Name: generation of zebrafish larval xenografts and tumor behavior analysis
Uploaded: 2021-06-19T13:00:00
Duration: 12 min 8 s
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हम चंपालिमौद फाउंडेशन, Congento (LISBOA-01-0145-FEDER-022170, सह एफसीटी द्वारा वित्त पोषित/Lisboa2020) के वित्तपोषण के लिए धन्यवाद । वीपी के लिए एफसीटी फैलोशिप (एसएफआरएच/बीडी/118252/2016), एमएमएल (पीडी/बीडी/138203/2018) । महत्वपूर्ण चर्चाओं के लिए फियोर लैब के सभी सदस्य; डेटा साझा करने के लिए बी कोस्टा और सी रेरेलो डी अल्मेडा; और हमारे लैब सदस्यों सी रेरेलो डी अल्मेडा, एम बरासो और एल Leite वीडियो में उनकी भागीदारी के लिए । हम सीएफ फिश फैसिलिटी (सी सेर्टल, जे मोंटेरो एट अल) और चंपालिमौद कम्युनिकेशन, इवेंट्स एंड आउटरीच टीम को शानदार फिल्म मेकिंग और कातारीना रामोस और टेरेसा फर्नांडिस को उनकी मदद के लिए धन्यवाद देना चाहेंगे ।

<ol>
	<li>Gut, P., Reischauer, S., Stainier, D. Y. R., Arnaout, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Little+Fish,+Big+Data:+Zebrafish+as+a+Model+for+Cardiovascular+and+Metabolic+Disease.">Little Fish, Big Data: Zebrafish as a Model for Cardiovascular and Metabolic Disease.</a> Physiological Reviews. 97, 889-938 (2017).</li><li>Howe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome.">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496, 498-503 (2013).</li><li>Santoriello, C., Zon, L. 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F., Mendes, R. V., Fior, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+Avatars+towards+Personalized+Medicine-A+Comparative+Review+between+Avatar+Models.">Zebrafish Avatars towards Personalized Medicine-A Comparative Review between Avatar Models.</a> Cells. 9, 293 (2020).</li><li>TRICAINE - Protocols. ZFIN Community Wiki Available from: <a target="_blank" href="https://wiki.zfin.org/display/prot/TRICAINE">https://wiki.zfin.org/display/prot/TRICAINE</a> (2021)</li><li>Zhao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Xenograft+Model+in+Zebrafish+for+High-Resolution+Investigating+Dynamics+of+Neovascularization+in+Tumors.">A Novel Xenograft Model in Zebrafish for High-Resolution Investigating Dynamics of Neovascularization in Tumors.</a> Plos One. , (2011).</li><li>Veinotte, C. J., Dellaire, G., Berman, J. 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कोई नहीं

