Name: directed differentiation of hemogenic endothelial cells from human pluripotent stem cells
Uploaded: 2021-03-31T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Directed Differentiation of Hemogenic Endothelial Cells from Human Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

تم دعم هذا العمل جزئيا من خلال منح المعاهد الوطنية للصحة HL128064 و U2EB017103. تم تقديم مزيد من الدعم من خلال منحة CT Innovations 15-RMB-YALE-04.

1. إعداد الكواشف والكواشف
ملاحظة: ترد قائمة بالكواشف في جدول المواد.
<ol><li>الحصول على خطوط الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات: H1-hESC ، H9-Fucci-hESC. ملاحظة: قد يكون توليد ECs الدموية أكثر كفاءة في خط الخلايا H1.</li>
	<li>تحضير مخزون بروتين المصفوفة: قم بتقسيم بروتين المصفوف?...

<ol>
	<li>Giacomelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+cardiac+microtissues+composed+of+cardiomyocytes+and+endothelial+cells+co-differentiated+from+human+pluripotent+stem+cells.">Three-dimensional cardiac microtissues composed of cardiomyocytes and endothelial cells co-differentiated from human pluripotent stem cells.</a> Development. 144 (6), 1008-1017 (2017).</li><li>Wu, J., Wu, Z., Xue, Z., Li, H., Liu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PHBV/bioglass+composite+scaffolds+with+co-cultures+of+endothelial+cells+and+bone+marrow+stromal+cells+improve+vascularization+and+osteogenesis+for+bone+tissue+engineering.">PHBV/bioglass composite scaffolds with co-cultures of endothelial cells and bone marrow stromal cells improve vascularization and osteogenesis for bone tissue engineering.</a> RSC Advances. 7 (36), 22197-22207 (2017).</li><li>Lee, H., Chung, M., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvasculature:+An+essential+component+for+organ-on-chip+systems.">Microvasculature: An essential component for organ-on-chip systems.</a> MRS Bulletin. 39 (1), 51-59 (2014).</li><li>Gritz, E., Hirschi, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specification+and+function+of+hemogenic+endothelium+during+embryogenesis.">Specification and function of hemogenic endothelium during embryogenesis.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 73 (8), 1547-1567 (2016).</li><li>Williams, I. M., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+endothelial+cells+from+human+pluripotent+stem+cells:+Methods,+considerations,+and+applications.">Generation of endothelial cells from human pluripotent stem cells: Methods, considerations, and applications.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 39 (7), 1317-1329 (2019).</li><li>Olmer, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+functional+endothelial+cells+in+scalable+suspension+culture.">Differentiation of human pluripotent stem cells into functional endothelial cells in scalable suspension culture.</a> Stem Cell Reports. 10 (5), 1657-1672 (2018).</li><li>Cossu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lancet+Commission:+Stem+cells+and+regenerative+medicine.">Lancet Commission: Stem cells and regenerative medicine.</a> The Lancet. 391 (10123), 883-910 (2018).</li><li>Fox, I. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+differentiated+pluripotent+stem+cells+in+replacement+therapy+for+treating+disease.">Use of differentiated pluripotent stem cells in replacement therapy for treating disease.</a> Science. 345 (6199), 1247391 (2014).</li><li>Mahla, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+applications+in+regenerative+medicine+and+disease+therapeutics.">Stem cells applications in regenerative medicine and disease therapeutics.</a> International Journal of Cell Biology. 2016, 1-24 (2016).</li><li>Ebert, A. D., Liang, P., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+as+a+disease+modeling+and+drug+screening+platform.">Induced pluripotent stem cells as a disease modeling and drug screening platform.</a> Journal of Cardiovascular Pharmacology. 60 (4), 408-416 (2012).</li><li>Rowe, R. G., Daley, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+in+disease+modelling+and+drug+discovery.">Induced pluripotent stem cells in disease modelling and drug discovery.</a> Nature Reviews Genetics. 20 (7), 377-388 (2019).</li><li>Liu, C., Oikonomopoulos, A., Sayed, N., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+diseases+with+induced+pluripotent+stem+cells:+from+2D+to+3D+and+beyond.">Modeling human diseases with induced pluripotent stem cells: from 2D to 3D and beyond.</a> Development. 145 (5), (2018).</li><li>Wnorowski, A., Yang, H., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress,+obstacles,+and+limitations+in+the+use+of+stem+cells+in+organ-on-a-chip+models.">Progress, obstacles, and limitations in the use of stem cells in organ-on-a-chip models.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 140, 3-11 (2019).