Name: generation of zebrafish larval xenografts and tumor behavior analysis
Uploaded: 2021-06-19T13:00:00
Duration: 12 min 8 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Zebrafish Larval Xenografts and Tumor Behavior Analysis at JoVE.com

Vi takker Champalimaud Foundation, Congento (LISBOA-01-0145-FEDER-022170, finansiert av FCT/Lisboa2020) for finansiering. FCT-stipendiatstillinger for VP (SFRH/BD/118252/2016), MML (PD/BD/138203/2018). Alle medlemmer av Fior Lab for kritiske diskusjoner; B. Costa og C. Rebelo de Almeida for deling av data; og våre Lab-medlemmer C. Rebelo de Almeida, M. Barroso og L. Leite for deres deltakelse i videoen. Vi vil gjerne takke CF Fish Facility (C. Certal, J. Monteiro et al) og Champalimaud Communication, Events and Outreach team spesielt Alexandre Azinheira for den fantastiske filmproduksjon og Catarina Ramos og Teresa Fernandes for deres hjelp.

<ol>
	<li>Gut, P., Reischauer, S., Stainier, D. Y. R., Arnaout, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Little+Fish,+Big+Data:+Zebrafish+as+a+Model+for+Cardiovascular+and+Metabolic+Disease.">Little Fish, Big Data: Zebrafish as a Model for Cardiovascular and Metabolic Disease.</a> Physiological Reviews. 97, 889-938 (2017).</li><li>Howe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome.">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496, 498-503 (2013).</li><li>Santoriello, C., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hooked!+Modeling+human+disease+in+zebrafish.">Hooked! Modeling human disease in zebrafish.</a> Journal of Clinical Investigation. 122, 2337-2343 (2012).</li><li>Stoletov, K., Klemke, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catch+of+the+day:+zebrafish+as+a+human+cancer+model.">Catch of the day: zebrafish as a human cancer model.</a> Oncogene. 27, 4509-4520 (2008).</li><li>Weintraub, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=All+eyes+on+zebrafish.">All eyes on zebrafish.</a> Lab Animals. 46, 323-326 (2017).</li><li>Novoa, B., Figueras, A., Lambris, J. D., Hajishengallis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+Model+for+the+Study+of+Inflammation+and+the+Innate+Immune+Response+to+Infectious+Diseases.">Zebrafish: Model for the Study of Inflammation and the Innate Immune Response to Infectious Diseases.</a> Current Topics in Innate Immunity II. , 253-275 (2012).</li><li>Fazio, M., Ablain, J., Chuan, Y., Langenau, D. M., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+patient+avatars+in+cancer+biology+and+precision+cancer+therapy.">Zebrafish patient avatars in cancer biology and precision cancer therapy.</a> Nature Reviews Cancer. 20, 263-273 (2020).</li><li>Fior, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+functional+and+chemosensitive+profiling+of+combinatorial+colorectal+therapy+in+zebrafish+xenografts.">Single-cell functional and chemosensitive profiling of combinatorial colorectal therapy in zebrafish xenografts.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114, 8234-8243 (2017).</li><li>P&#243;voa, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immune+evasion+revealed+in+a+colorectal+zebrafish+xenograft+model.">Innate immune evasion revealed in a colorectal zebrafish xenograft model.</a> Nature Communications. 12, 1156 (2021).</li><li>Galletti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+Macrophages+Sensitizes+Chronic+Lymphocytic+Leukemia+to+Apoptosis+and+Inhibits+Disease+Progression.">Targeting Macrophages Sensitizes Chronic Lymphocytic Leukemia to Apoptosis and Inhibits Disease Progression.</a> Cell Reports. 14, 1748-1760 (2016).</li><li>Rebelo de Almeida, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+xenografts+as+a+fast+screening+platform+for+bevacizumab+cancer+therapy.">Zebrafish xenografts as a fast screening platform for bevacizumab cancer therapy.</a> Communications Biology. 3, 1-13 (2020).</li><li>Varanda, A. B., Martins-Logrado, A., Godinho Ferreira, M., Fior, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+Xenografts+Unveil+Sensitivity+to+Olaparib+beyond+BRCA+Status.">Zebrafish Xenografts Unveil Sensitivity to Olaparib beyond BRCA Status.</a> Cancers. 12, 1769 (2020).</li><li>Osmani, N., Goetz, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiscale+Imaging+of+Metastasis+in+Zebrafish.">Multiscale Imaging of Metastasis in Zebrafish.</a> Trends in Cancer. 5, 766-778 (2019).</li><li>Hyenne, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+the+Fate+of+Tumor+Extracellular+Vesicles+at+High+Spatiotemporal+Resolution+Using+the+Zebrafish+Embryo.">Studying the Fate of Tumor Extracellular Vesicles at High Spatiotemporal Resolution Using the Zebrafish Embryo.</a> Developmental Cell. 48, 554-572 (2019).</li><li>Costa, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developments+in+zebrafish+avatars+as+radiotherapy+sensitivity+reporters+-+towards+personalized+medicine.">Developments in zebrafish avatars as radiotherapy sensitivity reporters - towards personalized medicine.</a> EBioMedicine. 51, 102578 (2020).</li><li>Costa, B., Estrada, M. F., Mendes, R. V., Fior, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+Avatars+towards+Personalized+Medicine-A+Comparative+Review+between+Avatar+Models.">Zebrafish Avatars towards Personalized Medicine-A Comparative Review between Avatar Models.</a> Cells. 9, 293 (2020).</li><li>TRICAINE - Protocols. ZFIN Community Wiki Available from: <a target="_blank" href="https://wiki.zfin.org/display/prot/TRICAINE">https://wiki.zfin.org/display/prot/TRICAINE</a> (2021)</li><li>Zhao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Xenograft+Model+in+Zebrafish+for+High-Resolution+Investigating+Dynamics+of+Neovascularization+in+Tumors.">A Novel Xenograft Model in Zebrafish for High-Resolution Investigating Dynamics of Neovascularization in Tumors.</a> Plos One. , (2011).</li><li>Veinotte, C. J., Dellaire, G., Berman, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hooking+the+big+one:+the+potential+of+zebrafish+xenotransplantation+to+reform+cancer+drug+screening+in+the+genomic+era.">Hooking the big one: the potential of zebrafish xenotransplantation to reform cancer drug screening in the genomic era.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 7, 745-754 (2014).</li><li>Haldi, M., Ton, C., Seng, W. L., McGrath, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+melanoma+cells+transplanted+into+zebrafish+proliferate,+migrate,+produce+melanin,+form+masses+and+stimulate+angiogenesis+in+zebrafish.">Human melanoma cells transplanted into zebrafish proliferate, migrate, produce melanin, form masses and stimulate angiogenesis in zebrafish.</a> Angiogenesis. 9, 139-151 (2006).</li><li>Zon, L. I., Peterson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+New+Age+of+Chemical+Screening+in+Zebrafish.">The New Age of Chemical Screening in Zebrafish.</a> Zebrafish. 7, 1 (2010).</li><li>Mycoplasma Contamination of Cell Cultures. InvivoGen Available from: <a target="_blank" href="https://www.invivogen.com/review-mycoplasma">https://www.invivogen.com/review-mycoplasma</a> (2016)</li><li>van Zijl, F., Krupitza, G., Mikulits, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+steps+of+metastasis:+cell+invasion+and+endothelial+transmigration.">Initial steps of metastasis: cell invasion and endothelial transmigration.</a> Mutation Research. 728, 23-34 (2011).</li></ol>

