Name: ganglioside extraction, purification and profiling
Uploaded: 2021-03-12T15:00:00
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Este trabalho foi apoiado pelo Fundo Comum dos Institutos Nacionais de Saúde (NIH) para a concessão da Glicociência U01CA241953. O MJP foi apoiado pelo Programa de Interface Química-Biologia da Johns Hopkins (T32GM080189).

A coleta de tecidos foi realizada em condições autorizadas pelo Comitê de Uso e Cuidados e Uso de Animais johns Hopkins.
1. Extração de ganglioside em pequena escala e purificação parcial
ATENÇÃO: Tenha ventilação adequada ao trabalhar com solventes voláteis e tóxicos. Evite o plástico por toda parte; solventes extrairão componentes químicos de muitos plásticos que interferem com análises subsequentes. Politetrafluoroetileno (PTFE) é uma exceção; ...

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	<li>Schnaar, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Biology+of+Gangliosides.">The Biology of Gangliosides.</a> Advances in Carbohydrate Chemistry and Biochemistry. 76, 113-148 (2019).</li><li>DeMarco, M. L., Woods, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic-resolution+conformational+analysis+of+the+GM3+ganglioside+in+a+lipid+bilayer+and+its+implications+for+ganglioside-protein+recognition+at+membrane+surfaces.">Atomic-resolution conformational analysis of the GM3 ganglioside in a lipid bilayer and its implications for ganglioside-protein recognition at membrane surfaces.</a> Glycobiology. 19 (4), 344-355 (2009).</li><li>Schnaar, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gangliosides+of+the+vertebrate+nervous+system.">Gangliosides of the vertebrate nervous system.</a> Journal of Molecular Biology. 428, 3325-3336 (2016).</li><li>Klenk, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#220;ber+die+Ganglioside,+eine+neue+Gruppe+von+zuckerhaltigen+Gehirnlipoiden+[About+gangliosides,+a+new+group+of+sugar-containing+brain+lipids].">&#220;ber die Ganglioside, eine neue Gruppe von zuckerhaltigen Gehirnlipoiden [About gangliosides, a new group of sugar-containing brain lipids].</a> Hoppe-Seyler's Zeitschrift f&#252;r Physiologische Chemie. 273, 76-86 (1942).</li><li>Uemura, S., Go, S., Shishido, F., Inokuchi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+machinery+of+GM4:+the+excess+amounts+of+GM3/GM4S+synthase+(ST3GAL5)+are+necessary+for+GM4+synthesis+in+mammalian+cells.">Expression machinery of GM4: the excess amounts of GM3/GM4S synthase (ST3GAL5) are necessary for GM4 synthesis in mammalian cells.</a> Glycoconjugate Journal. 31 (2), 101-108 (2014).</li><li>Nimrichter, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=E-selectin+receptors+on+human+leukocytes.">E-selectin receptors on human leukocytes.</a> Blood. 112 (9), 3744-3752 (2008).</li><li>Saito, M., Kitamura, H., Sugiyama, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+heptasialosyl+c-series+ganglioside+in+embryonic+chicken+brain:+its+structure+and+stage-specific+expression.">A novel heptasialosyl c-series ganglioside in embryonic chicken brain: its structure and stage-specific expression.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics. 1571 (1), 18-26 (2002).</li><li>Todeschini, A. 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L., Needham, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thin-layer+chromatography+of+glycosphingolipids.">Thin-layer chromatography of glycosphingolipids.</a> Methods in Enzymology. 230, 371-389 (1994).</li><li>Ledeen, R. W., Yu, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gangliosides:+structure,+isolation,+and+analysis.">Gangliosides: structure, isolation, and analysis.</a> Methods in Enzymology. 83, 139-191 (1982).</li><li>Lopez, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+lacking+sialyltransferase+ST3Gal-II+develop+late-onset+obesity+and+insulin+resistance.">Mice lacking sialyltransferase ST3Gal-II develop late-onset obesity and insulin resistance.</a> Glycobiology. 27 (2), 129-139 (2017).</li></ol>

Os métodos de extração e isolamento de ganglioside de pequeno e grande porte relatados aqui não são únicos - existem muitas abordagens diferentes de extração e purificação de solventes que fornecem excelentes resultados12. Os métodos relatados aqui para purificação em pequena escala do cérebro, de Fredman e Svennerholm13, mostraram-se para otimizar a recuperação e provaram ser robustos e diretos ao longo de muitos anos em nosso laboratório. O isolamento e p...