</li><li>Ramme, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+induced+pluripotent+stem+cell-derived+four-organ-chip.">Autologous induced pluripotent stem cell-derived four-organ-chip.</a> Future Science OA. 5 (8), 1-12 (2019).</li><li>Ronaldson-Bouchard, K., Vunjak-Novakovic, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organs-on-a-Chip:+A+fast+track+for+engineered+human+tissues+in+drug+development.">Organs-on-a-Chip: A fast track for engineered human tissues in drug development.</a> Cell Stem Cell. 22 (3), 310-324 (2018).</li><li>Kane, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+endothelial+cells+from+human+embryonic+stem+cells+by+directed+differentiation:+analysis+of+microrna+and+angiogenesis+in+vitro+and+in+vivo.">Derivation of endothelial cells from human embryonic stem cells by directed differentiation: analysis of microrna and angiogenesis in vitro and in vivo.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 30 (7), 1389-1397 (2010).</li><li>Costa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+endothelial+cells+from+human+embryonic+stem+cells+in+fully+defined+medium+enables+identification+of+lysophosphatidic+acid+and+platelet+activating+factor+as+regulators+of+eNOS+localization.">Derivation of endothelial cells from human embryonic stem cells in fully defined medium enables identification of lysophosphatidic acid and platelet activating factor as regulators of eNOS localization.</a> Stem Cell Research. 10 (1), 103-117 (2013).</li><li>Nguyen, M. T. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+to+endothelial+progenitor+cells+on+laminins+in+defined+and+xeno-free+systems.">Differentiation of human embryonic stem cells to endothelial progenitor cells on laminins in defined and xeno-free systems.</a> Stem Cell Reports. 7 (4), 802-816 (2016).</li><li>Ikuno, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+and+robust+differentiation+of+endothelial+cells+from+human+induced+pluripotent+stem+cells+via+lineage+control+with+VEGF+and+cyclic+AMP.">Efficient and robust differentiation of endothelial cells from human induced pluripotent stem cells via lineage control with VEGF and cyclic AMP.</a> PLOS One. 12 (3), 0173271 (2017).</li><li>Aoki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+differentiation+and+purification+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+endothelial+progenitor+cells+and+expansion+with+the+use+of+inhibitors+of+ROCK,+TGF-B,+and+GSK3B.">Efficient differentiation and purification of human induced pluripotent stem cell-derived endothelial progenitor cells and expansion with the use of inhibitors of ROCK, TGF-B, and GSK3B.</a> Heliyon. 6 (3), 03493 (2020).</li><li>Lian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+endothelial+progenitors+via+small-molecule+activation+of+Wnt+signaling.">Efficient differentiation of human pluripotent stem cells to endothelial progenitors via small-molecule activation of Wnt signaling.</a> Stem Cell Reports. 3 (5), 804-816 (2014).</li><li>Orlova, V. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation,+expansion+and+functional+analysis+of+endothelial+cells+and+pericytes+derived+from+human+pluripotent+stem+cells.">Generation, expansion and functional analysis of endothelial cells and pericytes derived from human pluripotent stem cells.</a> Nature Protocols. 9 (6), 1514-1531 (2014).</li><li>Kusuma, S., Gerecht, S., Turksen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+endothelial+cells+and+pericytes+from+human+pluripotent+stem+cells.">Derivation of endothelial cells and pericytes from human pluripotent stem cells.</a> Human Embryonic Stem Cell Protocols. , 213-222 (2014).</li><li>Bao, X., Lian, X., Palecek, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+endothelial+progenitor+differentiation+from+human+pluripotent+stem+cells+via+wnt+activation+under+defined+conditions.">Directed endothelial progenitor differentiation from human pluripotent stem cells via wnt activation under defined conditions.</a> Methods in Molecular Biology. 1481, 183-196 (2016).</li><li>Xu, M., He, J., Zhang, C., Xu, J., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+derivation+of+endothelial+lineages+from+human+stem+cells.">Strategies for derivation of endothelial lineages from human stem cells.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 10 (1), 200 (2019).</li><li>Arora, S., Yim, E. K. F., Toh, Y. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+specification+of+pluripotent+stem+cell+derived+endothelial+cells+toward+arterial+and+venous+subtypes.">Environmental specification of pluripotent stem cell derived endothelial cells toward arterial and venous subtypes.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 7, 143 (2019).