Name: harvesting and disaggregation: an overlooked step in biofilm methods research
Uploaded: 2022-04-22T12:30:00
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我们要感谢Danielle Orr Goveia，Blaine Fritz，Jennifer Summers和Fei San Lee对本文的贡献。

1. 涡旋和超声处理
<ol><li>生长成熟的铜绿假单胞菌ATCC 15442生物膜，根据ASTM标准E25622生长。</li>
	<li>在48小时生长期结束时，准备根据ASTM标准E28718处理生物膜和样品试样
</li>
	<li>使用火焰灭菌镊子将高压灭菌的防溅罩无菌插入无菌的50 mL锥形管中。对所有将要接受治疗的管子重复上述步骤。用于控制优惠券的管子不需要防溅罩。</li>
	<li>无菌?...

<ol>
	<li>Donlan, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilms:+microbial+life+on+surfaces.">Biofilms: microbial life on surfaces.</a> Emerging Infectious Diseases. 8 (9), 881-890 (2002).</li><li>ASTM International. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ASTM+Standard+E2562,+2017,+Standard+Test+Method+for+Quantification+of+Pseudomonas+aeruginosa+Biofilm+Grown+with+High+Shear+and+Continuous+Flow+using+CDC+Biofilm+Reactor.">ASTM Standard E2562, 2017, Standard Test Method for Quantification of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Grown with High Shear and Continuous Flow using CDC Biofilm Reactor.</a> ASTM International. , (2017).</li><li>Azeredo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+review+on+biofilm+methods.">Critical review on biofilm methods.</a> Critical Reviews In Microbiology. 43 (3), 313-351 (2017).</li><li>Gomes, I. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+growing+a+biofilm+under+low+shear+at+the+air-liquid+interface+using+the+drip+flow+biofilm+reactor.">A method for growing a biofilm under low shear at the air-liquid interface using the drip flow biofilm reactor.</a> Nature Protocols. 4 (5), 783-788 (2009).</li><li>ASTM International. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ASTM+Standard+E2871,+Standard+Test+Method+for+Determining+Disinfectant+Efficacy+Against+Biofilm+Grown+in+the+CDC+Biofilm+Reactor+Using+the+Single+Tube+Method.">ASTM Standard E2871, Standard Test Method for Determining Disinfectant Efficacy Against Biofilm Grown in the CDC Biofilm Reactor Using the Single Tube Method.</a> ASTM International. , (2019).</li><li>Goeres, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+Biofilm+Efficacy+Test:+The+Single+Tube+Method.">Validation of a Biofilm Efficacy Test: The Single Tube Method.</a> Journal of Microbiological Methods. , (2019).</li><li>The development and validation of a standard in vitro method to evaluate the efficacy of surface modified urinary catheters. Theses and Dissertations at Montana State University Available from: <a target="_blank" href="https://scholarworks.montana.edu/xmlui/handle/1/15149">https://scholarworks.montana.edu/xmlui/handle/1/15149</a> (2019)</li><li>Hamilton, M. A., Buckingham-Meyer, K., Goeres, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Checking+the+Validity+of+the+harvesting+and+Disaggregating+Steps+in+Laboratory+Tests+of+Surface+Disinfectants.">Checking the Validity of the harvesting and Disaggregating Steps in Laboratory Tests of Surface Disinfectants.</a> Journal of AOAC International. 92 (6), 1755-1762 (2009).</li><li>Conlon, B. P., Rowe, S. 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W., Tuohy, M. J., Fujishiro, T., Procop, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brief+Ultrasonication+Improves+Detection+of+Biofilm-formative+Bacteria+Around+a+Metal+Implant.">Brief Ultrasonication Improves Detection of Biofilm-formative Bacteria Around a Metal Implant.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. 457, 210-213 (2007).</li><li>Lourenco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimum+information+about+a+biofilm+experiment+(MIABiE),+standards+for+reporting+experiments+and+data+on+sessile+microbial+communities+living+at+interfaces.">Minimum information about a biofilm experiment (MIABiE), standards for reporting experiments and data on sessile microbial communities living at interfaces.</a> Pathogens and Disease. , 1-7 (2014).</li><li>Nascentes, C. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposure+times+and+energy+densities+for+ultrasonic+disinfection+of+Escherichia+coli,+Pseudomonas+aeruginosa,+Enterococcus+avium+and+sewage.">Exposure times and energy densities for ultrasonic disinfection of Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus avium and sewage.</a> Journal of Environmental Engineering and Science. 7 (2), 139-146 (2008).</li><li>Suslick, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonochemistry.">Sonochemistry.</a> Science. 247 (4949), (1990).</li></ol>

