики в окно прижизальной визуализации на языке.

μTongue: функциональная платформа визуализации на основе микрофлюидики для языка in vivo

Intravital fluorescence microscopy is a tool used widely to study multicellular dynamics in a live animal. However, it has not been successfully used in ...

Этот протокол позволяет наблюдать функции вкусовых клеток в естественной микросреде с сохранением нейронных связей и кровообращения. Используя этот метод, межклеточная связь может быть исследована in vivo. Для начала заполните резервуары перфузионной системы сжатым потоком искусственной слюной и вкуснятными веществами.Подключите линию сжатого воздуха к входу регулятора и установите давление воздуха в системе подачи жидкости на 30-50 фунтов на квадратный дюйм. Установите выходное давление регулятора на 0,4 фунта на квадратный дюйм и проверьте, начинает ли жидкость вытекать из трубки. Подключите коллектор из резервуаров к входному порту микроязыка, затем подключите выходной порт микроязыка к шприцевым насосом и отведите жидкость со скоростью примерно 300 микролитров в минуту, чтобы установить состояние устойчивого состояния.Убедитесь, что объем капли, висящей под микроязычком, остается постоянным, и отрегулируйте давление воздуха и скорость потока для получения желаемой высоты образца. После настройки микрофлюидной системы отсоедините линию сжатого воздуха и выключите шприцевой насос до тех пор, пока мышь не будет подготовлена к визуализации in vivo. После введения анестезии мыши внутривенно вводят ТРИТК-декстран через ретро-орбитальный путь для наблюдения за кровообращением во время визуализации.Поместя мышь в положение лежа на спине, распылите 70% этанола на ее голову. Используйте щипцы, чтобы слегка подвискать кожу головы, затем используйте ножницы, чтобы отрезать примерно семь квадратных миллиметров кожи. После очистки волос вокруг кожи головы удалите из-под кожи околоушную кость и нанесите мгновенный клей на череп.Затем прикрепите настроенный фиксатор головы. Как только мгновенный клей затвердеет, нанесите зубной клей вокруг головного фиксатора и затвердите его путем освещения синим светом. Используя мгновенный клей, чтобы приклеить нижнюю губу мыши к нижнему блоку микроязыка, затем поместил мышь на доску подготовки мыши и закрепил нижний блок на микроязычке к удерживающим стойкам, выровняв отверстия на краю микроязыка с стойками.Затяните фиксатор головки мыши к держателю головки на плате и отрегулируйте расстояние между головкой мыши и устройством. Затем, используя держатель для крепления головки, плавно поверните головку мыши примерно на 45 градусов. Прикрепив мышь к доске, используйте пластиковый пинцет, чтобы аккуратно нарисовать ее язык.Затем, используя мгновенный клей, прикрепите вентральную сторону языка к верхней стороне нижнего блока микроязыка. Чтобы язык был влажным, протрите поверхность влажным ватным тампоном, затем поместите кусочек ткани, пропитанный искусственной слюной, на открытую поверхность языка. Поместите изогнутые шайбы на стойки, удерживая нижнюю часть микроязычков, затем переместите подготовку мыши на стадию микроскопа.Расположите открытый язык мыши под приблизительным центром объектива микроскопа, следя за тем, чтобы не отклоняться от динамического диапазона сцены, затем затяните винты, чтобы прочно прикрепить доску мыши к сцене. Поместите грелку под мышь, чтобы поддерживать температуру ее тела между 36,5 и 37,5 градусами Цельсия. Чтобы предотвратить попадание жидкости в трахею мыши, поместите тонкий кусок скрученой бумаги внутрь рта мыши, затем удалите влажную ткань, помещенную на поверхность языка, и поместите подготовленный микроязык на язык мыши, чтобы поверхность языка была видна через окно визуализации.Закрепите микроязычок, аккуратно завинтив оба конца с минимальным давлением сжатия. Чтобы начать получать изображения, откройте программное обеспечение микроскопа, затем включите двухфотонный лазер на 920 нанометров. Установите объектив погружения в воду на микроскоп, затем опустите объектив на окно визуализации микроязыка и погрузите объектив.В режиме камеры осветить поверхность языка, включив синий свет от ртутной лампы. Чтобы найти приблизительную фокальную плоскость, отрегулируйте ось Z и найдите сигнал автофлуоресценции от нитевидных сосочков. Затем с помощью регуляторной ручки X и Y найдите вкусовой рецептор.Переключитесь в многофотонный режим, затем задайте длину волны возбуждения, набор фильтра излучения, режим сканирования и размер кадра для получения изображения. Со вкусовым рецептором в центре окна визуализации распокажите кровеносные сосуды, окружающие вкусовую рецептор, примерно на две трети высоты вкусовой рецептора и визуализируйте кровообращение. Если кровоток забит, слегка ослабьте фиксирующие винты, чтобы возобновить кровоток.Отрегулируйте ось Z, чтобы найти Z-плоскость вкусовой рецептора, содержащей достаточное количество вкусовых клеток, затем приступайте к визуализации кальция при двух-шести герцах в течение 80 секунд. После начала визуализации включите резервуар жидкостной системы, чтобы обеспечить вкусовое решение в течение 20 секунд. После 20 секунд стимуляции вкуса переключите резервуар обратно на искусственную слюну.Во время визуализации подождите около трех-четырех минут между сеансами, последовательно обеспечивая искусственную слюну, чтобы сохранить язык влажным и смыть вкус, оставшийся от предыдущего сеанса. Поверхность языка мыши Pirt-GCaMP6f-tdTomato покрыта автофлуоресцентными нитевидными сосочками и разрозненными вкусовыми рецепторами. Нитевидные сосочки желтого цвета захватываются с помощью фотодетектора на глубине от 500 до 550 нанометров и могут наблюдаться с самой поверхности языка глубиной до примерно 25 микрометров.Сигналы GCaMP зеленого цвета, обнаруженные фильтром от 500 до 550 нанометров, и сигналы tdTomato красного цвета, обнаруженные фильтром от 607 до 670 нанометров, представляют вкусовые ячейки. Сигнал tdTomato получен для метрического анализа соотношения. Кровеносные сосуды, которые окружают вкусовую рецептор, приобретаются с помощью фильтра от 500 до 550 нанометров, установленного в коллагеновой соединительной ткани, который структурно поддерживает вкусовую рецептор, приобретается с помощью набора фильтров от 447 до 460 нанометров.В этом репрезентативном примере скрининга вкуса in vivo с использованием кальциевой визуализации каждая вкусовая клетка разграничена пунктирными линиями. В этом испытании клетка 2 реагировала как на сладкие, так и на вкусные вкусители умами. И клетка 3 реагировала как на вкусные вещества с низким, так и на высокое содержание соли.Ни одна из клеток в этом вкусовом рецепторе не реагировала на кислые вкусы. Поскольку целью данного эксперимента является наблюдение за функцией вкусовых клеток в естественной среде, важно доставить флуоресценты в кровеносные сосуды на этапе подготовки и подтвердить их циркуляцию во время эксперимента.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