</li><li>Fang, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shear-induced+Notch-Cx37-p27+axis+arrests+endothelial+cell+cycle+to+enable+arterial+specification.">Shear-induced Notch-Cx37-p27 axis arrests endothelial cell cycle to enable arterial specification.</a> Nature Communications. 8 (1), 2149 (2017).</li><li>Dalton, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linking+the+cell+cycle+to+cell+fate+decisions.">Linking the cell cycle to cell fate decisions.</a> Trends in Cell Biology. 25 (10), 592-600 (2015).</li><li>Wolf, K., Hu, H., Isaji, T., Dardik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identity+of+arteries,+veins,+and+lymphatics.">Molecular identity of arteries, veins, and lymphatics.</a> Journal of Vascular Surgery. 69 (1), 253-262 (2019).</li><li>Rocha, S. F., Adams, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+differentiation+and+specialization+of+vascular+beds.">Molecular differentiation and specialization of vascular beds.</a> Angiogenesis. 12 (2), 139-147 (2009).</li><li>Goldie, L. C., Lucitti, J. L., Dickinson, M. E., Hirschi, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+signaling+directing+the+formation+and+function+of+hemogenic+endothelium+during+murine+embryogenesis.">Cell signaling directing the formation and function of hemogenic endothelium during murine embryogenesis.</a> Blood. 112 (8), 3194-3204 (2008).</li><li>Chanda, B., Ditadi, A., Iscove, N. N., Keller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoic+acid+signaling+is+essential+for+embryonic+hematopoietic+stem+cell+development.">Retinoic acid signaling is essential for embryonic hematopoietic stem cell development.</a> Cell. 155 (1), 215-227 (2013).</li><li>Marcelo, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemogenic+endothelial+cell+specification+requires+c-kit,+notch+signaling,+and+p27-mediated+cell-cycle+control.">Hemogenic endothelial cell specification requires c-kit, notch signaling, and p27-mediated cell-cycle control.</a> Developmental Cell. 27 (5), 504-515 (2013).</li><li>Dejana, E., Hirschi, K. K., Simons, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+basis+of+endothelial+cell+plasticity.">The molecular basis of endothelial cell plasticity.</a> Nature Communications. 8 (1), 14361 (2017).</li><li>Ottersbach, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial-to-haematopoietic+transition:+an+update+on+the+process+of+making+blood.">Endothelial-to-haematopoietic transition: an update on the process of making blood.</a> Biochemical Society Transactions. 47 (2), 591-601 (2019).</li><li>Pauklin, S., Vallier, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell-cycle+state+of+stem+cells+determines+cell+fate+propensity.">The cell-cycle state of stem cells determines cell fate propensity.</a> Cell. 155 (1), 135-147 (2013).</li><li>Qiu, J., Nordling, S., Vasavada, H. H., Butcher, E. C., Hirschi, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoic+acid+promotes+endothelial+cell+cycle+early+g1+state+to+enable+human+hemogenic+endothelial+cell+specification.">Retinoic acid promotes endothelial cell cycle early g1 state to enable human hemogenic endothelial cell specification.</a> Cell Reports. 33 (9), 108465 (2020).</li><li>Sriram, G., Tan, J. Y., Islam, I., Rufaihah, A. J., Cao, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+to+arterial+and+venous+endothelial+cells+under+feeder-+and+serum-free+conditions.">Efficient differentiation of human embryonic stem cells to arterial and venous endothelial cells under feeder- and serum-free conditions.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 6 (1), 261 (2015).</li><li>Ohta, R., Sugimura, R., Niwa, A., Saito, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemogenic+endothelium+differentiation+from+human+pluripotent+stem+cells+in+a+feeder-+and+xeno-free+defined+condition.">Hemogenic endothelium differentiation from human pluripotent stem cells in a feeder- and xeno-free defined condition.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (148), e59823 (2019).</li><li>Galat, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine-free+directed+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+efficiently+produces+hemogenic+endothelium+with+lymphoid+potential.">Cytokine-free directed differentiation of human pluripotent stem cells efficiently produces hemogenic endothelium with lymphoid potential.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 67 (2017).</li><li>Sidney, L. E., Branch, M. J., Dunphy, S. E., Dua, H. S., Hopkinson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concise+review:+Evidence+for+CD34+as+a+common+marker+for+diverse+progenitors.">Concise review: Evidence for CD34 as a common marker for diverse progenitors.</a> Stem Cells. 32 (6), 1380-1389 (2014).</li></ol>