收获和分解方法的最少信息 为了在整个科学界创建可重复的生物膜数据，作者必须尽可能多地提供有关生物膜方法的每个生长，处理，采样和分析步骤的详细信息。生物膜方法的标准化有助于这项工作，因为它允许研究人员参考特定方法和任何相关修改。然而，许多论文只包含一两句话来描述生物膜的收获和分解。为了获得更好的再现性，我们建议在出版物中包括生物膜收获的最?...

生物膜的定义在过去几十年中不断发展，包括微生物与各种生物和/或非生物表面的关联，包括基质中显示不同生长和遗传表达的非细胞成分12。生物膜提供保护，免受干燥等环境压力，并可能使化学消毒剂的作用效果降低，从而导致微生物的存活。生物膜中的幸存者可能会提供致病微生物的来源，这些微生物是公共卫生问题3。
生物膜方法由四个步骤组成，生长，处理，采样（收获和分解）和分析。生长是用户确定生物体生长条件、温度、培养基等的第一步，是生物膜文献4，5，6，7中考虑和报告最多的步骤。该处理步骤评估抗菌剂（例如，消毒剂）以确定其对成熟生物膜3，8，9的功效，或者可以将抗菌剂掺入表面以确定产物防止或减少生物膜生长的能力10。第三步，取样，包括从其生长的表面收获生物膜的步骤，并对去除的团块进行分类3，8，11。第四步，分析，可能包括活细胞计数，显微镜检查，荧光测量，分子结果和/或基质成分评估8，9。数据评估提供有关实验结果的信息。在这四种方法中，采样通常是最容易被忽视的步骤，因为它假定所选的生物膜收获和/或分解技术是100%有效的，通常无需验证11。
通常被认为是均质的细菌浮游悬浮液在分析之前需要简单的涡旋。然而，生物膜是由微生物（原核和/或真核）、外多糖、蛋白质、脂质、细胞外DNA和宿主细胞组成的复杂群落12。需要采取超越传统浮游微生物培养方法的步骤，以便从表面充分收获生物膜，然后将其分解成均匀的单细胞悬浮液。广泛的文献综述（本出版物中未包含的信息）表明，去除和解聚技术的选择取决于许多因素，包括生物膜中存在的物种，生物膜附着的表面（无孔或多孔），生长表面的可及性（易于去除的优惠券或生物膜生长的设备的物理破坏）， 表面几何形状（面积和形状），生长表面上生物膜的密度以及可用的实验室设备。
当从表面收获生物膜时，产生的细胞悬浮液是非均性的。如果要准确枚举这种不均匀的悬浮液，则必须将其分解为单个单元格。活板计数假设菌落形成单元来自一种细菌。如果将生物膜的聚集体放置在生长培养基上，则无法区分可能导致不准确估计的单个细胞。例如，在消毒剂功效测试期间，如果与对照组相比，处理非常有效地从表面上去除生物膜，则与对照组相比，对数减少可能显得人为地大。另一方面，与对照组相比，将生物膜固定在表面上的化学消毒剂似乎具有较低的对数减少率11。这种类型的情况可能导致对实验数据的偏见解释。
在准备出版时，对文献的回顾确定，收获和分解生物膜的常见方法包括刮擦，拭子，超声处理，涡旋或这些的组合。刮擦被定义为用无菌棒，刮刀或其他工具从表面上物理去除生物膜。擦拭是指用棉签或其他固定吸收材料从表面上去除生物膜。超声处理是指通过分布在水中的超声波破坏表面的生物膜。涡旋是指使用混合器实现管内样品的液体涡流。均质化使用旋转叶片将收获的生物膜团块剪切成单个细胞悬浮液。在本文中，我们提出了两种不同表面类型的收获和解聚方法，即硬/无孔和多孔。
提供了研究人员应在出版物的方法部分包括的建议最低限度信息清单。我们希望包含这些信息使其他研究人员能够重现他们的工作。没有完美的收获和分解方法，因此，还提供了有关如何检查该技术的建议。
本文演示了从常见生长表面收获和分解生物膜的三种常用方法。这些信息将使研究人员能够更好地了解生物膜测试方法的整体精度和偏差。描述的方法如下：（1）在CDC生物膜反应器中高流体剪切下在聚碳酸酯试样（坚硬的非多孔表面）上生长的 铜绿假单胞菌 生物膜在涡旋和超声处理的五步组合后收获和解分解，以实现生物膜收获和解聚（2）铜 绿假单胞菌 在低流体剪切作用下，在滴流反应器中硼硅酸盐玻璃试样（坚硬的非多孔表面）上生长的生物膜被收获并使用刮擦和均质化进行分解（3）在硅胶管（多孔表面）中生长 的大肠杆菌 生物膜被收获并使用刮擦分解，然后进行超声处理和涡旋。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>50 mL conical vials</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mL glass beakers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB102100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL serological pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-12D</td>
			<td>For adding treatment to vials containing coupons.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL serological pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-14C</td>
			<td>For adding neutralizer to vials at the end of treatment contact time.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Applicator sticks</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>16-100-115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal spatula</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-373</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTFE policemen</td>
			<td>Saint-Gobain</td>
			<td>06369-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S 10 N - 10 G - ST Dispersing tool</td>
			<td>IKA</td>
			<td>4446700</td>
			<td>For homogenization of biofilm samples.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-951-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone Foley catheter, size 16 French</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>DYND11502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone tubing, size 16</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW96400-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Splash Guards</td>
			<td>BioSurface Technologies, Inc.</td>
			<td>CBR 2232</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T 10 basic ULTRA-TURRAX Disperser</td>
			<td>IKA</td>
			<td>3737001</td>
			<td>For homogenization of biofilm samples.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing connectors</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW02023-86</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic Cleaner</td>
			<td>Elma</td>
			<td>TI-H15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex-Genie 2</td>
			<td>Scientific Industries</td>
			<td>SI-0236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex-Genie 2 Vertical 50 mL Tube Holder</td>
			<td>Scientific Industries</td>
			<td>SI-V506</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

