Name: ganglioside extraction, purification and profiling
Uploaded: 2021-03-12T15:00:00
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这项工作得到了美国国立卫生研究院（NIH）糖科学共同基金U01CA241953的支持。MJP得到了约翰霍普金斯大学化学 - 生物学界面计划（T32GM080189）的支持。

组织收集是在约翰霍普金斯动物护理和使用委员会授权的条件下进行的。
1.小规模神经节苷脂提取和部分纯化
注意：使用挥发性和有毒溶剂时，请使用适当的通风。避免自始至终使用塑料;溶剂将从许多塑料中提取化学成分，从而干扰后续分析。聚四氟乙烯（PTFE）是一个例外;PTFE衬里瓶盖应用于玻璃储存瓶盖。
<ol><li>萃取<ol>
<li>称量一个新鲜或解冻的小?...

<ol>
	<li>Schnaar, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Biology+of+Gangliosides.">The Biology of Gangliosides.</a> Advances in Carbohydrate Chemistry and Biochemistry. 76, 113-148 (2019).</li><li>DeMarco, M. L., Woods, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic-resolution+conformational+analysis+of+the+GM3+ganglioside+in+a+lipid+bilayer+and+its+implications+for+ganglioside-protein+recognition+at+membrane+surfaces.">Atomic-resolution conformational analysis of the GM3 ganglioside in a lipid bilayer and its implications for ganglioside-protein recognition at membrane surfaces.</a> Glycobiology. 19 (4), 344-355 (2009).</li><li>Schnaar, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gangliosides+of+the+vertebrate+nervous+system.">Gangliosides of the vertebrate nervous system.</a> Journal of Molecular Biology. 428, 3325-3336 (2016).</li><li>Klenk, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#220;ber+die+Ganglioside,+eine+neue+Gruppe+von+zuckerhaltigen+Gehirnlipoiden+[About+gangliosides,+a+new+group+of+sugar-containing+brain+lipids].">&#220;ber die Ganglioside, eine neue Gruppe von zuckerhaltigen Gehirnlipoiden [About gangliosides, a new group of sugar-containing brain lipids].</a> Hoppe-Seyler's Zeitschrift f&#252;r Physiologische Chemie. 273, 76-86 (1942).</li><li>Uemura, S., Go, S., Shishido, F., Inokuchi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+machinery+of+GM4:+the+excess+amounts+of+GM3/GM4S+synthase+(ST3GAL5)+are+necessary+for+GM4+synthesis+in+mammalian+cells.">Expression machinery of GM4: the excess amounts of GM3/GM4S synthase (ST3GAL5) are necessary for GM4 synthesis in mammalian cells.</a> Glycoconjugate Journal. 31 (2), 101-108 (2014).</li><li>Nimrichter, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=E-selectin+receptors+on+human+leukocytes.">E-selectin receptors on human leukocytes.</a> Blood. 112 (9), 3744-3752 (2008).</li><li>Saito, M., Kitamura, H., Sugiyama, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+heptasialosyl+c-series+ganglioside+in+embryonic+chicken+brain:+its+structure+and+stage-specific+expression.">A novel heptasialosyl c-series ganglioside in embryonic chicken brain: its structure and stage-specific expression.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics. 1571 (1), 18-26 (2002).</li><li>Todeschini, A. R., Hakomori, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+role+of+glycosphingolipids+and+gangliosides+in+control+of+cell+adhesion,+motility,+and+growth,+through+glycosynaptic+microdomains.">Functional role of glycosphingolipids and gangliosides in control of cell adhesion, motility, and growth, through glycosynaptic microdomains.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics. 1780 (3), 421-433 (2008).</li><li>Sturgill, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biosynthesis+of+the+major+brain+gangliosides+GD1a+and+GT1b.">Biosynthesis of the major brain gangliosides GD1a and GT1b.</a> Glycobiology. 22, 1289-1301 (2012).</li><li>Cavdarli, S., Delannoy, P., Groux-Degroote, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=O-Acetylated+gangliosides+as+targets+for+cancer+immunotherapy.">O-Acetylated gangliosides as targets for cancer immunotherapy.</a> Cells. 9 (3), (2020).</li><li>Varki, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symbol+nomenclature+for+graphical+representations+of+glycans.">Symbol nomenclature for graphical representations of glycans.</a> Glycobiology. 25 (12), 1323-1324 (2015).</li><li>Schnaar, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+glycosphingolipids.">Isolation of glycosphingolipids.</a> Methods in Enzymology. 230, 348-370 (1994).</li><li>Svennerholm, L., Fredman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+procedure+for+the+quantitative+isolation+of+brain+gangliosides.">A procedure for the quantitative isolation of brain gangliosides.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics. 617, 97-109 (1980).</li><li>Tettamanti, G., Bonali, F., Marchesini, S., Zambotti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+procedure+for+the+extraction,+purification+and+fractionation+of+brain+gangliosides.">A new procedure for the extraction, purification and fractionation of brain gangliosides.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics. 296, 160-170 (1973).</li><li>Gazzotti, G., Sonnino, S., Ghidoni, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal-phase+high-performance+liquid+chromatographic+separation+of+non-derivatized+ganglioside+mixtures.">Normal-phase high-performance liquid chromatographic separation of non-derivatized ganglioside mixtures.</a> Journal of Chromatography. 348, 371-378 (1985).</li><li>Schnaar, R. L., Needham, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thin-layer+chromatography+of+glycosphingolipids.">Thin-layer chromatography of glycosphingolipids.</a> Methods in Enzymology. 230, 371-389 (1994).</li><li>Ledeen, R. W., Yu, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gangliosides:+structure,+isolation,+and+analysis.">Gangliosides: structure, isolation, and analysis.</a> Methods in Enzymology. 83, 139-191 (1982).</li><li>Lopez, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+lacking+sialyltransferase+ST3Gal-II+develop+late-onset+obesity+and+insulin+resistance.">Mice lacking sialyltransferase ST3Gal-II develop late-onset obesity and insulin resistance.</a> Glycobiology. 27 (2), 129-139 (2017).</li></ol>