ज़ेब्राफिश (डैनियो रेरियो) विकास और बीमारी का अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली कशेरुकी मॉडल जीव के रूप में उभर रहा है। ज़ेब्राफ़िश अत्यधिक संरक्षित आनुवंशिक (~ 70% जेनेटिक होमोलॉजी और ~ 84% रोग से संबंधित जीन) और मनुष्यों के साथ बुनियादी अंग रूपात्मक विशेषताएं साझा करता है1,2। यह संरक्षण जेब्राफिश के उपयोग को कैंसर3, 4सहित कई मानव रोगों को मॉडल करने की अनुमतिदेताहै।
जेब्राफिश की हैंडलिंग और रखरखाव चूहों की तुलना में उनके छोटे आकार, पूरे वर्ष उच्च फीकीपन और बाहरी निषेचन3,5के कारण बहुत आसान और अधिक लागत प्रभावी है। ज़ेब्राफ़िश भ्रूण को अपने जीवन के पहले 5-7 दिनों के दौरान जीवित भोजन की आवश्यकता नहीं होती है और इसे विकास, संक्रमण औरकैंसर1, 4,6,7के लिए एक प्रभावी मॉडल के रूप में इस्तेमाल किया गया है। ज़ेब्राफ़िश भ्रूण निषेचन (एचपीएफ) के बाद 48 घंटे में निकलते हैं और सभी अंगों के साथ मुक्त तैराकी वाले जानवर हैं, एक धड़कन दिल और कार्यात्मक संचार प्रणाली, यकृत, मस्तिष्क, गुर्दे का मैरो, आदि1,3। इसके अलावा, विकास के इस चरण में केवल सहज प्रतिरक्षा खेलने पर है, अनुकूली प्रतिरक्षा अभी भी विकसित हो रही है, जिससे मानव कोशिकाओं के सामान्य कुशल एनग्रेफ्टमेंट की अनुमति मिल रही है, जिसमें इम्यूनोसमझे हुए म्यूटेंट7,8के उपयोग की कोई आवश्यकता नहीं है। फिर भी, यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि सभी मानव कोशिकाएं समान रूप से9 को engraft नहीं करती हैं और उदाहरण के लिए, ल्यूकेमिया कोशिकाओं के लिए यह दिखाया गया था कि फगोसाइट्स (न्यूट्रोफिल और मैक्रोफेज) को कुशल एनग्रफ्टमेंट10के लिए समाप्त करने की आवश्यकता है।
ज़ेब्राफ़िश जेनेटिक ट्रैक्टेबिलिटी और इसके शुरुआती भ्रूणीय चरणों की ऑप्टिकल पारदर्शिता एक उच्च संकल्प पर एकल कोशिका इंट्राविटल इमेजिंग के लिए अनुमति देती है और इस प्रकार, जीव विज्ञान के विविध क्षेत्रों में अत्याधुनिक इमेजिंग तकनीकों की स्थापना के लिए। इसके अलावा, कैंसर के संदर्भ में, ये विशेषताएं मेजबान-ट्यूमर इंटरैक्शन के शुरुआती चरणों के वास्तविक समय के अध्ययन के लिए उपयोगी हैं, जैसे एंजियोजेनिक और मेटास्टैटिक क्षमता का अध्ययन करना, साथ ही जन्मजात प्रतिरक्षा प्रणाली8,9,11,12, 13के साथ बातचीत।
हालांकि छोटे ज़ेनोबेड़ा परख में मेटास्टैटिक "विकास" के लिए कोई समय नहीं है - ट्यूमर कोशिकाओं की मेटास्टैटिक क्षमता का विश्लेषण करना संभव है (यानी, आक्रमण, इंट्रावेशन, परिसंचरण में अस्तित्व, अतिवेवास और उपनिवेशीकरण जैसे मेटास्टैटिक चरणों से गुजरना उनकी दक्षता, और इसलिए वीवो में इन प्रक्रियाओं का अध्ययन करें और वास्तविक समय8,11,13,14)।
इसके जीवन चक्र की विशेषताएं जेब्राफिश को कैंसर में व्यक्तिगत चिकित्सा के लिए एक अद्वितीय मॉडल के रूप में रखें। परख कम समय में की जा सकती है और कुछ ही हफ्तों में प्राप्त परिणाम7,8, 9,11,12,15,16. इन परखों की सेलेरिटी और व्यवहार्यता डॉक्टरों और शोधकर्ताओं को ट्रांसलेशनल परिणाम प्राप्त करने की संभावना प्रदान करती है जो कैंसर रोगियों के लिए उपयोगी हो सकती है, जिनके लिए समय एक आवश्यक आवश्यकता है।
सफल ज़ेब्राफ़िश भ्रूण xenografts पैदा करने में बढ़ते प्रयासों के बावजूद, इंजेक्शन प्रक्रिया के मानकीकरण के साथ-साथ इंजेक्शन के बाद सेल व्यवहार्यता और ट्यूमर व्यवहार के मूल्यांकन की अभी भी आवश्यकता है।
इस प्रोटोकॉल में हम शोधकर्ताओं को जेब्राफिश भ्रूण में मानव कैंसर सेल लाइनों के इंजेक्शन और बाद में फिक्सेशन, इम्यूनोदाते, इमेजिंग और ट्यूमर सेल व्यवहार के मात्राकरण के लिए एक स्पष्ट और विस्तृत कदम-दर-कदम गाइड प्रदान करते हैं।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar for bacteriology</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97064-336</td>
			<td>Agar plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Caspase3Asp175 (Rabbit monoclonal)</td>
			<td>Cell Signalling Technologies</td>
			<td>9661</td>
			<td>Primary antibody for whole mount immuno staining (Dilution 1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-human HLA (Rabbit monoclonal)</td>
			<td>Abcam EP1395Y</td>
			<td>ab52922</td>
			<td>Primary antibody for whole mount immuno staining (Dilution 1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti- 488 (Rabbit monoclonal)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>35552</td>
			<td>Secondary antibody for whole mount immuno staining (Dilution 1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti- 594 (Rabbit monoclonal)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>35560</td>
			<td>Secondary antibody for whole mount immuno staining (Dilution 1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTracker Deep Red Dye</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C34565</td>
			<td>Lipophilic dye (Dilution 1:1000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTracker Green CMFDA Dye</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C2925</td>
			<td>Lipophilic dye (Dilution 1:1000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Centrifuge tube 50mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>525-0610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Centrifuge tube 15mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>525-0604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Nuclear and chromosome counterstain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser-Based Micropipette Puller P-2000</td>
			<td>Sutter-Instrument</td>
			<td></td>
			<td>Micropipette Puller</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube 1.5mL</td>
			<td>Abdos</td>
			<td>P10202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides, cut edge</td>
			<td>RS France</td>
			<td>BPB016</td>
			<td>Slides for mounting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mowiol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>81381</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pneumatic Picopump</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>PV820</td>
			<td>Microinjector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectangular cover glasses, Menzel Gl&#228;ser</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>631-9430</td>
			<td>Coverslips for mounting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SeaKem LE Agarose</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>50004</td>
			<td>Agar plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thin Wall Glass Capillaries</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>TW100-4</td>
			<td>Borosilicate capillaries</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12605036</td>
			<td>Enzymatic detachment solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaseline</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Petroleum jelly for slide sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vybrant CM-DiI Dye</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>V22888</td>
			<td>Lipophilic dye (Dilution 1:1000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vybrant DiO Cell-Labeling Solution</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>V22886</td>
			<td>Lipophilic dye (Dilution 1:1000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS Axio Zoom.V16 for Biology</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td>&#160;Fluorescence Stereo Zoom Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM 710</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td>Confocal microscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of zebrafish larval xenografts and tumor behavior analysis