harvesting and disaggregation: an overlooked step in biofilm methods research

生物膜方法包括四个不同的步骤：在相关模型中生长生物膜，处理成熟的生物膜，从表面收获生物膜并分解团块，以及分析样品。在这四个步骤中，收获和分解是研究最少的，但在考虑测试偏差的可能性时仍然至关重要。本文演示了在三种不同表面上生长的生物膜的常用收获和解聚技术。从广泛的文献综述中收集的三种生物膜收获和解聚技术包括涡旋和超声处理，刮削和均质化，以及刮擦，涡旋和超声处理。考虑两种表面类型：硬质无孔（聚碳酸酯和硼硅酸盐玻璃）和多孔（硅胶）。此外，我们还提供了在报告所遵循的收获技术时应包含的最少信息的建议，以及检查偏差的随附方法。

收获方法的验证/确认 在我们的实验室进行的几项研究检查了涡旋和超声处理的能力，以有效收获使用单管法（ASTM E2871）8在生物膜反应器（ASTM E2562）2中生长的生物膜。
根据ASTM E25622在硼硅酸盐玻璃试样上生长铜绿假单胞菌ATCC 15442生物膜。48小时后，将四张试样放入小瓶中，用4mL无菌缓冲水“处理”?...

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Harvesting and Disaggregation: An Overlooked Step in Biofilm Methods Research

本文详细介绍了在两种表面类型上展示三种常见生物膜收获和解聚技术的方法，收获方法的坚固性测试以及在选择和优化收获和分解技术以提高可重复性时要考虑的最少信息。

收获和分解：生物膜方法研究中被忽视的步骤

Biofilm methods consist of four distinct steps: growing the biofilm in a relevant model, treating the mature biofilm, harvesting the biofilm from the ...