这里报道的小规模和大尺度神经节苷脂提取和分离方法并非独一无二 - 有许多不同的溶剂提取和纯化方法可提供出色的结果12。这里报道的从Fredman和Svennerholm13中进行小规模纯化的大脑的方法被证明可以优化恢复，并且多年来在我们的实验室中已被证明是强大而直接的。适用于TLC和MS的分离和纯化可以在几个小时内从完整组织到分离的神经节苷脂轻松完成。MS可?...

神经节苷脂被定义为含有一种或多种唾液酸残基的鞘氨醇脂1。它们主要在细胞表面表达，其疏水性神经酰胺脂质部分嵌入质膜的外小叶中，亲水聚糖延伸到细胞外空间2。虽然它们广泛分布在脊椎动物细胞和组织中，但它们在脊椎动物的大脑中特别丰富3，它们在那里首次被发现并命名4。
神经节苷脂聚糖的结构各不相同，是其命名法的基础（图1）。神经节苷脂聚糖由中性糖核组成，具有不同数量和分布的唾液酸。最小的神经节苷脂GM4只有两种糖（唾液酸与半乳糖结合）5。较大的天然神经节苷脂可能含有十几种总糖6 或多达七种唾液酸，单个中性核心7。它们的神经酰胺脂质部分也各不相同，具有不同的鞘氨醇长度和多种脂肪酸酰胺。在脊椎动物的大脑中，有四种神经节苷脂，GM1，GD1a，GD1b和GT1b占主导地位。神经节苷脂表达具有发育调控性、组织特异性和细胞类型特异性。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62385/62385fig01.jpg"> 图1：主要的脑神经节苷脂及其生物合成前体。 结构使用聚糖符号命名法显示11。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62385/62385fig01large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>
神经节苷脂通过在其自身膜中参与和调节蛋白质（顺式调节）或通过在细胞外环境中参与聚糖结合蛋白，包括其他细胞上的细菌毒素和凝集素（反式识别）在分子水平上起作用3。神经节苷脂与调节蛋白的特异性结合和/或与其他分子的自关联转化为脂筏导致细胞行为的变化，从而影响神经系统结构和功能、癌症进展、代谢、炎症、神经元蛋白病和传染病8。由于它们的细胞作用多种多样，它们的分离和分析方法可以增强对生理和病理过程调节的见解。在这里，提供了经过验证的快速小规模提取和分析方法，以及从大脑中分离神经节苷脂的制备性规模。讨论了应用于其他组织的机遇和挑战。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bovine brain, stripped</td>
			<td>PelFreez</td>
			<td>57105-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ganglioside standards</td>
			<td>Matreya</td>
			<td>GM1, 1061; GD1a, 1062; GD1b, 1501; GT1b, 1063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottle with PTFE-lined cap</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-911-739</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass centrifuge bottle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-586B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass culture tubes, 16 x 125 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>60825-430</td>
			<td>for collecting HPLC fractions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass separatory funnel (2 L)</td>
			<td>Pyrex</td>
			<td>6400-2L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection syringe - Hamilton 1750 gastight 500 &#181;l</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>81265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-Anisaldehyde, 98%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>&#160;A88107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potter-Elvhjem Homogenizer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-414-14A</td>
			<td>Choose appropriate volume option</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reprosil 100 NH2 10&#181;m 5x4mm guard columns</td>
			<td>Analytics-Shop</td>