Den økende betydningen av sebrafisken som modell for kreftutvikling og legemiddelscreening har resultert i en rekke publikasjoner3,4,7,13,14,16,18,19,20,21. Imidlertid er injeksjon av kreftceller i sebrafiskembryoer en teknikk som krever et høyt nivå av fingerferdighet som kan være utfordrende for forskere. I denne protokollen tar vi sikte på å gi praktisk informasjon og noen tips som kan bidra til å overvinne de første utfordringene med å sette opp sebrafisk embryo xenografts.
Cellehåndtering før injeksjon Denne optimaliserte protokollen for generering av sebrafisk xenografts med cellelinjer kan tilpasses ulike typer (kreft) celler med forskjellige morfologier. Vi anbefaler at alle cellelinjene som brukes til sebrafisk xenografts er mykoplasmafrie. I motsetning til andre bakterielle forurensninger genererer tilstedeværelsen av mykoplasma i cellekultur ikke endringer som lett kan oppdages under mikroskopet22. Mykoplasmaforurensning kan påvirke engraftmentpotensialet til cellelinjene, deres følsomhet for narkotika, samt levedyktigheten til sebrafiskembryoene.
Selv om celler kan fortsette å spre seg i en lengre periode, kan deres fenotype og genotype være utsatt for endringer. Det er viktig å bli kjent med morfologien og oppførselen til cellelinjene i kulturen. Vi anbefaler å holde antall cellepassasjer etter opptining mellom 3-12 for å få reproduserbare resultater. Dermed bør vanlige mykoplasma tester utføres.
Celler bør være i loggfasen (eksponentiell vekstfase før de når sammenløpet ~ 70%) på injeksjonsdagen. Dette vil muliggjøre en tilstrekkelig engraftment og riktig utvikling av svulstens særegne kjennetegn. For å forhindre variasjon i fenotypen av celler i xenograft, er det viktig å opprettholde sammenløpet for injeksjonskonstant mellom eksperimenter. Antall injiserte celler kan tilpasses egenskapene til hver cellelinje, da noen kan kreve høyere tetthet av injeksjon for å trives i sebrafiskembryoene.
Hensyn ved cellemerking For bedre å visualisere menneskelige tumorceller for injeksjon og fremtidig analyse, kan tumorceller merkes med fluorescerende fargestoffer. På grunn av forskjeller i cellulær størrelse varierer det totale antall celler / cm2 i tilhengerkulturer mellom cellelinjer. Dette vil påvirke effekten av fargingsprotokollen samt antall celler høstet til injeksjon. Store celler som gir lave tall per kolbe (dvs. Hs578T) eller vokser i klynger (dvs. BFTC905) vil kreve sammenslåing av flere kolber for et enkelt eksperiment. I dette tilfellet bør farging av celler ikke utføres direkte i kolben, da dette vil føre til bruk av store mengder fargestoff (høy pris). På den annen side kan celler som er svært følsomme for overdreven sykluser med sentrifugering, samt de som gir høye tall per kolbe (dvs. HCT116) farges direkte i kolben og deretter løsnes med EDTA/celleskraper (for mer informasjon se tabell 1).
Når det er mulig, i stedet for å bruke en enzymatisk tilnærming, bruk EDTA til å løsne cellene på injeksjonsdagen, slik at cellene gjenoppretter cellecellekryssene raskere og blir utsatt for mindre sentrifugeringstrinn. Likevel, hvis cellene er følsomme for EDTA, veldig tilhenger eller vokser i klynger - kan en enzymatisk metode brukes. Optimaliseringen av den ideelle injeksjonskonsentrasjonen samt injeksjonsmediet er avhengig av egenskapene til hver cellelinje, og det kan derfor trenge noen justeringer (Tabell 1).
Mikroinjeksjonskalibrering I motsetning til levering av oligonukleotider eller legemidler i sebrafiskembryoet, brukes ikke en graticule til å kalibrere nålen når du arbeider med cellelinjer for xenografts. Etter en tid under injeksjonen vil cellene begynne å tette, og det er nødvendig å kutte spissen av nålen for å øke diameteren eller endre nålen helt. Denne prosedyren hindrer graticule kalibrering.
For å løse dette problemet reguleres antall celler som dispenseres av utkasttrykk og tid som trengs for å nå en størrelse som ligner embryoøyet innen 1-3 pulser. Deretter, for å kontrollere tumorstørrelsen ytterligere, ved 1 dpi, sorteres xenografts i henhold til tumorstørrelsen som vist i figur 6 B-B". Som representert i figur 6C-eksemplet, er denne sorteringsmetoden effektiv for å redusere variasjonen av tumorstørrelser: Hvis vi samler dem alle sammen (+, ++, +++) er STEV ~ dobbelt så stor som ++-klassen (~906 celler til ~422 celler) og koeffisientvariasjonen er ~ 31,9% sammenlignet med 14,5% i ++klassen. Siden referansen til injeksjon er volum, varierer det totale antall celler mye mellom celletyper - avhengig av størrelsen og formen på cellene. For eksempel produserer store celler med mye cytoplasma som brystkreft Hs578T, mye mindre svulster (~ 600 celler). Hver cellelinje krever også forskjellig antall celler. For eksempel har HT29 CRC og RT112 urinblærekreftcellelinjer vist at jo høyere antall celler som injiseres, jo høyere er sebrafiskdødeligheten. Derfor er det nødvendig med en periode med optimalisering mens du utvikler xenografts for å teste om cellelinjen har toksiske effekter i embryoet eller krever høyere / lavere tetthet av injeksjon.
Injeksjonssted En av de vanligste avvikene ved generering av sebrafisk embryo xenografts er injeksjonsstedet. Eggeplommen er vanligvis stedet for injeksjon på grunn av sin enkle tilgjengelighet. Vi har imidlertid observert at celler injisert i eggeplommen har en høyere tendens til å dø. Selv om det er teknisk vanskeligere, anbefaler vi å injisere i PVS og så langt som mulig fra hjertet. Innenfor PVS kan celler aggregere, rekruttere kar og immunceller, og migrere, intravasere, ekstravasat og danne mikrometastase, hvis de viser metastatiske egenskaper8,11.
Effektivitet i engraftment Forskjeller i engraftment effektivitet og tumor størrelse blant cellelinjer på 4 dpi forventes på grunn av deres distinkte grader av basal celle død / overlevelse / spredning, men også på grunn av medfødt immunogenisitet som hver celle linje kan vise9.
Metastasering Metastase består av en multistep kaskade av hendelser som kan deles inn i to vilkårlige stadier. I første fase må tumorceller løsne fra det primære stedet, migrere og invadere tilstøtende vev og deretter intravasere inn i blodet. I andre fase må tumorceller overleve i omløp, ekstravasere fra blodet eller lymfekarene, og til slutt kolonisere på sekundære steder23. For å skille mellom disse tidlige og sene hendelsene og adressere potensialet / ferdighetene til de forskjellige tumorcellene for å utføre disse trinnene, designet vi en enkel analyse.