Os gangliosides são definidos como glicosfingolipids com um ou mais resíduos de ácido sálico1. Eles são expressos principalmente na superfície celular com sua moiety lipídica de ceramida hidrofóbica incorporada no folheto externo da membrana plasmática e seus glicanos hidrofílicos estendendo-se para o espaço extracelular2. Embora amplamente distribuídas em células vertebradas e tecidos, elas são particularmente abundantes no cérebro vertebrado3, onde foram descobertos pela primeira vez e nomeados4.
As estruturas dos glicanos gangliosas variam e são a base para sua nomenclatura (Figura 1). Os glicanos ganglios são compostos por um núcleo de açúcar neutro com diferentes números e distribuições de ácidos sálicos. O menor ganglioside, GM4, tem apenas dois açúcares (ácido sálico ligado à galactose)5. Gangliosides maiores e naturais podem conter bem mais de uma dúzia de açúcares totais6 ou até sete ácidos sálicos em um único núcleo neutro7. Seus moieties lipídios de ceramida também variam, tendo diferentes comprimentos de sphingosina e uma variedade de amides de ácido graxo. No cérebro vertebrado predominam quatro espécies de ganglioside, GM1, GD1a, GD1b e GT1b. A expressão ganglioside é regulada pelo desenvolvimento, específica do tecido e tipo celular específico.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62385/62385fig01.jpg"> Figura 1: Grandes gângsteres cerebrais e seus precursores biossintéticos. As estruturas são mostradas usando a nomenclatura de símbolos para Glycans11. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62385/62385fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
Os ganglios funcionam no nível molecular ao engajar e modular proteínas em suas próprias membranas (regulação cis) ou por envolver proteínas de ligação glica no meio extracelular, incluindo toxinas bacterianas e lectinas em outras células (reconhecimento trans)3. A ligação específica de gangliosides a proteínas regulatórias e/ou auto-associação com outras moléculas em vigas lipídicas resulta em mudanças no comportamento celular que impactam a estrutura e função do sistema nervoso, progressão do câncer, metabolismo, inflamação, proteinopatias neuronais e doenças infecciosas8. Devido às suas diversas funções celulares, os métodos para seu isolamento e análise podem fornecer insights aprimorados sobre a regulação dos processos fisiológicos e patológicos. Aqui, são fornecidos métodos validados para extração e análise rápida em pequena escala e isolamento em escala preparatória de gangliosides do cérebro. São discutidas oportunidades e desafios para a aplicação a outros tecidos.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bovine brain, stripped</td>
			<td>PelFreez</td>
			<td>57105-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ganglioside standards</td>
			<td>Matreya</td>
			<td>GM1, 1061; GD1a, 1062; GD1b, 1501; GT1b, 1063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottle with PTFE-lined cap</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-911-739</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass centrifuge bottle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-586B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass culture tubes, 16 x 125 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>60825-430</td>
			<td>for collecting HPLC fractions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass separatory funnel (2 L)</td>
			<td>Pyrex</td>
			<td>6400-2L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection syringe - Hamilton 1750 gastight 500 &#181;l</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>81265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-Anisaldehyde, 98%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>&#160;A88107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potter-Elvhjem Homogenizer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-414-14A</td>
			<td>Choose appropriate volume option</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reprosil 100 NH2 10&#181;m 5x4mm guard columns</td>
			<td>Analytics-Shop</td>
			<td>AAVRS1N-100540-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reprospher 100 NH2, 5 &#956;m, 250 mm x 20 mm HPLC column</td>
			<td>Analytics-Shop</td>
			<td>custom packed</td>
			<td>other sizes available</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resorcinol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30752-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotary evaporator</td>
			<td>Buchi</td>
			<td>R-300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sample loop for Model 7725 Injector (5 ml)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>57632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sep-Pak tC18 Cartidges Vac 35 cc (10 g)</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT043350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sep-Pak tC18 Plus Short Cartridge, 400 mg</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT036810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spotting syringe - Hamilton 701N 10 &#181;l</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thick-walled 13-mm diameter test tubes with PFTE lined caps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-933A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Threaded 2-ml vials with PFTE lined caps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-955-323</td>
			<td>For ganglioside storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TLC plates, HPTLC Silica gel 60 F254 Multiformat</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M1056350001</td>
			<td>Fluorescence impregnation (F254) stabilizes the sorbent surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TLC reagent sprayer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-723-26A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TLC running chamber for 10 x 10 cm plates</td>
			<td>Camag</td>
			<td>22.5155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waring 1-Liter Stainless Steal Explosion Resistant Blender</td>
			<td>Waring</td>
			<td>E8520</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ganglioside extraction, purification and profiling