			<td>AAVRS1N-100540-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reprospher 100 NH2, 5 &#956;m, 250 mm x 20 mm HPLC column</td>
			<td>Analytics-Shop</td>
			<td>custom packed</td>
			<td>other sizes available</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resorcinol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30752-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotary evaporator</td>
			<td>Buchi</td>
			<td>R-300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sample loop for Model 7725 Injector (5 ml)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>57632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sep-Pak tC18 Cartidges Vac 35 cc (10 g)</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT043350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sep-Pak tC18 Plus Short Cartridge, 400 mg</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT036810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spotting syringe - Hamilton 701N 10 &#181;l</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thick-walled 13-mm diameter test tubes with PFTE lined caps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-933A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Threaded 2-ml vials with PFTE lined caps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-955-323</td>
			<td>For ganglioside storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TLC plates, HPTLC Silica gel 60 F254 Multiformat</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M1056350001</td>
			<td>Fluorescence impregnation (F254) stabilizes the sorbent surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TLC reagent sprayer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-723-26A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TLC running chamber for 10 x 10 cm plates</td>
			<td>Camag</td>
			<td>22.5155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waring 1-Liter Stainless Steal Explosion Resistant Blender</td>
			<td>Waring</td>
			<td>E8520</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ganglioside extraction, purification and profiling

神经节苷脂是含有一种或多种唾液酸残基的鞘氨醇脂。它们存在于所有脊椎动物细胞和组织上，但在大脑中特别丰富。它们主要在细胞质膜的外叶上表达，通过横向关联调节细胞表面蛋白的活性，在细胞 - 细胞相互作用中充当受体，并且是病原体和毒素的靶标。人类神经节苷脂生物合成的遗传失调导致严重的先天性神经系统疾病。由于其两性性质，神经节苷脂的提取，纯化和分析需要许多研究人员自发现以来80年来已经优化的技术。在这里，我们描述了用于从组织和细胞中提取，纯化以及主要神经节苷脂的初步定性和定量分析的台级方法，这些方法可以在几个小时内完成。我们还描述了从大脑中更大规模地分离和纯化主要神经节苷脂物种的方法。总之，这些方法为这类生物活性分子提供了分析和制备规模的访问。

第1节（小规模）中描述的方法为主要脑神经节苷脂的定性和定量测定提供了足够数量和纯度的神经节苷脂。当按照所述制备时，从小鼠脑中恢复的神经节苷脂每g脑湿重（1 nmol / μL）〜 1μmol。使用第3节的1μL（1 nmol）的TLC分辨率为间苯二酚检测提供了充足的材料，并解决了所有主要的脑神经节苷脂，如图 4所示的野生型和转基因小鼠。虽然使用第1节制备的混合神经节苷脂并?...