Generelt, når de injiseres i PVS, kan tumorceller komme direkte inn i sirkulasjon og deretter bli fysisk fanget i kaudalt hematopoietisk vev (CHT) (haleregion). Men i henhold til egenskapene til hver tumorcelle - har vi sett at noen tumorceller forblir på CHT 4 dpi og er i stand til å danne mikrometastasis mens andre tumorceller forsvinner (ryddet etter å ha blitt fanget i CHT).
Derfor, ved å sammenligne mikrometastaseeffektiviteten (ved 4 dpi) når celler ble plassert direkte i sirkulasjon - CIRC (celler trenger bare å gå gjennom de sene trinnene i metastase) vs. når ikke - NO CIRC (celler må gå gjennom tidlige og sene trinn for å kunne danne en mikrometastase) kan vi vurdere deres tidlige eller sene metastatiske potensial. Vi har observert tumorceller som effektivt kan danne mikrometastase i CHT i begge gruppene (CIRC og NO CIRC), noe som tyder på at disse cellene har kapasitet til å gjennomgå alle trinnene i den metastatiske kaskaden (SW480 og MDA-MB-468 for eksempel)8,11. I motsetning har andre tumorceller et svært lavt metastatisk potensial i begge gruppene, som nesten aldri gjør mikrometastase, selv når de injiseres i sirkulasjon (dvs. synlig i CHT ved 24 hpi, men ved 4 dpi er de ikke lenger der, Hs578T for eksempel)8. Imidlertid har vi tydelig funnet en annen gruppe - en som bare er i stand til å danne mikrometastasis når den injiseres i sirkulasjon (vi kan bare observere mikrometastasis i CIRC-gruppen). Dette antyder at disse cellene har lav effektivitet i å utføre de første trinnene i den metastatiske kaskaden, men på den annen side er i stand til å overleve i omløp, ekstravasere og kolonisere et fjernt sted.
Immunstaining og avbildning Før fiksering kan denne injeksjonsprotokollen brukes til andre levende avbildningsmetoder som levende differensialinterferenskontrast (DIC) mikroskopi, spinnende diskmikroskopi, høyoppløselig levende konføling og lysarkmikroskopi, etc.
Døde celler og cellulære rusk vises lyse når de observeres gjennom det fluorescerende stereomikroskopet og kan forveksles med levende celler, spesielt hvis målet med studien vurderer cellelinjenes metastatiske potensial. Vi vil understreke viktigheten av å utføre konfikal avbildning med spesifikke levedyktighetsmarkører og DAPI for å vurdere overlevelsestilstanden til svulsten og mikrometastase. Det er også grunnleggende å bruke spesifikke menneskelige antistoffer for å oppdage menneskelige celler som antimenneskelig mitokondrier eller antimenneskelig HLA. Når du implementerer protokollen, trene eksperimenterer øyne ved å sammenligne farging i stereomikroskopet med de konfekt bilder. Etter en tid kan eksperimenter tydelig skille rusk fra levende celler i det fluorescerende stereomikroskopet.
Selv om andre metoder for å kvantifisere tumorbyrde som hele fluorescensområdet er mye brukt, anbefaler vi å utføre hele mount immunostaining og konfokal avbildning som en mer nøyaktig metode. Ikke bare effektiviteten av lipofil fargestofffarging er svært variabel (dvs. noen celler er veldig godt farget, mens andre ikke er - sannsynligvis på grunn av lipidinnholdet i membranene), men også mange ganger lipofile fargestoffer danner aggregater, og døde celler har en tendens til å være lysere - og skaper flere gjenstander som kan forveksles med levende celler.
Celler kan transduseres med fluorescerende proteiner for å hjelpe til med sporingen og for å hoppe over cellemerking. Sørg imidlertid for at de transinduserte og ikke-transinduserte cellene gir de samme resultatene i sebrafisk xenografts.
I tillegg kan makrofager fagocytt disse fluorescerende celleavfallene bli fluorescerende merket og migrere, og generere falske positive metastatiske celler. Dermed anbefaler vi en rekke analytiske verktøy, som selvfølgelig kan utvides til mange andre avlesninger for en mer nøyaktig tolkning av tumoradferd:
<ul style="list-style-type: square;"><li>
Spredning - kvantifisering av mititotiske figurer med DAPI eller anti-pHH3Ser10 antistoff (Merck Millipore Cat. #06-570),</li>
	<li>
Celledød ved apoptose- antistoff antiaktivert Caspase3Asp175 (Cell Signalling Technologies Cat. #9661) eller tilsvarende,</li>
	<li>
Tumorstørrelse - DAPI-telling - menneskelige tumorceller viser en veldig distinkt kromatinorganisasjon, slik at de lett skiller seg fra sebrafiskcellene og er alltid mulig å dobbeltsjekke med fargestoffet (når du trener øyet),</li>
	<li>
For metastatiske studier, for entydig å oppdage menneskelige celler, - anti-menneskelig HLA (Abcam EP1395Y Cat. #ab52922), anti-menneskelige mitokondrier (Merck Millipore Cat. #MAB1273- Klone 113-1).</li>
</ul>For et konfokalt oppkjøp med 5 μm intervall mellom skiver i Z-stabelen av kontrollkreftcellene HCT116 (gjennomsnittlig kjernefysisk størrelse på 10-12 μm diameter) med DAPI-motstaining, har vi observert at ~ 50% av cellene deles mellom to påfølgende skiver. Derfor, hvis hver skive telles, er det stor risiko for å telle de samme cellene to ganger. Å gå frem og tilbake mellom skiver for å unngå problemer med kvantifisering resulterer i en tidkrevende og feilutsatt teknikk. For å lette kvantifiseringen av det totale antall celler og gi mer reproduserbarhet mellom forskere, opprettet vi tumorstørrelsesformelen som tidligere er beskrevet i denne protokollen8.
Vi inkluderte et korreksjonsnummer (1,5) for å gjøre rede for ~50% cellene som deles mellom stykker. Vi fant at den gjennomsnittlige feilen ved manuell telling av hele svulsten mellom forskere var 20%. To forskere som brukte formelen hadde en 2% feil. Bruken av denne formelen har en nøyaktighetsgrad på 93% og 98% reproduserbarhetshastighet. Vi testet også automatiserte metoder, men de viste en feil høyere enn 50% forårsaket av terskelinnstillinger.
På grunn av egenskapene til apoptotiske celler er kvantifiseringen av aktiverte Caspase 3-celler vanskeligere. For å redusere antall feil og variasjoner i resultatene, anbefaler vi at kontroll- og eksperimentelle prøver telles av samme forsker. I tillegg, når man lærer denne teknikken, må en ny forsker telle bilder som allerede var kvantifisert av mer erfarne forskere for å sammenligne resultater og trene.
Lengden på analysen kan forlenges om nødvendig. Det er imidlertid viktig å vurdere at sebrafisk larver krever levende fôring fra ~ 7 dager etter befruktning (5 dager etter injeksjon). I tillegg kan dyrevelferdsretningslinjene og forskriftene som brukes på larver eldre enn 6 dager etter befruktning variere.
Denne protokollen gir nyttige verktøy for å gjøre det mulig for en enkelt forsker å injisere omtrent ~ 200-300 sebrafisk larver per time; og resultater for hele analysen, inkludert analyse og statistisk tolkning, oppnådd om tre uker. Vi håper at denne protokollen kan hjelpe forskere med å bli eksperter på å generere sebrafisk xenografts. Det er ikke lett; du må øve, men du kommer dit. lykke til!