Gangliosides são glicosfingolipidos que contêm um ou mais resíduos de ácido sálico. Eles são encontrados em todas as células vertebrados e tecidos, mas são especialmente abundantes no cérebro. Expressos principalmente no folheto externo das membranas plasmáticas das células, eles modulam as atividades das proteínas da superfície celular via associação lateral, atuam como receptores nas interações células-células e são alvos de patógenos e toxinas. A desregulação genética da biossíntese ganglioside em humanos resulta em graves distúrbios do sistema nervoso congênito. Devido à sua natureza anfípppica, a extração, a purificação e a análise de gangliosides exigem técnicas que foram otimizadas por muitos investigadores nos 80 anos desde sua descoberta. Aqui, descrevemos métodos de nível de bancada para a extração, purificação e análises qualitativas e quantitativas preliminares de grandes gangliosides de tecidos e células que podem ser completadas em poucas horas. Também descrevemos métodos para isolamento em maior escala e purificação de grandes espécies de ganglioside do cérebro. Juntos, esses métodos proporcionam acesso analítico e de escala preparatória a essa classe de moléculas bioativas.

Os métodos descritos na seção 1 (pequena escala) fornecem gangliosides em quantidade e pureza suficientes para a determinação qualitativa e quantitativa de grandes lesões cerebrais. A recuperação do cérebro do camundongo é ~ 1 μmol ganglioside por g peso molhado cerebral (1 nmol/μL) quando preparado como descrito. A resolução TLC de 1 μL (1 nmol) usando a seção 3 fornece material amplo para detecção de resorcinol e resolve todos os principais gangliodolos cerebrais como mostrado para o tipo selvagem e ...

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Ganglioside Extraction, Purification and Profiling

Gangliosides são glicósfoliópidos portadores de ácido sálico que são particularmente abundantes no cérebro. Sua natureza anfíppática requer técnicas orgânicas/aquosas de extração e purificação para garantir uma recuperação ideal e análises precisas. Este artigo fornece visões gerais da extração de ganglioside em escala analítica e preparatória, purificação e análise de cromatografia de camada fina.

Extração de ganglioside, purificação e perfil

Gangliosides are glycosphingolipids that contain one or more sialic acid residues. They are found on all vertebrate cells and tissues but are especially ...