这些程序的总体目标是以最佳方式收获和分解生物膜，以提高可重复性。本视频将演示三种技术，每种技术都侧重于从不同表面类型中收获和分解。该视频将演示一种技术的正确技术，即从坚硬的无孔表面（例如来自CDC生物膜反应器的聚碳酸酯试样）涡旋和超声处理生物膜。二、将生物膜刮除和均质化掉滴流反应器中常见的坚硬无孔硼硅酸盐玻璃表面。第三，从导管模型中常见的多孔硅胶管表面刮擦，涡旋和超声处理生物膜。嗨，我的名字是Kelly Buckingham-Meyer，在标准化生物膜方法实验室。在我们的实验室中，我们将生物膜方法分解为四个组成部分：生长，处理，采样和分析。在同行评审的文献中，关于生物膜如何从表面取样或收获和分解的细节通常很少。这就是制作此视频的原因。由于我们的实验室开发和测试标准化的生物膜方法，我们进行了广泛的文献综述，其中确定了三种最常见的生物膜收获和解聚方法。这些方法是从聚碳酸酯试样中对生物膜进行涡旋和超声处理，从硼硅酸盐玻璃试样中刮擦和均质化生物膜，以及从硅胶管中刮擦，涡旋和超声处理生物膜。虽然写在纸上的方法很强大，但我们希望我和我的同事林赛·米勒（Lindsey Miller）介绍的技术细节视频会有所帮助。首先，根据ASTM标准E2562培养成熟的铜绿假单胞菌15442生物膜，这是使用CDC生物膜反应器定量铜绿假单胞菌生物膜的标准测试方法。在48小时生长期结束时，根据ASTM标准E2871准备处理和样品优惠券，这是使用单管法确定消毒剂对CDC生物膜反应器中生长的生物膜功效的标准测试方法。然后使用火焰灭菌镊子无菌地将高压灭菌的防溅罩插入无菌的50毫升锥形管中。对所有将要接受治疗的管子重复上述步骤。用于控制优惠券的管子不需要防溅罩。无菌地从CDC生物膜反应器中取出一根棒，并在30毫升无菌稀释水中冲洗。这将从生物膜中去除松散附着的细胞。将杆平行于工作台顶部固定在带有防溅罩的样品管上。使用火焰灭菌的内六角扳手，拧松固定螺钉，将生物膜涂层的试样放入管中。重复所需数量的优惠券。取下防溅罩，并将防溅罩放在单独的容器中进行灭菌。使用五毫升血清学移液器，将四毫升的处理或对照液缓慢移液到管中，使液体沿着管壁内侧流动。轻轻旋转管的底部，使试样下的任何气泡都被置换。每次添加之间留出 30 到 60 秒。在指定的接触时间结束时，将36毫升中和剂移液到管中，其顺序与施加处理或对照的顺序相同。在最高设置下涡旋每个管子30加或减去5秒，并确保达到完全涡旋。将管子放在悬挂在脱气超声仪中的管架中，使浴槽中的水位等于管中的水位。以45千赫兹，100%功率和正常功能30加或减去5秒对样品进行超声处理。重复涡旋和超声检查循环，并以最终涡旋结束，共五个循环。最后，连续稀释样品，将稀释液置于R2A琼脂上，并在36摄氏度下孵育平板24小时。根据电镀方法对菌落进行计数并记录数据。这种下一种生物膜收获和解聚技术对于滴流反应器中标配的硬质无孔试样非常有用。根据ASTM标准E2647培养成熟的铜绿假单胞菌15442生物膜，这是使用低剪切和连续流动的滴流生物膜反应器生长的铜绿假单胞菌生物膜定量的标准测试方法。设置采样站，包括采样板，烧杯中的95%乙醇，酒精燃烧器，止血器，试样去除工具，带有无菌稀释水的烧杯以及用于冲洗试样的稀释管。关闭泵，取下通道盖，使用无菌试样去除工具和止血剂取出试样，注意不要干扰生物膜。通过以流体运动轻轻浸入50毫升离心管中包含的45毫升无菌稀释水中来冲洗试样。立即反转动作以删除优惠券。将试样放入装有45毫升无菌稀释水的烧杯中。使用无菌刮刀或刮刀向下刮擦生物膜覆盖的试样表面约15秒。通过在烧杯中搅拌来冲洗刮刀或刮刀。重复刮擦和漂洗过程三到四次，确保完全覆盖试样表面。冲洗试样，方法是将其以60度角放在无菌烧杯上，并在试样表面上移液一毫升无菌稀释水。重复，总共冲洗五次。烧杯中的最终体积现在是50毫升。在生物安全柜中工作，使刮下的生物膜样品均质化。将无菌均质器探头连接到均质器上。将探针尖端放入液体中，打开均质机，升压至20， 500 RPM。使样品均质30秒。