Sebrafisk (Danio rerio) dukker opp som en kraftig virveldyrmodellorganisme for å studere utvikling og sykdom. Sebrafisk deler svært konservert genetisk (~ 70% genetisk homologi og ~ 84% sykdomsrelaterte gener) og grunnleggende organmorfologiske egenskaper med mennesker1,2. Denne bevaringen tillater bruk av sebrafisk for å modellere flere menneskelige sykdommer, inkludert kreft3,4.
Håndtering og vedlikehold av sebrafisk er mye enklere og mer kostnadseffektivt enn mus på grunn av deres lille størrelse, høy fecundity hele året og ekstern befruktning3,5. Sebrafisk embryoer krever ikke levende fôring i løpet av de første 5-7 dagene av livet og har blitt brukt som en effektiv modell for utvikling, infeksjon og kreft1,4,6,7. Sebrafisk embryoer klekkes på 48 timer etter befruktning (hpf) og er frittsvømmende dyr med alle organer dannet, et bankende hjerte og funksjonelt sirkulasjonssystem, lever, hjerne, nyremarg, etc.1,3. Også på dette utviklingsstadiet er bare medfødt immunitet i spill, adaptiv immunitet utvikler seg fortsatt, noe som gir en generell effektiv engraftment av menneskelige celler uten behov for bruk av immunkompromitterte mutanter7,8. Likevel er det viktig å merke seg at ikke alle menneskelige celler engraft like9, og at for eksempel for leukemiceller ble det vist at fagocytter (nøytrofiler og makrofager) må tømmes for effektiv engraftment10.
Sebrafiskgenetisk tractability og den optiske gjennomsiktigheten av sine tidlige embryonale stadier tillater enkeltcellet intravital avbildning med høy oppløsning og dermed for etablering av toppmoderne bildeteknikker innen ulike biologiområder. Videre, i sammenheng med kreft, er disse funksjonene nyttige for sanntidsstudier av de tidligste stadiene av vertssvulstinteraksjoner, som å studere angiogent og metastatisk potensial, samt interaksjoner med det medfødte immunforsvaret8,9,11,12,13.
Selv om det i den korte xenograftanalysen ikke er tid for metastatisk "evolusjon"- er det mulig å analysere tumorcellenes metastatiske kapasitet (dvs. deres effektivitet til å gå gjennom metastatiske trinn som invasjon, intravasasjon, overlevelse i omløp, ekstravasasjon og kolonisering, og derfor studere disse prosessene in vivo og i sanntid8,11,13,14).
Egenskapene til livssyklusen plasserer sebrafisken som en unik modell for personlig medisin i kreft. Analyser kan utføres i et kortere tidsrom og resultater oppnådd i noen uker7,8,9,11,12,15,16. Celerity og gjennomførbarhet av disse analysene gir leger og forskere muligheten til å oppnå oversettelsesresultater som kan være nyttige for kreftpasienter, for hvem tid er et viktig behov.
Til tross for de økende forsøkene på å generere vellykkede sebrafisk embryo xenografts, er det fortsatt behov for standardisering av injeksjonsprosedyren samt evaluering av celle levedyktighet og tumoradferd etter injeksjon.
I denne protokollen gir vi forskere en klar og detaljert trinnvis guide for injeksjon av menneskelige kreftcellelinjer i sebrafiskembryoer og etterfølgende fiksering, immunsitting, avbildning og kvantifisering av tumorcelleadferd.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar for bacteriology</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97064-336</td>
			<td>Agar plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Caspase3Asp175 (Rabbit monoclonal)</td>
			<td>Cell Signalling Technologies</td>
			<td>9661</td>
			<td>Primary antibody for whole mount immuno staining (Dilution 1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-human HLA (Rabbit monoclonal)</td>
			<td>Abcam EP1395Y</td>
			<td>ab52922</td>
			<td>Primary antibody for whole mount immuno staining (Dilution 1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti- 488 (Rabbit monoclonal)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>35552</td>
			<td>Secondary antibody for whole mount immuno staining (Dilution 1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti- 594 (Rabbit monoclonal)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>35560</td>
			<td>Secondary antibody for whole mount immuno staining (Dilution 1:200)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTracker Deep Red Dye</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C34565</td>
			<td>Lipophilic dye (Dilution 1:1000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTracker Green CMFDA Dye</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C2925</td>
			<td>Lipophilic dye (Dilution 1:1000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Centrifuge tube 50mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>525-0610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Centrifuge tube 15mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>525-0604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Nuclear and chromosome counterstain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser-Based Micropipette Puller P-2000</td>
			<td>Sutter-Instrument</td>
			<td></td>
			<td>Micropipette Puller</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube 1.5mL</td>
			<td>Abdos</td>
			<td>P10202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides, cut edge</td>
			<td>RS France</td>
			<td>BPB016</td>
			<td>Slides for mounting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mowiol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>81381</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pneumatic Picopump</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>PV820</td>
			<td>Microinjector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectangular cover glasses, Menzel Gl&#228;ser</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>631-9430</td>
			<td>Coverslips for mounting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SeaKem LE Agarose</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>50004</td>
			<td>Agar plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thin Wall Glass Capillaries</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>TW100-4</td>
			<td>Borosilicate capillaries</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12605036</td>
			<td>Enzymatic detachment solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaseline</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Petroleum jelly for slide sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vybrant CM-DiI Dye</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>V22888</td>
			<td>Lipophilic dye (Dilution 1:1000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vybrant DiO Cell-Labeling Solution</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>V22886</td>
			<td>Lipophilic dye (Dilution 1:1000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS Axio Zoom.V16 for Biology</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td>&#160;Fluorescence Stereo Zoom Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM 710</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td>Confocal microscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of zebrafish larval xenografts and tumor behavior analysis