Gangliosides são expressos em todas as superfícies celulares vertebrados e são especialmente abundantes em células nervosas. Eles regulam a sinalização celular e o reconhecimento celular-celular. Este protocolo introduz o isolamento e análise do ganglioside.As técnicas foram selecionadas para maximizar os rendimentos do ganglioside em grandes e pequenas escalas, ao mesmo tempo em que simplificam a purificação. Também descrevemos métodos para realizar relativamente rapidamente análises qualitativas e semiquantitativas do lado do gângster. O estudo sobre lipídios, especialmente lipídios polares como gangliosides, requer diferentes ferramentas e técnicas do que trabalhar com proteínas ou ácidos nucleicos.Este vídeo familiariza você com como trabalhar com essas moléculas. Como solventes como clorofórmio e tetrahidrofurano dissolvem plásticos comuns, usamos garrafas de vidro e frascos com tampas forradas com Teflon, pipetas de vidro, vidro, microsingas de aço inoxidável e homogeneizadores de vidro Teflon durante esses procedimentos. A não orealização resulta em polímeros plásticos nos produtos que podem interferir nas análises.Para começar, adicione 4,1 mililitros de água por grama de peso molhado de tecido, e homogeneize-o com 10 tacadas. Adicione 13 mililitros de metanol por grama de tecido. Transfira para uma temperatura ambiente de 22 graus Celsius, e misture.Transfira o tecido para um tubo de parede grossa, vidro, tampa de parafuso com uma tampa de parafuso forrada com PTFE e misture bem. Adicione 6,5 mililitros de clorofórmio por grama de tecido, tampe-o e misture bem. Centrifugar a 450 vezes g por 15 minutos.Em seguida, transfira o supernatante claro para um tubo fresco e tampado por parafusos e meça o volume como volume de extrato recuperado. Para particionamento, adicione 0,173 vezes o volume de extrato recuperado de água ao supernanato claro. Então cap-lo.Vórtice vigorosamente. Centrifugar a 450 vezes g por 15 minutos. Transfira a fase superior, que contém os gangliosides, em um tubo de vidro fresco com uma tampa de parafuso forrada com PTFE.Para realizar a cromatografia do cartucho em fase inversa, use uma seringa de vidro de cinco mililitros para lavar um cartucho de extração em fase sólida tC18 com três mililitros de metanol. Em seguida, adicione três mililitros de clorofórmio-metanol-água a uma proporção de 2 a 43 a 55. Carregue a fase superior da etapa anterior no cartucho tC18 através da mesma seringa de vidro.Colete o fluxo-through e recarregue-o na coluna para otimizar a adsorção. Lave o cartucho com três mililitros de clorofórmio-metanol-água e, em seguida, com três mililitros de água de metanol. Elute o gangliosides com três mililitros de metanol em um tubo fresco, com tampa de parafuso.Evaporar até a secura sob um fluxo suave de nitrogênio a uma temperatura inferior ou igual a 45 graus Celsius. Dissolva-se em metanol a um mililitro por grama de peso molhado de tecido original. Coloque 100 gramas de matéria cinzenta cerebral em um liquidificador, e adicione um mililitro por grama de peso úmido cerebral de frio, tampão fosfato de potássio de 10 milimolar de pH 6.8.Em seguida, homogeneize em baixo por 20 segundos. Adicione oito mililitros de tetrahidrofurano por grama de peso úmido cerebral, e homogeneize em baixo por 10 segundos. Decante em garrafas de centrífugas de vidro, e centrífuga a 5.000 vezes g por 15 minutos.Colete o supernante, meça seu volume e, em seguida, transfira-o para um funil separador de vidro. Adicione 0,3 mililitros de éter etílico por mililitro do supernatante. Agite vigorosamente.Em seguida, deixe-o ficar imperturbável por 30 minutos, durante os quais duas fases, uma fase superior do éter e uma fase aquosa inferior, se separam. Colete a fase inferior, que contém os gangliosides, em uma garrafa de vidro com uma tampa alinhada com PTFE. À fase superior do éter restante no funil separador, adicione 0,1 mililitros de água por mililitro de supernanato original da etapa anterior.Agite vigorosamente. Permitir que as fases se separem. Em seguida, colete a fase aquosa inferior e misture-a com a fase inferior coletada anteriormente.Evaporar as fases inferiores combinadas para um pó seco, e pesá-lo. Para realizar a cromatografia em fase inversa, pré-lave um cartucho de extração em fase sólida tC18 em larga escala, passando 50 mililitros de solventes através da coluna usando vácuo ou pressão por menos de um minuto por lavagem. Carregue a fase superior da separação da fase pós-saponificação na coluna por vácuo ou pressão.Em seguida, colete o fluxo-through, recarregue-o e colete o fluxo novamente para análise subsequente. Lave a coluna com 30 mililitros cada um de clorofórmio-metanol-água, seguido de água metanol. Em seguida, elute os gangliosides com 50 mililitros de metanol e, em seguida, novamente com 10 mililitros de metanol.Colete cada lavagem e eluição separadamente. Use cromatografia de camada