调低转速并关闭均质机。如上所述，通过在9毫升无菌稀释空白中以20， 500 RPM均质30秒来消毒生物膜样品之间的探针。将9毫升70%乙醇管匀浆30秒，然后取下探针，使其在乙醇管中静置一分钟。均质化两个额外的稀释坯料。此外，每个样品都可以使用无菌的一次性均质器探头。连续稀释均质样品，使用适当的电镀方法将稀释液在R2A上，并在36摄氏度下孵育板24小时。计算菌落并记录数据。这种最终的生物膜收获和解聚技术对于在多孔管中生长的生物膜非常有用，例如导管模型中使用的硅胶管。要开始此过程，请在硅胶导管中培养成熟的大肠杆菌53498生物膜。准备取样材料：冲洗管，无菌离心管，空无菌培养皿，火焰灭菌不锈钢止血器，剪刀，计时器和尺子。泵暂停后，使用70%乙醇清洁管道外部。测量距离末端两厘米，避开连接到连接器的区域，并标记管道以确定切割位置。用火焰灭菌剪刀，将管道切成两厘米的标记。冲洗管段以除去浮游细胞。用火焰灭菌的镊子，将管段轻轻浸入20毫升无菌稀释水中，然后立即取出。将该段放入10毫升中和剂中。使用火焰灭菌镊子，握住管段并用无菌木制涂抹器刮刀刮，直到刮掉管子的所有内部区域。偶尔在10毫升中和剂中冲洗棒，并将该段放回样品管中。刮擦的管段现在是10到零或零稀释。在最高设置下涡旋每个管子30加或减去五秒钟。将管子放在悬挂在超声仪浴中的管架中，使得浴槽中的水位等于管中的液位。以45千赫兹，100%功率和正常功能30加或减去5秒的超声处理。重复这个漩涡和超声循环，然后以最终的漩涡结束。在缓冲水中连续稀释样品。使用适当的电镀方法在胰液大豆琼脂上平板，然后将管在36加或减两摄氏度下孵育24小时。根据所使用的电镀方法对菌落进行适当的计数，并记录数据以计算算术平均值。Danielle Or和Blaine Fritz拍摄的这四张照片都有助于说明这种收获和分解过程的重要性。所有这四个试样都用结晶紫染色，以帮助可视化在涡旋和超声处理过程之前和之后存在于药样上的铜绿假单胞菌生物膜的数量。优惠券A完全覆盖在生物膜中，而优惠券B，C和D在其表面上的生物膜都少得多。试样B，C和D都经历了前面描述的涡旋和超声处理过程。Lindsey Miller在共聚焦显微镜下以12.5倍放大倍率拍摄的这两张照片描绘了用背光活/死染色处理的铜绿假单胞菌生物膜。左边的图像以45千赫兹和10%的功率超声处理，而右边的图像以45千赫兹和100%的功率超声处理。显然，与右侧的优惠券相比，左侧的优惠券表面上残留的生物膜要多得多。最后一张图显示了对不同超声处理参数的操纵如何影响从试样表面去除的铜绿假单胞菌生物膜的量。所有这些优惠券均以45千赫兹，100%功率和正常设置30加或减去5秒进行超声处理。这些图像是由Lindsey Miller以12.5倍放大倍率拍摄的。第一排的试样在稀释水中超声处理，而第二排的试样在DE中和肉汤中超声处理。与稀释水相比，在含有表面活性剂的DE肉汤中超声处理的试样上剩余的生物膜似乎较少。试样A，B，E和F均以10毫升体积超声处理，而试样C，D，G和H在40毫升溶液中超声处理。在较小体积中超声处理的试样上的生物膜明显较少。优惠券A，C，E和G在浴中一次用三个管子超声处理，而优惠券B，D，F和H在一次有12个管子的浴中超声处理。似乎用较少的管子超声处理的样品表现出优异的生物膜收获。最终，最大限度地减少试管中的体积，减少一次超声处理的试管数量，以及使用DE中和肉汤似乎都有助于增强生物膜的收获。没有完美的方法来收获和分解生物膜，但有些方法更适合不同的表面和/或应用。根据文献综述，本视频中演示的技术是三种最常见的方法。这三种技术可以为研究人员提供一个起点。花时间验证所选的收获和分解方法非常重要。所有设备都略有不同，因此即使方法已经标准化，对于所使用的设备确认工艺仍然是谨慎的。研究表明，不正确的选择可能会导致有偏见的测试结果。观看此视频后，这些信息有望帮助研究人员就使用哪种方法做出更明智的决定，并为提高三种表面类型的再现性以及互补的收获和分解技术提供指导。