Zebrafish larval xenografts blir mye brukt til kreftforskning for å utføre in vivo og sanntidsstudier av human kreft. Muligheten for raskt å visualisere responsen på antikreftbehandlinger (kjemo, strålebehandling og biologisk), angiogenese og metastase med enkeltcelleoppløsning, plasserer sebrafisk xenograftmodellen som et toppvalg for å utvikle prekliniske studier.

Sebrafisk larval xenograft analysen presenterer flere eksperimentelle fordeler sammenlignet med andre modeller, men sannsynligvis er den mest slående reduksjonen av størrelsesskala og dermed tid. Denne reduksjonen av skala tillater enkeltcelleavbildning, bruk av et relativt lavt antall menneskelige celler (kompatibel med biopsier), middels høy-gjennomstrømning narkotika screenings, men viktigst av alt muliggjør en betydelig reduksjon av tiden av analysen. Alle disse fordelene gjør sebrafisk xenograftanalysen ekstremt attraktiv for fremtidige personlige medisinapplikasjoner.

Mange sebrafisk xenograft protokoller har blitt utviklet med et bredt mangfold av menneskelige svulster; Imidlertid mangler fortsatt en generell og standardisert protokoll for effektivt å generere sebrafisk larval xenografts. Her tilbyr vi en trinnvis protokoll, med tips for å generere xenografter og retningslinjer for tumoradferdsanalyse, helmontert immunfluorescens og konfokal bilde kvantifisering.

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Zebrafish Larval Xenografts and Tumor Behavior Analysis at JoVE.com

Generation of Zebrafish Larval Xenografts and Tumor Behavior Analysis

Her tilbyr vi en trinnvis protokoll, med tips for å generere xenografter og retningslinjer for tumoradferdsanalyse, helmontert immunfluorescens og konfokal bilde kvantifisering.

Generasjon av sebrafisk Larval Xenografts og tumor atferdsanalyse

Zebrafish larval xenografts are being widely used for cancer research to perform in vivo and real-time studies of human cancer. The possibility of rapidly ...