هنا ، يتم تحديد خطوات إنتاج الخلايا البطانية الدموية من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية في حوالي أسبوع واحد باستخدام نظام زراعة 2D خال من تغذية الفئران والمصل (الشكل 1). يتوسع هذا البروتوكول في طريقة وصفها Sriram et al. (2015) للحصول على ECs38 البدائية. يتم توضيح الطبيعة ?...

الخلايا البطانية (ECs) هي مجموعة غير متجانسة من الخلايا التي تؤدي وظائف متعددة في جميع أنحاء جسم الإنسان وفي الأنسجة المهندسة. بالإضافة إلى دعم وتنظيم أنواع الخلايا الأخرى (مثل خلايا عضلة القلب1 ، الخلايا العظمية2) ، تشمل هذه الوظائف تشكيل حاجز انتقائي بين الدم والأنسجة والمساعدة في تكوين الأنسجة3. يتطلب تمايز ECs الناضجة أثناء التطور الطبيعي مسارات إشارات متنوعة. يتم اشتقاق ECs البدائية من أسلاف الأديم المتوسط ، ثم يتم تحديدها نحو الأنماط الظاهرية الشريانية والوريدية والشعيرية واللمفاويةالناضجة 4. بالإضافة إلى ذلك ، تم تحديد مجموعة فرعية صغيرة من ECs في كيس الصفار خارج الجنين ومنطقة الشريان الأورطي والغدد التناسلية و Mesonephros الجنينية (AGM) لتصبح ECs دموية ، والتي تؤدي إلى ظهور الخلايا الجذعية والسلفية المكونة للدم (HSPCs) التي تهاجر إلى كبد الجنين ونخاع عظم الجنين ، حيث تبقى بعد الولادة وتولد جميع أنواع خلايا الدم طوال الحياة4. تعد المجموعة المتنوعة من الأنماط الظاهرية EC ضرورية لجميع الأنسجة التنموية وصيانتها.
وبالتالي ، فإن ECs ومشتقاتها هي مكونات حاسمة في الدراسات التي تهدف إلى نمذجة وتوضيح آليات التنمية البشرية و / أو المرض ، وكذلك الطب التجديدي وتطبيقات هندسة الأنسجة5،6،7،8. ومع ذلك ، فإن القيد الرئيسي لهذه الأنواع من الدراسات هو عدم توفر ECs البشرية الأولية بالكمية المطلوبة. تشير التقديرات إلى أن ما لا يقل عن 3 × 108 ECs ستكون مطلوبة لغالبية التطبيقات العلاجية6. لحل هذه المشكلة ، تم اقتراح استخدام الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) والخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة البشرية (hiPSCs) نظرا لإمكانات نسبها المتنوعة وقدرتها على توليد أعداد كبيرة من النسل 6,9.
في الواقع ، تم إثبات فائدة الخلايا المشتقة من hESCs أو hiPSCs في دراسات متعددة تركز على نمذجة الأمراض وفحص الأدوية10،11،12. تم استخدام تقنية Organ-on-a-Chip (OOC) لتلخيص فسيولوجيا جسم الإنسان بأمانة أكبر من خلال دمج الخلايا والأنسجة في سقالات ثلاثية الأبعاد. علاوة على ذلك ، يمكن تحقيق اتصال OOCs الفردية المتعددة (ما يسمى بالجسم أو الإنسان على رقاقة ، BOC / HOC) عبر الموائع الدقيقة للسماح بالحديث المتبادل بين الأجهزة ذات الاهتمام13،14،15. الأنسجة الداعمة ، مثل الأوعية الدموية ، هي مكونات حاسمة في OOCs و BOC / HOCs. يسمح دمج الأوعية الدموية بنقل العناصر الغذائية والأكسجين وعوامل paracrine في جميع أنحاء الأنسجة ، وبالتالي تعزيز البيئة المكروية المطلوبة الخاصة بالأنسجة3،12. وبالتالي ، فإن طرق اشتقاق ECs البشرية الناضجة ، مثل ECs الشريانية والوريدية واللمفاوية والدموية ، ضرورية لتطوير مناهج هندسة الأنسجة هذه.
تم نشر بروتوكولات متعددة توضح بالتفصيل خطوات اشتقاق ECs البدائية أو السلفية البشرية من hESCs أو hiPSCs5،16،17،18،19،20،21،22،23،24،25،26 . تعتمد العديد من هذه البروتوكولات على تكوين الجسم الجنيني (EB) أو الاستزراع المشترك ل ESCs / iPSCs مع طبقة مغذية للفئران من الخلايا اللحمية. تميل هذه الاستراتيجيات إلى أن تكون صعبة وتستغرق وقتا طويلا ، مع انخفاض غلة EC و / أو تلوث ECs البشرية بخلايا الفئران. البروتوكولات التي تعتمد بشكل صارم على ثقافة 2D دون استخدام الخلايا اللحمية غالبا ما تتطلب تحريضات طويلة ، واستخدام مجموعات معقدة من عوامل النمو و / أو مثبطات للتحريض ، وتمديد فترات التوسع بعد فصل الخلايا ، أو مزيج من هذه العوامل. يوفر تطوير المعرفة بمسارات الإشارات والعوامل المشاركة في اشتقاق أنواع EC الناضجة في الجسم الحي الأساس لبروتوكول تمايز مباشر وقوي في المختبر.
في السابق ، تم تحديد الأدوار الرئيسية لمسارات إشارات Notch و Retinoic Acid (RA) في مواصفات ECs الشريانية والدموية للفأر ، على التوالي ، أثناء التطوير. يلعب مسار إشارات Notch أدوارا متعددة في مواصفات وصيانة النمط الظاهري الشرياني EC. حدد العمل باستخدام نموذج الأوعية الدموية لشبكية العين في الفئران مسارا يؤدي فيه إجهاد قص السوائل إلى تحفيز محور إشارات Notch-Cx37-p27 ، مما يعزز توقف دورة الخلية G1 ، مما يتيح مواصفات EC الشريانية27. تم افتراض أن حالات دورة الخلية تلعب دورا في قرارات مصير الخلية من خلال توفير نوافذ مميزة من الفرص التي تتقبل فيها الخلايا إشارات معينة يمكن أن تحفز التعبير الجيني وتغيرات النمط الظاهري28. مكن هذا الاعتقال G1 بوساطة Notch من التعبير عن الجينات المخصبة في ECs الشريانية ، بما في ذلك ephrinB2 و Cx40 و DLL4 و Notch1 و Notch 4 (تمت مراجعته في29،30). وقد تبين أيضا أن مواصفات EC الدموية يتم الترويج لها في الجسم الحي عبر إشارات RA31,32. حددت دراسات إضافية أنه ، في اتجاه مجرى إشارات RA ، والتعبير عن c-Kit و Notch upregulation p27 ، مما يتيح المواصفات الدموية في كيس صفار الفئران و AGM33. يمكن تحديد ECs الدموية للفأر إلى الحد الأدنى من خلال التعبير عن كل من علامات البطانية (أي CD31 ، KDR) والمكونة للدم (أي c-Kit ، CD34)4. أخيرا ، تخضع ECs الدموية لانتقال بطاني إلى مكون للدم (EHT) لتشكيل HSPCs ، والتي يمكن أن تؤدي إلى ظهور جميع أنواع خلايا الدم4،34،35.
اختبر العمل الأخير ما إذا كان هذا التسلسل الهرمي للإشارات نفسه يمكن أن يعزز مواصفات EC البشرية المسببة للدم. للقيام بذلك ، تم تطوير بروتوكول زراعة 2D خال من المصل والتغذية لاشتقاق ECs الدموية من hESCs ، وتم تمييز ECs الدموية هذه على مستوى خلية واحدة على أنها CD31 + KDR + c-Kit + CD34 + VE-Cadherin- CD45-. استفادت هذه الدراسة أيضا من مراسل مؤشر دورة الخلية الفلورية في كل مكان (FUCCI) ، والذي يحدد حالات دورة الخلية المختلفة ، باستخدام H9-hESCs التي تعبر عن بناء مراسل FUCCI (H9-FUCCI-hESC)36. في الدراسات التي أجريت على هذه الخلايا ، ثبت أن التهاب المفاصل الروماتويدي يعزز توقف دورة الخلية G1 المبكر في ECs ، وأن حالة G1 المبكرة تمكن من المواصفات الدموية في المختبر37. هنا ، يتم توفير بروتوكول مفصل للتمييز بين هذه الخلايا البطانية البشرية البشرية والمقايسات التي تؤكد هويتها. توفر هذه الطريقة المباشرة وسيلة مفيدة لتوليد هذه المجموعة الفرعية المتخصصة من ECs للدراسات المستقبلية لآليات تطوير خلايا الدم البشرية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 cm dishes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430599</td>