ज़ेब्राफिश लार्वा ज़ेनोग्राफ्ट का व्यापक रूप से उपयोग कैंसर अनुसंधान के लिए वीवो और मानव कैंसर के वास्तविक समय के अध्ययन में करने के लिए किया जा रहा है। कैंसर विरोधी उपचारों (कीमो, रेडियोथेरेपी, और जैविक), एंजियोजेनेसिस और मेटास्टेसिस के साथ एकल सेल रिज़ॉल्यूशन के साथ प्रतिक्रिया को तेजी से कल्पना करने की संभावना, प्रीक्लिनिकल अध्ययन विकसित करने के लिए जेब्राफिश ज़ेनोबेड़ा मॉडल को एक शीर्ष विकल्प के रूप में रखता है।

जेब्राफिश लार्वा xenograft परख अन्य मॉडलों की तुलना में कई प्रयोगात्मक लाभ प्रस्तुत करता है, लेकिन शायद सबसे हड़ताली आकार पैमाने की कमी और फलस्वरूप समय है। पैमाने की यह कमी एकल सेल इमेजिंग, मानव कोशिकाओं की अपेक्षाकृत कम संख्या (बायोप्सी के साथ संगत), मध्यम उच्च-थ्रूपुट दवा स्क्रीनिंग का उपयोग करने की अनुमति देती है, लेकिन सबसे महत्वपूर्ण बात यह है कि परख के समय में महत्वपूर्ण कमी सक्षम हो। ये सभी फायदे भविष्य के व्यक्तिगत दवा अनुप्रयोगों के लिए जेब्राफिश ज़ेनोबेड़ा परख को बेहद आकर्षक बनाते हैं।