Sebrafisk xenografts blir mye brukt til kreftforskning. Du kan ta menneskelige tumorceller og injisere det i små larver sebrafisk, eller til og med inn i voksne. Her er det vi presenterer en trinnvis protokoll av larvemodellen, hvor vi kan studere flere menneskelige kreftmerker i et levende dyr.Du kan studere spredning, du kan studere angiogenese, du kan studere metastase, og også interaksjoner innen tumormikromiljøet. Og en stor fordel er at du kan studere dette på veldig kort tid. Bare fire dager, for eksempel.En annen stor fordel er at du kan studere dette live med encellet oppløsning, ved hjelp av et konfokalt eller et lysarkmikroskop. Du kan studere hvordan celler migrerer, hvordan celler samhandler med hverandre, eller til og med hvordan de snakker med hverandre. Så det er en veldig kraftig modell for å studere kreftbiologi.Zebrafish xenografts kan brukes til å studere respons på anti-kreft terapier, som kjemoterapi, strålebehandling, eller til og med målrettede terapier med antistoffer. Og til slutt kan også denne protokollen tilpasses for å bruke pasientavledede celler fra en kirurgisk prøve, eller til og med fra biopsier, og deretter generere sebrafiskavatarene. Oppsett for injeksjon.To uker før injeksjon, utvide cellene i kulturen. Start med overflødige celler og overflødig fisk til de blir dyktige med teknikken, siden mange celler og fisk vil gå tapt under trening. Tabell en av de medfølgende PDF-ene har en detaljert guide for de optimale prosentandelene av in-vitro-sammenløp for injeksjon av flere cellelinjer.Tre dager før injeksjonen, kryss sebrafisken av ønsket bakgrunn. 24 timer før injeksjon. Rengjør sebrafisk embryoplatene.Kast alle døde og ikke-utviklede embryoer og oppdater E3-mediet. Kast cellekulturmediet i cellekulturrommet. Vask en gang med PBS 1X for å fjerne dødcellene og tilsett friskt medium.Forbered verktøyene for injeksjonsprosedyren, for eksempel mikroinjeksjonsnåler, agaroseplater og hårnåler for å justere embryoene til injeksjon. For plateforberedelse, hell ett lag oppløst 2% agarose i lokket på en ren Petri-tallerken. La det polymerisere og ved hjelp av en linjal, lag tre til fire rette agarose linjer for justering av embryoene.Injeksjonsdag. Skill de klekkede embryoene fra unhatched egg. Å legge Pronase til embryomediet på dette stadiet kan øke klekkingen.Plasser embryoene i inkubatoren ved 28 grader Celsius til injeksjon. Cellemerking til injeksjon. For å hjelpe til med å etablere en reproduserbar cellemerkingsteknikk, sjekk tabellene en og to av den skriftlige protokollen for en samling av en liste over cellelinjer og flere merkingsløsninger.Fjern cellekulturmediet og vask kolben to ganger med PBS 1X. Merk cellene med et lipofilt fargestoff, unngå eksponering for lys og inkuber kolben ved 37 grader. Du kan også velge å merke cellene i et 1,5 ml mikrosenterrør ved løsrivelse.Fjern cellemerkingsløsningen og vask cellene med PBS 1X for å ta ut overflødig fargestoff. Tilsett det tilsvarende løsningen, og inkuber cellene ved 37 grader Celsius. Forenkle løsningen ved å pusse kolben med en steril celleskraper og samle cellene med en serologisk pipette.Overfør cellene til 1,5 ml mikrosenterrør og sentrifuge. Kast supernatant og re-suspendere pellet med cellekultur medium. Kvantifisere celle levedyktighet ved hjelp av et Neubauer kammer med trypan blå ekskludering eller annen metode for valg.Sentrifuger og re-suspendere cellene i injeksjonsmediet. De anbefalte konsentrasjonene av celler i medium finnes i tabell en av manuskriptet. Fra dette tidspunktet og utover må cellene holdes på is.Injeksjonsprosedyrer. Bedøv embryoene i trikain 1X i 5 minutter. Overfør deretter en liten mengde bedøvede embryoer til en agaroseplate og juster dem ved hjelp av en hårnålsløyfe.Sørg for å opprettholde avstand mellom embryoene. Spesielt mellom eggeplommen til den ene og hodet til den neste. For å forhindre dødelighet, sørg for at de justerte embryoene ikke tørker ut i agaroseplaten ved å forsiktig legge til en til tre dråper trikain 1X-løsning til platen.Trykk lett på mikrosenterrøret for å suspendere cellene på nytt. Last injeksjonsnålen tilbake med en cellefjæring ved hjelp av en Mikroloaderspiss, unngå luftbobler, da de kan kompromittere embryoenes integritet. Åpne lufttrykkventilen, sett opp mikroinjektoren, og plasser mikroinjeksjonsnålen forsiktig inn i holderen.Klipp mikroinjeksjonsnålen nær spissen. Gjennombor forsiktig embryoets eggeplomme, senk nålens vinkel og skyv forsiktig til nålens spiss når perivitellinerommet. Når spissen er i perivitellineområdet, injiser cellene.Prøv å injisere et volum celler som ligner på størrelsen på embryoets øye, og så langt som mulig fra hjertet for å forhindre hjerteødem. Juster mikroinjektortrykket om nødvendig. Overfør de injiserte embryoene til en ren Petri-tallerken med trikain 1X-løsning og la dem hvile i fem til 10 minutter.Dette vil gi såret tid til å lukke. Fjern trikain 1X-løsningen og tilsett ferskT E3-medium. Deretter inkuberer embryoene ved 34 grader Celsius.Denne temperaturen vil tillate overlevelsen til både sebrafiskembryoene og de menneskelige tumorcellene. Metastatisk