			<td>tissue culture treated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm dishes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430165</td>
			<td>tissue culture treated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3516</td>
			<td>tissue culture treated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimicrobial reagent 
			Brand Name: Normocin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>ant-nr-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bFGF</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>233-FB-025</td>
			<td>use at 50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BMP4</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>595202</td>
			<td>use at 25 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Detatchment Solution 
			Brand Name: vAccutase</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>7920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl Sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2650-100mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>7913</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DLL4</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>1506-D4/CF</td>
			<td>recombinant human; use at 10 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM:F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11320-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endothelial cell growth medium 
			Brand Name: EGM-2 Endothelial Cell Growth Medium-2 BulletKit (EGM-2)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352235</td>
			<td>polystyrene round bottom with filter cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Gemini Bio</td>
			<td>100-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>33016015</td>
			<td>use at 4 mg/cm2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GSK3i/CHIR99021</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>04-0004-02</td>
			<td>10 mM stock; use at 5 &#956;M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175-095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric Acid (HCl)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A144S-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrix protein&#160; 
			Brand Name: Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356230</td>
			<td>Growth factor reduced. Refer to the Certificate of Analysis for the lot to determine the protein (Matrigel) concentration. This concentration is required to calculate the volume of Matrigel that contains 1 mg of protein.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylcellulose-based medium 
			Brand Name: MethoCult H4435 Enriched</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>4435</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pluripotent stem cell differentiation medium 
			Brand Name: STEMdiff APEL 2</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>5270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pluripotent stem cells: H1, H9, H9-FUCCI</td>
			<td>WiCell</td>
			<td>WA09 (H9), WA01 (H1)</td>
			<td>human; H9-FUCCI were obtained from Dr. Ludovic Vallier&#39;s lab at Cambridge Stem Cell Institute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein-Free Hybridoma Medium (PFMH)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12040077</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retinoic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>R2625-50mg</td>
			<td>use at 0.5 &#956;M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reverse transcription master mix 
			Brand Name: iScript Reverse Transcription Supermix</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1708840</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA extraction kit 
			Brand Name: RNeasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SS255-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stem cell growth medium 
			Brand Name: mTeSR1</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>85850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYBR Green master mix 
			Brand Name: iTaq Universal SYBR Green Master Mix</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1725121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25299956</td>
			<td>0.25%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VEGF165 (VEGF-A)</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>100-20</td>
			<td>use at 50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-CD31-FITC</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>303104</td>
			<td>2 &#956;g/mL*</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-CD34-Pacific Blue</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>343512</td>
			<td>2 &#956;g/mL*</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-CD45-APC/Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304014</td>
			<td>2 &#956;g/mL*</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-c-Kit-APC</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>313206</td>
			<td>2 &#956;g/mL*</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-Flk-1-PE/Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>359911</td>
			<td>2 &#956;g/mL*</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-VE-Cadherin-PE</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>348506</td>
			<td>2 &#956;g/mL*</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">* Antibody fluorescent conjugates should be optimized based on the cell sorter used. Presented here are the final concentrations utilized in this study.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