fina, ou TLC, para confirmar que os gangliosides estão ausentes do fluxo e lava e eluiram na primeira elução do metanol. Evaporar os gangliosides elucidos para um pó seco, e pesá-los.Para executar o TLC, despeje solvente em uma câmara TLC de vidro de 10 por 10 centímetros com uma tampa de aço inoxidável para que a profundidade do solvente seja de 0,5 centímetros. Cubra a câmara e deixe-a equilibrar por cerca de 10 minutos. Lave uma seringa Hamilton de 10 microliter com uma agulha chanfrada usando metanol.Desenhe um microliter de metanol em uma seringa de vidro para encher o volume morto da agulha e, em seguida, um microliter de amostra ou padrão. Localmente a amostra uniformemente nas linhas pré-marcadas de cinco milímetros até que menos de um microliter de solvente de metanol permaneça na seringa. Deixe a placa secar a 22 graus Celsius depois que todas as amostras forem avistadas.Coloque a placa manchada e seca sobre a câmara TLC pré-equilibrada com a borda inferior imersa no solvente em execução. Deixe que o solvente em execução avance pela placa por ação capilar até que a frente do solvente atinja dentro de um centímetro da parte superior da placa. Retire e marque a frente do solvente na borda da placa com um lápis.Permita que os solventes evaporem completamente imperturbáveis ou sob fluxo de ar suave. Em um capô de fumaça química, coloque a placa TLC com a extremidade de origem de gangliosides resolvida de cabeça para baixo em uma caixa de papelão cortada para proteger as paredes do capô do spray ácido. Coloque reagente de spray de resorcinol em um pulverizador de TLC de vidro.Anexe-o a uma fonte de nitrogênio pressurizado e pulverize levemente a placa diagonalmente nas direções vertical e horizontal. Cubra imediatamente a placa com uma placa de cobertura limpa, seca e de vidro das mesmas dimensões e fixe a placa de cobertura no lugar com clipes de aglutinante. Aqueça a placa coberta a 125 graus Celsius por 20 minutos.Gangliosides aparecerá roxo escuro contra um fundo branco. Para realizar a coloração lipídica, mergulhe a placa TLC com o lado de origem do gangliosides resolvido para baixo em um béquer contendo a mancha de anisaldeído. Submerso na frente por pouco mais de dois segundos.Em seguida, deixe-o drenar. Aqueça a placa TLC em uma placa quente a uma temperatura baixa para se desenvolver. Este protocolo fornece gangliosides em quantidade e pureza suficientes para determinação qualitativa e quantitativa.A resolução tlc de um microliter fornece material amplo para detecção de resorcinol e resolve todos os principais gangliosides cerebrais para camundongos selvagens e geneticamente modificados. Embora os gangliosides mistos preparados não estejam livres de outros lipídios importantes, eles são de pureza suficiente para a determinação espectrométrica de massa, seja como gangliosides purificados nativos no modo negativo ou após a pré-metilação no modo positivo. A purificação em larga escala inclui extração, saponificação e resolução hplc para fornecer gangliosides cerebrais cerebrais purificados adequados para experimentos biológicos e para outras modificações químicas e enzimáticas.Um perfil HPLC exemplar e uma análise TLC subsequente são mostrados. O tratamento alcalino, ou saponificação, é necessário para hidrificar e remover fosfolipídios contaminantes, mas também hidrificar modificações naturais de gangliosides como ácidos sálicos o-acetilados, que podem ser importantes em alguns contextos. As razões precisas de solventes para extração, partição de solventes e resolução TLC são fundamentais para melhorar a recuperação, a pureza e as análises.Do câncer ao metabolismo à função cerebral, os gangliosides são modificadores fisiológicos e alvos terapêuticos. Isolamento, purificação e análises de ganglioside são pilares para descoberta biomédica e desenvolvimento terapêutico.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

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Nitropeptide Profiling and Identification Illustrated by Angiotensin II

Perfil e identificação de nitropeptídeos ilustrados pela angiotensina II

Protein nitration is one of the most important post-translational modifications (PTM) on tyrosine residues and it can be induced by chemical actions of ...

DNA Sequence Recognition by DNA Primase Using High-Throughput Primase Profiling

Reconhecimento da seqüência do ADN pelo primase do ADN usando o perfilamento da primase da elevado-produção

DNA primase synthesizes short RNA primers that initiate DNA synthesis of Okazaki fragments on the lagging strand by DNA polymerase during DNA replication. ...

High-Resolution Complexome Profiling by Cryoslicing BN-MS Analysis

Perfilamento Complexome de alta resolução por Cryoslicing BN-MS Analysis

Proteins generally exert biological functions through interactions with other proteins, either in dynamic protein assemblies or as a part of stably formed ...