analyse. Hvis du vil studere det metastatiske potensialet til cellelinjene dine, på rundt en time etter injeksjon, kan du screene de injiserte embryoene på et fluorescenssteremkroroskop, og sortere dem i to grupper i henhold til fravær eller tilstedeværelse av kreftceller i omløp.En dag etter injeksjon. På et fluorescens stereomikroskop, analyser forsiktig hvert embryo og velg de med riktig injiserte svulster. Sorter de valgte xenograftene i henhold til tumorstørrelsen.Bruk størrelsen på øyet til sammenligning. Kast bort embryoer med unormal morfologi, hjerte- eller eggeplommeødem, xenografter med svært få kreftceller, eller de med kreftceller bare inne i eggeplommen. Fordel xenograftene i henhold til ønsket eksperimentell layout og start legemiddelanalysen.Bytt ut stoffene og E3-mediet daglig. Inkuber xenograftene, opprettholde temperaturen på 34 grader Celsius til slutten av analysen. Fire dager etter injeksjon.På den siste dagen av analysen bedøves xenograftene med trikain 1X-løsning, og juster dem forsiktig på agarplaten. Kast eventuelle døde eller hovne xenografter. Disse xenograftene vurderes ikke for engraftment-kvantifisering.På et fluorescens stereomikroskop analyserer du forsiktig hver xenograft og vurderer fraværet eller tilstedeværelsen av svulster i perivitellinerommet. I følge det eksperimentelle oppsettet, velg xenografts av interesse og euthanize dem med trikain 25X. Fest dem i 4% formaldehyd i minst 4 timer ved romtemperatur for å fortsette med immunstaining.Ellers, lagre over natten på fire grader Celsius og på neste dag, erstatte formaldehyd med 100% metanol. Xenografts fast i 100% metanol kan lagres ved 20 grader på ubestemt tid. Hel montering immunostaining for konfikal avbildning.Hele mount immunfluorescence teknikken tar tre dager, delt som følger. Den første dagen er for permeabilisering av xenografts og primær antistoffinkubasjon. Den andre dagen, for vask og sekundær antistoffinkubasjon.Og den tredje dagen, for vasking, fiksering av xenografts og lagring i monteringsmediet. Flere detaljer om denne prosedyren finner du i den tilhørende PDF-filen. Montering av xenografts.Forsegle kantene på en dekselglidning med petroleumjell eller silikonfett, slik at monteringsmediet ikke lekker. Bruk en Pasteur pipette, overfør xenografts til dekselslippet. Juster dem forsiktig etter en hårnål.Legg monteringsmediet til en annen dekselslipp. Slå forsiktig sammen begge dekselskliene og plasser dem på toppen av et mikroskopsklie for å muliggjøre enklere manipulering. Konfekt bildebehandling.En apochromatisk 25X nedsenknings objektiv linse med vannkorreksjon er optimal for avbildning av svulster med en enkelt celleoppløsning. Hent prøvene ved hjelp av Z-Stack-funksjonen med et intervall på fem mikron mellom hver sektor. Åpne rådataene i Fiji-programvaren.Velg tre representative skiver av svulsten fra toppen, midten og bunnen, per z-stack, per xenograft. Åpne Cell Counter-plugin fra Fiji-programvare. Klikk Initialiser i celletellerverktøyet, velg en tellertype, og klikk bildet for å starte tellemodus manuelt.For hvert klikk spør telleren hvor mange celler som telles. For å oppnå totalt antall celler i svulsten, bruk følgende formel. For å vurdere totalt antall eller prosentandel av markører, for eksempel immunceller, mititotiske figurer, aktivert kaspase, kvantifisere manuelt cellene som er positive til den spesifikke merkingen, markøren eller transgene av interesse langs alle skiver av z-stack med Cell Counter plugin.Vær oppmerksom på at noen celler vil være plassert mellom to stykker. Gå frem og tilbake i z-stakken for å sikre at ingen celler telles to ganger. Representative resultater.HCT 116 kolorektal kreftcellelinje xenografts ble generert som beskrevet i protokollen. Xenografts ble tilfeldig fordelt i ikke-behandlede kontroller og FOLFIRI kjemoterapi. Immunfluorescence ble utført for å oppdage apoptotiske celler, ved hjelp av anti-cleaved caspase-3 antistoff og DAPI for nukleisk motstaining.Kvantifisering av mititotisk indeks, apoptose og tumorstørrelse viste at FOLFIRI induserer en betydelig reduksjon av mitose og en betydelig induksjon av apoptose, ledsaget av en 54% reduksjon av tumorstørrelse. Disse funksjonene er nyttige i høygjennomstrømning fenotypiske legemiddelskjermer, samt å teste cellen iboende og fysiologiske effekter av flere kreftbehandlinger på kort tid. En annen stor fordel med sebrafisk xenograft-modellen er at det er mulig å studere samspillet mellom forskjellige tumorceller og analysere hvordan hver type celle kan påvirke den andres oppførsel.Ulike humane kreftceller, forskjellige kloner fra samme svulst, eller fra forskjellige svulster, kan injiseres samtidig. I dette eksemplet ble to kolorektale kreftcellelinjer avledet fra samme pasient merket med forskjellige lipofile fargestoffer og blandet i et forhold mellom en-til-en for injeksjon. Vi håper at denne protokollen kan hjelpe forskere med å bli reelle eksperter på å generere sebrafisk xenografts.Det er ikke lett. Du må øve, øve. Ikke gi opp.Jeg er sikker på at du kommer dit. lykke til.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