directed differentiation of hemogenic endothelial cells from human pluripotent stem cells

يتم توزيع الأوعية الدموية في كل مكان داخل جميع أنسجة الجسم وتؤدي وظائف متنوعة. وبالتالي ، فإن اشتقاق الخلايا البطانية الوعائية الناضجة ، التي تبطن لومن الأوعية الدموية ، من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات أمر بالغ الأهمية للعديد من تطبيقات هندسة الأنسجة وتجديدها. في الجسم الحي ، تشتق الخلايا البطانية البدائية من سلالة الأديم المتوسط ويتم تحديدها نحو أنواع فرعية محددة ، بما في ذلك الشرايين والوريدية والشعيرات الدموية والهيموجينية واللمفاوية. تعتبر الخلايا البطانية الدموية ذات أهمية خاصة لأنها ، أثناء التطور ، تؤدي إلى ظهور الخلايا الجذعية والسلفية المكونة للدم ، والتي تولد بعد ذلك جميع سلالات الدم طوال الحياة. وبالتالي ، فإن إنشاء نظام لتوليد الخلايا البطانية الدموية في المختبر من شأنه أن يوفر فرصة لدراسة الانتقال من البطانة إلى المكونة للدم ، وقد يؤدي إلى إنتاج منتجات الدم البشري خارج الجسم الحي وتقليل الاعتماد على المتبرعين البشريين. في حين توجد عدة بروتوكولات لاشتقاق الخلايا البطانية السلفية والبدائية ، لم يتم وصف توليد الخلايا البطانية الدموية ذات الخصائص الجيدة من الخلايا الجذعية البشرية. هنا ، يتم تقديم طريقة لاشتقاق الخلايا البطانية الدموية من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية في حوالي 1 أسبوع: بروتوكول تمايز مع خلايا خط بدائية تشكلت استجابة لمثبط GSK3β (CHIR99021) ، ثم تحريض سلالة الأديم المتوسط بوساطة bFGF ، تليها تطوير الخلايا البطانية البدائية التي يروج لها BMP4 و VEGF-A ، وأخيرا مواصفات الخلايا البطانية الدموية التي يسببها حمض الريتينويك. ينتج عن هذا البروتوكول مجموعة محددة جيدا من الخلايا البطانية الدموية التي يمكن استخدامها لفهم تنظيمها الجزيئي والانتقال من البطانة إلى المكونة للدم ، والتي لديها القدرة على تطبيقها على التطبيقات العلاجية النهائية.