मानव ट्यूमर की व्यापक विविधता के साथ कई जेब्राफिश ज़ेनोबेड़ा प्रोटोकॉल विकसित किए गए हैं; हालांकि, जेब्राफिश लार्वा ज़ेनोग्राफ्ट को कुशलतापूर्वक उत्पन्न करने के लिए एक सामान्य और मानकीकृत प्रोटोकॉल अभी भी कमी है। यहां हम एक कदम-दर-कदम प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं, जिसमें ट्यूमर व्यवहार विश्लेषण, पूरे माउंट इम्यूनोफ्लोरेसेंस और कॉन्फोकल इमेजिंग क्वांटिफिकेशन के लिए ज़ेनोग्रफ्ट और दिशानिर्देश उत्पन्न करने के टिप्स दिए जाते हैं।

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Generation of Zebrafish Larval Xenografts and Tumor Behavior Analysis

यहां, हम ट्यूमर व्यवहार विश्लेषण, पूरे माउंट इम्यूनोफ्लोरेसेंस, और कॉन्फोकल इमेजिंग क्वांटिफिकेशन के लिए ज़ेनोग्रफ्ट और दिशानिर्देश उत्पन्न करने के सुझावों के साथ एक कदम-दर-कदम प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं।

जेब्राफिश लार्वाल Xenografts और ट्यूमर व्यवहार विश्लेषण की पीढ़ी

Zebrafish larval xenografts are being widely used for cancer research to perform in vivo and real-time studies of human cancer. The possibility of rapidly ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

ट्यूमर के विकास और मेटास्टेसिस अध्ययन के लिए Traceable पत्रकारों के साथ स्तन कैंसर के रोगी व्युत्पन्न Xenografts की लेबलिंग

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish

भ्रूणीय Zebrafish में मानव स्तन कैंसर की कोशिकाओं के आक्रामक व्यवहार

In many cases, cancer patients do not die of a primary tumor, but rather because of metastasis. Although numerous rodent models are available for studying ...

Transplantation of Zebrafish Pediatric Brain Tumors into Immune-competent Hosts for Long-term Study of Tumor Cell Behavior and Drug Response

ट्यूमर सेल व्यवहार और ड्रग रिस्पांस के दीर्घकालिक अध्ययन के लिए प्रतिरक्षा-सक्षम होस्ट में ज़ेफराफीश बाल रोग के ट्यूमर का प्रत्यारोपण

Tumor cell transplantation is an important technique to define the mechanisms controlling cancer cell growth, migration, and host response, as well as to ...

Simple and Rapid Method to Obtain High-quality Tumor DNA from Clinical-pathological Specimens Using Touch Imprint Cytology

स्पर्श छाप Cytology का उपयोग नैदानिक रोग नमूनों से उच्च गुणवत्ता वाले ट्यूमर डीएनए प्राप्त करने के लिए सरल और तेजी से विधि

It is critical to determine the mutational status in cancer before administration and treatment of specific molecular targeted drugs for cancer patients. ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

अलगाव और सरकोमा रोगी व्युत्पन्न Xenografts से ट्यूमर शुरू कोशिकाओं की विशेषता

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

Spheroids, कॉलोनी के गठन की परख, और Zebrafish Xenografts द्वारा विरोधी अनंतमूलि OT48 की सी गतिविधि के नैदानिक मूल्यांकन

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

अल्ट्रासाउंड निर्देशित ऊतक के उपयोग-जैविक रूप से प्रासंगिक मेटास्टेटिक ट्यूमर की स्थापना के लिए सेलुलर आरोपण निर्देशित Xenografts

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

In Vivo Imaging and Quantitation of the Host Angiogenic Response in Zebrafish Tumor Xenografts

ज़ेब्राफ़िश ट्यूमर Xenografts में मेजबान एंजियोजेनिक प्रतिक्रिया के Vivo इमेजिंग और क्वांटिटेशन में

Tumor angiogenesis is a key target of anti-cancer therapy and this method has been developed to provide a new model to study this process in vivo. A ...

Testing Targeted Therapies in Cancer using Structural DNA Alteration Analysis and Patient-Derived Xenografts

संरचनात्मक डीएनए परिवर्तन विश्लेषण और रोगी-व्युत्पन्न Xenografts का उपयोग कर कैंसर में लक्षित चिकित्सा का परीक्षण

We present here an integrative approach for testing efficacy of targeted therapies that combines the next generation sequencing technolo-gies, therapeutic ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

जेब्राफिश में प्राथमिक रोगी व्युत्पन्न ट्यूमर ज़ेनोग्राफ्ट की दवा जांच

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...