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Ganglioside Extraction, Purification and Profiling

神经节苷脂是含唾液酸的鞘糖脂，在大脑中特别丰富。它们的两性性质需要有机/水提取和纯化技术，以确保最佳的回收率和准确的分析。本文概述了分析和制备规模的神经节苷脂提取，纯化和薄层色谱分析。

神经节苷脂提取、纯化和分析

Gangliosides are glycosphingolipids that contain one or more sialic acid residues. They are found on all vertebrate cells and tissues but are especially ...

神经节苷脂在所有脊椎动物细胞表面表达，在神经细胞上特别丰富。它们调节细胞信号传导和细胞间识别。该方案引入了神经节苷脂分离和分析。选择这些技术是为了最大限度地提高大尺度和小尺度的神经节苷脂产量，同时简化纯化。我们还描述了相对快速地进行定性和半定量性神经节苷脂分析的方法。对脂质的研究，特别是像神经节苷脂这样的极性脂质，需要与处理蛋白质或核酸不同的工具和技术。本视频将让您熟悉如何使用这些分子。由于氯仿和四氢呋喃等溶剂可溶解普通塑料，因此我们在整个过程中使用带有特氟龙衬盖的玻璃瓶和小瓶，玻璃移液器，玻璃，不锈钢微量注射器和特氟龙玻璃均质机。如果不这样做，产品中的塑料聚合物可能会干扰分析。首先，每克组织湿重加入4.1毫升水，并用10次笔触使其均质化。每克组织加入13毫升甲醇。将其转移到22摄氏度的环境温度，然后混合。将组织转移到带有PTFE衬里螺旋盖的厚壁，玻璃，螺旋盖的管中，并彻底混合。每克组织加入6.5毫升氯仿，盖上盖子，然后充分混合。以450次g离心15分钟。然后将透明上清液转移到新的螺旋盖管中，并将体积测量为恢复的提取物体积。对于分区，向清清液中加入0.173倍于回收的提取物体积的水。然后盖上盖子。剧烈涡旋。以450次g离心15分钟。将含有神经节苷脂的上相转移到带有PTFE衬里螺旋盖的新鲜玻璃管中。要进行反相墨盒色谱分析，请使用5毫升玻璃注射器洗涤带有3毫升甲醇的tC18固相萃取盒。然后以2~43~55的比例加入三毫升氯仿-甲醇-水。通过相同的玻璃注射器将上一步的上相加载到tC18墨盒上。收集流出物，并将其重新加载到色谱柱上以优化吸附。用三毫升氯仿 - 甲醇 - 水洗涤墨盒，然后用三毫升甲醇水清洗。用三毫升甲醇洗脱神经节苷脂到一个新鲜的螺旋盖管中。在温度小于或等于45摄氏度的温和氮气流下蒸发至干。以每克原始组织湿重一毫升溶解在甲醇中。将100克脑灰质放入搅拌机中，每克脑湿重加入一毫升，冷却后，10毫摩尔磷酸钾缓冲液pH值为6.8。然后在低位均质20秒。每克脑湿重加入8毫升四氢呋喃，并在低浓度下匀浆10秒。倒入玻璃离心机瓶中，以5， 000 g离心15分钟。收集上清液，测量其体积，然后将其转移到玻璃分离漏斗中。每毫升上清液加入0.3毫升乙醚。用力摇晃。然后让它不受干扰地静置30分钟，在此期间，两个相，一个上以太相和一个下水相，分开。