يوضح الشكل 1 مخططا يوضح مواصفات ECs البدائية و ECs الدموية من hESCs ، وصورة تمثيلية للخلايا بعد 24 ساعة من الطلاء. وفقا للمواصفات ، يتم تنقية ECs البدائية و ECs الدموية في أيام 5 و 8 ، على التوالي. يتم تعريف ECs البدائية على أنها CD31 + CD45- ويتم تعريف ECs الدموية على أنها CD31 + KDR + c-Kit + CD34...

Watch this Scientific Journal Video about Directed Differentiation of Hemogenic Endothelial Cells from Human Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Directed Differentiation of Hemogenic Endothelial Cells from Human Pluripotent Stem Cells

يعرض هنا بروتوكول بسيط للتمايز الموجه للخلايا البطانية الدموية من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات في حوالي 1 أسبوع.

التمايز الموجه للخلايا البطانية الدموية من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات

Blood vessels are ubiquitously distributed within all tissues of the body and perform diverse functions. Thus, derivation of mature vascular endothelial ...

يفصل هذا البروتوكول طريقة لتوليد مجموعة مميزة جيدا من الخلايا البطانية البشرية المولدة للدم. يمكن استخدام هذه الخلايا لدراسة التنظيم الجزيئي والانتقال من البطانة إلى المكونة للدم. ابدأ بزراعة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية لمدة أربعة أيام لتمييزها إلى خلايا بطانية بدائية.في اليوم الخامس ، استنشاق الوسط فوق الخلايا. ثم اغسل الخلايا برفق باستخدام ملليلتر واحد من DMEM / F-12 لكل بئر. أضف ملليلتر واحد من وسط تمايز الخلايا البطانية الدموية الطازج لكل بئر واحتضان الخلايا لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.في اليوم السادس واليوم السابع ، استبدل الوسط فوق الخلايا بملليلتر واحد من وسط تمايز الخلايا البطانية المتجانسة المعد حديثا لكل بئر ، واحتضان الخلايا لمدة 24 ساعة أخرى. في اليوم الثامن. بعد فصل الخلايا وغسلها ، قسمها بالتساوي إلى أنابيب طرد مركزي دقيقة على الجليد ، يحتوي كل منها على ما لا يقل عن 600 ميكرولتر من الخلايا بكثافة 1 مرة 10 إلى 5 خلايا لكل ملليلتر.أضف الأجسام المضادة إلى الأنابيب التي تحتوي على خلايا حسب الاقتضاء واحتضانها على ثلج محمي من الضوء لمدة 30 دقيقة. قم بتكوير الخلايا بالطرد المركزي عند 1000 مرة G و 4 درجات مئوية لمدة خمس دقائق. قم بإزالة المادة الطافية وأعد تعليق الكريات في 600 ميكرولتر من مخزن الفرز البارد المثلج.قم بتصفية العينات من خلال غطاء المرشح الشبكي لأنابيب FACS سعة خمسة ملليلتر وقم بتخزين الخلايا على الجليد المحمي من الضوء لفرز الخلايا على الفور. لعزل الخلايا البطانية الدموية بواسطة FACS ، قم أولا ببوابة مجموعة الخلايا السلبية CD45. ثم داخل المجتمع الإحصائي السلبي CD45 ، قم ببوابة الخلايا الإيجابية CD31.التالي ضمن السكان الإيجابيين CD31 ، بوابة لمجتمع الخلايا السلبية VE-cadherin. ثم داخل السكان سلبي VE-cadherin ، بوابة للخلايا الإيجابية c-Kit. من السكان الإيجابيين c-Kit ، قم ببوابة مجتمع الخلايا الإيجابي CD34.وأخيرا من مجتمع الخلايا الإيجابية CD34 ، حدد الخلايا الإيجابية KDR واجمعها. بعد بذر الخلايا البطانية الدموية في وسط قائم على ميثيل سلولوز تمت صياغته لنمو الخلايا السلفية المكونة للدم ، يتم حساب مستعمرات تشكيل وحدة الإريثرويد ، ومستعمرات تشكيل الانفجار - مستعمرات الإريثرويد في اليوم الثامن. وحدة تشكيل المستعمرة - الخلايا المحببة - البلاعم ووحدة تشكيل المستعمرات - المحببة ، الكريات الحمراء ، الضامة ، والخلايا الضخمة.يتم حساب مستعمرات السلف المكونة للدم متعددة القدرات في اليوم 14. لكل 1000 خلية بطانية دموية مطلية ، يتم إنشاء ما يقرب من 20 وحدة تشكيل مستعمرة. الخلايا ذات مورفولوجيا الخلايا البطانية مرئية أيضا في الثقافات.هذه هي الخلايا البطانية الدموية التي تؤدي إلى أسلاف المكونة للدم متعددة السلالات على مستوى خلية واحدة. هذا البروتوكول عبارة عن مصل 2D ونظام ثقافة خال من تغذية الفئران يمكنه توليد خلايا بطانية بشرية في أسبوع واحد تقريبا.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Direct Induction of Hemogenic Endothelium and Blood by Overexpression of Transcription Factors in Human Pluripotent Stem Cells