&#181;Tongue: A Microfluidics-Based Functional Imaging Platform for the Tongue In Vivo

Functional Mapping with Simultaneous MEG and EEG

Функциональные карты с одновременным МЭГ и ЭЭГ

We use magnetoencephalography (MEG) and electroencephalography (EEG) to locate and determine the temporal evolution in brain areas involved in the ...

High-resolution Functional Magnetic Resonance Imaging Methods for Human Midbrain

Высокое разрешение функциональной магнитно-резонансной томографии методы по правам мозга

Functional MRI (fMRI) is a widely used tool for non-invasively measuring correlates of human brain activity. However, its use has mostly been focused upon ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Функциональные нейровизуализации с использованием ультразвуковых Гематоэнцефалический Разрушение барьеров и марганца-МРТ

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Ex Vivo Imaging of Postnatal Cerebellar Granule Cell Migration Using Confocal Macroscopy

Ex Vivo Imaging of Postnatal Cerebellar Granule Cell Migration Using Confocal Macroscopy

Экс естественных изображений послеродовой мозжечка ЗК миграции с помощью конфокальной макроскопии

During postnatal development, immature granule cells (excitatory interneurons) exhibit tangential migration in the external granular layer, and then ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Одновременный<em&gt; Экс естественных условиях</em&gt; Функциональное тестирование двух сетчатки по<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Система электроретинограммы

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

High-resolution Structural Magnetic Resonance Imaging of the Human Subcortex In Vivo and Postmortem

High-resolution Structural Magnetic Resonance Imaging of the Human Subcortex In Vivo and Postmortem

Высокое разрешение Структурная магнитно-резонансная томография в подкорке человека<I&gt; В Vivo</I&gt; И Посмертный

The focus of this study was to test the resolution limits of structural MRI of a postmortem brain compared to living human brains. The resolution of ...

In Vivo Functional Brain Imaging Approach Based on Bioluminescent Calcium Indicator GFP-aequorin

In Vivo Functional Brain Imaging Approach Based on Bioluminescent Calcium Indicator GFP-aequorin

В Vivo Функциональное мозга изображений подход, основанный на Биолюминесцентный кальция Индикатор GFP-акворина

Functional in vivo imaging has become a powerful approach to study the function and physiology of brain cells and structures of interest. Recently a new ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

Объемный метод количественного определения церебрального спазм сосудов в мышиных модели субарахноидальное кровоизлияние

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

В естественных условиях Двух фотонных изображений корковых нейронов в новорожденных мышей

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...

In Vivo Imaging of Cerebrospinal Fluid Transport through the Intact Mouse Skull using Fluorescence Macroscopy

В Vivo Изображение цереброспинальной жидкости транспорт через Череп мыши Intact с помощью флуоресценции Макроскопия

Cerebrospinal fluid (CSF) flow in rodents has largely been studied using ex vivo quantification of tracers. Techniques such as two-photon microscopy and ...