将含有神经节苷脂的下相收集到带有PTFE衬里盖的玻璃瓶中。向分离漏斗中剩余的上醚相，每毫升原始上清液加入0.1毫升水。用力摇晃。允许阶段分开。然后收集下层水相，并将其与先前收集的下相混合。将组合的下相蒸发成干粉，然后称重。要进行反相色谱，每次洗涤时使用真空或压力将50毫升溶剂通过柱中少于一分钟，从而预洗大型tC18固相萃取盒。通过真空或压力将皂化后相分离的上相加载到色谱柱上。然后收集流出，重新加载，并再次收集流出以进行后续分析。用氯仿 - 甲醇 - 水各30毫升洗涤色谱柱，然后用甲醇水洗涤。然后用50毫升甲醇洗脱神经节苷脂，然后再次用10毫升甲醇洗脱。分别收集每个洗涤物和洗脱液。使用薄层色谱法或TLC来确认流出中没有神经节苷脂，并在甲醇的第一次洗脱中洗涤和洗脱。将洗脱的神经节苷脂蒸发成干粉，并称量它们。要进行TLC，请将运行溶剂倒入带有不锈钢盖的10×10厘米玻璃TLC室中，使溶剂深度为0.5厘米。盖上腔室，让它平衡约10分钟。用甲醇用斜针清洗10微升汉密尔顿注射器。将一微升甲醇吸入玻璃注射器中以填充针头死体积，然后填充一微升样品或标准品。将样品均匀地点在五毫米的预标记线上，直到注射器中残留不到一微升的甲醇溶剂。发现所有样品后，让板在22摄氏度下干燥。将斑点和干燥的板放在预平衡的TLC室中，底部边缘浸入运行溶剂中。让运行的溶剂通过毛细管作用向上推进板，直到溶剂前端到达板顶部一厘米以内。取下并用铅笔标记板边缘的溶剂前部。让溶剂完全不受干扰地蒸发或在温和的气流下蒸发。在化学通风橱中，将具有已解决的神经节苷脂起源端的TLC板倒置在一个切开的纸板箱中，以保护烟罩壁免受酸性喷雾。将间苯二酚喷雾试剂置于玻璃TLC喷雾器中。将其连接到加压氮气源上，并在垂直和水平方向上对角线轻轻喷洒板。立即用相同尺寸的干净、干燥的玻璃盖板，并用活页夹将盖板固定到位。将盖板在125摄氏度下加热20分钟。神经节苷脂在白色背景上呈现深紫色。要进行脂质染色，将具有解析的神经节苷脂来源的TLC板面向下浸入含有茴香醛染色剂的烧杯中。浸入跑步前方两秒钟多一点。然后让它排出。在低温下加热热板上的TLC板以显影。该方案提供足够数量和纯度的神经节苷脂，用于定性和定量测定。一微升的TLC分辨率为间苯二酚检测提供了充足的材料，并解决了野生型和转基因小鼠的所有主要脑神经节苷脂。虽然制备的混合神经节苷脂并非不含其他主要脂质，但它们具有足够的纯度，可以作为阴性模式下的天然纯化神经节苷脂或在阳性模式下预甲基化后进行质谱测定。大规模纯化包括提取、皂化和HPLC分辨，以提供纯化的主要脑神经节苷脂，适用于生物实验以及进一步的化学和酶促修饰。显示了示例性的HPLC曲线和随后的TLC分析。碱处理或皂化对于水解和去除污染性磷脂是必要的，但也将水解神经节苷脂的自然修饰，如O-乙酰化唾液酸，这在某些情况下可能很重要。用于萃取、溶剂分配和 TLC 分辨的精确溶剂比率对于提高回收率、纯度和分析至关重要。从癌症到新陈代谢再到脑功能，神经节苷脂是生理修饰剂和治疗靶点。神经节苷脂分离、纯化和分析是生物医学发现和治疗开发的基石。

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