الحث المباشر للمكون للدم البطانة Endothelium والدم عن طريق overexpression من العوامل المحفزة النسخ في الإنسان الخلايا الجذعية

During development, hematopoietic cells arise from a specialized subset of endothelial cells, hemogenic endothelium (HE). Modeling HE development in vitro ...

Feeder-free Derivation of Melanocytes from Human Pluripotent Stem Cells

اشتقاق خالية المغذية من الخلايا الصباغية من الخلايا الجذعية متعددة القدرات البشرية

Human pluripotent stem cells (hPSCs) represent a platform to study human development in vitro under both normal and disease conditions. Researchers can ...

Isolation of Murine Embryonic Hemogenic Endothelial Cells

عزل خلايا الفئران الجنينية مكون للدم غشائي

The specification of hemogenic endothelial cells from embryonic vascular endothelium occurs during brief developmental periods within distinct tissues, ...

Large-Scale Production of Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells Using a Highly Reproducible Small Molecule-Based Differentiation Protocol

إنتاج واسع النطاق العضلية من الخلايا الجذعية متعددة القدرات البشرية باستخدام تكرار للغاية الصغيرة وبناء جزيء بروتوكول التمايز

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

وجه التفريق بين فروعه المكونة للدم البدائي والنهائي من الخلايا الجذعية Pluripotent البشرية

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

في المختبر تمايز متعددة القدرات البشرية الخلايا الجذعية إلى خلايا الأرومة الغاذية

The placenta is the first organ to develop during embryogenesis and is required for the survival of the developing embryo. The placenta is comprised of ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

التفريق بين الخلايا الظهارية الصبغية الشبكية من الخلايا الجذعية Pluripotent المستحث أو الجنينية البشرية سريعة وموجهة

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Efficient and Scalable Directed Differentiation of Clinically Compatible Corneal Limbal Epithelial Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells

فعالة وقابلة للتمايز الموجهة متوافقة سريرياً القرنية حوفي طلائي الخلايا الجذعية من الخلايا الجذعية Pluripotent البشرية

Corneal limbal epithelial stem cells (LESCs) are responsible for continuously renewing the corneal epithelium, and thus maintaining corneal homeostasis ...

Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

التمايز الفعال للخلايا الجذعية البشرية متعددة القوى في خلايا الكبد

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

في المختبر توليد المشتقات سميط من البشرية التي يسببها الخلايا الجذعية Pluripotent

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...