Merking av brystkreftpasient-avledet xenografter med Spor Reporters for tumorvekst og metastase Studier

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish

Invasiv Opptreden av humane brystcancerceller i Embryonic Sebrafisk

In many cases, cancer patients do not die of a primary tumor, but rather because of metastasis. Although numerous rodent models are available for studying ...

Transplantation of Zebrafish Pediatric Brain Tumors into Immune-competent Hosts for Long-term Study of Tumor Cell Behavior and Drug Response

Transplantasjon av Zebrafish Pediatric Brain Tumors til Immun-kompetente verter for langvarig studie av Tumor Cell Behavior og Drug Response

Tumor cell transplantation is an important technique to define the mechanisms controlling cancer cell growth, migration, and host response, as well as to ...

Simple and Rapid Method to Obtain High-quality Tumor DNA from Clinical-pathological Specimens Using Touch Imprint Cytology

Enkel og rask metode å få høy kvalitet svulst DNA fra klinisk-patologisk prøver bruker Touch forlaget cytologi

It is critical to determine the mutational status in cancer before administration and treatment of specific molecular targeted drugs for cancer patients. ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

Isolering og karakterisering av tumor-initiere celler fra sarkom pasient-avledet Xenotransplantater

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts

Prekliniske vurdering av Bioactivity av Anticancer kumarin OT48 ved Spheroids, koloni formasjon analyser og sebrafisk Xenografts

In vitro and in vivo pre-clinical screening of novel therapeutic agents are an essential tool in cancer drug discovery. Although human cancer cell lines ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

Utnyttelse av ultralyd guidet vev-rettet mobilnettet implantasjon for etablering av biologisk relevante metastatisk svulst Xenografts

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

In Vivo Imaging and Quantitation of the Host Angiogenic Response in Zebrafish Tumor Xenografts

I vivo Imaging og kvantifisering av Host angiogenic Response i sebrafisk tumor Xenotransplantater

Tumor angiogenesis is a key target of anti-cancer therapy and this method has been developed to provide a new model to study this process in vivo. A ...

Testing Targeted Therapies in Cancer using Structural DNA Alteration Analysis and Patient-Derived Xenografts

Testing av målrettede behandlinger mot kreft ved hjelp av strukturell DNA-endringsanalyse og pasientavledede Xenografts

We present here an integrative approach for testing efficacy of targeted therapies that combines the next generation sequencing technolo-gies, therapeutic ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Narkotikascreening av primær pasient avledet tumor xenografts i sebrafisk

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...