Research

JoVE Journal

Biology

Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice

收获的小鼠精子和人工授精

Rodents of the genus Peromyscus (deer mice) are the most prevalent native North American mammals.  Peromyscus species are used in a wide range of research ...

科研

生物学

A Step-by-step Method for the Reconstitution of an ABC Transporter into Nanodisc Lipid Particles

一个循序渐进的步骤方法的到Nanodisc脂质颗粒的ABC转运蛋白的重组

The nanodisc is a discoidal particle (~ 10-12 nm large) that trap membrane proteins into a small patch of phospholipid bilayer. The nanodisc is a ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

基本的<em&gt;线虫</em&gt;方法：同步和观察

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

In Vitro Reconstitution of Light-harvesting Complexes of Plants and Green Algae

In Vitro Reconstitution of Light-harvesting Complexes of Plants and Green Algae

在植物和绿藻的捕光配合体外重组

In plants and green algae, light is captured by the light-harvesting complexes (LHCs), a family of integral membrane proteins that coordinate chlorophylls ...

Efficient Mammalian Cell Expression and Single-step Purification of Extracellular Glycoproteins for Crystallization

高效的哺乳动物细胞表达和细胞外糖蛋白的结晶一步纯化

Production of secreted mammalian proteins for structural and biophysical studies can be challenging, time intensive, and costly. Here described is a time ...

An In Vitro Model to Study the Effect of 5-Aminolevulinic Acid-mediated Photodynamic Therapy on Staphylococcus aureus Biofilm

An In Vitro Model to Study the Effect of 5-Aminolevulinic Acid-mediated Photodynamic Therapy on Staphylococcus aureus Biofilm

用体外模型研究 5-氨基乙酰丙酸介导光动力疗法对金黄色葡萄球菌生物膜的影响

Staphylococcus aureus (S. aureus) is a common human pathogen, which causes pyogenic and systemic infections. S. aureus infections are difficult to ...

Microbiota Analysis Using Two-step PCR and Next-generation 16S rRNA Gene Sequencing

使用两步PCR和下一代16S rRNA基因测序进行微生物群分析

The human gut is colonized by trillions of bacteria that support physiologic functions such as food metabolism, energy harvesting, and regulation of the ...

A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography

蚊子电图分步指南

Female mosquitoes are the deadliest animals on earth, claiming the lives of more than 1 million people every year due to pathogens they transmit when ...

Two-Step Reverse Transcription Droplet Digital PCR Protocols for SARS-CoV-2 Detection and Quantification

用于SARS-CoV-2检测和定量的两步逆转录液滴数字PCR方案

Diagnosis of the ongoing SARS-CoV-2 pandemic is a priority for all countries across the globe. Currently, reverse transcription quantitative PCR (RT-qPCR) ...

A Step-By-Step Method to Detect Neutralizing Antibodies Against AAV using a Colorimetric Cell-Based Assay

使用基于比色细胞的测定法检测针对 AAV 的中和抗体的分步方法

Recombinant adeno-associated viruses (rAAV) have proven to be a safe and successful vector for transferring genetic material to treat various health ...